双醋瑞因干预体外培养关节软骨结缔组织生长因子的表达

背景:在骨关节炎软骨退变中结缔组织生长因子作为一种重要的效应分子在软骨细胞的增殖、分化方面发挥重要作用。临床应用双醋瑞因治疗骨关节炎已取得了良好的效果,但其治疗的确切机制尚不清楚。目的:观察不同浓度双醋瑞因对体外白细胞介素1β诱导下软骨细胞中结缔组织生长因子的影响。方法:体外培养SD大鼠关节软骨细胞,重组人白细胞介素1β刺激软骨细胞制备体外骨关节炎模型。实验分组:正常对照组不给予任何处理因素;模型对照组给予重组人白细胞介素1β;实验组给予不同浓度双醋瑞因+10μg/L重组人白细胞介素1β。利用MTT比色法观察软骨细胞的增殖情况,Western Blot法检测结缔组织生长因子的表达。以上实验均重复3次。结果与结论:MTT结果显示,与正常对照组比较,双醋瑞因能促进软骨细胞MTT增殖活性,以浓度为10-5 mol/L更明显(P<0.01),白细胞介素1β作用后各实验组软骨细胞增殖能力下降(P<0.05);但与正常对照组比较,无论是否加白细胞介素1β,浓度为10-4 mol/L和10-5 mol/L双醋瑞因仍能促进软骨细胞MTT增殖活性(P<0.05)。Western Blot检测结果显示,白细胞介素1β能够降低结缔组织生长因子的表达(P<0.01),浓度为10-5 mol/L双醋瑞因能够显著促进白细胞介素1β诱导下结缔组织生长因子的表达,显著高于模型对照组(P<0.01)。提示双醋瑞因可以促进白细胞介素1β诱导下结缔组织生长因子的高表达,其可能是双醋瑞因促进软骨细胞的分化增殖,治疗骨关节炎的作用机制之一。     

体外冲击波治疗兔膝骨关节炎：白细胞介素1β及基质金属蛋白酶13的表达

背景：白细胞介素1β和基质金属蛋白13能促进软骨细胞的分解代谢,抑制软骨细胞的合成修复能力,引起细胞外基质的降解,在骨关节炎的发生中有十分重要的作用。 目的：观察体外冲击波对兔膝骨关节炎软骨细胞中白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13表达的影响。 方法：将30只新西兰兔随机分为治疗组、模型组、对照组,每组10只。治疗组和模型组均采用改良伸直位固定6周,制备兔膝骨关节炎模型。治疗组造模后给予体外冲击波治疗1次,能流密度0.1 mJ/mm2,冲击次数1000次。对照组不作任何处理。各组兔于治疗后4周处死,取膝关节液和关节软骨。苏木精-伊红染色和甲苯胺蓝染色法检测各组膝关节病理学形态改变,采用酶联免疫吸附法测定关节液白细胞介素1β水平,免疫组化法检测白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达。 结果与结论：治疗组和模型组关节液白细胞介素1β水平较对照组明显增高（P 〈0.01）,治疗结束后治疗组关节液白细胞介素1β水平较模型组下降（P 〈0.05）。治疗组和模型组软骨组织Mankin评分较对照组明显增高（P〈0.01）,治疗结束后治疗组软骨组织Mankin评分较模型组下降（P〈0.05）。治疗组和模型组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较对照组明显增高（P〈0.01）,治疗结束后治疗组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较模型组下降（P〈0.05）。结果可见体外冲击波能下调膝骨关节炎软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达,促进Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的合成,从而对膝骨关节炎起防治作用。     

双醋瑞因对去卵巢大鼠骨量丢失的干预作用

背景:双醋瑞因是一种新型的白细胞介素1阻滞剂,对绝经后骨质疏松形成过程中的白细胞介素相关因子增强骨吸收的抑制作用目前的报道较少.目的:验证双醋瑞因对去卵巢大鼠骨量丢失的干预作用.设计、时间及地点:完全随机分组设计,随机对照实验,于2008-08/11在重庆医科大学实验动物中心实验室完成.材料:清洁级3月龄雌性SD大鼠40只,随机分为4组:假手术组、去卵巢组、双醋瑞因10,100mg/(kg·d)组,每组10只.双醋瑞因胶囊(每粒50 mg含双醋瑞因48.1 mg),为昆明积大制药有限公司生产,批号:20070532.方法:除假手术组外其他3组大鼠分离出双侧卵巢结扎输卵管血管后切除卵巢,假手术组只切除卵巢周围少量脂肪组织,逐层缝合皮肤.去卵巢术后第2天双醋瑞因10,100 mg/(kg·d)组开始灌胃给药,假手术组和去卵巢组给予等量的生理盐水,持续给药10周后麻醉下处死所有大鼠采血,收集骨骼标本.主要观测指标:以骨密度双能X射线测量仪测量第3腰椎、股骨骨密度;放射免疫法测定骨组织中白细胞介素1 β、白细胞介素6水平及血清骨钙素水平.结果:40只大鼠均进入结果分析.去卵巢组骨密度低于假手术组(P＜0.05),双醋瑞因2个剂量组骨密度高于去卵巢组(P＜0.05).去卵巢组骨组织中白细胞介素1β、白细胞介素6水平高于假手术组(P＜0.05);双醋瑞因2个剂量组骨组织中白细胞介素1 β、白细胞介素6水平低于去卵巢组(P＜0.05).去卵巢组血清骨钙素水平高于假手术组(P＜0.05);双醋瑞因2个剂量组血清骨钙素水平与去卵巢组相比,差异无显著性意义(P＞0.05).结论:雌性大鼠卵巢切除10周后骨量丢失明显,双醋瑞因对去卵巢后大鼠由于骨吸收增强所引起的骨量丢失有干预作用.对成骨细胞介导的骨形成无明显的影响.     

烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调节作用

背景：研究表明，烟酰胺能够对白细胞介素1B或肿瘤坏死因子α致椎间盘退变起到保护作用，但烟酰胺对椎间盘细胞凋亡与增殖的保护机制尚不很清楚。目的：观察烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调控作用及其机制。设计、时间及地点：随机对照分组设计，于2007—04／10在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室及协和医院干细胞中心完成。材料：2—3月龄日本大白兔10只，体质量1．5-2．0kg，取L1-L6节段椎间盘内髓核细胞，体外培养髓核细胞凋亡模型。方法：实验分为6组，正常对照组：不加任何药物：烟酰胺组：加入0．5g／L烟酰胺；白细胞介素1β组：加入10μg／L白细胞介素1β：白细胞介素1β＋Caspase抑制剂组：加入10μg/L自细胞介素1β及非特异性Caspase抑制剂Z-VAD-FM；白细胞介素1β＋小剂量烟酰胺组：加入10μg/L白细胞介素1β及0．05g／L烟酰胺组：白细胞介素1β＋大剂量烟酰胺组：10μg／L白细胞介素1β及0．5g／L烟酰胺。3d后对各组细胞行Annexin V-PI染色，Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9功能染色检测及MTT检测。主要观察指标：各组细胞凋亡率、caspase-3、8、9功能染色阳性细胞率及各组细胞的吸光度。结果：①白细胞介素1β＋Caspase抑制剂组和白细胞介素lB＋大剂量烟酰胺组较白细胞介素1β组细胞凋亡率明显下降（P〈0．01）。②白细胞介素1β＋Caspase抑制剂组、白细胞介素1β＋大、小剂量烟酰胺组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9功能染色阳性细胞率较白细胞介素1β组明显下降（P〈0．01或P〈0．05）。③与白细胞介素1β组相比，白细胞介素1β＋Caspase抑制剂组和白细胞介素1β＋大剂量烟酰胺组吸光度升高（P〈0．01）。结论：烟酰胺可以促进髓核细胞的增殖并抑制白细胞介素1β诱导的髓核细胞凋亡，对凋亡的抑制作用主要通过抑制凋亡的线粒体途径实现。     

转化生长因子β1在白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化及大黄素干预中的作用

目的:大黄素对白细胞介素1β诱导NRK52E细胞转分化有显著抑制作用。实验拟进一步观察转化生长因子β1在白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及大黄素抑制作用中的意义。方法:实验于2006-10/2007-05在泸州医学院附属医院免疫实验室完成。⑴实验材料及分组:以培养的大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为观察对象,按如下分组分别添加不同处理因素:①对照组:仅加入体积分数为0.05小牛血清的高糖DMEM培养基。②白细胞介素1β诱导组:加含白细胞介素1β终浓度为10μg/L的高糖DMEM培养基。③SB431542阻断组:加含白细胞介素1β终浓度为10μg/L及SB431542终浓度为10μmol/L的高糖DMEM培养基。④白细胞介素1β 大黄素组:同时加分别含白细胞介素1β终浓度为10μg/L及大黄素终浓度为25mg/L的高糖DMEM培养基。⑵实验评估:培养48h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色法检测肌酸激酶、α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1的表达。结果:①白细胞介素1β可诱导部分细胞由卵圆形转变为梭形,且肌酸激酶表达减弱(P<0.01),α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1表达显著增强(P<0.01)。②SB431542特异性抑制转化生长因子β1作用后,白细胞介素1β诱导的细胞形态改变受抑,同时肌酸激酶表达增强(P<0.01),α-平滑肌肌动蛋白表达减弱(P<0.01),但转化生长因子β1的表达却无明显变化。③大黄素对白细胞介素1β诱导的细胞形态改变及肌酸激酶、α-平滑肌肌动蛋白的表达有明显抑制作用,其抑制作用与SB431542的作用相比无显著差异;同时,大黄素对白细胞介素1β诱导的转化生长因子β1的表达也有明显抑制作用(P<0.01)。结论:转化生长因子β1可能介导了白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化,并参与了大黄素抑制白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。     

一氧化氮合酶抑制剂对白细胞介素1β诱导软骨细胞增殖和基质金属蛋白酶表达的影响

目的:研究表明,白细胞介素1β对鼠肾细胞、心肌细胞和神经上皮细胞发挥抗增殖作用,但其是否可抑制人的软骨细胞增殖?这种抗增殖作用是否可被一氧化氮合酶抑制剂抑制尚不清楚.实验拟验证一氧化氮合酶抑制剂对人骨关节炎软骨细胞增殖及基质金属蛋白酶的影响.方法:选择2006-05/12在南方医科大学附属南方医院脊梓骨病科住院的膝骨关节炎患者8例.所有患者均符合1986年美国风湿病学会关于骨关节炎的临床诊断标准或临床及放射学诊断标准,排除其他疾病(创伤性、风湿性及感染性)所导致的骨关节炎.所有患者均在术前告知,并签有试验知情同意书.分离培养关节软骨细胞,将不同浓度(0,1,10,100 μg/L,其中0 μg/L作为对照)白细胞介素1β作用于骨关节炎软骨细胞24,48,72 h,一氧化氮合酶抑制剂氨基胍作为干扰因素,与白细胞介素1β共同作用72 h,收集细胞上清液,一氧化氮的表达量通过一氧化氮试剂盒检测,并作为检测一氧化氮合酶抑制剂活性的手段;四甲基偶氮唑盐法检测软骨细胞的增殖;xMAP技术检测软骨细胞基质金属蛋白酶1,基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9的表达.结果:①不同时间点1,10,100 μg/L白细胞介素1β组作用后的吸光度值与对照组相比,差异显著(JP＜0.05,P＜0.01);相同浓度白细胞介素1β在24,72h的吸光度值相比较,差异显著(P＜0.01).②白细胞介素1β和氨基胍(100 μmol/L)共同作用软骨细胞72 h后,各浓度组吸光度与白细胞介素1β组相比,差异显著(P＜0.01).③白细胞介素1β可促进软骨细胞一氧化氮的表达,并呈剂量依赖关系.④白细胞介素1β促进基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3的表达,与对照组相比,差异有显著性意义(P＜0.01),而软骨细胞基质金属蛋白酶9的表达在本实验中没有检测到.结论:白细胞介素1β可抑制软骨细胞增殖,诱导基质金属蛋白酶表达,这些影响可被氨基胍抑制,白细胞介素1β和氨基胍对软骨细胞的影响可能是通过一氧化氮途径发挥作用.     

白藜芦醇调控体外培养人骨关节炎滑膜细胞白细胞介素18的表达

背景：白藜芦醇可在体外抑制软骨细胞的凋亡。目的：观察白藜芦醇对体外培养人骨关节炎滑膜细胞中白细胞介素18、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α表达的影响。方法：对兔以白藜芦醇临床等效剂量灌胃后,制备含10%,20%,40%白藜芦醇含药血清,与人骨关节炎滑膜细胞共培养,以正常兔血清培养细胞为对照。结果与结论：ELISA检测及免疫细胞化学检测结果显示,不同浓度白藜芦醇含药血清组体外培养滑膜细胞白细胞介素18、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α分泌量较正常兔血清组明显降低（P〈0.01）,并随白藜芦醇浓度的增加,白细胞介素18、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α分泌量逐渐降低（P〈0.01或P〈0.05）。白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平依次与白细胞介素18水平呈正相关。表明白藜芦醇能够显著下调白细胞介素18、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α在骨关节炎滑膜细胞中的表达,减轻滑膜炎症反应。     

维药买朱尼对关节软骨前炎性因子的影响

背景：骨关节炎病理过程中,白细胞介素1β被认为是促进软骨基质降解和关节软骨破坏的最重要的细胞因之一。目的：观察白细胞介素113在关节软骨中的表达,并观察维药买朱尼对其的影响。方法：将40只SD大鼠随机数字表法随机等分为模型对照组、维药买朱尼组、假手术组、正常对照组。模型对照组和维药买朱尼组采用改良Hulth造模法建立大鼠膝骨关节炎模型,假手术组仅显露膝关节,不切断韧带,不切除内侧半月板。维药买朱尼组建模第2周开始灌胃维药买朱尼10．31mg／（kg·d）,模型组及假手术组大鼠均灌服等量生理盐水,连续4周。结果与结论：模型组软骨退变程度明显重于维药买朱尼组,模型组软骨大体评分及Mankin评分均明显高于维药买朱尼组（P〈0．05）,模型组软骨细胞白细胞介素1β的表达强度亦明显高于维药买朱尼组（P〈0．05）。与正常对照组比较,假手术组软骨大体评分、Mankin评分及软骨细胞白细胞介素1β差异无显著性意义（P〉0．05）。结果说明,维药买朱尼可以抑制关节软骨前炎性因子白细胞介素1β的表达。     

抗骨增生胶囊含药血清对软骨细胞增殖凋亡及基质金属蛋白酶分泌的影响

背景:抗骨增生胶囊在治疗骨关节疾病方面有很好的疗效,基础研究多集中于颈椎病等骨关节疾病上.目的:拟观察抗骨增牛胶囊含药血清对白细胞介索1β引起的软骨细胞增殖凋亡及基质金属蛋白酶分泌的影响.设计、时间及地点:分组对照体外细胞学实验,于2007-03/09在河北医科大学解剖教研室细胞培养中心完成.材料:新生1周sD大鼠,用于培养软骨细胞;体质量200 g左右SD大鼠10只,以中药水溶液灌胃后定时取血制备含药血清.方法:采用胶原酶NB4消化法从大鼠关节软骨中分离出软骨细胞并进行原代和传代培养,实验分为3组:空白血清组:90%L-DMEM 10%空白血清,每口给予同等量的生理盐水;白细胞介索1β组(90%DMEM 10%空白血清 自细胞介素1β);中药血清 白细胞介素1β组(90%DMEM 10%中约血清 白细胞介素1β).白细胞介素1β加入量为5μg/L,培养72 h.将实验用细胞消化传代后制成单细胞悬液,以1×108L-1的密度接种于96孔培养板,100μL/孔,每组6孔.主要观察指标:倒置显微镜下观察中药含药血清对软骨细胞增殖的影响:四甲基偶氮唑盐比色法检测其各孔吸光度变化;流式细胞仪分析凋亡细胞百分率;基质金属蛋白酶13 Elisa试剂盒检测不同组基质金属蛋白酶13分泌情况.结果:在正常培养基条件下,细胞形态均匀,死亡脱落细胞较少.空白血清组软骨细胞的增殖速度缓慢,细胞较稀疏.白细胞介索1β组细胞明显稀疏,部分细胞胞浆中窄泡增多,细胞核形态不规则.在中药血清培养基作用下,软骨细胞增殖的速度较白细胞介素1 B组快,胞体显著增大,细胞核形态规则.白细胞介素1β组细胞增殖数量减少,凋亡细胞百分率增加,其培养的细胞上清液中基质金属蛋白酶13含量升高,抗骨增生胶囊含药血清可对抗白细胞介素1β对软骨细胞的影响.结论:体外条件下,抗骨增生胶囊含药血清能够抑制白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡:降低基质金属蛋白酶13水平.     

Notch信号通路阻断剂对人脐带间充质干细胞软骨分化的影响

背景：Notch信号通路作为一条在细胞增殖和分化过程中起重要作用的信号通路,目前它在人脐带间充质干细胞在体外向软骨细胞诱导分化过程中的作用仍然未知。目的：首次探讨Notch信号通路特异性阻断剂2,4-二氨基-5-苯噻唑（DAPT）对人脐带间充质干细胞向软骨细胞诱导分化的影响。方法：从人脐带中分离获得间充质干细胞,体外向软骨细胞诱导分化。实验分4组：①无诱导组换成含体积分数5%胎牛血清和1%双抗的DMEM高糖培养基培养。②单纯诱导组换成终浓度为6.25 mg/L胰岛素、6.25 mg/L转铁蛋白、10μg/L转化生长因子β1、0.1μmol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、体积分数5%胎牛血清和1%双抗的软骨诱导培养基培养。③二甲基亚砜组在软骨诱导培养基中加入终浓度为0.1%的二甲基亚砜培养。④2,4-二氨基-5-苯噻唑组在软骨诱导培养基中加入终浓度为5μmol/L的2,4-二氨基-5-苯噻唑（溶于二甲基亚砜）培养,二甲基亚砜终浓度为0.1%。结果与结论：诱导人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化后,细胞形态由长梭形变为多边形,且甲苯胺蓝染色和免疫荧光染色均呈现阳性;软骨诱导分化后Jag-1、PS-1、Notch-1、Hes-1的基因表达均明显下降（P〈0.01）;添加2,4-二氨基-5-苯噻唑后,与单纯诱导组相比,人脐带间充质干细胞中Jag-1、PS-1、Hes-1（P〈0.01）和Notch-1（P〈0.05）的基因表达显著降低;蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白含量均降低（P〈0.01）;蛋白聚糖的基因表达显著降低（P〈0.01）,Ⅱ型胶原蛋白的基因表达也出现一定程度的下降。提示Notch信号存在于人脐带间充质干细胞中,诱导人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化后,这种信号强度迅速减弱;2,4-二氨基-5-苯噻唑可能通过Jag-1-Notch-1-Hes-1途径抑制人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化。     

辛伐他汀对高糖高脂诱导人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景：研究表明,他汀类药物能够促进骨髓间充质干细胞的增殖与黏附能力,抑制高糖高脂培养下骨髓间充质干细胞的凋亡。目的：观察辛伐他汀对高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法：将0.001,0.01,0.1,1.0μmol/L辛伐他汀分别与高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞培养48h,以正常培养骨髓间充质干细胞及高糖高脂诱导条件下培养的骨髓间充质干细胞为对照。倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法比较不同浓度辛伐他汀对高糖高脂环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡,加入PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002后辛伐他汀对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。结果与结论：与高糖高脂诱导组比较,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组骨髓间充质干细胞存活率均升高（P〈0.01）,其中辛伐他汀浓度在0.1μmol/L时骨髓间充质干细胞存活率升高最显著（P〈0.01）;同时流式细胞仪检测结果显示,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组细胞凋亡率下降（P〈0.01）,其中0.1μmol/L组凋亡率下降最显著（P〈0.01）。0.1μmol/L辛伐他汀对骨髓间充质干细胞的影响可被LY294002阻断。说明辛伐他汀能抑制高糖高脂诱导条件下骨髓间充质干细胞的凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号途径有关。     

地塞米松干预大鼠星形胶质细胞周期素的表达及细胞周期进程

背景：有研究表明地塞米松可引起星形胶质细胞凋亡,但其机制不清,有关地塞米松干扰星形胶质细胞的周期素表达的作用未见报道。目的：观察地塞米松引起大鼠星形胶质细胞凋亡与周期素表达的关系。方法：将不同浓度的地塞米松（0,10-5,10-4,10-3mol/L）与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育24h后,经流式细胞仪检测细胞周期,并用免疫细胞化学方法检测周期素A和E在星形胶质细胞内的表达。结果与结论：地塞米松10-5,10-4mol/L浓度组G1期细胞指数较对照组增加（P〈0.05,P〈0.01）,10-3mol/L组的S期细胞指数较对照组明显升高（P〈0.01）;周期素A的表达随着地塞米松浓度的升高而减弱（P〈0.05）。周期素E的表达在地塞米松0,10-5,10-4mol/L组随着地塞米松浓度的升高而减弱（P〈0.05）,但在10-3mol/L浓度组反而表达增强（P〈0.01）。说明地塞米松10-5,10-4mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于G1期且与周期素A和E表达降低有关,地塞米松10-3mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于S期主要与周期素A表达降低有关。     

川芎嗪可影响肿瘤坏死因子α刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及相关基因产物的表达

背景：川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚。目的：观察川芎嗪对肿瘤坏死因子α刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB及其相关基因产物白细胞介素6表达的影响。方法：体外培养HSC-T6细胞株,取对数生长期的细胞用于实验。实验分为4组：对照组仅加入细胞;TNF-α组加入10μg/L TNF-α;川芎嗪干预组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600,1000mg/L;PDTC组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,再加入终浓度18μmol/L的核因子κB阻断剂PDTC。结果与结论：MTT结果显示100,200,400,600,1000mg/L的川芎嗪均能抑制HSC-T6增殖,且呈剂量依赖性。免疫细胞化学染色及Western blot检测发现10μg/L的肿瘤坏死因子α刺激后,HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达明显增多（P〈0.01或P〈0.05）,200,400,600mg/L的川芎嗪及18μmol/L的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子α刺激后HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达（P〈0.01）,且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用最明显。相关性分析结果显示HSC-T6细胞结缔组织生长因子和核因子κB的表达呈正相关（r=0.980,P〈0.01）。说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达,抑制肝星状细胞的增殖。     

人参皂苷Rg1对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响

背景：人参是具有抗炎、抗应激、调节免疫等广泛药理学活性的中草药,其主要药理活性成分是人参皂苷,而Rg1是含量较多的活性成分。目的：探讨人参皂苷Rg1对白细胞介素1β诱导的人骨关节炎模型中软骨细胞Ⅱ型胶原及环氧合酶2mRNA表达的影响。方法：取因骨关节炎接受全膝关节置换患者的膝关节软骨进行体外培养,取第2代体外培养的软骨细胞,CCK-8检测0．001,0．01,0．1,1,10,100mg／L人参皂苷Rg1对软骨细胞增殖率的影响。再将第2代体外培养的关节软骨细胞,随机分为空白组、对照组和实验组,分别加入DMEM培养液、10μg／L白细胞介素1β,10μg／L白细胞介素1β＋0．1,1,10,100mg／L人参皂苷Rg1,培养24h后反转录PCR检测各组细胞中Ⅱ型胶原和环氧合酶2mRNA的表达。结果与结论：与对照组相比,人参皂苷Rg1质量浓度为0．001,0．01,0．1,1mg／L时促进软骨细胞的增殖作用不明显,差异无显著性意义（P〉0．05）;当人参皂苷Rg1质量浓度为10,100mg／L时,促进软骨细胞的增殖作用明显（P〈0．05）。与空白组相比,对照组的软骨细胞Ⅱ型胶原的mRNA表达明显下降,而环氧合酶2mRNA表达明显升高（P〈0．05）;与对照组相比,联合加入人参皂苷Rg1质量浓度为0．1和1mg／L时,人软骨细胞中Ⅱ型胶原和环氧合酶2mRNA表达没有明显变化（P〉0．05）;而联合加入人参皂苷Rg1质量浓度为10和100mg／L时,人软骨细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达增加,而环氧合酶2mRNA表达降低（P〈0．05）。说明一定浓度的人参皂苷Rg1可以拮抗白细胞介素113引起的人软骨细胞中Ⅱ型胶原的mRNA表达的降低和环氧合酶2mRNA表达的升高。     

感染性休克患者外周血T淋巴细胞凋亡和影响因素分析

目的观察感染性休克患者的外周血T淋巴细胞的凋亡情况,并对可能诱导T淋巴细胞凋亡的原因进行探讨。方法采集南京市第一医院ICU自2006年1月至2009年1月收治的32例感染性休克患者的外周血,用Annexin-V法和流式细胞仪测定其中的T淋巴细胞的凋亡情况,同时用酶联免疫法（ELISA）测定血浆中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素1β（IL-1β）的浓度,用化学发光法检测血浆中的游离皮质醇浓度,将上述的结果和脓毒血症病患者及健康对照（n=22）相比。结果在初始状态下,外周血T淋巴细胞CD4＋亚群在健康对照组、脓毒血症组及感染性休克组分别为（4.41±1.45）%、（7.87±3.82）%及（11.01±4.52）%,感染性休克患者的外周血T淋巴细胞CD4＋亚群的凋亡比例高于脓毒血症患者（P〈0.05）,脓毒血症患者高于健康对照组（P〈0.05）;而初始状态下健康对照组、脓毒血症组及感染性休克组患者外周血T淋巴细胞CD8＋亚群的凋亡为（9.62±8.32）%、（13.09±15.84）%及（11.33±19.62）%,3组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。在基础状态下TNF-α的浓度在健康对照组,脓毒血症组及感染性休克组中分别为（16.44±9.55）ng/L、（29.58±13.6）ng/L及（47.99±25.63）ng/L,感染性休克组TNF-α的浓度高于脓毒血症组（P〈0.05）,脓毒血症组高于健康对照组（P〈0.05）,持续72小时;IL-10的浓度在健康对照组,脓毒血症组及感染性休克组中分别为（6.38±7.5）ng/L、（9.67±4.88）ng/L及（15.01±5.36）ng/L,感染性休克组中的IL-10的浓度高于脓毒血症组（P〈0.05）,脓毒血症组高于健康对照组（P〈0.05）,持续72小时;游离皮质醇的浓度在健康对照组,脓毒血症组及感染性休克组中分别为（0.45±0.42）μmol/L、（0.87±0.49）μmol/L及（1.39±0.84）μmol/L,感染性休克组中的游离皮质醇浓度高于脓毒血症组（P〈0.05）,脓毒血症组高于健康对照组（P〈0.05）,持续72小时;IL-1β在健康对照组、脓毒血症组及感染性休克组中分别为（13.12±5.07）ng/L、（25.21±14.76）ng/L及（22.94±22.01）ng/L,感染性休克组和脓毒血症组的浓度高于健康对照组（P〈0.05）,但是感染性休克组和脓毒血症组的浓度差异无统计学意义（P〉0.05）。结论感染性休克患者的外周血T淋巴细胞中CD4＋亚群可发生明显的凋亡,TNF-α、IL-10及皮质醇可能参与了诱导CD4＋亚群的凋亡。     

YC-1对Aβ寡聚体毒性的保护作用及其相关机制

目的:探讨YC-1针对Aβ寡聚体(ADDLs)毒性的保护作用及其相关机制。方法:原代培养小鼠皮质神经元及星形胶质细胞混合培养体系,应用不同浓度ADDLs(500 nmol/L、1μmol/L、2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)干预以模拟体外AD模型,应用YC-1对此模型进行干预,以CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测NICD及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平,采用real-time PCR检测Caspase-3 mRNA水平。结果:浓度≥2μmol/L的ADDLs干预明显降低混合培养体系细胞活力水平,并呈现浓度依赖性(P<0.01)。10μmol/L ADDLs持续干预4 h显著降低细胞活力(P<0.01),YC-1可明显拮抗这种毒性作用(P<0.01)。10μmol/L ADDLs持续干预4 h明显上调NICD及HIF-1α水平(P<0.01),YC-1可拮抗这种提高(P<0.05或0.01)。10μmol/L ADDLs干预4 h显著提高Caspase-3的mRNA水平(P<0.01),YC-1可显著抑制这种上调(P<0.05)。结论:ADDLs表现出对原代培养小鼠皮质神经元及星形胶质细胞混合培养体系的毒性作用,YC-1可发挥保护作用。     

IL-1β对小鼠软骨细胞中 c-myc 蛋白表达的影响

目的：通过观察不同浓度IL-1β对软骨细胞c-myc蛋白表达的影响,探讨IL-1β在骨关节炎软骨损伤中的作用及机制并寻找有效治疗骨关节炎的方法。方法选用20只C57BL/6小鼠,体外进行关节软骨细胞的分离及原代培养;将原代培养的软骨细胞分为4组：A 组为空白对照组,采用含10% FBS 的RPMI-1640常规培养基培养;B、C、D组为IL-1β处理组,分别用含有1、10和100 ng/ml IL-1β的常规培养基培养,12 h后进行实验分析。采用Western blot和流式细胞仪检测法,观察各组c-myc蛋白表达情况及细胞凋亡情况。结果原代培养细胞24 h后开始贴壁,呈圆形或多角形,传至第4代、第5代细胞体积变大,逐渐成为梭形,甲苯胺蓝染色为软骨细胞内见蓝紫色异染颗粒。与对照组相比较,不同浓度IL-1β处理组软骨细胞 c-myc 蛋白表达水平逐渐增高,呈剂量依赖性（P＜0.05）;与对照组相比较,不同浓度 IL-1β处理组软骨细胞凋亡率逐渐增高,呈剂量依赖性（P＜0.05）。结论实验体外分离小鼠关节软骨,可成功获得高纯度,且传至3代以内活性率超过90%的软骨细胞;IL-1β可以按照剂量依赖方式上调软骨细胞c-myc蛋白的表达,同时增加软骨细胞凋亡率,说明IL-1β可能通过c-myc蛋白诱导软骨细胞凋亡。     

核因子κBp65特异性小干涉核糖核酸抑制肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β诱导的软骨细胞中基质金属蛋白酶9的表达

背景：小干涉核糖核酸是核糖核酸干涉的起始诱导物，在细胞内引起强烈的核糖核酸干涉，降解目的基因的信使核糖核酸，以控制目的基因表达。目的：利用核因子κBp65特异性小干涉核糖核酸抑制软骨细胞中肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β诱导的核因子κB的活性及其基质金属蛋白酶9的表达，观察在软骨细胞中核因子κBp65与细胞因子的关系。设计、时间和地点：单一样本观察．细胞学体外实验，于2006—09／2007—09在北京大学医学部中心实验室完成。材料：SD大鼠关节软骨细胞。方法：利用质脂体将筛选优化好的核因子κBp65特异性小于涉核糖核酸转染软骨细胞，特异性抑制核因子κBp65的表达，继而抑制肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β诱导的核因子κB的活性及基质金属蛋白酶9的表达。主要观察指标：利用电泳迁移率试验检测核因子κB的活性，反转录聚合酶链反应和蛋白质免疫印记法分析从信使核糖核酸和蛋白质两水平检测基质金属蛋白酶9的表达。结果：核因子κBp65特异性小干涉核糖核酸抑制核因子κBp65的表达，降低肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β诱导的核因子κB的转录活性，抑制肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β诱导的基质金属蛋白酶9的表达。 结论：在软骨细胞中核因子κBp65与肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β关系密切。     

两种砷化物诱导胰岛细胞的凋亡

背景：近年有流行病学调查显示砷暴露与糖尿病发病相关。目的：实验从砷导致胰岛β细胞凋亡的机制入手,阐明砷化物相关糖尿病的致病机制。方法：将砷酸氢二钠（Na2HAsO 4·7H2O,iAs5＋,50,100,200μmol/L）和二甲基胂酸钠（C2H6AsNaO2·3H2O,DMA5＋,100,200,400μmol/L）分别作用于大鼠胰岛细胞株（INS-1细胞）24 h或48 h。通过MTT法检测砷化物对胰岛细胞的毒性作用。用Annexin V-FITC/PI和Hoechst 33258染色法检测两种砷化物致细胞凋亡情况。用2’,7’-二氢二氯荧光素染色检测细胞内活性氧的含量,用Western blot检测细胞内P53的蛋白含量变化。结果与结论：砷酸氢二钠（〉50μmol/L）、二甲基胂酸钠（〉100μmol/L）均降低大鼠胰岛β细胞的细胞存活率（P〈0.05,P〈0.01）;砷酸氢二钠（50-200μmol/L）和二甲基胂酸钠（100-400μmol/L）作用于大鼠胰岛β细胞48 h后,细胞发生凋亡。砷酸氢二钠、二甲基胂酸钠暴露24 h引起大鼠胰岛β细胞内活性氧水平呈剂量依赖性升高（P〈0.05,P〈0.01）。经砷酸氢二钠染毒的胰岛β细胞的细胞核内P53蛋白表达增多（P〈0.05,P〈0.01）,而经二甲基胂酸钠染毒的大鼠胰岛β细胞的细胞核内P53蛋白表达差异无显著性意义。结果说明,两种砷化物砷酸氢二钠、二甲基胂酸钠均可引起胰岛β细胞凋亡,可能与砷所致活性氧水平增高有关。