氧化苦参碱对HepG2细胞胰岛素抵抗模型的影响

目的 探讨氧化苦参碱对Hep G2细胞胰岛素抵抗(IR-Hep G2)模型的影响。方法 采用以棕榈酸为诱导剂建立IR-Hep G2细胞模型,给予不同剂量的氧化苦参碱溶液(12.5~100μg·m L-1),分别测定葡萄糖消耗量、己糖激酶活力、丙酮酸激酶活力和肝糖原含量。结果 与正常组相比,模型组细胞的葡萄糖消耗量、己糖激酶活力、丙酮酸激酶活力和肝糖原含量均显著降低,表明胰岛素抵抗模型建立成功;与模型组相比,25~100μg·m L-1的氧化苦参碱可显著增加IR-Hep G2细胞的葡萄糖消耗量,50~100μg·m L-1的氧化苦参碱可显著提高IR-Hep G2细胞的己糖激酶活力、丙酮酸活力和肝糖原合成量。结论 氧化苦参碱可通过增加葡萄糖消耗量、己糖激酶活力、丙酮酸活力和肝糖原合成量改善IRHep G2细胞的胰岛素抵抗。     

苦参碱与氧化苦参碱抑制HepG2细胞增殖的对比研究

目的比较研究苦参碱与氧化苦参碱体外抑制肝癌HepG2细胞增殖的效果并初步探讨其机制。方法不同剂量苦参碱与氧化苦参碱注射液处理细胞 ,细胞计数及溴化四唑蓝实验观察细胞增殖抑制 ;光镜观察细胞形态改变 ;流式细胞仪和Tunnel实验观察细胞凋亡并检测细胞周期 ;免疫组化观察凋亡相关基因Bax与Bcl 2的表达。结果 0 .8g/L苦参碱处理细胞 3d即可明显抑制HepG2细胞增殖 ,细胞存活率为 5 1% ;1.5g/L苦参碱可明显诱导细胞凋亡 ,用药后大量细胞被阻滞于S期 ;1.5g/L的苦参碱使HepG2细胞凋亡相关基因Bax表达增强 ,Bcl 2的表达减弱。与苦参碱同浓度的氧化苦参碱不能抑制细胞增殖 ,1.5g/L氧化苦参碱处理细胞 3d ,细胞存活率仍为84 .2 % ;氧化苦参碱的浓度增至 8.0g/L时才出现明显凋亡峰。结论体外苦参碱诱导HepG2细胞凋亡能力强于氧化苦参碱 ,并调控了凋亡相关基因的表达 ,而氧化苦参碱浓度 6倍于苦参碱时细胞才出现凋亡。     

苦参碱、氧化苦参碱和白藜芦醇对HERG钾通道表达的影响

由于HERG钾通道在心律失常的发生与治疗中具有双重作用，因此成为近年来研究的热点。本文主要通过免疫荧光化学染色法、激光共聚焦显微镜及Western blotting法分别定性、定量地检测不同浓度的苦参碱、氧化苦参碱和白藜芦醇对稳定转染在HEK-293细胞中HERG钾通道表达的影响。研究发现，苦参碱(1 μmol·L^-1)和氧化苦参碱(1 μmol·L^-1)均能够促进定位于HERG-HEK细胞膜上的HERG钾通道的表达(n=5，P<0.05)，苦参碱(100 μmol·L^-1)能够抑制定位于HERG-HEK细胞膜上的HERG钾通道表达(n=5，P<0.05)，氧化苦参碱(100 μmol·L^-1)对HERG钾通道表达没有影响，白藜芦醇不影响HERG-HEK细胞中HERG钾通道表达。结果表明，低浓度的苦参碱促进HERG钾通道表达，高浓度的苦参碱抑制HERG钾通道表达，低浓度的氧化苦参碱促进HERG钾通道表达，白藜芦醇不影响HERG钾通道表达。这为苦参碱、氧化苦参碱和白藜芦醇抗心律失常作用机制及安全性提供了理论依据。     

黄芩苷体外调控乳腺癌细胞表达TIMP2的实验研究

目的:探讨黄芩苷对Bcap37细胞生长及TIMP2表达的影响。方法:体外细胞培养、MTT法测定不同浓度黄芩苷对Bcap37细胞生长曲线的影响,RTPCR、Westernblot方法研究不同浓度黄芩苷对Bcap37细胞TIMP2的影响。结果:黄芩苷对Bcap37细胞的生长抑制呈浓度依赖关系;黄芩苷对Bcap37细胞TIMP2在mRNA水平、蛋白水平呈浓度依赖关系,小剂量上调,高剂量下调。结论:黄芩苷对人乳腺癌Bcap37细胞生长有抑制作用,可能与肿瘤细胞TIMP2的下调有关。     

黄芩苷对白色念珠菌生物膜形成的体外抑制作用

目的：研究黄芩苷体外对白色念珠菌生物膜形成的影响。方法扫描电镜下观察不同培养时间的生物膜形态,并用XTT减低法检测黄芩苷对白色念珠菌生物膜活性的影响,用结晶紫含量测定法检测黄芩苷对白色念珠菌生物膜生物量的影响。结果白色念珠菌在48h时形成成熟的生物膜。黄芩苷在浓度为8．0mg? mL －1时使白色念珠菌生物膜活性及生物量分别减少（90．6±5．2）％和（90．3±2．6）％,生物膜已基本无活性。结论黄芩苷对白色念珠菌生物膜的形成具有抑制作用。     

黄芩素对人肝癌HepG2细胞生长的抑制作用

目的:研究黄芩素对人肝癌Hep G2细胞生长的抑制作用。方法:在培养Hep G2细胞的96孔板上加入药物,使黄芩素的终浓度分别为0、20、40、80、160μmol/L(即对照组与黄芩素1、2、3、4组)。采用MTT法检测细胞的存活情况,分光光度法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、8、9的活性,并检测丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果:与对照组比较,培养24、48、72 h时,黄芩素2、3、4组各时间点的吸光度降低;培养24 h时,Caspase-3、8、9活性增强,MDA含量增加,SOD、GSH-Px活性减弱,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:黄芩素对Hep G2细胞生长具有抑制作用,其机制与增强Caspase-3、8、9活性,增加MDA含量,减弱SOD、GSH-Px活性有关。     

HPLC同时测定黄芩花中野黄芩苷和黄芩苷的含量

目的 建立HPLC同时测定黄芩花中野黄芩苷和黄芩苷含量的方法,并控制其质量。方法 收集不同时期（初花期、盛花期、凋花期）黄芩花样品,采用HPLC测定其中的野黄芩苷和黄芩苷含量。色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）,流速1.0 mL·min^-1,检测波长280 nm;柱温30℃。结果 黄芩花中,野黄芩苷平均含量为1.690%,黄芩苷平均含量为0.306%;8月中旬盛花期时,2种指标成分含量最高,分别为1.857%,0.360%。结论 本法测定黄芩花中野黄芩苷和黄芩苷的含量简便、准确、快捷,可用于黄芩花的质量控制。     

氧化苦参碱上调角质形成细胞Fas抗原介导细胞凋亡

目的：探讨苦参碱上调角质形成细胞Fas抗原表达，治疗银屑病的机制。方法：采用流式细胞仪定量分析不同浓度氧化苦参碱对角质形成细胞Fas抗原表达的影响。结果：当氧化苦参碱浓度≥100mg/L时，可上调角质形成细胞Fas抗原表达，随着浓度升高，表达量增加，结论：一定浓度的氧化苦参碱可上调角质形成细胞Fas抗原表达，继而诱导角质形成细胞凋亡，这可能是苦参治疗银屑病的重要机制之一。     

氧化苦参碱和拉米夫定体外抗乙肝病毒的比较

目的比较氧化苦参碱(OM)和拉米夫定体外抗乙肝病毒的效果。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法考察OM和拉米夫定对HepG2.2.15生长的抑制作用,ELISA法检测对HepG2.2.15分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用。结果 OM和拉米夫定对HepG2.2.15的半数中毒剂量分别为1 489.1和15.5μg/L。对HBsAg和HBeAg的表达均有剂量和时间依赖的抑制作用。结论 OM治疗乙肝病毒的安全性高于拉米夫定。     

淫羊藿苷联合丝裂霉素对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用

目的通过将淫羊藿苷(ICA)联合丝裂霉素(MMC)联合作用肝癌HepG2细胞的实验研究,探讨联合药物对HepG2细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法 MTT法检测不同浓度ICA、MMC或两药联合处理48 h后及未处理组HepG2细胞的增殖活性,通过两药相互作用系数CDI评价两种药物的相互作用性质;RT-PCR检测药物处理后HepG2细胞内凋亡抑制蛋白质FLIP mRNA水平的变化。结果单独ICA或MMC处理后,均可抑制HepG2细胞的增殖,其抑制率随着药物剂量增加而增强(P<0.05),呈剂量依赖性;两药联合应用对HepG2细胞增殖的抑制作用明显,其抑制率呈剂量依赖性(P<0.01),且两药作用具有协同效应(CDI<1);与未处理组相比,ICA或MMC处理后HepG2细胞内FLIP mRNA水平降低,尤其以联合药物处理组降低更加显著(P<0.001)。结论 ICA与MMC联用可在体外抑制肝癌细胞的增殖,两药具有协同效应,其抑制机制可能通过抑制凋亡抑制蛋白FLIP的表达,从而增加癌细胞的凋亡而实现的。     

羊栖菜多糖的制备及其对HepG2细胞的抑制作用

目的研究羊栖菜多糖对人肝癌细胞HepG2的抑制作用.方法用热水提取,乙醇、氯化钙沉淀分离及酸水解制备了6种羊栖菜多糖样品;采用MTT法测定各羊栖菜多糖样品对人肝癌细胞HepG2的生长抑制率.结果除2种多糖在低浓度对其抑制率有所增加外,其它样品对人肝癌细胞HepG2的抑制率均随其浓度增加而增加,当剂量＜2000mg·L-1时,其抑制率均未超过40%.结论各羊栖菜多糖样品对肝癌细胞HepG2均有一定的抑制作用.     

DNA微矩阵芯片检测沙利度胺对HepG2细胞基因表达谱的影响

目的　从整个细胞基因组表达变化的角度 ,研究沙利度胺 (Tha)对基因表达谱的影响 ,揭示发育毒性药物的致畸机制。方法　用载有 8192条基因的DNA微矩阵芯片 ,检测在 11.6μmol·L- 1的Tha作用4 2h后 ,HepG2细胞基因表达谱的变化。结果有 19条基因的表达有明显变化 ,其中 17条基因表达下调 ,2条基因表达上调。下调基因中有多条为转录调控和胚胎发育相关基因 ,上调的基因中有DNA修复相关基因和线粒体功能相关的基因。结论　Tha能影响若干基因转录和胚胎发育基因的表达 ,可能与其发育毒性机制相关 ,为发展新的发育毒性药物评价方法提供了有利基础     

氯唑沙腙对抗HepG2肿瘤细胞的作用研究

目的研究氯唑沙腙(chlorzoxazone)对HepG2细胞存活和凋亡的影响。方法采用MTT法检测氯唑沙腙对体外培养的HepG2细胞存活率的影响,通过检测LDH释放观察氯唑沙腙对HepG2细胞的致坏死作用,通过TUNEL法评价细胞凋亡率,透射镜评价细胞的超微结构。结果氯唑沙腙在50～500μmol.L-1浓度范围内对HepG2细胞的存活率均有抑制作用,呈明显的剂量依赖效应关系。荧光显微镜和透射电镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变。氯唑沙腙在100、200、300及500μmol.L-1浓度下作用48h均可诱导HepG2细胞凋亡,具有明显的剂量效应关系。氯唑沙腙100、200、300及500μmol.L-14种浓度分别作用于HepG2细胞24、48及72h,发现以上各种浓度在48h即可诱导细胞凋亡,作用时间越长,凋亡率越高,有明显的时间效应关系。结论氯唑沙腙能够抑制HepG2细胞存活和诱导细胞凋亡。     

硒-甲基硒代半胱氨酸对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的研究硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine,MSC)对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,探讨其分子机制.方法用不同浓度的MSC处理培养的HepG2细胞,镜下观察细胞的形态学变化,MTT法和流式细胞仪分别检测其对细胞生长和细胞周期的影响,软琼脂生长试验观察瘤细胞恶性表型的变化,并检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA的表达和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性.结果25 μmol·L-1的MSC处理HepG2细胞24 h后,细胞生长受到明显抑制,出现S期阻滞和细胞凋亡,呈现浓度和时间依赖关系.软琼脂生长试验显示MSC抑制HepG2细胞在软琼脂上的生长能力.RT-PCR和Caspase-3的活性检测显示,25 μmol·L-1 MSC处理HepG2细胞24、48 h后,Cyclin D1 mRNA表达下降了38%和47%,而Caspase-3活性分别升高(39.61±6.65)%和(118.73±6.48)%;50 μmol·L-1 MSC处理HepG2细胞24、48 h后,Cyclin D1 mRNA表达下降了53%和82%, 而Caspase-3活性分别升高(80.66±9.31)%和(152.67±7.95)%.结论MSC抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡,瘤细胞的恶性程度减弱,这种表型变化与Cyclin D1的表达减弱和Caspase-3的活性增强有关.     

白鲜碱对HepG2细胞的毒性作用及其机制

目的研究白鲜碱的肝细胞毒性作用及其毒性机制。方法白鲜碱2.5～800μmol·L-1与HepG2细胞作用24 h,用MTT法检测细胞存活率并计算IC50值,用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤。白鲜碱25～100μmol·L-1与HepG2细胞作用4,24或48 h,用试剂盒方法分别检测细胞培养液中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)和谷氨酰转肽酶(GGT)活性。用倒置显微镜观察细胞形态变化;激光共聚焦扫描显微镜检测细胞线粒体膜电位的变化。结果白鲜碱25～800μmol· L-1与HepG2细胞作用24 h对HepG2细胞存活的抑制作用随着浓度的增加而降低(r=0.965,P<0.05),IC50值为(283±27)μmol·L-1。与溶剂对照组相比,白鲜碱12.5～50μmol·L-1作用24 h,HepG2细胞LDH释放率显著升高(P<0.01)。白鲜碱100和200μmol·L-1可引起HepG2细胞形态发生明显变化,细胞皱缩脱落,细胞数目减少,并使HepG2细胞线粒体膜电位下降(P<0.05,P<0.01)。白鲜碱100和200μmol·L-1与HepG2细胞作用24 h可使细胞培养液中ALT和AST活性显著升高,并呈浓度依赖性(r=0.995,P<0.05和r=0.996,P<0.05),线粒体膜电位亦明显下降(r=0.978,P<0.05)。与溶剂对照组相比,白鲜碱100和200μmol·L-1与HepG2细胞作用4 h,细胞培养液中GST活性明显升高(P<0.05);作用24 h,GST活性升高呈浓度依赖性(r=0.987,P<0.05)。白鲜碱200μmol· L-1作用48 h导致HepG2细胞培养液中GGT活性升高(P<0.05)。结论较高浓度的白鲜碱(≥100μmol· L-1)具有潜在的肝毒性,细胞膜损伤和线粒体损伤可能是其肝毒性作用机制之一。     

橙皮苷对胰岛素抵抗HepG2细胞体外糖代谢的影响

目的探讨橙皮苷(hesperidin)对胰岛素抵抗HepG2细胞体外糖代谢的影响。方法采用高浓度胰岛素(INS)持续作用HepG2 12h建立胰岛素抵抗(IR-HepG2)模型,同时培养液中给予不同质量浓度橙皮苷(10,40和60μg.mL-1)或盐酸二甲双胍(30μg.mL-1)干预。药物作用12h后,换含低浓度INS的培养液培养细胞12h,使细胞同步化。然后,测定各组细胞葡萄糖消耗量、细胞内肝糖原含量、己糖激酶(hexokinase,HK)和丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)的活力。结果与正常组相比,模型组细胞葡萄糖消耗量、肝糖原含量及HK和PK酶活力显著下降(P<0.01);与模型组相比,40和60μg.mL-1的橙皮苷可极显著增加IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量、肝糖原合成量及HK酶活力(P<0.01),显著增加PK酶活力(P<0.05)。结论橙皮苷可增加IR-HepG2细胞对葡萄糖的利用,增加肝糖原合成量,提高HK、PK活力,从而促进IR-HepG2细胞糖代谢,改善胰岛素抵抗能力。     

仙鹤草水提物对HepG2细胞凋亡的影响

目的研究仙鹤草水提液对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法将细胞分为6组:空白组、对照组、仙鹤草水提液-C、-D、-E、-F组。空白组加入正常培养液0. 1 m L,对照组加入质量浓度为50μg·m L^-1的5-FU培养液0. 1 m L,仙鹤草水提液-C、-D、-E、-F组别加入含不同浓度(1. 00,0. 75,0. 50,0. 25 mg·m L^-1)仙鹤草水提液的培养液0. 1 m L。以噻唑蓝法检测不同药物浓度与不同作用时间对肝癌细胞Hep G2生长的抑制作用;以流式细胞仪检测细胞凋亡率;以实时定量-聚合酶链反应和免疫印迹法检测Bax mRNA表达水平和Caspase-3蛋白的表达水平。结果在48 h,空白组、对照组与仙鹤草水提液-C、-D、-E、-F组对HepG2的生长的抑制率分别为0,22. 10%,71. 10%,67. 88%,47. 19%和27. 35%,这5个给药组与空白组比较,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01);且仙鹤草水提液对HepG2细胞的抑制作用呈剂量、时间依赖性。空白组与仙鹤草水提液-C、-D、-E组的Bax mRNA表达量分别为1. 00±0. 00,2. 53±0. 13,4. 95±0. 11和3. 39±0. 17,仙鹤草水提液-C、-D、-E组与空白组相比,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01);空白组、对照组与仙鹤草水提液-C、-E组的Caspase-3蛋白表达水平分别为0. 72±0. 00,1. 06±0. 02,1. 02±0. 11和0. 88±0. 07,对照组和仙鹤草水提液-C、-E组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。空白组和仙鹤草水提液-C组的人肝癌HepG2细胞凋亡率分别为0. 2%和24. 3%,仙鹤草水提液-C组与空白组比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论仙鹤草水提液能显著促进HepG2凋亡,抑制其增殖,可通过上调线粒体凋亡通路Bax基因和Caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡,其抗肿瘤作用可能与线粒体凋亡途径有关。     

苦参碱的体外抗乙型肝炎病毒作用

目的:观察苦参碱的体外抗HBV作用,初步探讨其作用机理。方法:4×10~4个/mL有HBV基因组的HepG2 2.2.15细胞接种于24孔板,37℃5%CO_2培养24h收取上清液后,更换培养基并加入0.025-0.5mg·mL~(-1)的苦参碱。每3d收取上清,换原浓度药液继续培养,共9天。用酶联免疫法测定上清中HBsAg和HBeAg,酚氯仿抽提被裂解细胞中的HBV DNA,用荧光定量PCR法测定细胞内及细胞外HBV DNA的拷贝数。结果:0.025-0.5mlg·mL~(-1)的苦参碱给药9d,对HepG2 2.2.15细胞分泌HBsAg的半数抑制浓度(IC_(50))为0~(-1)14 mg·mL~(-1),选择指数(SI)为5.66;对HBeAg的IC_(50)和S1分别为0.29mg·mL~(-1)和2.69;对细胞内HBV DNA的IC_(50)和SI分别为0.109mg·mL~(-1)和7.0;对细胞外HBV DNA的IC_(50)和SI则分别为0.120mg·mL~(-1)和6.39。结论:体外实验表明:在0.25-0.5mg·mL~(-1)的剂量范围内,苦参碱对2.2.15细胞中人乙型肝炎病毒的复制有不同程度的抑制作用。