人绒毛膜滋养层细胞的体外培养

目的 培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法 胰蛋白酶、胶原酶消化绒毛组织，进行原代培养，胰蛋白酶消化法传代培养，光镜、免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。结果 原代培养滋养层细胞3h后开始贴壁，18h后全部贴壁，3天可传代，角蛋白、波形蛋白染色细胞纯度达95％以上。结论 胰蛋白酶、胶原酶消化法简便易行，可获得符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞，建立了稳定的人类绒毛膜滋养层细胞体外培养体系。     

羧甲基几丁糖对兔佐剂性关节炎滑膜细胞体外培养影响实验研究

目的 研究羟甲基几丁糖对兔膝关节类风湿性关节炎模型滑膜组织细胞体外培养的影响。方法 实验在建立兔膝关节类风湿性关节炎模型后切取兔膝关节滑膜组织，作体外细胞培养，加入不同剂量的浓度的2％的羧甲基几丁糖溶液，用MTT法测定羧甲基几丁糖对造模膝关节滑膜细胞的抑制值。结果 随着羟甲基几丁糖浓度的增加，类风温性关节炎模型滑膜细胞的数量减少。结论 羟甲基几丁糖对类风湿关节炎模型滑膜细胞特别是对成纤维细胞样细胞的增殖有抑制作用。     

Ⅰ型IFN对体外培养树突状细胞的影响

树突状细胞(dendritic cells，DC)能够刺激并致敏初始T细胞和启动早期免疫反应而被认为是最重要的抗原呈递细胞。存在于外周组织中的未成熟DC主要参与捕获、加工处理抗原的过程，之后则进入淋巴器官分化为成熟DC并上调HIA—Ⅰ、Ⅱ类分子，CD80、CD86等共刺激分子及粘附分子的表达，诱导CD4^ 和CD8^ T细胞反应。国外研究表明，Ⅰ型IFN可以加速DC的分化和成熟。在Ⅰ型IFN存在下体外培养诱生的DC高表达HLA—Ⅰ、Ⅱ类分子、共刺激分子及粘附分子，刺激同种混合淋巴细胞反应的能力增强。本文对这一领域研究进展作一综述。     

急性淋巴细胞白血病细胞体外培养

急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞体外培养比较困难,这主要是因为ALL克隆形成细胞在各种生长因子中的半固体培养基中形成集落的能力有限,目前尚未发现ALL细胞理想培养条件。有鉴于此,我们开展了ALL细胞体外培养方法的研究,建立了ALL细胞培养体系,对12例ALL细胞进行了体外半固体培养观察,同时对ALL细胞集落形成的因素进行了探讨,现报告如下。材料和方法1 病例来源 12例ALL患者均经临床血象、骨髓确诊,其中L_1 7例,L_2 3例,L_3 2例。2例曾用VP(长春新     

兔膀胱平滑肌细胞体外培养初探

患者由于膀胱肿瘤、损伤结核行膀胱部分切除或全切术后,需行膀胱重建术.而临床上最常用的膀胱替代材料仍为胃肠道,由此带来的营养代谢和其他方面的并发症显而易见.     

应用组织工程方法体外培养人牙囊细胞与I型胶原的合成

目的：研究体外培养人牙囊细胞，探讨其生物学特性及其在牙齿萌出中的作用。方法：取年龄为12岁人埋藏阻生第三磨牙的牙囊，组织块法进行人牙囊细胞的培养，HE染色、扫描电镜观察人牙囊细胞的形态，免疫组织化学染色技术观察I型胶原及波形蛋白在牙囊细胞中的表达及定位。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形，卵圆形及多角形，形似成纤维细胞；扫描电镜可见细胞多呈梭形，也可见多角形，所有细胞表面均有颗粒状物质，有的细胞表面多且密，有的细胞表面较少，折光性较强，细胞核周围分布较多；在牙囊细胞中I型胶原和波形蛋白的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，围绕细胞核周围染色较强，细胞核内染色阴性。结论：体外可以培养人牙囊细胞，人牙囊细胞具有成纤维细胞的特性，具有合成I型胶原的能力。     

人滑膜细胞的分离培养与鉴定

[目的]建立人滑膜细胞体外分离培养的方法，为进一步的实验研究奠定基础。[方法]分别用胶原酶消化法及组织块培养法分离和培养人滑膜细胞，并通过形态学和免疫组化进行鉴定。[结果]培养的滑膜细胞具有成纤维细胞的形态和特征；免疫组化染色显示Vimentin阳性，CD68阴性，滑膜细胞呈长梭形极向生长。[结论]两种方法均成功的培养出了人滑膜细胞，适合做为实验研究的靶细胞。     

细胞因子对树突状细胞体外培养的影响

１导言免疫反应的产生首先需要有抗原递呈细胞（AntigenPresentingCellsAPC）捕获抗原，经加工处理后使抗原肽与MHC分子结合而递呈至细胞表面，T细胞得到抗原信息后，在强大的共刺激分子共同作用下而引起特异性的免疫反应。因此，APC是人体免疫反应产生的首要环节。树突状细胞（Den－driticCellsDC）是一类形状不规则的非单核吞噬系统细胞，特点是胞浆有许多长突起呈触须状，使整个细胞形态象个蜘蛛。DC分散于全身的上皮组织和实质性器官，其细胞数量不超过局部细胞总数的１％；也可迁移到血液和淋巴，其数量不超过血液有核细胞总数…     

一种简易的人原代肝细胞分离培养方法

背景:采用原位两步灌流法分离肝细胞数量多,活性高,但灌流装置价格昂贵,操作环节多,技术要求高,所需时间长,易污染,限制了在一般实验室及人原代肝细胞在医学中的应用.目的:建立人原代肝细胞体外分离培养方法.方法:采用多点穿刺灌注方法将预温38 ℃的前灌流液及Ⅱ型胶原酶溶液灌依次灌入人肝脏组织中,经消化及离心后获得人原代肝细胞;倒置显微镜和电镜观察细胞形态特征,并鉴定.结果与结论:经多点穿刺灌注法消化分离后可获得约5×105个肝细胞,分离获得的肝细胞活率达90%;细胞培养24 h后呈铺路石样生长;电镜示肝细胞呈典型形态特征:细胞核大,胞质少;培养的肝细胞 PAS糖原染色阳性,白蛋白表达阳性.说明多点穿刺灌注法分离人原代肝细胞简单易行,肝细胞产量高、活力好、纯度高,分离培养的肝细胞具有特异性生物学功能表达,适宜在一般条件实验室推广应用.     

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的研究青藤碱对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节模型(CIA)滑膜细胞凋亡的影响。方法原位细胞凋亡检测试剂盒检测各组原代大鼠滑膜细胞凋亡的水平。结果青藤碱组CIA大鼠滑膜细胞的凋亡数明显增加。结论青藤碱治疗类风湿性关节炎的机制可能与诱导滑膜细胞凋亡有关。     

体外纯化乳鼠许旺细胞的4种方法比较(英文)

背景:许旺细胞是外周神经系统中修复神经损伤及神经疾病的主要种子细胞之一.但是,许旺细胞的来源有限,且由于成纤维细胞的污染,使许旺细胞的纯度受到影响.有学者提出了其他的纯化方法,但每种方法都存在其不足之处而不能很好的满足临床应用的需要.目的:比较差速贴壁消化法、冷喷注法、磁珠分选法和G418筛选法4种体外纯化乳鼠许旺细胞方法的差异.方法:取SD大鼠坐骨神经得到所需神经组织.分别用差速贴壁消化法、冷喷注法、磁珠分选法和G418筛选法纯化许旺细胞.比较4种方法获得细胞的活力,免疫组织化学法鉴定许旺细胞并计算纯度.结果与结论:差速贴壁消化法所得到的细胞纯度稍低,活力尚可;冷喷注法获得的细胞纯度和活力均较高;磁珠分选法获得的细胞纯度和冷喷注法相当,但是活力稍差:G418筛选法活力差,纯度高.     

In vitro culture of acute myelogenous leukemia blasts: a comparison of four different culture media

Proliferative responses and cytokine secretion were compared when AML blasts were cultured in the three serum-free media, X-Vivo 10, X-Vivo 15, and defined serum-free medium (IMDM with mercaptoethanol, low-density lipoprotein, albumin, and transferrin) and in media containing 10% inactivated fetal bovine serum (FBS). The following AML blast functions were investigated: (a) constitutive cytokine secretion, (b) autonomous and cytokine-dependent proliferation, and (c) accessory cell function during T cell activation. Constitutive cytokine secretion and accessory cell function differed markedly when using different culture media. For the constitutive AML blast secretion of IL-1beta, IL-6, and tumor necrosis factor (TNF)-alpha, no qualitative differences were seen, but quantitative differences were observed with decreased cytokine levels for cells cultured in X-Vivo 10 and X-Vivo 15. The accessory cell function of AML blasts was also decreased in the X-Vivo media, whereas differences were less pronounced when comparing AML blast proliferation. Our results clearly demonstrate that a well-characterized culture system is essential for in vitro studies of AML blast functions.     

人骨膜细胞体外培养的实验

目的:观察体外培养的人骨膜细胞的形态学特征。方法:实验于2001-01/2003-10广东省粤北人民医院骨科和医学动物实验室完成。采用常规细胞培养法进行人骨膜细胞体外培养,并采用倒置显微镜和电子显微镜观察骨膜细胞生长情况、形态特征及超微结构。结果:①人骨膜培养活细胞光镜下形态:早期新生细胞呈梭形,饱满透明,立体感强;分裂期呈立方形或短柱状;后期由长梭形逐渐变成宽梭和不规则形,分泌功能旺盛。②人骨膜细胞电镜下超微结构:胞体呈梭形,膜面有少量微绒毛状突起,粗面内质网丰富,有大量异噬体等次级溶酶体,线粒体体积较小、基质致密有少量嵴。具有原代细胞生物形态学特征。结论:人骨膜成骨细胞可经体外培养大量增殖,且细胞传代进化后,其形态学结构与原代细胞无明显差异,可用于细胞移植。     

人骨膜细胞体外培养的实验

目的：观察体外培养的人骨膜细胞的形态学特征。方法：实验于2001-01／2003-10广东省粤北人民医院骨科和医学动物实验室完成。采用常规细胞培养法进行人骨膜细胞体外培养，并采用倒置显微镜和电子显微镜观察骨膜细胞生长情况、形态特征及超微结构。结果：①人骨膜培养活细胞光镜下形态：早期新生细胞呈梭形，饱满透明，立体感强；分裂期呈立方形或短柱状；后期由长梭形逐渐变成宽梭和不规则形，分泌功能旺盛。②人骨膜细胞电镜下超微结构：胞体呈梭形，膜面有少量微绒毛状突起，粗面内质网丰富，有大量异噬体等次级溶酶体，线粒体体积较小、基质致密有少量嵴。具有原代细胞生物形态学特征。结论：人骨膜成骨细胞可经体外培养大量增殖，且细胞传代进化后，其形态学结构与原代细胞无明显差异，可用于细胞移植。     

大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞的体外培养与鉴定

目的:目前内皮祖细胞主要从骨髓、脐带血和外周血获取,但其分离培养方法尚不成熟,外周血来源因损伤小、易获取而被普遍使用,但得到的内皮祖细胞纯度较低.实验拟探讨大鼠骨髓来源内皮祖细胞体外培养、诱导扩增和生物学特性鉴定方法.方法:实验于2006-08/2007-08 在南昌大学第一附属医院泌外研究所完成.①实验材料:2周龄SD大鼠由南昌大学医学院动科部提供,雌雄不拘,清洁级,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:应用梯度离心法采集大鼠骨髓单个核细胞,贴壁筛选法分离内皮祖细胞,置于添加了血管内皮细胞生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子、表皮生长因子的M199培养液中扩增培养,对培养2周的细胞采用免疫荧光染色鉴定细胞标志物血管性血友病因子、血管内皮生长因子受体-2、CD34、CD133, 采用RT-PCR法检测内皮细胞特异性分子标志血管性血友病因子、FLK-1、Tie-2、CD34、CD133、eNOS基因表达.结果:①培养4 d,光电显微镜下可见细胞集落形成,梭形贴壁细胞从集落中央以放射状向外周生长.培养7～10 d,细胞集落相互连接,呈典型的"鹅卵石"样外观.2周左右可见细胞排列成条索状结构并可呈"微血管样"排列生长.②贴壁细胞免疫荧光染色鉴定细胞标志物血管性血友病因子、FLK-1、CD34、CD133阳性,RT-PCR法检测内皮细胞特异性分子标志血管性血友病因子、FLK-1、Tie-2、CD34、CD133、eNOS基因阳性表达.结论:采用梯度离心法从骨髓中分离单个核细胞,经诱导培养可实现内皮祖细胞的分离培养和体外扩增.     

无血清培养大鼠胚胎向神经干细胞的分化

背景:体外培养扩增获取大量、高纯度的神经干细胞是其移植应用的前提,无血清培养主要目的是去除血清中可能诱导神经干细胞分化的生长因子等干扰因素.目的:在无血清条件下体外分离培养大鼠胚胎神经干细胞,并观察其生物学特性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-03/2006-03在河北医科大学第三医院中心实验室完成.材料:14～16 d龄SD胎鼠2只,由河北医科大学实验动物中心提供.方法:无菌条件下取胎鼠大脑皮质,剪碎后机械分离法制作单细胞悬液,加入含B27神经营养添加剂的无血清MEM/F12培养基进行培养,1周后传代.主要观察指标:免疫荧光染色鉴定神经干细胞巢蛋白的表达及传代能力,加入含血清的MEM/F12培养基诱导分化1周后免疫组化检测细胞分化情况.结果:培养48～72h细胞聚集悬浮生长,形成典犁的神经球,呈神经干细胞特异性抗原巢蛋白阳性表达.传代的神经干细胞置于BrdU培养液中5～7d形成次代神经球,呈BrdU阳性,表明次代神经球中绝大部分细胞为传代后细胞分裂而来,具有传代能力,传代后加入含血清的培养基后可以分化为微管相关蛋白2阳性细胞和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞.结论:利用无血清培养技术可成功从胎鼠脑皮质中分离培养出具有分裂增殖能力及多向分化潜能的神经干细胞.     

鼠胚胎神经干细胞的体外培养及诱导分化

背景:随着神经干细胞培养技术条件的成熟,为颅脑损伤后神经系统功能重建、神经再生和神经系统疾病治疗提供了新的思路和途径.但移植所用的细胞来源及移植后的神经干细胞能否分化为神经细胞是急需解决的重要问题.目的:拟将体外分离培养的鼠胚胎神经干细胞稳定增殖传代,并诱导分化出神经系统的3种基本细胞.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-06/2008-06在新疆维吾尔自治区人民医院完成.材料:14～16d孕龄Wistar大鼠胚胎,由新疆自治区实验动物研究所和新疆医科大学实验动物中心提供.方法:取胎鼠额叶大脑皮质,组织块消化法体外分离培养神经干细胞,在表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和B27联合作用下使其稳定增殖.原代培养7 d后,加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导14 d.主要观察指标:倒置显微镜下观察神经干细胞的生长形态,并行巢蛋白免疫荧光染色鉴定.应用免疫组化染色检测诱导后神经干细胞的分化情况.结果:原代培养一两天细胞散在分布,胞体较小,呈圆形,折光性较好,3 d后逐渐形成由数个细胞组成的细胞球;传代后贴壁细胞多数分化为长梭形或扁平形的胶质细胞,10 d时可见大量由数十至数百个细胞组成的较大细胞球,其生长速度基本与原代培养相同,但成球速度明显加快;免疫荧光染色呈巢蛋白阳性反应.以含体积分数为10%胎牛血清的培养液诱导后,免疫化学染色示神经干细胞球呈神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白、髓鞘碱性蛋白阳性表达.结论:实验成功从鼠胚胎脑皮质分离培养出神经干细胞,并诱导分化为神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞.     

许旺细胞的体外培养提纯

许旺细胞是组织工程修复神经损伤的种子细胞,能否获得大量且高纯度的许旺细胞对于组织工程学至关重要.许旺细胞的培养纯化技术日趋完善,其经典的培养方法有植块法和酶消化法,在此基础上改进的去除成纤维细胞的方法有差速贴壁法、免疫选择法、阿糖胞苷补充法、刺激因子增殖法等.最近比较新的提纯方法有磁性活细胞分离法、层粘连蛋白纯化法、三维支架联合培养法.另外还有一些因子,如胎牛血清浓度等影响许旺细胞的扩增.这些技术的主要目的就是在体外获得大量的高纯度许旺细胞,以满足组织工程修复神经的需要.许旺细胞的体外培养和提纯方法众多,且已取得初步进展,但在此技术完全成熟之前尚还有许多问题有待解决,如周期长、细胞活性低、在传代培养中细胞生物学特性不稳定等.     

兔膀胱脱细胞基质负载大鼠毛囊干细胞的体外培养

背景：组织工程学的兴起为泌尿系组织或器官的修复和重建开辟了新的途径,膀胱脱细胞基质是较好的泌尿系组织工程修复的替代材料。目的：构建毛囊干细胞与异种膀胱脱细胞基质为支架的细胞支架复合物,体外培养观察细胞在支架上的生长状态。方法：制备新西兰兔膀胱脱细胞基质,通过扫描电镜和Masson染色检测材料脱细胞效果,采用二次沉淀法将第3代毛囊干细胞静态接种于膀胱脱细胞基质表面,倒置显微镜下观察细胞生长状态,并绘制细胞生长曲线,组织学检测和扫描电镜观察细胞在材料表面的生长状况。结果与结论：制备的膀胱脱细胞基质为白色半透明膜状,扫描电镜下观察为纤维网状结构,未见细胞残留。Masson染色提示膀胱脱细胞基质为胶原结构,无明显细胞残留。细胞材料体外复合培养48 h后倒置显微镜下观察膀胱脱细胞基质周围毛囊干细胞生长状态良好,1周后扫描电镜下观察毛囊干细胞伸展、黏附于支架表面。结果可见毛囊干细胞与膀胱脱细胞基质体外培养具有良好的生物相容性。     

三种纯化方法体外培养人胚嗅球嗅鞘细胞的比较

目的:嗅鞘细胞纯化培养方法有免疫亲和吸附法、免疫磁珠法、化学药物法、差速贴壁法、无血清饥饿法等,但均存在缺陷.比较3种纯化方法原代培养人胚嗅球嗅鞘细胞的纯度,寻求简单实用的高纯度人胚嗅球嗅鞘细胞的体外培养方法.方法:实验于2007-08/12在西安交通大学口腔医院医学实验中心进行.选用流产胚胎标本24份,胎龄4～6月,由西安交通大学第二医院和陕西省妇幼保健院产科提供.实验经产妇及家属同意,并经医院伦理委员会的批准.实验方法:取胚胎嗅球分离培养嗅鞘细胞,制成单细胞悬液.将单细胞悬液加入未包被的培养瓶中培养,然后再次将细胞悬液加入未包被的培养瓶中,具体差速时间根据观察决定.最后将差速贴壁后含未贴壁细胞的细胞悬液加入多聚赖氨酸包被的培养瓶或培养板中,用3种方法纯化培养:阿糖胞苷法、无血清饥饿法和间断神经营养因子3法纯化培养人胚嗅球嗅鞘细胞.比较3种纯化方法下嗅鞘细胞生长变化及纯度.结果:①培养早期嗅鞘细胞呈圆形, 随着培养过程进行细胞逐渐伸出细长突起呈双极、三极和多极细胞,胞核位于细胞中央. 成熟的嗅鞘细胞大多呈双极、三极细胞与许旺细胞相似,细胞折光性好,胞核呈圆形位于细胞中央,"煎蛋样" 细胞少见.②差速贴壁法培养3～6 d时纯度为88%,以后成纤维细胞增殖嗅鞘细胞纯度迅速下降.阿糖胞苷法阿糖胞苷作用后细胞大量死亡,免疫染色几乎未见阳性反应细胞存在.无血清饥饿法培养3～6 d时嗅鞘细胞纯度为90%,但细胞状态差.间断神经营养因子3法培养3～9 d时嗅鞘细胞纯度为95%,且细胞状态良好.结论:差速贴壁结合间断间断神经营养因子3法比结合阿糖胞苷法、无血清饥饿法获得的嗅鞘细胞纯度高,且细胞状态良好.