重组人促红细胞生成素治疗尿毒症贫血的疗效

目的 探讨重组人促红细胞生成素治疗尿毒症贫血的临床效果.方法 六盘水市水矿集团总医院治疗的尿毒症贫血患者,全部使用重组人促红细胞生成素进行治疗.观察患者治疗前后的贫血治疗情况和肾功能改善情况.结果 36例患者经过12周的治疗后,显效17例,占47.22％;有效15例,占41.67％;无效4例,占11.11％;总有效率达到88.89％.患者的血红蛋白水平明显提高,红细胞压积也明显改善,肾功能无明显变化.有4例患者发生轻微的血压升高,无其他不良反应发生.结论 重组人促红细胞生成素可以安全、有效地改善尿毒症患者的贫血情况,提高患者的日常生活质量,值得临床推广.     

人重组促红细胞生成素治疗脓毒症贫血的临床研究

目的 探讨人重组促红细胞生成素治疗脓毒症贫血的临床价值.方法 选择2005年6月至2006年12月天津医科大学第二医院ICU脓毒症伴有贫血患者60例,分为人重组促红细胞生成素治疗组(n=30)和对照组(n=30).所有患者均需排除肾功能不全需血液净化治疗者、消化道出血及曾经rhu-EPO治疗者.治疗组患者入院后48h起给予皮下注射人重组促红细胞生成素,每次6000U,隔日一次,连续两周;当Hb≤80 g/L,输红细胞治疗或根据病情由主诊医师决定.数据均以(-x±s)表示,计量资料用t检验,计数资料采用精确概率法检验,P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 两组患者治疗前后血红蛋白比较,治疗前两组患者血红蛋白差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后治疗组血红蛋白(105.87±11.48)g/L明显高于对照组(91.23±19.89)g/L(P＜0.01).治疗组输血量(2.0 ±0.47)U显著低于对照组(2.63±0.43)U(P＜0.01).两组患者死亡率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脓毒症合并贫血患者给予皮下注射人重组促红细胞生成素治疗可以显著提高血红蛋白水平,减少输血.     

重组人促红细胞生成素联合骨髓间充质干细胞移植治疗脓毒症大鼠心肌损伤

背景：相关研究表明促红细胞生成素及骨髓间充质干细胞均对心肌凋亡有一定影响,但两者联合应用治疗脓毒症相关性心肌损伤少见报道。目的：观察骨髓间充质干细胞移植联合腹腔内注射促红细胞生成素对脓毒症大鼠心肌细胞病理学改变及细胞凋亡的影响。方法：选用SD大鼠50只,随机数字表法均分为5组（n=10）,应用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症大鼠模型。骨髓间充质干细胞组建模后即刻尾静脉输注异体间充质干细胞;促红细胞生成素组建模后即刻腹腔内注射促红细胞生成素;促红细胞生成素＋细胞移植组两者联合应用;模型组行盲肠结扎穿孔术,对照组开腹后不做任何处理,均尾静脉输注相同容量的生理盐水。24 h 后麻醉处死实验动物,取心肌标本,采用苏木精-伊红染色观察心肌组织形态;用Western blot方法检测心肌组织中凋亡蛋白Bax、Caspase-3,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量。结果与结论：苏木精-伊红染色结果：对照组可见心肌细胞排列整齐,心肌细胞结构完整;模型组可见广泛心肌纤维断裂,排列紊乱,心肌细胞肿胀或皱缩,可见空泡变性;心肌间质血管充血、水肿,炎症细胞浸润;促红细胞生成素组与骨髓间充质干细胞组心肌组织相似,炎性细胞浸润情况较轻,期间散在分布正常心肌细胞;促红细胞生成素＋细胞移植组心肌细胞损害较轻,间质充血不明显,少量炎症细胞浸润。Western blot结果：促红细胞生成素＋细胞移植组Bcl-2蛋白表达显著高于促红细胞生成素组、模型组及对照组（P＜0.01）, Bax及Caspase-3蛋白表达量均减低（P＜0.05）。结果显示,骨髓间充质干细胞移植联合给予促红细胞生成素在脓毒症相关性心肌损伤的治疗中可减轻心肌的病理学改变、抑制心肌细胞的凋亡,其机制可能是通过上调抗凋亡蛋白、下调凋亡蛋白?     

重组人促红细胞生成素在多发性骨髓瘤中的应用进展

多发性骨髓瘤(MM)是一种源于浆细胞的恶性肿瘤,其典型临床表现有贫血、骨痛、肾功能损害和感染,而贫血是其最常见表现。临床上仍以药物化学治疗和骨髓移植作为其治疗方案。随着对重组人促红细胞生成素(rHuEpo)作用机制及MM的发病机制深入研究,rHuEpo在MM治疗中的临床应用日益广泛。近年的研究表明,rHuEpo既能改善MM相关性贫血、还有一定抗骨髓瘤效应,抗骨髓瘤机制还有待进一步研究。     

重组人促红细胞生成素治疗慢性病性贫血的疗效

目的探讨重组人促红细胞生成素治疗慢性病性贫血的临床疗效。方法选取2004年12月至2013年6月慢性病性贫血患者200例,按照治疗药物分为治疗组和对照组,每组100例。治疗组皮下注射促红细胞生成素(r Hu EPO),对照组行常规原发病治疗。治疗8周末对比两组患者治疗前后血液学指标以及血清、转铁蛋白饱和度等指标的恢复情况。结果治疗组95例心悸气短、头昏眼花、食欲不振等慢性贫血病患者出现了不同程度的改善,同时血液学指标以及血清铁、总铁结合力以及转铁蛋白饱和度相比于治疗前有显著改善,而对照组患者的临床症状未见明显改善。结论对慢性病性贫血患者采用重组人促红细胞生成素能在一定程度上改善患者的贫血症状,改善临床症状,值得在临床推广应用。     

促红细胞生成素及其检测

促红细胞生成素（erythropoietin EPO）,主要由肾脏近曲小管附近的细胞合成和分泌,它的基本生理功能是刺激骨髓红细胞的生成和释放。1985年,人们利用基因重组技术表达了重组人促红细胞生成素（rhEPo）,在临床上主要用于治疗肾性贫血以及肿瘤等各种慢性疾患所伴发的贫血。由于EPO能促进血液中红细胞数量的增加,从而提高血液的载氧能力,EPO也被竞技体育中某些耐力项目（如长跑、自行车、游泳、划船等）的运动员滥用,借以提高体能。而长期使用rhEPO对运动员来说,它可能会带来一时的荣誉,     

重组人促红细胞生成素对尿毒症患者血清瘦素水平的影响

目的观察重组人促红细胞生成素对尿毒症患者血清瘦素水平的影响.方法 30例尿毒症患者早八时抽空腹血,用酶标法测定重组人促红细胞生成素应用前及用药二周、四周、八周后的血清瘦素水平. 结果男(6.24±4.18)μg/L,女(9.86±5.86)μg/L;重组人促红细胞生成素应用前尿毒症患者血清瘦的水平为男(21.18±7.42)μg/L,女(29.04±6.48)μg/L;应用二周后为男(16.24±5.88)μg/L,女(20.28±6.36)μg/L;四周后为男(13.76±4.24)μg/L,女(16.82±5.25)μg/L;八周后为(14.84±6.496)μg/L,女(18.47±5.34)μg/L.结论尿毒症患者血清瘦素水平明显高于正常人;红细胞生成素的应用能够有效降低患者的血清瘦素水平、增加食欲、改善营养状态.     

重组人促红细胞生成素治疗肿瘤相关性贫血的研究

目的 观察重组人促红细胞生成素对肿瘤相关性贫血治疗的疗效.方法 将肿瘤相关性贫血患者80例按随机数字表法分为观察组(40例)和对照组(40例),对照组采用常规化疗,观察组在常规化疗基础上加用重组人促红细胞生成素治疗,每次150 U·kg-1,皮下注射,3次·周-1,疗程8周;比较2组的疗效.结果 观察组在使用重组人促红细胞生成素后第4周和8周,有效率分别为40%(16/40)和70%(28/40);对照组有效率相应为15%(6/40)、25%(10/40).与对照组治疗后同期比较,观察组有效率较高(均P<0.05);观察组治疗8周后血红蛋白、红细胞、血细胞比容均高于对照组(均P<0.05～0.01).与治疗前比较,观察组治疗后卡氏性能状态评分较高(P<0.05).结论 应用重组人促红细胞生成素治疗肿瘤相关性贫血疗效明显,能有效提高其血红蛋白水平,改善生活质量.     

不同浓度重组人促红细胞生成素对神经干细胞体外培养增殖的影响

背景：重组人促红细胞生成素是一种糖蛋白,近年的研究表明其对神经细胞的许多功能活动均具有调节作用。目的：观察不同浓度重组人促红细胞生成素对神经干细胞体外培养增殖的影响。方法：提取新生SD大鼠神经干细胞,用含不同浓度（5,50,500U/mL）重组人促红细胞生成素和20μg/L碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基进行培养,以不含重组人促红细胞生成素无血清培养基为对照组。细胞培养7d后计算神经干细胞克隆形成率,培养10d后计数NSE和GFAP免疫阳性细胞数。结果与结论：添加重组人促红细胞生成素组细胞增殖较快,最终神经球的数量多于对照组,以50U/mL重组人促红细胞生成素组作用显著;50U/mL重组人促红细胞生成素组的生长速度显著快于对照组。50U/mL重组人促红细胞生成素组中NSE和GFAP免疫阳性细胞明显多于对照组（P〈0.01）。结果表明重组人促红细胞生成素对神经干细胞体外培养增殖有促进作用,尤以适中浓度（50U/mL）作用更加明显。     

Simvastatin induces osteogenic differentiation in human amniotic fluid mesenchymal stem cells (AFMSC)

Amniotic fluid is a complex mixture composed of water, salts and different cells types derived from embryo exfoliation. Some of these cells present similar characteristics to mesenchymal stem cells as adherent properties, typical surface antigens and differentiation capacity. These cells are called amniotic fluid‐derived mesenchymal stem cells (AFMSCs) and are easily obtained by amniocentesis, propagated in culture and differentiated in several cell types with specific inductions. In this study, we observe the ability of simvastatin, a 3‐HMG‐CoA reductase inhibitor, to induce AFSMCs osteogenic differentiation. When AFSMCs were incubated with medium containing simvastatin, it was observed morphological changes, calcium deposits formation confirmed by Alizarin Red stain. Differentiated cells also expressed typical osteogenic genes, as osteopontin and osteocalcin. In conclusion, simvastatin could be used as an optional osteogenic induction agent for amniotic fluid‐derived mesenchymal stem cells.     

重组人促红细胞生成素与骨髓间充质干细胞的迁移及黏附☆

背景:促红细胞生成素可促进内皮祖细胞的增殖分化并增强其黏附性。目的:观察重组人促红细胞生成素干预对人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力及相关细胞信号传导通路的影响。方法:体外培养人骨髓间充质干细胞,使用重组人促红细胞生成素干预第6代人骨髓间充质干细胞。分别用PI3K/Akt通路特异抑制剂Ly294002或p38MAPK通路特异激动剂anisomycin或ERK1/2通路特异抑制剂U0126预处理。结果与结论:重组人促红细胞生成素可使人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路磷酸化水平升高,抑制p38MAPK通路磷酸化水平,对人骨髓间充质干细胞的ERK通路和总Akt、总p38MAPK水平无明显影响。重组人促红细胞生成素作用组中迁移细胞数目显著高于对照组(P<0.01),黏附细胞数亦明显增加(P<0.01),PI3K/AKT通路特异抑制剂Ly294002预处理后重组人促红细胞生成素对迁移能力的作用消失,p38MAPK通路特异激动剂anisomycin预处理对两种作用影响均不明显。提示重组人促红细胞生成素具有增强人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力的作用,其增强迁移能力的作用与激活人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路有关,但是它对黏附能力的作用与PI3K/Akt和p38MAPK通路均无关。     

重组人转化生长因子-β1对间充质干细胞分化为成骨细胞的影响

目的 探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对成人骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为成骨细胞的影响。方法 体外分离、扩增成人骨髓MSCs。采用不同浓度的rhTGF-β1诱导成人骨髓MSCs体外分化为成骨细胞。利用倒置光学显微镜、透射电镜、四甲基偶氮唑盐比色、碱性磷酸酶(ALP)染色、ALP活性测定等方法研究成人骨髓MSCs增殖和分化情况。结果 成人骨髓MSCs的增殖及分化与rhTGF-β1呈剂量依赖关系，低浓度时促进增殖，高浓度抑制增殖，5μg／L浓度时增殖达到高峰。其浓度升高促进MSCs分化。结论 成人骨髓MSCs分化为成骨细胞，rhTGF-β1浓度为5μg／L时较合适。     

两步法分离和培养人羊水来源胚胎间充质干细胞及其向神经元样细胞诱导分化的实验研究

目的 建立两步培养法分离培养人孕中期羊水间充质干细胞(MSCs)的方法,观察羊水MSCs向神经元样细胞的诱导分化.方法 采用改进的两步培养法分离和培养人羊水MSCs,以β-巯基乙醇诱导其向神经元样细胞方向分化;并使用流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学法研究人羊水MSCs的生物学特性.结果 成功分离、培养和传代出人羊水MSCs.流式细胞术检测人羊水MSCs表达CD44、CD29、CD105,不表达CD45、CD34、人白细胞DR抗原(HLA-DR);免疫荧光法和RT-PCR检测表明,部分人羊水MSCs表达转录因子Oct-4.两步培养法羊水MSCs集落形成率[(15.0±2.3)%]和Oct-4阳性细胞率[(1.2±0.3)%]均高于一步法[分别为(10.0±1.8)%,(0.9±0.2)%,P均<0.05].羊水MSCs经β-巯基乙醇诱导后细胞形态发生改变,伸出突起并呈神经球样改变;免疫细胞化学法检测显示(54.76±3.65)%的细胞表达神经元特异性烯醇化酶(NSE),同时(36.28±4.27)%的细胞表达神经胶质酸性蛋白(GFAP).结论 人羊水中存在MSCs,两步培养法是一种高效、简便、实用而且不干扰常规产前诊断程序的方法.在体外条件下,利用β-巯基乙醇和适宜的培养液可使羊水MSCs定向分化为神经元.     

体外诱导羊膜来源间充质干细胞分化为血管内皮细胞

背景：羊膜来源间充质干细胞植入机体不同类型组织后是否可以分化为相应组织靶细胞呢？目的：检测血管内皮细胞生长因子在体外诱导人羊膜间充质干细胞分化为血管内皮细胞的可行性。方法：分离培养羊膜间充质干细胞,鉴定其表面抗原表达,用含体积分数2%胎牛血清以及50μg/L血管内皮生长因子的条件培养基诱导,诱导后细胞通过内皮细胞标志物血管内皮生长因子受体2以及v-WF染色鉴定。结果与结论：羊膜间充质干细胞表面抗原CD29、CD44、CD105阳性,CD34、CD45、CD106以及HLA-DR阴性。诱导后细胞形态明显改变,内皮细胞标志物血管内皮细胞生长因子受体2以及v-WF染色结果阳性。提示羊膜间充质干细胞在体外具有分化为血管内皮细胞的能力。     

体外诱导羊膜来源间充质干细胞分化为血管内皮细胞

背景:羊膜来源间充质干细胞植入机体不同类型组织后是否可以分化为相应组织靶细胞呢?目的:检测血管内皮细胞生长因子在体外诱导人羊膜间充质干细胞分化为血管内皮细胞的可行性.方法:分离培养羊膜间充质干细胞,鉴定其表面抗原表达,用含体积分数2%胎牛血清以及50 μg/L血管内皮生长因子的条件培养基诱导,诱导后细胞通过内皮细胞标志物血管内皮生长因子受体2以及v-WF染色鉴定.结果与结论:羊膜间充质干细胞表面抗原CD29、CD44、CD105阳性,CD34、CD45、CD106以及HLA-DR阴性.诱导后细胞形态明显改变,内皮细胞标志物血管内皮细胞生长因子受体2以及v-WF染色结果阳性.提示羊膜间充质干细胞在体外具有分化为血管内皮细胞的能力.     

Renal differentiation of amniotic fluid stem cells: perspectives for clinical application and for studies on specific human genetic diseases

Eur J Clin Invest 2012; 42 (6): 677–684 Background Owing to growing rates of diabetes, hypertension and the ageing population, the prevalence of end‐stage renal disease, developed from earlier stages of chronic kidney disease, and of acute renal failure is dramatically increasing. Dialysis and preferable renal transplantation are widely applied therapies for this incurable condition. However these options are limited because of morbidity, shortage of compatible organs and costs. Therefore, stem cell‐based approaches are becoming increasingly accepted as an alternative therapeutic strategy. Design This review summarizes the current findings on the nephrogenic potential of amniotic fluid stem (AFS) cells and their putative implications for clinical applications and for studies on specific human genetic diseases. Results Since their discovery in 2003, AFS cells have been shown to be pluripotent with the potential to form embryoid bodies. Compared to adult stem cells, induced pluripotent stem cells or embryonic stem cells, AFS cells harbour a variety of advantages, such as their high differentiation and proliferative potential, no need for ectopic induction of pluripotency and no somatic mutations and epigenetic memory of source cells, and no tumourigenic potential and associated ethical controversies, respectively. Conclusions Recently, the results of different independent studies provided evidence that AFS cells could indeed be a powerful tool for renal regenerative medicine.     

不同孕期羊水间充质干细胞体外培养方法的比较

背景：以往对羊水间充质干细胞的培养多采集孕中期羊水,对妊娠其他阶段羊水进行间充质干细胞培养的研究还很少,特别是系统地对不同孕期羊水和不同培养基进行间充质干细胞培养的效果还未见报道。目的：比较不同孕期羊水中间充质干细胞体外培养的效果。方法：采用两种不同细胞培养基分别对60份妊娠时间为15~42周的羊水进行间充质干细胞的分离培养,观察间充质干细胞培养过程中生长状况及间充质干细胞培养成功率;细胞化学染色法检测间充质干细胞的化学性质;MTT法检测传代后间充质干细胞的生长曲线。结果与结论：采用含体积分数为10%胎牛血清的PRMI-1640培养基和AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基对孕期为37~42周羊水的间充质干细胞培养成功率分别为8%和44%,孕期为21~36周羊水的间充质干细胞成功率分别为20%和60%。而孕期为15~20周的羊水用两种培养基培养成功率为100%。细胞化学染色结果显示：POX、SB（-）,ACP、PAS、AENE（＋）,而NAP有1%为（＋）,不同孕期染色结果无差异。MTT法测定羊水间充质干细胞的生长曲线呈＂S＂形。孕期在15~36周的羊水间充质干细胞可以传15代以上仍然旺盛,而孕期为37~42周的羊水间充质干细胞传10代即表现为生长缓慢。结果表明采用AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基可以明显提高晚期羊水间充质干细胞培养的成功率。羊水的最佳采集时间为15~20周。背景：以往对羊水间充质干细胞的培养多采集孕中期羊水,对妊娠其他阶段羊水进行间充质干细胞培养的研究还很少,特别是系统地对不同孕期羊水和不同培养基进行间充质干细胞培养的效果还未见报道。目的：比较不同孕期羊水中间充质干细胞体外培养的效果。方法：采用两种不同细胞培养基分别对60份妊娠时间为15~42周的羊水进行间充质干细胞的分离培养,观察间充质干细胞培养过程中生长状况及间充质干细胞培养成功率;细胞化学染色法检测间充质干细胞的化学性质;MTT法检测传代后间充质干细胞的生长曲线。结果与结论：采用含体积分数为10%胎牛血清的PRMI-1640培养基和AmnioMAXⅡcomplete羊水专用细胞培养基对孕期为37~42周羊水的间充质干细胞培养成功率分别为8%和44%,孕期为21~36周羊水的间充质干细胞成功率分别为20%和60%。而孕期为15~20周的羊水用两种培养基培养成功率为100%。细胞化学染色结果显示：POX、SB（-）,ACP、PAS、AENE（＋）,而NAP有1%为（＋）,不同孕期染色结果无差异。MTT法测定羊水间充质干细胞的生长曲线呈＂S＂形。孕期在15~36周的羊水间充质干细胞可以传15代以上仍然旺盛,而孕期为37~42周的羊水间充质干细胞传10代即表现为生长缓慢。结果表明采用AmnioMAXⅡcomplete羊水专用细胞培养基可以明显提高晚期羊水间充质干细胞培养的成功率。羊水的最佳采集时间为15~20周。     

不同孕期羊水间充质干细胞体外培养方法的比较

背景:以往对羊水间充质干细胞的培养多采集孕中期羊水,对妊娠其他阶段羊水进行间充质干细胞培养的研究还很少,特别是系统地对不同孕期羊水和不同培养基进行间充质干细胞培养的效果还未见报道.目的:比较不同孕期羊水中间充质干细胞体外培养的效果.方法:采用两种不同细胞培养基分别对60份妊娠时间为15~42周的羊水进行间充质干细胞的分离培养,观察间充质干细胞培养过程中生长状况及间充质干细胞培养成功率;细胞化学染色法检测间充质干细胞的化学性质;MTT法检测传代后间充质干细胞的生长曲线.结果与结论:采用含体积分数为10%胎牛血清的PRMI-1640培养基和AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基对孕期为37~42周羊水的间充质干细胞培养成功率分别为8%和44%,孕期为21~36周羊水的间充质干细胞成功率分别为20%和60%.而孕期为15~20周的羊水用两种培养基培养成功率为100%.细胞化学染色结果显示:POX、SB(-),ACP、PAS、AENE(+),而NAP有1%为(+),不同孕期染色结果无差异.MTT法测定羊水间充质干细胞的生长曲线呈"S"形.孕期在15~36周的羊水间充质干细胞可以传15代以上仍然旺盛,而孕期为37~42周的羊水间充质干细胞传10代即表现为生长缓慢.结果表明采用AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基可以明显提高晚期羊水间充质干细胞培养的成功率.羊水的最佳采集时间为15~20周.