不同浓度吗啡与5-氟尿嘧啶联合应用对MCF-7乳腺癌细胞Bcl-2、 Bax表达的影响

目的:研究吗啡与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合应用对MCF-7乳腺癌细胞Bcl-2、Bax表达的影响.方法:药物作用48 h后通过Western Blot检测Bcl-2、Bax表达情况.结果:Bcl-2表达情况:未处理组最强.单独应用吗啡时,250 μmol/L及1 250 μmol/L引起Bcl-2表达减弱.单独应用500 μmol/L 5-Fu时Bcl-2表达减弱.与5-Fu联合应用,随其中吗啡浓度的增加,Bcl-2表达逐渐减弱,且均具有协同作用.Bax表达情况:未处理组最弱.单独应用吗啡时,250μmol/L及1 250 μmol/L引起Bax表达增强.单独应用500 μmol/L 5-Fu时Bax表达增强.与5-Fu联合应用,随着吗啡浓度的增加,Bax表达逐渐增强,且均具有协同作用.结论:一定浓度的吗啡、5-Fu及联合应用于MCF-7乳腺癌细胞48 h能下调Bcl-2表达、上调Bax表达,且与其中吗啡的浓度有一定的剂量依赖关系,两药联合应用具有协同作用.     

丝裂霉素、5—氟尿嘧啶、三苯氧胺联合应用对人乳癌细胞株MCF—7的作用

目的：观察丝裂霉素，5－氟尿嘧啶，三苯氧胺联合应用对人乳癌细胞株MCF－7的相互作用。方法：采用MTT法利用中效原理判断联合用药的效应。结果：MMC，5－Fu单用及联合应用时，随着药物浓度增加其效应也增加，TAM与MMC，5－Fu合用时，对MCF－7细胞作用加强，MMC与5－Fu高浓度合用时呈协同作用，低浓度时呈拮抗作用，两药合用时浓度比例变化及给药时间次序对效应影响不大。结论：MMC与5－Fu高浓度合用时为协同作用，低浓度时为拮抗作用，TAM与MMC，5－Fu合用时，对MCF－7细胞作用加强，两药合用效应大小与两药浓度比例及给药时间次序无关。     

MCF7细胞中肿瘤干细胞的增殖特征

背景:肿瘤干细胞学说认为,肿瘤干细胞是肿瘤不断增殖的根源,并与肿瘤的浸润转移、耐药现象密切相关。目的:在单细胞水平研究体外传代培养的MCF7细胞中肿瘤干细胞含量变化规律,认识肿瘤干细胞在体外培养环境下的增殖特点。方法:利用单细胞分离种植-成瘤性克隆方法对传代培养后不同时间点MCF7细胞中肿瘤干细胞的比例连续检测,流式细胞仪同步检测相应细胞样本中CD44+CD24-/low亚群的含量变化。结果与结论:传代后培养的MCF7细胞在不同时间点其肿瘤干细胞比例及CD44+/CD24-/low亚群比例均呈现有规律的变化。但CD44+/CD24-/low亚群变化更为显著(36.84%到81.95%),而肿瘤干细胞含量仅在小范围波动(38.54%～47.39%)。结果提示传代培养的MCF7细胞中,肿瘤干细胞具有通过调节自身增殖来保持其比例相对稳定的特点;CD44+/CD24-/low亚群并不代表或者富集MCF7细胞株中的肿瘤干细胞亚群。     

MCF7细胞中肿瘤干细胞的增殖特征

背景：肿瘤干细胞学说认为,肿瘤干细胞是肿瘤不断增殖的根源,并与肿瘤的浸润转移、耐药现象密切相关。目的：在单细胞水平研究体外传代培养的MCF7细胞中肿瘤干细胞含量变化规律,认识肿瘤干细胞在体外培养环境下的增殖特点。方法：利用单细胞分离种植-成瘤性克隆方法对传代培养后不同时间点MCF7细胞中肿瘤干细胞的比例连续检测,流式细胞仪同步检测相应细胞样本中CD44＋CD24-/low亚群的含量变化。结果与结论：传代后培养的MCF7细胞在不同时间点其肿瘤干细胞比例及CD44＋/CD24-/low亚群比例均呈现有规律的变化。但CD44＋/CD24-/low亚群变化更为显著（36.84%到81.95%）,而肿瘤干细胞含量仅在小范围波动（38.54%～47.39%）。结果提示传代培养的MCF7细胞中,肿瘤干细胞具有通过调节自身增殖来保持其比例相对稳定的特点;CD44＋/CD24-/low亚群并不代表或者富集MCF7细胞株中的肿瘤干细胞亚群。     

5-氟尿嘧啶诱导的造血损伤中骨髓基质重建相关基因的表达及其意义

目的:探究胞外基质重建相关基因在氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)诱导的造血损伤重建中的表达及其意义。方法:采用C57BL/6小鼠腹腔注射5-FU(200 mg/kg)建立造血损伤模型。注射后3、6、9、15、21、27 d常规检测外周血象;在相同时间点用TRIzol法提取骨髓总RNA,反转录后以实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测胞外基质重建相关基因的mRNA水平,包括细胞外基质(ECM-1)、明胶酶(MMP-2)、基质降解素(MMP-3)、胶原酶(MMP-13)、组织金属酶抑制剂(TIMP-1)基因。结果:小鼠经5-FU注射后外周血出现典型的造血损伤与修复过程,且红细胞、白细胞、血小板损伤修复的动态不同;RT-q PCR显示在5-FU损伤期骨髓胞外基质重建相关基因的表达均显著上调,MMP-2在注射5-FU后第3天时表达最高,MMP-3、MMP-13、TIMP-1、ECM-1在第6天表达最高;MMP-3在骨髓中表达较低,但损伤后上升幅度最大。结论:在5-FU建立的骨髓造血损伤模型中,胞外基质重建相关基因可能参与造血损伤和随后骨髓基质的重构过程,且不同基因发挥的时段和作用对象不同,但彼此协同为造血损坏后重建奠定基础。     

5-氟尿嘧啶对乳腺癌T47D细胞摄取18F-氟代脱氧葡萄糖的影响

目的研究测定乳腺癌T47D细胞的18F-氟代脱氧葡萄糖（FDG）细胞摄取率方法和5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗后对乳腺癌T47D细胞摄取18F-FDG的影响。方法在不同条件下测定乳腺癌T47D细胞的18F-FDG细胞摄取率,细胞数量为1×104～5×106／瓶,18F-FDG放射性活度为1．85～29．6kBq,反应时间为20～120min,葡萄糖浓度为0～11mmol／L。采用细胞增殖和细胞毒性检测试剂（CCK-8）法分别测定加入不同剂量（0-8．0×10-6mmol／L）5-FU 200μL,培养24h及48h后测定细胞生长抑制率。测定加入不同剂量（0～8．0×10-6mmol／L）5-FU 2mL,培养24h及48h后18F-FDG的细胞摄取率。结果当每瓶1×106个细胞、加入3．7kBq 18F-FDG、葡萄糖浓度为0mmol／L、作用时间为100min时,细胞摄取率可达到（28．07±0．45）％。加入1．0×10-6、2．0×10-6、4．0×10-6和8．0×10-6mmol／L5-FU 24h后,细胞生长抑制率分别为（26．96±1．33）％、（42．94±2．25）％、（52．65±2．10）％和（60．03±4．35）％。细胞摄取抑制率分别为（17．86±2．96）％、（28．44±7．10）％、（42．62±3．62）％和（69．02±4．03）％。给5-FU 48h后,细胞生长抑制率和18F—FDG摄取抑制率均高于24h细胞摄取抑制率。结论5-FU作用24h及48h后引起乳腺癌T47D细胞的18F-FDG细胞摄取率下降,且48h比24h下降更明显,18F-FDG显像可以早期观测5-FU对乳腺癌的化疗疗效。     

低浓度5-氟尿嘧啶对胃癌细胞生物学特性的影响

目的探讨低浓度5-氟尿嘧啶(5-FU)对胃癌细胞转录因子OCT4、SOX2及细胞增殖能力的影响。方法用MTT法检测并确定5-FU对胃癌细胞系MGC803、SGC-7901的半数抑制浓度(IC50),实时荧光定量PCR及western blot检测经不同浓度的5-FU处理后胃癌细胞转录因子OCT4、SOX2表达水平,平板克隆形成实验分析胃癌细胞增殖能力的改变情况。结果5-FU对MGC803、SGC-7901细胞的IC50分别为(28.82±1.25)和(23.95±1.34);低浓度5-FU(0.5、1μmol/L)处理后,胃癌细胞MGC803、SGC-7901中转录因子OCT4、SOX2在mRNA及蛋白质水平中的表达均增强,差异具有统计学意义(P0.05);平板克隆形成实验结果表明,经低浓度5-FU(0.5、1μmol/L)作用后胃癌细胞的增殖能力变强,形成的克隆数增多,差异有统计学意义(P0.05);但5-FU浓度为2μmol/L时OCT4和SOX4的表达有不同程度的减弱,且克隆形成能力也有下降。结论低浓度5-FU能增强胃癌细胞转录因子表达、促进胃癌细胞增殖。     

采用组织芯片研究非小细胞肺癌中Oct4、Nanog基因的表达及意义

目的 采用组织芯片技术研究非小细胞肺癌中Oct4、Nanog的表达,分析其临床意义.方法 制作186例非小细胞肺癌组织及23例正常肺组织芯片,用免疫组化S-P法检测组织芯片中Oct4、Nanog的表达.结果 在非小细胞肺癌中,Oct4、Nanog的表达阳性率分别为46.8%(87/186) 和81.7%(152/186),与正常肺组织中的0(0/23)和 30.4%(7/23)相比,差异有统计学意义(P<0.01);Oct4的表达与非小细胞肺癌患者的临床分期及有无淋巴结转移密切相关(P<0.05);Nanog的表达与非小细胞肺癌患者的临床分期、分化程度密切相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄和组织学类型无关(P>0.05).结论 Oct4和Nanog在非小细胞癌的发生发展过程中起着重要作用,与非小细胞肺癌的转移性及恶性程度密切相关.     

雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7 RCAS1表达的影响

目的探讨体外雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7表达SiSo细胞上的受体结合肿瘤抗原(RCAS1)分子的影响。方法用浓度为10-12~10-8mol/L的雌激素或浓度为10-9~10-5mol/L的孕激素作用乳腺癌细胞MCF-7后,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCF-7细胞RCAS1 mRNA水平的变化,用蛋白免疫印迹试验分析MCF-7细胞表达RCAS1蛋白水平的变化。结果在10-12~10-8mol/L范围内随着雌激素浓度的增加,MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈递增趋势,在10-11、10-10、10-9、10-8mol/L范围内雌激素组与未处理对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。随着10-9~10-5mol/L的孕激素浓度的增加,MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈下降趋势,孕激素各组与未处理对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。用RCAS1单克隆抗体能检出相对分子质量为32 000的条带,其灰度随着雌激素浓度的增加而增强,随孕激素浓度的增加而减弱。结论雌激素可上调MCF-7细胞的RCAS1分子表达,孕激素可下调MCF-7细胞的RCAS1分子表达。     

着丝粒蛋白CENP-H对乳腺癌细胞株MCF7增殖能力的影响

目的 研究CENP-H对乳腺癌细胞增殖能力的影响,初步探讨CENP-H与乳腺癌发生、发展的关系.方法 将反转录病毒质粒pMSCV和pMSCV-CENP-H经脂质体转染至293FT细胞制备病毒,并感染MCF7细胞,用嘌呤霉素筛选及Western blot鉴定,建立CENP-H基因稳定表达的MCF7细胞株;应用噻唑盐(MTT)法、平板集落形成实验、5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入法检测CENP-H对MCF7细胞增殖的影响.结果 成功建立稳定表达CENP-H的MCF7细胞株,并发现CENP-H过表达可上调细胞增殖相关分子cyclin D1的表达;MTT、平板克隆实验及Brdu掺入实验结果显示CENP-H过表达后,MCF7的增殖能力模型增强.结论 CENP-H可上调cyclin D1的表达,增强MCF7的增殖能力,提示CENP-H可能在乳腺癌发生、发展中起重要作用.     

雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7 RCAS1表达的影响

目的探讨体外雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7表达SiSo细胞上的受体结合肿瘤抗原（RCAS1）分子的影响。方法用浓度为10^12～10^-8mol／L的雌激素或浓度为10^-9～10^-5mol／L的孕激素作用乳腺癌细胞MCF-7后,用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测MCF-7细胞RCAS1 mRNA水平的变化,用蛋白免疫印迹试验分析MCF-7细胞表达RCAS1蛋白水平的变化。结果在10^-12～10^-8mol／L范围内随着雌激素浓度的增加,MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈递增趋势,在10^-11、10^-10、10^-9、10^-8mol／L范围内雌激素组与未处理对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。随着10^-9～10^-5mol／L的孕激素浓度的增加,MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈下降趋势,孕激素各组与未处理对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。用RCAS1单克隆抗体能检出相对分子质量为32000的条带,其灰度随着雌激素浓度的增加而增强,随孕激素浓度的增加而减弱。结论雌激素可上调MCF-7细胞的RCAS1分子表达,孕激素可下调MCF-7细胞的RCAS1分子表达。     

缺氧对乳腺癌细胞E-cadherin、cytokeratin、vimentin表达的影响

目的:研究体外缺氧对乳腺癌细胞系MCF7浸润能力及其细胞表面黏附分子E-cadherin和细胞骨架蛋白犤细胞角蛋白(cytokeratin)、波形蛋白(vimentin)犦表达的影响。方法:模拟体外缺氧环境,观察缺氧对乳腺癌细胞MCF7浸润穿透Matrigel的能力;以及采用半定量RT-PCR检测细胞表面黏附分子E-cadherin和cytokeratin、vimentin表达情况。结果:缺氧状态下MCF7细胞的浸润能力明显增强;且在缺氧条件下E-cadherin基因表达下降、cytokeratin、vimentin基因表达升高。结论:缺氧状态下MCF7细胞转移能力和其表面的E-cadherin基因、cytokeratin、vimentin基因表达存在一定关系。     

5氮杂脱氧胞苷对乳腺癌MCF-7细胞中抑癌基因p16mRNA表达的影响

目的 探讨5氮杂脱氧胞苷(5-aza-cdr)对乳腺癌细胞中p16基因mRNA表达的影响.方法 分别用5-aza-cdr 5、10和20 μmol/L处理乳腺癌细胞MCF-7,未处理的MCF-7细胞作为对照.采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)对药物处理前后的细胞进行p16基因甲基化检测;绿色荧光染料实时反转录聚合酶链反应(SYBR Green qRT-PCR)检测p16 mRNA表达.结果 在未处理的MCF-7细胞中(对照)p16基因呈完全甲基化状态,随着5-aza-cdr浓度增加,甲基化水平逐渐减弱,至5-aza-cdr 20 μmol/L时p16基因甲基化状态完全被逆转;p16 mRNA表达水平也随着药物剂量的递增逐渐增加,5-aza-cdr 20 μmol/L处理组与5、10 μmol/L处理组以及未处理组比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 乳腺癌细胞MCF-7中p16基因的甲基化能被5-aza-cdr逆转,去甲基化后可以促进p16 mRNA表达.     

Synergistic inhibitory effects of curcumin and 5-fluorouracil on the growth of the human colon cancer cell line HT-29

The synergistic effect of combination treatment with COX-2 inhibitors and chemotherapy may be another promising therapy regimen in the future treatment of colorectal cancer. Curcumin, a major yellow pigment in turmeric which is used widely all over the world, inhibits the growth of human colon cancer cell line HT-29 significantly and specifically inhibits the expression of COX-2 protein. However, the worldwide exposure of populations to curcumin raised the question of whether this agent would enhance or inhibit the effects of chemotherapy. In this report, we evaluated the growth-inhibitory effect of curcumin and a traditional chemotherapy agent, 5-FU, against the proliferation of a human colon cancer cell line (HT-29). The combination effect was quantitatively determined using the method of median-effect principle and the combination index. The inhibition of COX-2 expression after treatment with the curcumin-5-FU combination was also evaluated by Western blot analysis. The IC(50) value in the HT-29 cells for curcumin was 15.9 +/- 1.96 microM and for 5-FU it was 17.3 +/- 1.85 microM. When curcumin and 5-FU were used concurrently, synergistic inhibition of growth was quantitatively demonstrated. The level of COX-2 protein expression was reduced almost 6-fold after the combination treatment. Our results demonstrate synergism between curcumin and 5-FU at higher doses against the human colon cancer cell line HT-29. This synergism was associated with the decreased expression of COX-2 protein.     

人乳腺癌细胞株KLK5 mRNA的表达及雌激素的调节作用

目的 探讨雌激素对雌激素受体阳性人乳腺癌细胞株MCF-7和B37组织激肽释放酶5（KLK 5）mRNA的表达水平,以及雌激素对KLK5 mRNA表达水平的影响。方法 分别取生长良好的MCF-7和B37细胞,在不同浓度的雌激素（17-βE2）存在下培养72小时后,收集细胞,提取总RNA,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应,检测KLK5 mRNA表达水平及变化。结果 在未经刺激的乙醇对照组,MCF-7细胞KLK5 mRNA的相对表达水平（KLK5 mRNA/GAPDH mR-NA）为（3.23±0.51）×10^-5,B37细胞KLK5 mRNA表达水平为（3.13±0.62）×10^-4。B37细胞KLK5 mRNA表达水平高于MCF-7细胞。当17-βE2浓度10^-11mol/L以下时,MCF-7和B37细胞中KLK5 mRNA表达水平与乙醇对照组无明显差异（P〈0.05）。随17-βE2浓度的增高,MCF-7和B37细胞中KLK5 mRNA的表达呈递增趋势,各组与乙醇对照组相比差异有显著意义（P〈0.01）。结论 雌激素对人乳腺癌细胞株MCF-7和B37细胞的KLK5 mRNA表达有剂量依赖的上调作用。