树突状细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎的临床观察

形成慢性乙型肝炎的重要原因之一是树突状细胞（DC）功能缺陷。已知DC是功能最强的抗原递呈细胞，也是惟一能激活初始型T淋巴细胞的抗原递呈细胞，在T淋巴细胞介导的细胞免疫中起重要作用。当用特异性病毒抗原负载DC时，有可能通过诱导抗原特异细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性而特异性杀伤表达病毒抗原的靶细胞。     

树突状细胞与慢性乙型肝炎

树突状细胞（DC）是体内功能最强大的抗原提呈细胞,在HBV感染及CHB发病过程中起着重要的作用。近年来,DC已作为特异性免疫治疗手段被应用于CHB的治疗。     

肝癌抗原肽冲击转染p53的树突状细胞对荷瘤小鼠免疫功能的影响

树突状细胞（DC）是体内功能最强大的专职性抗原呈递细胞，它们能高效摄取、处理抗原，并将多肽呈递给静息型T细胞，引起针对此抗原的特异性免疫反应。我们将全长野生型p53基因（wt—p53）转染小鼠骨髓来源的DC，然后用肝癌抗原肽修饰已转染野生型p53的DC（wt—p53DC），利用这种DC诱导小鼠脾脏淋巴细胞特异的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。     

通过腺相关病毒载体导入树突状细胞的HBV基因可诱导CTL的活性

乙型肝炎已是一个越来越重要的全球问题，但是还很难治疗。不过免疫学治疗提供了新的有效的治疗措施。3种重组性腺相关病毒（AAV）2型载体分别将HBV基因S，C或X中的任何一个导入专职抗原提呈树突状细胞（DC），可刺激体内细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的活性。研究发现这3种携带重组性AAV／HBV抗原病毒的DC其转导有效率为90％。更为重要的是，这3种AAV转导树突状细胞都刺激了快速的，抗原特异性的MHCCTL活性。     

树突状细胞调节和细胞因子诱导的杀伤细胞的抗肿瘤机制及其在结直肠癌治疗中的应用前景

利用细胞因子诱导树突状细胞（dendritic cell，DC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer，CIK细胞），以肿瘤抗原冲击DC，将经过抗原冲击的DC和CIK细胞按一定比例混合进行共培养，得到一种新的免疫效应细胞群，即DC调节和细胞因子诱导的杀伤细胞（DCIK细胞）。DCIK细胞具有识别和特异性杀伤恶性细胞的作用，打破了放化疗“敌我不分”的状况。DCIK细胞不但存活率高，增殖能力强．而且对肿瘤细胞具有特异性杀伤能力，为肿瘤免疫治疗开创了一条新的途径。     

乙型肝炎患者外周血树突状细胞的培养及表型分析

树突状细胞（dendritic cells，DC）是已知体内功能最强及唯一能活化静息T细胞的专职抗原递呈细胞,并且在增强或调节细胞介导的免疫反应中起管决定性作用．在CHB患者中不仅DC的表型不成熟并且存在着功能的缺失，树突状细胞这种功能改变及数量变化与乙型肝炎患者针对HBV特异的CTL反应下降有密切关系。     

慢性乙型肝炎患者单核细胞来源树突状细胞Toll样受体的表达特征分析

目的观察慢性乙型肝炎（CHB）患者单核细胞来源树突状细胞（moDC）Toll样受体（TLR）的表达，并分析抗病毒相关TLR（TLR3、TLR4、TLR7、TLR8、TLR9）在CHB患者moDC的表达特征及意义。方法用羟乙基淀粉（HES）分离10例CHB患者及15例健康对照外周血单个核细胞（PBMC），经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素4（rhIL-4）诱导培养树突状细胞（DC），经流式细胞仪用特异性单克隆抗体检测不同成熟阶段DC的TLR表达，并以HBcAg负载未成熟DC，应用FACS分析HBcAg的负载效率及细胞内IFN-γ、IL-4表达水平。结果moDC不同成熟阶段TLR的表达水平不同；CHB患者的未成熟moDC（imDC）表达的TLR7、TLR8低于健康对照（75．9％、1．0％比98．4％、15．4％，P〈0．05），CHB患者成熟moDC（mDC）表达TLR3、TLR7低于健康对照（9．5％、79．7％比11．5％、90．7％，P〈0．05）；应用HBcAg分别于细胞培养第3天和第5天冲击DC，第1次冲击后48hHBcAg的膜内、膜外负载率分别为53．0％和7．5％，第2次冲击后分别为80．2％和19．0％；HBcAg负载或未负载的moDC，均刺激淋巴细胞高表达IFN-γ，较少表达或不表达IL-4，呈现显著的Th1免疫应答。结论CHB患者moDC的抗病毒相关TLR表达低下，且可能是其DC功能低下的重要原因之一；应用HBcAg冲击imDC，可使其有效负载HBcAg，负载后DC的成熟过程及功能不受影响，仍以诱导Th1免疫应答反应为主。     

负载HBcAg对慢性HBV感染患者树突状细胞的活化作用及功能影响

目的:探讨免疫耐受期慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(DC)负载HBcAg后细胞表型及免疫功能的改变。方法:从CHB免疫耐受期患者外周血分离培养DC,在DC成熟前,加入重组HBcAg表位肽,诱导HBV特异性DC分化成熟,流式细胞仪检测DC表面共刺激分子CD1a、CD80、CD83的表达水平,应用淋巴细胞增殖试验评估DC功能。结果:负载不同剂量的HBcAg后,DC细胞活化增强,DC细胞共刺激分子标志物CD1a、CD80以及CD83表达率均明显上升,且随着抗原负载剂量的增加,表达率进一步增加,各组之间差异具有统计学意义(均P<0.001);未负载HBcAg的DC细胞激活的淋巴细胞反应较弱,负载HBcAg的DC细胞刺激同种异体健康成人T淋巴细胞增殖能力增强,且随着负载抗原剂量的加大,T淋巴细胞的增殖能力进一步提高,与未负载抗原的对照组相比,差异具有统计学意义(F=428.14,P=0.000)。结论:体外负载HBcAg刺激CHB患者DC细胞可增强其有效抗原提呈能力,促进T淋巴细胞增殖。     

K562细胞可溶性抗原负载树突状细胞体外诱导CTL作用的研究

目的探讨经K562细胞裂解物冲击致敏的外周血单个核细胞衍生的树突状细胞（DC）的生物特性及体外诱导抗原特异性CTL应答的能力。方法采集健康人抗凝外周血分离单个核细胞，贴壁细胞用含rhGM—CSF、rhIL-4、TNF—α的RPM1640＋10％FBS培养基体外诱导培养产生DC，5天收获细胞并将细胞分组：A组：未负载抗原DC；B组：加入K562细胞裂解液脉冲DC。7天后用流式细胞仪检测成熟DC免疫表型，并将非贴壁细胞（淋巴细胞）作为效应细胞与各组DE共育，以产生细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。12天用LDH释放试验测定对K562细胞的杀伤活性。并用ELISA方法测定细胞上清液中IL-12的含量。结果（1）经细胞因子联合体外诱导的各组DC较培养前在数量，形态及免疫表型上差异有统计学意义，CD86、CD83、CD40、CD1a表达增加，其中经K562细胞裂解液冲击的DC的CD83CD86表达率明显升高。（2）效应细胞与K562细胞混合培养时，负载K562细胞裂解液的DC刺激后的T细胞比单独DC刺激后的T细胞对K562细胞的杀伤作用更明显。（3）负载K562细胞裂解液的DC细胞培养上清液中产生IL-12含量较未负载抗原的DC明显增加。结论用GM—CSF、IL-4以及TNF—α诱导培养健康人外周血单个核细胞可以得到成熟的DC，且经K562细胞裂解液致敏可以进一步促进DC的成熟并体外诱导特异性杀伤靶细胞的CTL。     

胸腺肽α1对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞调节作用的体外研究

背景：近年研究显示慢性乙型肝炎（CHB）患者体内树突状细胞（DC）存在不同程度的功能缺失。胸腺肽α1（T-α1）是一种生物学应答调节物质,对CHB的临床治疗有较好疗效。目的：研究T-α1对CHB患者外周血DC分化和功能成熟的影响,寻求改善DC功能的途径。方法：从12例CHB患者和10名健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）中分离培养DC。培养过程中应用不同浓度T-α1干预DC。以流式细胞仪检测DC表面标志,以甲基噻唑基四唑（MTT）实验检测混合淋巴细胞反应中DC刺激T细胞增殖的能力。结果：从PBMC分离培养得到的外周血DC呈现典型树突状形态。CHB组DC表面标记物CD80、CD86、人白细胞位点DR抗原（HLA-DR）水平以及刺激T细胞增殖的能力显著低于正常对照组（P〈0.001）;经T-α1干预后,两组上述指标均较相应空白对照升高,尤以0.5μg/mlT-α1的作用为著（P〈0.05）,可使CHB组上述指标恢复至正常水平。结论：T-α1能促进CHB患者外周血DC分化和功能成熟,在CHBDC疫苗的研究中可能具有重要价值。     

异基因树突细胞体外诱导抗慢性粒细胞白血病作用研究

树突细胞（DC）是体内惟一可以直接激活初始T细胞的专职抗原提呈细胞，是激发免疫应答的关键。我们选用持续表达BCR-ABL肿瘤抗原的K562细胞冻融抗原负载健康供者DC，避免自体肿瘤抗原和自身DC存在的缺陷，探索BCR-ABL肿瘤抗原负载的异基因健康供者DC在体外能否诱导HLA部分相合的慢性粒细胞白血病（CML）患者T细胞产生抗BCR-ABL^＋白血病效应。     

自身免疫病与树突状细胞免疫调控

树突状细胞（dendriti cells，DCs）是已知功能最强的专职抗原提呈细胞（professional antigen-presenting cells，APC）。DCs活化静止性T细胞的效率是其他APC（如巨噬细胞等）的1000倍。同时，作为APC，它能惟一激活初始型T细胞（naive T cells）致敏，产生初次免疫应答。成熟DCs联合抗原作用可加强免疫应答，而不成熟DCs又可诱导抗原特异性T细胞克隆清除（无能）或产生调节T细胞（Tr），产生免疫抑制或免疫耐受。因此，DCs被视为重要的免疫调节工具。有望应用于自身免疫病、慢性病毒感染和肿瘤等一系列疾病的临床治疗。本文就DCs免疫凋控与自身免疫病关系综述如下。     

含CpG基序寡核苷酸对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞的免疫激活研究

目的 研究含非甲基化CpG基序的寡核苷酸（CpG-ODN）对慢性乙型肝炎患者（CHB）外周血树突状细胞（DC）表型和功能的影响。方法以CD14磁性分选微珠分离CHB患者外周血高纯度单核细胞；以重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（hGM—CSF）、重组人白细胞介素-4（hIL-4）诱导扩增DC；以CpG-ODN刺激DC成熟，并与肿瘤坏死因子（TNF）-n比较，评价其对DC表达表面分子人类白细胞组织相容性抗原（HLA）-DR、CD86、CD1a，分泌IL-12p70以及刺激同种T细胞增殖能力的影响。结果与non—ODN和磷酸盐缓冲液（PBS）组比较，CpG-ODN能明显提高CHB患者外周血DC表面分子HLA—DR、CD86的表达，使IL-12分泌增加，刺激同种异体T细胞增殖的能力亦显著增强（P=0．017和0．023），但不能明显提高CD1a的表达；CpG-ODN的上述刺激作用接近或略逊于hTNF-α，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CpG-ODN与hTNF-α一样能够促进CHB患者外周血DC成熟进而增强其抗原提呈功能。     

树突状细胞在乙型肝炎病毒感染中的作用

树突状细胞（dendriti ccell，DC）能有效地激活并诱导初始T细胞分化，是机体免疫反应的始动者，在免疫应答或免疫耐受中具有独特地位。大量研究证实慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者中，DC表型及功能存在不同程度的损伤，影响DC对HBV各种抗原的提呈及免疫激活反应，从而使机体免疫耐受致慢性化。如何有效活化DC抗原提呈及免疫激活能力，以抑制体内HBV复制成为新的免疫治疗热点。     

树突状细胞负载肝癌相关抗原后成熟调控的研究

目的 研究树突状细胞（DC）负载肝癌相关抗原后的成熟调控。方法 用SDS－PAGE制备电泳纯化牛结核分枝杆菌热休克蛋白70，用其诱导DC的分化与成熟。结果 DC负载肝癌可溶性抗原后，10％2细胞失去了DC特征，同时其表面CD54（90．0％），CD83（78．0％），CD86（85．0％）分子表达下降；牛分枝杆菌卡介苗－热休克蛋白70（BCG HSP70）的活化有利于负载肝癌可溶性抗原后的DC维持其特异性标志，同时DC表面CD54（92．0％），CD83（90．0％），CD86（91．0％）分子表达增加，DC诱导同种异体淋巴细胞转化的能力增加，淋巴细胞增殖加快，从而促进DC成熟，增加其抗原呈递能力。结论 预示BCG HSP70有可能成为促进DC活化和成熟的另一重要分子。     

细胞因子诱导的自体杀伤细胞回输治疗慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的研究

目的了解细胞因子诱导的自体杀伤（CIK）细胞回输治疗是否能恢复慢性乙型肝炎（CHB）患者树突状细胞（DC）的功能。方法12例CHB患者应用CIK细胞回输治疗,入组前6个月至CIK细胞治疗随访期间,患者未接受任何抗病毒及免疫调节治疗。观察24周后患者髓样树突状细胞（mDC）、浆细胞样树突状细胞（pDC）比例和功能变化,并对其变化结果进行分析。结果应用CIK细胞回输治疗24周后,病毒载量下降≥2个log或转阴的患者外周血mDC、pDC功能明显提高。病毒学应答患者（n=6）病毒载量下降水平与外周血DC功能的恢复密切相关。结论CHB患者接受CIK细胞回输治疗可以提高外周血mDC和pDC功能。     

DCCIK细胞抗肿瘤的基础研究及临床应用进展

树突状细胞（dendritic cells，DC）分布于除脑和睾丸以外的身体的任何组织，是目前所知的功能最强大的专职抗原递呈细胞（antigen presenting cells，APC），亦是体内唯一具有激活幼稚T淋巴细胞诱导初次免疫应答能力的APC。     

慢性乙型肝炎患者CD4+CD25+调节性T淋巴细胞对树突状细胞的作用

高效的特异性CTL反应是机体清除HBV的关键,树突状细胞(DC)在诱导特异性抗HBV免疫的过程中发挥非常重要的作用[1-2].近年来的研究发现,慢性乙型肝炎(CHB)患者体内的DC存在功能缺陷,可以影响Th1/Th2分化,进而使患者体内CTL反应不足[3-4],但是导致DC出现功能缺陷的确切机制尚不清楚.     

肝素对慢性乙型肝炎患者树突状细胞免疫功能的作用

慢性乙型肝炎(CHB)发生的重要原因之一是患者的机体不能对乙型肝炎病毒川BV)形成充分有效的免疫应答以清除病毒。树突状细胞(DC)是目前发现的功能最强的抗原呈递细胞,在激活T细胞介导的免疫中具有重要的作用。近期文献报道及我们的研究结果提示CHB患者DC不仅数量较少而且发育障碍、功能低下。所以促进CHB患者DC发育并改善其功能,对提高CHB患者的免疫功能以清除体内的HBV有重要意义。本文通过研究肝素在体外对CHB患者DC功能的调节作用,为寻找能促进DC成熟的经济有效的诱导因子提供实验依据。一、材料与方法 1．材料：巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(北京医科大学免疫室提供)；白细胞介素(IL)4、肿瘤坏死因子(TNF) α、干扰素(IFN)γ(美国Promega公司产品)；荧光标记的抗人CDla、CD40、CD80、CD83、CD86、人类白细胞抗原-DR 单克隆抗体(美国lmmunotech公司产品)；RPMI 1640培养基、MTT、异硫氰酸荧光素(FITC)-Dextran(美国Sigma     

胸腺肽α1对慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的体外影响

树突状细胞(DC)是人体内抗原提呈能力最强的抗原提呈细胞(APC),在抗病毒的细胞免疫中起重要作用[1].慢性乙型肝炎(CHB)形成的重要原因之一是患者DC功能低下[2];胸腺肽α1是一种由28个氨基酸构成的胸腺多肽,被广泛用于调节机体免疫,促进T淋巴细胞功能可能是其重要机制之一.作为临床上治疗CHB的重要辅助用药,我们对胸腺肽α1调节CHB患者DC功能进行了研究.