贵金属烤瓷合金与高糖对细胞外液炎性因子的影响

背景：前期研究中发现高糖与烤瓷合金浸提液对小鼠成纤维细胞L-929的增殖存在交互效应。目的：观察3种贵金属烤瓷合金与高糖对小鼠成纤维细胞L-929中白细胞介素6水平的影响。方法：采用两因素析因设计实验研究不同糖浓度（11．1,22．2,33．3mmol／L）下,89％金合金、74％金合金及银钯合金贵金属烤瓷合金浸提液,分别与小鼠成纤维细胞L-929休外共培养24h后,细胞外液中白细胞介素6水平的变化,并设未加入合金材料的空白对照为阴性对照组。结果与结论：两因素析因设计分析结果表明,贵金属烤瓷合金浸提液的主效应有统计学意义（P=0．001）,其中74％金合金与银钯合金白细胞介素6水平低于阴性对照组（P=0．004．0）：糖浓度的主效应也有统计学意义（P=0．005）,33．3mmol／L精浓度组白细胞介素6水平低于11．1mmol／L（正常）糖浓度组（P=O．001）.但贵金属烤瓷合金浸提液与糖浓度两因素对小鼠成纤维细胞L-929细胞外液中白细胞介素6水平的影响无交互作用（P=O．33）。     

本期专题：口腔金属烤瓷合金材料的生物学性能②

4三种贵金属烤瓷台金与高糖对小鼠成纤维细胞L-929增殖的影响 谢晖（广州医学院口腔医院,广东省广州市510140） 推荐理由：研究表明,金属烤瓷合金中析出的金属离子对细胞有一定的毒性作用,改变细胞炎性递质的表达。即使贵金属烤瓷合金也不例外。而某些全身疾病如糖尿病也会引发口腔疾病,糖尿病与烤瓷冠修复同样增加了牙周炎的易感性．     

细胞培养法评价自制镍铬烤瓷合金的细胞毒性

背景:具有良好抗腐蚀性能的镍铬铸造烤瓷合金正在临床广泛应用,但不容忽视的是其释放出的镍离子、铍离子具有明显的毒副作用.因此,改进合会的组成成分,提高其理化性能和生物相容性是目前研究的热点.目的:检测自制镍铬烤瓷合金的体外细胞毒性,并与口腔科常用的镍铬合金、纯铁金属的细胞毒性进行比较.设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-05/12在中国医科大学中心实验室完成.材料:细胞选用对数生长期的小鼠成纤维细胞(L-929细胞).自制镍铬烤瓷合金由中国科学院金属研究所提供,纯钛由日本松风公司提供,镍铬合金由贺利氏古莎齿科有限公司提供.方法:实验分为自制镍铬烤瓷合金、纯钛组、镍铬合金组,阳性对照组,阴性对照组.取96孔培养板,每板选出5组孔,每组重复孔12个,每孔中均加入浓度为1.0×108L-1的细胞悬液100μ L.在自制镍铬烤瓷合金、纯钛组、镍铬合金组孔中分别加入各种材料浸提液100μL,阳性对照组孔中加入铅浸提液100 μ L,使材料浸提液浓度最终为50%,在阴性对照组孔内加入RPMI 1640培养液100 μ L.主要观察指标:分别于培养1,2,3,4,5 d时采用四唑盐比色法测定各组吸光度值,计算相对增殖率.结果:3种金属材料组与阴性对照组之间的吸光度值差异均无显著性意义(P＞0.05),与阳性对照组之间的吸光度值差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01).纯钛组细胞增殖率＞100%,细胞毒性为0级,自制镍铬烤瓷合金组和镍铬合金组的细胞增殖率为86.36%～99.49%,细胞毒性为1级,阳性对照组在培养3d后细胞毒性增长至2级.结论:自制镍铬烤瓷合金仪具有极微弱的细胞毒性,符合口腔材料临床应用的要求.     

三种比色法评价4种牙科金属材料对L-929细胞的毒性

背景：采用不同方法评价材料的细胞毒性可能会得出不同的实验结果。目的：采用3种比色法评价镍铬合金、钴铬合金、3铬13及纯钛等牙科金属材料对小鼠成纤维细胞（L-929细胞）的细胞毒性。方法：以镍铬合金、钴铬合金、3铬13及纯钛4种牙科金属材料的浸提液分别作用于体外培养的L-929细胞24,72h。以体积分数10％小牛血清＋高糖DMEM培养液培养的L-929细胞为阴性对照组,以0.7％丙烯酰胺＋体积分数10％小牛血清＋高糖DMEM培养液培养的L-929细胞为阳性对照组,分别采用MTT、CCK-8及结晶紫3种比色法检测上述材料的细胞毒性。结果与结论：①4种材料浸提液中培养的细胞形态正常,胞内结构清晰,随着培养时间延长细胞大量增殖,与阴性对照组细胞形态无明显差异。阳性对照组细胞数量明显减少,形态完整性受破坏,形成大量细胞碎片。②培养24h时,CCK-8比色法检测中钴铬合金组的细胞相对增殖率低于阴性对照组沪〈0．05）,MTT及结晶紫比色法检测中钴铬合金组的细胞相对增殖率与阴性对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）;培养72h时,MTT比色法检测中4种牙科金属材料组细胞相对增殖率低于阴性对照组（P〈0．01）,CCK-8及结晶紫比色法检测中4组的细胞相对增殖率与阴性对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）,但材料细胞毒性均为0—1级。表明上述4种牙科金属材料细胞毒性均在临床应用的允许范围内,具有良好的生物安全性。     

五种无机载银抗菌剂的体外细胞毒性比较

背景：无机载银抗菌材料是口腔生物材料一种新的来源选择。目的：评估5种无机载银抗菌剂不同质量浓度溶液的体外细胞毒性,为无机载银抗菌剂应用于口腔修复材料提供参考。设计、时间及地点：对比观察的细胞学实验,2006-10/2007-04在解放军第四军医大学组织工程中心完成。材料：小鼠成纤维结缔组织细胞（L-929细胞）由解放军第四军医大学组织工程中心提供。5种无机载银抗菌剂分别为Novaron、Zeomic、XDK-101、HN-300、Conval-PAg40。方法：用MTT比色法检测5种无机载银抗菌剂100,50,25,12.5g/L溶液对小鼠成纤维细胞L-929细胞相对增殖率的影响,并评价其细胞毒性。主要观察指标：用酶联免疫检测仪测定溶液吸光度值（A值）来评估细胞的增殖率。结果：5种无机载银抗菌剂随着质量浓度下降细胞毒性均随之下降,抗菌剂质量浓度≤50g/L时对L-929细胞无毒性;5种无机载银抗菌剂中Conval-PAg40和Novaron的安全性好于Zeomic、XDK-101和HN-300。结论：质量浓度≤50g/L的Novaron和Conval-PAg40可作为口腔修复材料的抗菌剂。     

3种牙科金属材料对小鼠成纤维细胞凋亡的影响

背景:有关磁性附着体外包裹不锈钢材料引起的细胞凋亡,经检索CNKI数据库未见报道.目的:观察磁性附着体的3种外包裹牙科金属材料钴铬合金、钛合金及奥氏体不锈钢对L-929细胞凋亡的影响.设计、时间及地点:对比观察,实验于2007-06/12在中国医科大学中心实验室完成.材料:选用对数生长期的小鼠成纤维细胞L-g29,由中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所提供.钴铬合金由贺立氏古莎齿科有限公司提供:钛合会由日本森田公司提供;奥氏体不锈钢由中国科学院金属研究所提供.方法:将钛合金、奥氏体不锈钢和钴铬合金3种金属材料制成圆片形,放置于24孔板中,按浸提液体积与试件表面积比值为0.1 mL/cm2放入RPMI-1640培养液,即得到材料浸提液.实验分为5组:钛合金组、奥氏体不锈钢组和钴铬合金组分别将L-929细胞接种于含不同质量浓度(250,500 g/L,1 kg/L)钛金属、奥氏体不锈钢和钴铬金属的浸提液中;阴性对照组:RPMI1640培养的L-929细胞:阳性对照组:1 00 mg/L丝列霉素处理的L-929细胞.主要观察指标:流式细胞仪检测各组不同质量浓度浸提液干预24 h对L-929细胞凋亡的影响.结果:除250 g/L质量浓度钛合金与阴性对照组之间细胞凋亡率无显著差异(P>0.05)外,其他各组材料同一质量浓度或同一材料不同质量浓度之间细胞凋亡率相比,差异均有显著件意义(P<0.01).结论:3种金属材料对细胞凋亡率均有显著影响,凋亡率大小依次为:钛合金组<奥氏体不锈钢组<钴铬合金组     

不同材料烤瓷冠在后牙种植修复中的对比

背景：种植体上部结构牙冠材料的选择十分重要,其临床修复效果直接影响到种植体的寿命和患者的牙周健康状况。目的：比较Lava氧化锆全瓷、金铂合金烤瓷与银钯合金烤瓷冠在后牙单颗缺失口腔种植修复中的临床效果。方法：选择60例120颗第一磨牙缺失病例,完成单颗牙缺失种植牙修复治疗,上部结构修复牙冠材料分别为Lava氧化锆全瓷冠、金铂合金烤瓷冠与银钯合金烤瓷冠,每种材料40颗,比较3种修复体的临床修复效果。结果与结论：通过6-48个月的随访发现,Lava氧化锆全瓷冠组和金铂合金烤瓷冠组的牙龈边缘着色、龈缘密合度、修复体颜色优于银钯合金烤瓷冠组,Lava氧化锆全瓷冠组的牙龈边缘着色和修复体颜色优于金铂合金烤瓷冠组,金铂合金烤瓷冠组的龈缘密合度优于Lava氧化锆全瓷冠组;银钯合金烤瓷冠抗折程度最强,最具临床优越性,但其牙龈指数最高,牙龈健康程度最差,菌斑形成速度最快、程度最重。由此可见,在种植修复完成后需要选择较为适合的冠部修复体进行种植修复,Lava氧化锆全瓷冠具有卓越的生物相容性,而金铂合金烤瓷冠在边缘密合性方面更具优势,此两种修复体在临床治疗中具有一定的优势。     

烤瓷合金材料生物相容性的研究与进展

背景:研究表明,戴用金属烤瓷冠后,牙龈和牙周出现的局部组织不良反应与口腔烤瓷合金修复体的金属元素释放有关。目的:总结分析非贵金属烤瓷合金及贵金属烤瓷合金的生物相容性、细胞毒性、细胞代谢及其在分子水平的研究机制。方法:检索1990-01/2012-01PubMed数据库,万方数据库与金属烤瓷合金材料对细胞正常生理代谢及细胞免疫学影响的相关研究。英文检索词为"dental casting alloys,biocompatibility,cytotoxicity,cytokines",中文检索词为"烤瓷合金,生物相容性,细胞毒性,细胞因子"。排除因研究目的与本文无关及内容重复的研究,共保留其中的39篇归纳总结。结果与结论:临床5种常用的烤瓷合金的细胞毒性大小依次为:镍铬合金、钛合金、钴铬合金、钯基合金、金合金。贵金属烤瓷合金除了拥有优越的机械性能、抗变色和耐腐蚀性能以及优良的加工应用性还有良好的细胞相容性和生物相容性。金合金的遗传毒性性能优于镍铬合金、钛合金和钴铬合金,是具有良好生物学性能的牙科烤瓷合金材料。非贵金属烤瓷合金中Co-Cr-Mo生物安全性最高,Ni-Cr-Be生物安全性最低,而Ni-Cr介于两者之间。贵金属烤瓷合金的金瓷结合力比非贵金属烤瓷合金的金瓷结合力高,不易出现崩瓷现象。金层可利用自身的弹性屈服来缓解界面应力的破坏从而分散聚集的内应力相应地增强金瓷的结合强度。     

4种烤瓷冠基底合金浸提液影响人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax的表达

背景:研究显示,纯钛材料对人牙龈成纤维细胞的影响不明显,而镍铬合金、含钛镍铬合金明显影响了细胞的炎性表达。目的:比较4种烤瓷冠基底合金对人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的影响。方法:用组织块法分离培养人牙龈成纤维细胞,实验组分别用4种烤瓷冠基底合金浸提液加入人牙龈成纤维细胞培养液中,空白对照组用含体积分数10%小牛血清的DMEM培养液,Western-blot法检测人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的改变。结果与结论:金合金组对Bcl-2和Bax表达的影响接近空白对照组,纯钛组和钴铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响较小,镍铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响最大,与其他各组相比差异有显著性意义(P<0.05)。提示镍铬合金可通过影响Bcl-2与Bax的表达水平,抑制人牙龈成纤维细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

四种烤瓷冠基底金属浸提液干预人牙龈成纤维细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂的表达

背景:修复材料的生物相容性是决定临床修复效果的重要因素之一。目的:通过比较4种金属浸提液对人牙龈成纤维细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂表达的差异探索其生物相容性。方法:选用活体牙龈,原代培养人牙龈成纤维细胞,采用镍铬、钴铬、纯钛及金钯合金4种金属浸提液进行干预,以未进行干预的细胞作为对照。结果与结论:ELISA检测结果显示镍铬和钴铬合金浸提液干预后细胞尿纤溶酶原激活剂表达增加;免疫荧光实验结合电镜观察发现镍铬和钴铬合金浸提液干预的细胞胞质荧光染色深,分布均匀,遍布整个细胞,提示细胞Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂表达增加。而纯钛和金钯合金浸提液对细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂的表达无影响。说明纯钛和金钯合金的生物相容性优于镍铬和钴铬合金。     

镁合金的初步生物安全性评价

目的初步评价AZ31B镁合金的生物安全性。方法体外细胞毒性:L929细胞分别与实验组(M)镁合金培养基浸提液、空白对照组(N)DMEM培养基,阳性对照组(P)5%DMSO培养基培养,3 d后进行细胞毒性分级。体外溶血率:稀释兔血分别与实验组(M)镁合金生理盐水浸提液、空白对照组(N)生理盐水、阳性对照组(N)蒸馏水混合后置37℃水浴中孵育,60 min后离心,取上清液测定吸光度(OD),计算镁合金材料溶血率。体外浸提液分析:检测镁合金材料浸提液中镁离子和钠离子浓度,以及pH值。体内急性毒性:分别自小白鼠腹腔注射空白对照组(N)生理盐水和镁合金组(M)镁合金材料生理盐水浸提液,观察和记录动物的状态,72 h后计算动物体质量变化。结果 N组毒性反应分级为0级,M组为4级,P组为3级。M组溶血率为68.1%,具有溶血作用。浸提液镁离子浓度为1.33 mmol/L,钠离子浓度为134 mmol/L;浸提液pH值为10.10±0.29。所有动物注射后在各时间点无不良反应,一般情况好。M组和N组动物体质量的平均变化分别为1.97%和0.43%,小鼠体质量增加百分比差异无统计学意义(t=0.499,P=0.624)。结论体外实验显示高腐蚀率的镁合金有细胞毒性和溶血率,但体内实验并未见到急性毒性反应。     

自制钴铬烤瓷合金的金瓷结合性能

背景：在非贵金属烤瓷合金中,钴铬烤瓷合金在生物相容性、耐腐蚀性以及金属稳定性方面都优于镍铬烤瓷合金和含钛烤瓷合金,被广泛的应用于临床。目的：通过与德国BEGO钴铬合金对比,评价自制钴铬烤瓷合金的金瓷结合性能。方法：制作25mm×3mm×0.5mm规格的德国BEGO钴铬合金与自制钴铬烤瓷合金两种合金的金属试条,分别熔附8mm×3mm×1mm的VITAMK95瓷粉,采用三点弯曲的方法测试金瓷结合力,利用扫描电镜观察金属氧化界面。结果与结论：加力后国产和德国BEGO钴铬合金样本随着力量的增加瓷层开裂同时完全脱落,表面成灰黑色氧化膜,无明显瓷残余;自制钴铬烤瓷合金与德国BEGO钴铬合金的金瓷结合力差异无显著性意义[（41.26±2.68）,（41.35±2.59）MPa,P〉0.05]。说明自制钴铬烤瓷合金的金瓷结合强度高于ISO所要求的基本值25MPa,且与德国BEGO钴铬合金相比无差异,可满足临床要求。     

转化生长因子β1与体外血管外膜成纤维细胞的增殖和迁移

背景：近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用。当血管损伤后,转化生长因子β1在局部水平上调激活下游多种信号途径,其对血管外膜成纤维细胞参与新生内膜增生过程中所起的作用尚不十分清楚。目的：观察转化生长因子β1对体外血管外膜成纤维细胞增殖和迁移的影响方法：体外培养大鼠胸主动脉成纤维细胞,分别以0,3,5,10,15μg/L的转化生长因子β1刺激成纤维细胞0,2,12,24,48,72h。以MTT法检测细胞增殖活性,Transwell Chamber测试细胞迁移。结果与结论：转化生长因子β1能诱导血管外膜成纤维细胞增殖,随着转化生长因子β1质量浓度、作用时间的增加,诱导血管外膜成纤维细胞增殖能力增强（P〈0.05）,其中10μg/L转化生长因子β1作用48h增殖较对照组增强最为明显（P〈0.01）。不同剂量转化生长因子β1刺激后迁移的细胞数目随转化生长因子β1质量浓度增加而增加,促进作用逐渐增强,呈剂量依赖关系。     

体外高浓度葡萄糖培养及黄芪干预人外周血内皮祖细胞的数量和增殖与分化

背景：内皮祖细胞数量及功能受损是糖尿病血管并发症发生发展的重要环节,黄芪对多种原因引起内皮功能障碍具有保护作用,可以有效保护血管内皮功能。目的：观察高浓度葡萄糖及黄芪干预对人外周血内皮祖细胞数量、增殖及分化影响。方法：不同浓度葡萄糖孵育内皮祖细胞24h以及30mmol/L葡萄糖孵育内皮祖细胞不同时间;内皮祖细胞经20g/L黄芪预处理24h后,再加入30mmol/L葡萄糖培养24h。结果与结论：高葡萄糖以浓度及时间依赖方式减少内皮祖细胞的数量,降低内皮祖细胞的增殖及向内皮细胞系分化能力（P0.05或0.01）,给予黄芪预处理后,内皮祖细胞数量明显增加,增殖及向内皮细胞系分化能力明显增强（P〈0.05或0.01）。提示高葡萄糖以浓度及时间依赖方式减少外周血内皮祖细胞数量,降低内皮祖细胞的增殖及向内皮细胞系分化能力,黄芪可以改善高葡萄糖对内皮祖细胞的损伤作用。     

原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞自分泌转化生长因子β1浓度检测及对转化生长因子β1增殖的调节

背景：体外实验常采用外源性转化生长因子β1刺激来观察细胞增殖变化,易忽略细胞本身自分泌转化生长因子β1的影响。目的：检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞（L929）自分泌转化生长因子β1的浓度和细胞增殖的变化。方法：Elisa试剂盒检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞各时相点细胞内和培养上清中生长转化因子β1水平。结果与结论：纤维肉瘤细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而升高,原代成纤维细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而降低;两种细胞培养上清转化生长因子β1浓度均随时间而上升,但纤维肉瘤细胞显著高于原代成纤维细胞（P〈0.01）,峰值时达到原代成纤维细胞的20倍;两种细胞增殖曲线在72h内均随时间而显著增高（P〈0.01）,同一时间点比较,纤维肉瘤细胞明显高于原代成纤维细胞。提示自分泌转化生长因子β1具有促进细胞增殖的作用,不同的自分泌水平可能是影响原代成纤维细胞这种正常细胞和纤维肉瘤细胞肿瘤细胞对于外源转化生长因子β1反应不同的重要原因。     

高糖状态下小鼠肾小球足细胞凋亡和组成型光形态建成1蛋白的表达

背景：组成型光形态建成1蛋白与细胞凋亡有关。目的：观察高糖对体外培养的小鼠肾小球足细胞凋亡和组成型光形态建成1蛋白表达的影响。方法：将不同浓度葡萄糖溶液分别加入体外培养的条件永生性小鼠肾小球足细胞株培养液中,培养不同时间后检测肾小球足细胞凋亡指数和死亡指数,以筛选最佳剂量效应葡萄糖浓度。用30mmol/L葡萄糖溶液干预小鼠肾小球足细胞（高糖组）,并设立对照组和采用30mmol/L甘露醇干预的甘露醇组。结果与结论：在一定浓度范围内,葡萄糖呈时间和剂量依赖性诱导肾小球足细胞凋亡和死亡（P〈0.05）,随着葡萄糖浓度的进一步加大,肾小球足细胞死亡指数明显升高,而凋亡指数变化不大。与对照组比较,高糖组凋亡指数显著增加（P〈0.05）,其COP1 mRNA及蛋白表达水平均明显下降（P〈0.05）。结果证实,高糖可诱导肾小球足细胞的凋亡,其机制可能与其下调COP1的表达有关。     

益气养阴活血方对肾小球系膜细胞增殖及ERK通路的影响

目的 观察益气养阴活血方含药血清对高糖条件培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及胞外信号调节激酶(ERK)通路的影响.方法 制备益气养阴活血方和福辛普利含药血清.将大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖培养组、高糖培养+福辛普利含药血清组和高糖培养+三个不同浓度益气养阴活血方含药血清组.培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后用Western-blot法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的表达进行半定量分析,用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.结果 与正常对照组相比,高糖组早期(24 h、48 h)能显著促进系膜细胞增殖,福辛普利和高浓度中药含药血清组均可抑制高糖引起的系膜细胞增殖(P<0.05),两组间无统计学差异(P>0.05).高糖刺激6 h后系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达即明显增高,24 h达到高峰,后逐渐减弱,福辛普利和不同浓度中药含药血清干预后,pERK1/2蛋白水平显著下降(P<0.05),中药组和西药组间无统计学差异(P>0.05).结论 益气养阴活血方能抑制肾小球系膜细胞增殖和ERK通路的磷酸化,这可能是其临床肾脏保护作用机制所在.