不同水平切应力对早期内皮祖细胞功能的影响

目的:本研究旨在观察切应力对早期内皮祖细胞体外功能的影响,以探讨切应力介导细胞修复血管损伤的可能性。方法:分离培养及鉴定外周血内皮祖细胞,予以10 dyn/cm~2和20 dyn/cm~2处理15小时,并观察不同水平切应力对内皮祖细胞体外功能的影响。结果:切应力处理后,内皮祖细胞的迁移、黏附和增殖功能明显增加,并且这种作用呈剂量依赖性。结论:10 dyn/cm~2和20 dyn/cm~2切应力显著增加内皮祖细胞体外功能和内皮修复能力,表明切应力介导的细胞疗法是修复血管内皮损伤的有效策略之一。     

内皮祖细胞与氧化应激研究进展

背景：内皮祖细胞是外周血中存在的一种干/祖细胞,是成熟内皮细胞的前体细胞,其与氧化应激的关系越来越受到人们的关注,而且国内外研究正日趋增多。目的：对国内外内皮祖细胞与氧化应激关系的现状及新进展作一综述。方法：应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1997-01/2010-05关于内皮祖细胞与氧化应激的文章,在标题和摘要中以＂内皮祖细胞,氧化应激＂或＂endothelial progenitor cells,oxidative stress＂为检索词进行检索。选择文章内容与内皮祖细胞与氧化应激有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到212篇文献,最终选择有代表性的34篇文献进行综述。结果与结论：内皮祖细胞与氧化应激关系密切,虽然内皮祖细胞具有比成熟内皮细胞更强的抗氧化能力,但在长期氧化应激存在的情况下,氧化应激通过减弱其抗氧化酶的表达,增加氧化酶的表达而促进内皮祖细胞的凋亡而影响其功能及数量,故氧化应激是导致内皮祖细胞数量改变及功能受损的影响因素之一,而通过他汀类药物、血管紧张素转换酶抑制剂/受体拮抗剂及过氧化物酶体激动剂的干预可改善内皮祖细胞的氧化应激状态,保护其功能。     

内皮祖细胞与氧化应激研究进展

背景:内皮祖细胞是外周血中存在的一种干/祖细胞,是成熟内皮细胞的前体细胞,其与氧化应激的关系越来越受到人们的关注,而且国内外研究正日趋增多.目的:对国内外内皮祖细胞与氧化应激关系的现状及新进展作一综述.方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1997-01/2010-05关于内皮祖细胞与氧化应激的文章,在标题和摘要中以内皮祖细胞,氧化应激或endothelial progenitor cells ,oxidative stress为检索词进行检索.选择文章内容与内皮祖细胞与氧化应激有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章.初检得到212篇文献,最终选择有代表性的34篇文献进行综述. 结果与结论:内皮祖细胞与氧化应激关系密切,虽然内皮祖细胞具有比成熟内皮细胞更强的抗氧化能力,但在长期氧化应激存在的情况下,氧化应激通过减弱其抗氧化酶的表达,增加氧化酶的表达而促进内皮祖细胞的凋亡而影响其功能及数量,故氧化应激是导致内皮祖细胞数量改变及功能受损的影响因素之一,而通过他汀类药物、血管紧张素转换酶抑制剂/受体拮抗剂及过氧化物酶体激动剂的干预可改善内皮祖细胞的氧化应激状态,保护其功能.     

血管内皮祖细胞生物学活性与血管内皮祖细胞捕获支架的研究进展

血管内皮祖细胞（EPCs）作为内皮细胞的前体细胞,具有"持续"的自我更新及定向分化的能力。EPCs捕获支架,如表面包被CD34^＋抗体的支架,能够识别循环血液中EPCs表面特异性性结合位点,捕获并促使EPCs归巢、分化为内皮细胞,参与病变血管内皮修复、促进血管新生、改善冠脉血流。EPCs的生物学活性是决定EPCs捕获支架临床应用的关键,本文从EPCs生物学特性、功能、冠状动脉微环境对EPCs的调控机制、EPCs捕获支架的研究进展等方面进行综述,探讨EPCs捕获支架的治疗价值。     

外周血内皮祖细胞与糖尿病

自1997年Asahara等[1]在外周血单个核细胞中首次分离出内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)后,人们对EPCs进行了大量的研究,发现出生后同胚胎时期血管发生一样,不仅存在着血管新生,也存在着依赖于血管内皮祖细胞的血管发生。EPCs对稳定血管内膜、修复受损血管、促进     

血管内皮生长因子表达载体的构建及在内皮祖细胞中的表达

背景：血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）具有很强的促进血管生成作用，但构建其真核表达质粒是否可转染缸管内皮祖细胞并完整表达还不清楚。目的：构建VEGF表达载体，并观察其在内皮祖细胞中的表达情况。设计、时间及地点：观察性试验，于2007-12／2008-03在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心实验室完成。材料：质粒PDC315-VEGFl65自备，质粒pIRES2-EGFP由美国国立卫生研究院Stanko Stojilkovic教授惠赠。方法：运用DNA重组技术构建VEGF表达载体pIRES2-EGFP-VEGF，应用脂质体包裹的方法将载体转染猪外周血血管内皮祖细胞。主要观察指标：采用荧光显微镜观察VEGF在内皮祖细胞内的表达，反转录．聚合酶链反应法检测VEGFmRNA表达水平，ELISA检测VEGF165蛋白表达情况。结果：成功构建VEGF真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF。转染重组质粒pIRES2-EGFP-VEGF后，在内皮祖细胞内有VEGF的表达，VEGFmRNA和VEGF165蛋白表达水平均明显增加。结论：VEGF表达载体转染猪外周血血管内皮祖细胞后能有效增加VEGF基因的表达，能够获得较高水平的VEGF蛋白。     

内皮祖细胞研究进展

内皮祖细胞自发现以来深得关注。本文就内皮祖细胞存在的证据、生物学特征、动员及研究存在的问题和可能的应用前景进行综述。     

内皮祖细胞与雌激素

背景:研究发现雌激素对血管内皮具有明显的保护作用,而内皮祖细胞作为内皮细胞的前体细胞参与内皮的修复.目的:总结内皮祖细胞生物特点及雌激素对内皮祖细胞作用的研究进展.方法:应用计算机检索PubMed数据库及CNKI数据库,在标题和摘要中以"内皮祖细胞,雌激素"或"Endothelial progenitor cells,estrogen"为检索词进行检索.选择与内皮祖细胞生物学特点及雌激素对其作用研究相关的文献.结果与结论:内皮祖细胞存在于骨髓和外周血中,是具有增殖、迁移、黏附能力并分化为血管内皮细胞潜能的原始细胞,可作为未来治疗心血管疾病的重要的靶点.雌激素对内皮祖细胞有保护效应,能增强内皮祖细胞增殖、迁移、黏附等生物活性,同时还能延迟内皮祖细胞衰老、拮抗其凋亡.但雌激素影响内皮祖细胞生物活性的具体靶点及机制尚有待进一步研究.     

内皮祖细胞与雌激素

背景：研究发现雌激素对血管内皮具有明显的保护作用,而内皮祖细胞作为内皮细胞的前体细胞参与内皮的修复。目的：总结内皮祖细胞生物特点及雌激素对内皮祖细胞作用的研究进展。方法：应用计算机检索PubMed数据库及CNKI数据库,在标题和摘要中以＂内皮祖细胞,雌激素＂或＂Endothelialprogenitorcells,estrogen＂为检索词进行检索。选择与内皮祖细胞生物学特点及雌激素对其作用研究相关的文献。结果与结论：内皮祖细胞存在于骨髓和外周血中,是具有增殖、迁移、黏附能力并分化为血管内皮细胞潜能的原始细胞,可作为未来治疗心血管疾病的重要的靶点。雌激素对内皮祖细胞有保护效应,能增强内皮祖细胞增殖、迁移、黏附等生物活性,同时还能延迟内皮祖细胞衰老、拮抗其凋亡。但雌激素影响内皮祖细胞生物活性的具体靶点及机制尚有待进一步研究。     

The copper-zinc superoxide dismutase activity in selected diseases

Copper-zinc superoxide dismutase (Cu,Zn-SOD) plays a protective role in various types of tissue protecting them from oxidative damage. Alterations in Cu,Zn-SOD (SOD1 and SOD3) activity and its expression have been observed in pathological occurrences most prevalent in modern society, including inflammatory bowel disease, obesity and its implications—diabetes and hypertension, and chronic obstructive pulmonary disease. Moreover, several SOD1 and SOD3 gene polymorphisms have been associated with the risk of developing a particular type of disease, or its exacerbation. This article features recent observations in this topic, aiming to show the importance of proper gene sequence and activity of Cu,Zn-SOD in the aforementioned diseases.     

Manganese superoxide dismutase expression in endothelial progenitor cells accelerates wound healing in diabetic mice

Amputation as a result of impaired wound healing is a serious complication of diabetes. Inadequate angiogenesis contributes to poor wound healing in diabetic patients. Endothelial progenitor cells (EPCs) normally augment angiogenesis and wound repair but are functionally impaired in diabetics. Here we report that decreased expression of manganese superoxide dismutase (MnSOD) in EPCs contributes to impaired would healing in a mouse model of type 2 diabetes. A decreased frequency of circulating EPCs was detected in type 2 diabetic (db/db) mice, and when isolated, these cells exhibited decreased expression and activity of MnSOD. Wound healing and angiogenesis were markedly delayed in diabetic mice compared with normal controls. For cell therapy, topical transplantation of EPCs onto excisional wounds in diabetic mice demonstrated that diabetic EPCs were less effective than normal EPCs at accelerating wound closure. Transplantation of diabetic EPCs after MnSOD gene therapy restored their ability to mediate angiogenesis and wound repair. Conversely, siRNA-mediated knockdown of MnSOD in normal EPCs reduced their activity in diabetic wound healing assays. Increasing the number of transplanted diabetic EPCs also improved the rate of wound closure. Our findings demonstrate that cell therapy using diabetic EPCs after ex vivo MnSOD gene transfer accelerates their ability to heal wounds in a mouse model of type 2 diabetes.     

Age-correlated modifications of copper-zinc superoxide dismutase and glutathione-related enzyme activities in human erythrocytes.

To obtain a comprehensive profile of the erythrocyte antioxidant defense potential during aging, we investigated copper-zinc superoxide dismutase (CuZn-SOD), seleno-dependent glutathione peroxidase (GSH-Px), glutathione reductase (GSSG-RD), and glutathione-S-transferase (GSH-S-T) activities in human erythrocytes from 167 apparently healthy subjects, ages one month to 63 years (102 females, 65 males). We found a negative correlation between age and activities of CuZn-SOD (r = 0.362, P less than 0.001), GSSG-RD (r = 0.549, P less than 0.001), and GSH-S-T (r = 0.575, P less than 0.001). In contrast, we found a positive correlation between age and GSH-Px activity (r = 0.401, P less than 0.001). To evaluate aging changes, we divided the subjects into five groups: Group 1 (newborn-age one year), Group 2 (1-11 years), Group 3 (11-25 years), Group 4 (25-40 years), and Group 5 (40-63 years). Significant age-related modifications in erythrocyte enzyme activities appeared in Group 3 for CuZn-SOD, GSSG-RD, and GSH-Px activity, whereas for GSH-S-T activity age-related modifications appeared in Group 2. We found no sex-related differences in erythrocyte CuZn-SOD, GSSG-RD, GSH-Px, and GSH-S-T activities.     

切应力对支架边缘内皮细胞生长因子表达的影响

背景:支架植入血管后,支架及其附近血液动力学发生了变化。切应力对支架边缘内皮细胞生长因子血小板源性生长因子A,B和碱性纤维生长因子的分泌表达与未植入支架时是否不同?目的:观察切应力对支架边缘内皮细胞生长因子表达的影响。设计:观察对比实验。单位:皖南医学院弋矶山医院心内科,上海交通大学医学院生物力学实验室。材料:实验于2006-04/10于上海交通大学医学院生物力学实验室完成。胰蛋白酶(Hyclon公司),M199培养基(高糖,Gibco BRL公司);胎牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所),血小板源性生长因子,Heparin,Hepes均为Sigma公司产品;胸腺嘧啶(Thymide)、兔抗人Ⅷ因子单克隆抗体、生物素化马抗兔IgG与碘化丙锭为Sigma公司提供;青/链霉素为上海生工公司提供;新生儿脐带由上海市第五人民医院产房提供;Trizol(Invitrogene公司),RT-PCR试剂盒(Fermentas公司),目的基因引物由上海生工公司合成。方法:改进传统平行平板流动腔,设计成矩形和具有切应力梯度两种模型的平行平板流动腔,分别作为矩形受力组和梯度受力组(具有切应力),同时设立静止组,前两组分别施加11.37dyne/cm2和5.66￣14.38dyne/cm2的剪切力,分别受力3,6,12h。主要观察指标:采用RT-PCR测定各组受力不同时间点人脐静脉内皮细胞中血小板源性生长因子A,B与碱性纤维生长因子mRNA的表达变化。结果:与静止组相比,梯度受力组细胞在受力3h血小板源性生长因子A,B与碱性纤维生长因子mRNA表达水平均已达到峰值,且血小板源性生长因子AmRNA表达水平延续至12h,矩形受力组上述各生长因子的表达峰值均出现于受力6h。结论:支架植入术后继发于剪切力改变而导致血小板源性生长因子A,B及碱性纤维生长因子诱导增加可能是引起支架内再狭窄过程中血管内膜增生的原因之一。     

剪切力对血管内皮细胞形态学变化的作用

目的:介绍血管内皮细胞在剪切力的作用下发生了形态学的变化,可直接影响内皮细胞的生理功能,并与血栓形成等疾病有一定关系。资料来源:应用计算机检索Medline1993-01/2004-01期间的关于剪切力的相关文章,检索词:“Deformability”和“endothelialcell”,限定文章语种类为英文;检索维普数据库1995-01/2004-01期间剪切力相关文章,检索词“剪切力”、“内皮细胞”和“细胞骨架”,限定语言种类为中文。资料选择:选择剪切力、血管内皮细胞、细胞骨架蛋白血液流变学的相关文献38篇。资料提炼:在38篇文献中,按剪切力与血管内皮细胞相关性研究的新观点进行提炼,对文献进行分类整理,用于综述,其中10篇选用为参考文献。资料综合:剪切力可使血管内皮细胞发生形态学改变。而这种变化影响细胞损伤后的再生。同时剪切力可改变内皮细胞生理功能,激活内皮细胞Ca2+通道、K通道,引起力化学信号转导。+结论:剪切力通过力化学信号转导途径,实现力化学转换,从而调节细胞的生理功能。这一生理功能改变可引起机体某些病理变化,最终导致血栓形成,从生物物理学观点阐明了剪切力与血栓形成的关系。     

体外细胞培养装置评估交变应力对内皮细胞的影响

对内皮细胞体外培养装置加以改进,在回路中形成既能正向流动,又能逆向流动的流场,旨模拟在血管分支、分叉、狭窄或弯曲处产生的双向血流或涡流.在改进后的血流动力学体外实验平台上进行细胞体外培养,交变流动对内皮细胞的损伤比单向流动要大.实验结果初步表明,交变脉动的切应力足导致内皮细胞损伤进而引起动脉粥样硬化斑块发生和发展的一个不可忽略的因素.     

流体剪切应力对骨肉瘤成骨样细胞核结合因子α1基因的表达作用

背景:机械应力在成骨细胞功能调控中的作用是近年骨组织生物力学研究的一个重点。流体剪切应力是否可以诱导成骨细胞内核结合因子α1的表达,其规律如何?目前少见报道。目的:观察流体剪切应力对骨肉瘤成骨样细胞(MG-63)核结合因子α1基因表达的作用。设计:对比观察实验。单位:解放军第四军医大学航空航天医学系航空航天生物动力学教研室完成。材料:MG-63人源骨肉瘤成骨样细胞。方法:实验于2004-11/2005-04在解放军第四军医大学航空航天医学系航空航天生物动力学教研室完成。①对MG-63细胞进行培养,传代60h后,将细胞置于流室系统中进行刺激实验。流体剪切应力分别为0.5Pa(0.5Pa应力刺激组)和1.5Pa(1.5Pa应力刺激组),作用时间分别为15,30和60min。同时取盖玻片置于含培养基的培养皿中,作为流体剪切应力刺激组的即时对照(对照组)。②提取细胞总RNA,进行反转录聚合酶链反应,检测细胞内核结合因子α1mRNA的表达,并计算与内参照GAPDHmRNA的比值。主要观察指标:不同流体剪切应力及不同作用时间核结合因子α1mRNA的表达值。结果:①与对照组相比,流体剪切应力刺激组的核结合因子α1mRNA的表达在作用30min和60min均显著增强,且在一定的时间范围内(15～60min),核结合因子α1mRNA的表达水平随着作用时间的延长、应力水平的增加而增强。②1.5Pa应力刺激组在作用30min和60min核结合因子α1mRNA的表达比0.5Pa应力刺激组均显著增强(P<0.01)。结论:流体剪切应力可以促进成骨细胞内核结合因子α1的表达。     

流体剪切应力对骨肉瘤成骨样细胞核结合因子α1基因的表达作用

背景：机械应力在成骨细胞功能调控中的作用是近年骨组织生物力学研究的一个重点。流体剪切应力是否可以诱导成骨细胞内核结合因子α1的表达，其规律如何？目前少见报道。 目的：观察流体剪切应力对骨肉瘤成骨样细胞（MG-63）核结合因子α1基因表达的作用. 设计：对比观察实验 单位：解放军第四军医大学航空航天医学系航空航天生物动力学教研室完成. 材料：MG-63人源骨肉瘤成骨样细胞。 方法：实验于2004-11／2005—04在解放军第四军医大学航空航天医学系航空航天生物动力学教研室完成。①对MG-63细胞进行培养，传代60h后，将细胞置于流室系统中进行刺激实验。流体剪切应力分别为0．5Pa（0．5Pa应力刺激组）和1．5Pa（1．5Pa应力刺激组），作用时间分别为15，30和60min。同时取盖玻片置于含培养基的培养皿中，作为流体剪切应力刺激组的即时对照（对照组）．②提取细胞总RNA，进行反转录聚合酶链反应，检测细胞内核结合因子α1mRNA的表达，并计算与内参照GAPDH mRNA的比值. 主要观察指标：不同流体剪切应力及不同作用时间核结合因子α1mRNA的表达值. 结果：①与对照组相比，流体剪切应力刺激组的核结合因子α1mRNA的表达在作用30min和60min均显著增强，且在一定的时间范围内（15-60min），核结合因子α1mRNA的表达水平随着作用时间的延长、应力水平的增加而增强．②1．5Pa应力刺激组在作用30min和60min核结合因子α1mRNA的表达比0．5Pa应力刺激组均显著增强（P〈0．01） 结论：流体剪切应力可以促进成骨细胞内核结合因子α1的表达。     

超氧化物歧化酶对脑动脉内皮细胞缺氧复氧时一氧化氮合酶Ⅲ表达的影响

目的：探讨在脑动脉内皮细胞缺氧复氧时超氧化物歧化酶对一氧化氮化酶Ⅲ（MOSⅢ）mRNA及蛋白表达的影响。方法：将原代培养的猪脑动脉内皮细胞（CAEC）进行缺氧复氧，用逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）和免疫细胞化学方法（ABC法）分别测定氧，复氧以及超氧化物歧化酶（SOD）干预时，MOSⅢ mRNA及蛋白质表达的变化。结果：（1）缺氧1h，MOSⅢ mRNA，蛋白质的表达增加，分别是正常对照组的1．32、1．29倍，加用SOD干预后，不能抑制其表达的上调；（2）复氧2、6、12h,MOSⅢ mRNA、蛋白的表达低于正常对照组，6h降至最低，是正常对照组的0．61、0．69倍，用不同浓度的SOD（100－400U／mL）预处理内皮细胞缺氧1h后复氧6h，SOD能抑制MOSⅢ mRNA、蛋白表达的下调，并且呈剂量依赖性。结论：在内皮细胞复氧时SOD能抑制MOSⅢ基因表达的下调，缺氧时SOD不能抑制MOSⅢ基因表达的上调；氧自由基可能参与了复氧时MOSⅢ基因表达的下调。     

运动条件下健康人循环内皮祖细胞的数量和功能

背景：运动条件对内皮祖细胞数量和功能是否会产生的影响目前尚无公识。目的：观察急性运动对健康成人循环内皮祖细胞数量和功能的影响。方法：健康男性成人志愿者12例参加急性平板运动锻炼（9.3±2.1）min。用流式细胞仪测定运动前后CD34和KDR双标阳性循环内皮祖细胞水平,ac-LDL及lectin荧光标记方法评估体外培养内皮祖细数量,检测内皮祖细胞的黏附、迁移和增殖能力,并测定运动前后血浆和内皮祖细胞分泌一氧化氮、血管内皮生长因子和粒-巨噬细胞集落刺激因子水平变化。结果与结论：流式细胞仪检测显示健康志愿者运动后循环内皮祖细胞水平较运动前增加（P〈0.05）。荧光标记法证实运动后ac-LDL及lectin抗体双阳性内皮祖细胞数量较运动前增加（P〈0.05）,内皮祖细胞迁移和增殖能力明显增强（P〈0.05）,但黏附能力无明显变化。急性运动能明显增加健康志愿者的血浆一氧化氮水平（P〈0.05）,健康志愿者运动前后血浆一氧化氮水平和循环内皮祖细胞数量及功能的增加倍数呈明显的直线相关回归关系（P〈0.05）。结果证实,运动可明显增加健康成人循环内皮祖细胞的数量和功能,其机制与其诱导一氧化氮释放增多有关。