脑心通对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制

目的:研究脑心通对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其机制。方法:将体外传代培养的人脐动脉VSMC随机分为5组:空白组、模型组和脑心通(1g/L,0.5g/L,0.1g/L)三个不同剂量组。采用MTT比色法检测各组VSMC的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期构成比。结果:脑心通有抑制ox-LDL诱导的VSMC的增殖的作用,MTT吸光度(OD值)由0.733±0.033减少到0.672±0.035(P<0.05);流式细胞分析示G0/G1期细胞比例由51.67%±9.64增加到64.70%±5.54(P<0.05)。结论:脑心通可抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,机制与其阻止细胞进入有丝分裂期有关。     

补肾益气方及其拆方对ox-LDL所致"AS"症血管平滑肌细胞病理模型的影响

目的:研究补肾益气方及其拆方(黄芪、首乌)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)所致动脉粥样硬化(AS)症血管平滑肌(VSMC)病理模型细胞的增殖及其调控基因的影响。方法:用ox-LDL处理VSMC复制"AS"细胞病理模型,用MTT法、流式细胞仪、RT-PCR法观察含受试药物血清对模型细胞增殖、泡沫细胞形成、增殖周期及相关基因表达影响。结果:补肾益气方及其拆方(黄芪、首乌)能降低模型细胞的增殖率及泡沫细胞形成率;降低S期细胞的百分率,下调VSMC增殖促进基因PDGF-a、c-MYC,上调增殖抑制基因P27的表达。结论:补肾益气方及其拆方具有抑制AS症的血管平滑肌细胞增殖和泡沫细胞的形成。     

淫羊藿苷通过影响MAPK信号通路抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖作用研究

研究淫羊藿苷(ICA)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,以及对增殖细胞核抗原(PCNA)表达和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。以ox-LDL(50 mg·L-1)诱导VSMC增殖,采用MTT法检测ICA对ox-LDL诱导VSMC增殖的抑制作用;Real-time PCR和Western blot方法检测ICA对ox-LDL诱导增殖VSMC内细胞周期相关蛋白PCNA基因及蛋白表达的影响;Western blot方法检测ICA对ox-LDL诱导增殖VSMC内p38MAPK,ERK1/2,JNK信号通路相关信号蛋白磷酸化的影响。结果显示,经ox-LDL(50 mg·L-1)刺激后,VSMC增殖活性显著增强,细胞存活率显著提升,S期、G2/M期细胞显著增加,G0/G1期细胞显著减少;同时,PCNA基因及蛋白表达水平显著提升;不同浓度的ICA(40,20,10μmol·L-1)可显著抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,减少S期、G2/M期细胞,增加G0/G1期细胞,降低ox-LDL诱导的PCNA基因及蛋白的表达水平,下调ox-LDL诱导的p-p38和p-ERK1/2蛋白的表达,但不影响p-JNK蛋白的表达。上述结果表明,ICA对ox-LDL诱导的VSMC增殖具有抑制作用,可能通过降低PCNA表达和阻断p38MAPK和ERK1/2信号通路抑制VSMC增殖。     

不同程度氧化修饰的低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究不同程度氧化修饰的低密度脂蛋白在诱导血管平滑肌细胞增殖时的影响.方法:采用消化法培养血管平滑肌细胞,Cu2 氧化制备弱氧化型低密度脂蛋白(mox-LDL)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),用3H-TdR掺入法检测血管平滑肌细胞DNA合成率.结果:在比较n-LDL和mox-LDL、ox-LDL诱导VSMC增殖时,发现mox-LDL组和n-LDL组相似,DNA合成率先上升到最高后快速下降,但mox-LDL组始终明显高于n-LDL组,ox-LDL组则随着时间的推移呈上升趋势.结论:mox-LDL与n-LDL、ox-LDL在诱导VSMC增殖时具有不同的作用方式,其差异与其所含的过氧化脂质种类及不同的受体途径两种因素有密切关系.     

养阴益气活血方药不同配伍对VSMC的影响

目的:探讨养阴益气活血方药不同配伍对高胰岛素、高脂血清诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的拮抗作用。方法:通过MTT比色测定及形态学方法观察养阴益气活血方药各组药物血清的作用效果。结果:人参与麦冬组药物血清有较明显的抗VSMC增殖作用,形态学观察显示各组药物血清可不同程度缓解高胰岛素、高血脂造成的形态学改变。结论:养阴益气活血方药物各药物血清治疗瘀血的机制与血管平滑肌细胞有密切联系。     

丹参对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶和骨桥蛋白基因表达及细胞增殖的影响

目的：探讨丹参（SAL）对氧化低密度脂密度（ox-LDL)诱导体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）基质金属蛋白酶（MMP）和骨桥蛋白（OPN）基因表达的影响，以提示SAL抑制VSMC增殖和迁移的作用机理。方法：应用Northern,Western印迹和斑点杂交检测SAL对MMP-2，MMP-9和OPN表达的影响；采用^3H-TdR掺入实验，检测VSMC增殖活性。结果：SAL或复方丹参（SALC）注射液对ox-LDL诱导的MMP-2和MMP-9表达以及OPN的合成与分泌具有明显的下调作用。且可显著抑制VSMC的DNA合成；将ox-LDL与SAL或SALC注射液共孵育1h后再处理VSMC，ox-LDL对上述基因表达和VSMC增殖的诱导作用基因消化。结论：SAL抗VSMC增殖与迁移的作用与其调整基质代谢有关。     

丹参不同组分对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

[目的]探讨丹参的水溶性有效成分 (总丹酚酸 )和脂溶性有效成分 (总丹参酮)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响 ,以寻找药物的作用靶点。[方法]分离大鼠主动脉中层平滑肌 ,贴壁法培养平滑肌细胞 ,无血清培养基培养静止后 ,以5 %胎牛血清(FCS)刺激VSMC增殖 ,分别加入不同浓度的总丹参酮或丹酚酸 ,以四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法观察药物对VSMC增殖的影响 ;以Bradford法检测细胞总蛋白 ;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响。[结果]与对照组相比丹参酮使VSMC增殖活性下降(P<0.05) ,细胞总蛋白合成降低 (P<0.05) ,并呈浓度依赖性,而丹酚酸组与对照组相比无显著性差异 ;此外流式细胞术检测结果显示丹参酮使VSMCG0/G1 期比例升高 ,S期比例下降 ,而丹酚酸组与对照组相比仍无显著性差异。[结论]丹参的脂溶性有效成分总丹参酮具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用 ,而丹酚酸对VSMC不具有以上作用     

苏木乙酸乙酯提取液靶向调控miRNA-99a抑制动脉粥样硬化的作用机制研究

目的研究苏木乙酸乙酯提取液(SAEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、凋亡的机制及miRNA-99a在其中的可能作用。方法 ox-LDL诱导VSMC模型,分别将SAEE(200μg/mL)、miRNA-99a模拟剂、miRNA-99a抑制剂作用于细胞。采用MTT法检测各组VSMC的增殖,流式细胞学检测其凋亡水平,Western blotting法检测细胞中Ki-67、PCNA、Bax、Bcl-2、MMP-1、TIMP-1蛋白的表达,RT-PCR检测细胞中miRNA-99a的表达。结果与空白组相比,ox-LDL能显著增加VSMC细胞增殖、晚期凋亡和总凋亡率,上调细胞中Ki-67、PCNA、Bax、MMP-1蛋白的表达及Bax/Bcl-2、MMP-1/TIMP-1的比值,下调Bcl-2、TIMP-1蛋白和miRNA-99a的表达,差异均具有显著统计学意义(P 0.01);SAEE能够抑制VSMC细胞增殖、晚期凋亡和总凋亡率,上调Bcl-2、TIMP-1蛋白和mi R-99a的表达,下调细胞中Ki-67、PCNA、Bax、MMP-1蛋白的表达及Bax/Bcl-2、MMP-1/TIMP-1的比值,与模型组比较,差异均具有统计学意义(P 0.01)。结论 SAEE能够通过上调细胞中miRNA-99a的表达,抑制VSMC细胞增殖、凋亡和细胞外基质的降解,促进斑块的稳定和防止纤维帽的破裂,发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞增殖活性及总蛋白含量的影响

目的:研究淫羊藿苷( icariin,ICA)对氧化低密度脂蛋白(oxidized,ox - LDL)诱导增殖血管平滑肌细胞(vascular smoooth muscle cell,VSMC)的促凋亡作用.方法:建立ox- LDL诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的淫羊藿苷共同培养,用MTT法检测细胞增殖活性;考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白量.结果:与空白组相比较,模型组OD值显著升高(P＜0.01),证明LDL可促进VSMC增殖;与模型组相比,高、中、低浓度的ICA均可抑制LDL所诱导的VSMC增殖(P＜0.01);经ICA处理24h、48h、72 h后,VSMC总蛋白含量均低于LDL组,提示ICA对VSMC增殖均有抑制作用.结论:淫羊藿苷拮抗ox-LDL诱导的兔VSMC增殖,促进其凋亡.     

镇肝息风汤含药血清对人脐动脉平滑肌细胞增殖和凋亡作用的实验研究

目的观察镇肝息风汤含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激人脐动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、凋亡的影响。方法制备镇肝息风汤含药血清,采用组织贴块法培养VSMC,并以α-SMactin免疫细胞化学法鉴定。用10-6mol/LAngⅡ刺激VSMC,以MTT法观察含药血清对VSMC增殖的影响;Brdu免疫细胞化学法观察含药血清对VSMCsDNA合成的影响;流式细胞术AnnexinV-FITC法观察含药血清对VSMCs凋亡的影响;并以西药依那普利作为阳性对照药物。结果镇肝息风汤含药血清可抑制AngⅡ诱导的细胞增殖,Brdu标记率增加,促使凋亡率升高。结论镇肝息风汤可通过调节VSMCs增殖-凋亡失衡,从而改善血管重塑。     

3种姜黄色素干预ox-LDL促平滑肌细胞增殖与影响LDL-R表达的研究

目的:研究3种不同结构的姜黄色素单体对牛主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖及牛VSMC低密度脂蛋白受体(LDL-R)表达的影响,解析构效关系。方法:用MTT比色法和流式细胞仪观察3种不同结构的姜黄色素单体对ox-LDL促牛VSMC增殖及对VSMC LDL-R表达的影响。结果:ox-LDL在2.5,5,10 mg.L^-1时,对VSMC有明显的促增殖作用,P<0.05。姜黄素16.5,33,66μmol.L^-1,一脱甲氧基姜黄素(简称一脱)33,66μmol.L^-1和二脱甲氧基姜黄素(简称二脱)66μmol.L^-1对10 mg.L^-1ox-LDL培养的VSMC有明显的抑制作用,P<0.05。3种姜黄色素的抑制率为姜黄素>一脱>二脱。3种姜黄色素在66,33,16.5μmol.L^-1时对VSMC LDL-R的表达均有明显的上调作用,其中姜黄素16.5μmol.L^-1组与正常组比较,P<0.05,其他组与正常组比较P<0.01,上调作用二脱>一脱>姜黄素,经组间方差分析,P<0.01,与姜黄色素抑制牛VSMC增殖作用相反。结论:3种不同结构姜黄色素单体能明显抑制ox-LDL促牛VSMC增殖作用,上调牛VSMC LDL-R表达,从而有可能延缓动脉粥样硬化的发生发展过程。     

滋补肝肾,益气活血方药对血管平滑肌细胞增殖及相关基因表 …

目的：采用血清药理学方法研究滋补肝肾、益气活血方药对内皮素（ＥＴ）诱导的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和ＷＫＹ大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖及相关基因表达的影响。方法：采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验检测ＶＳＭＣ增殖状态,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交,反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测中药血甭中ＶＳＭＣ诱导一氧化氮合酶基因和ＥＴ－诱导和ｃ－ｊｕｎ、增殖细胞怕（ＰＣＮＡ）基因表达活性的影响。结果：中导型一氧     

滋补肝肾、益气活血方药对血管平滑肌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的:采用血清药理学方法研究滋补肝肾、益气活血方药对内皮素(ET)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及相关基因表达的影响。方法:采用3HTdR掺入实验检测VSMC增殖状态,应用Northern杂交、反转录聚合酶链反应(RTPCR)检测中药血清对VSMC诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因和ET诱导的cjun、增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达活性的影响。结果:中药血清可明显抑制ET对VSMC的促丝裂作用(P<005);抑制原癌基因cjun和PCNA基因表达,促进iNOS转录。结论:滋补肝肾、益气活血方药通过调节iNOS和细胞增殖相关基因的表达活性进而阻止VSMC增殖。     

丹参酮对大鼠血管平滑肌细胞增殖及pp-ERK1/2表达的影响

 目的　探讨丹参的脂溶性有效成分(总丹参酮)对血管平滑肌细胞增殖的影响及其可能的细胞内信号传导机制。方法　分离大鼠胸主动脉,贴壁法培养平滑肌细胞,无血清培养基培养静止后,以5%FBS刺激VSMC增殖,分别加入不同浓度的总丹参酮,以MTT及细胞总蛋白测定法观察药物对VSMC增殖的影响;用Westernblot方法检测pp-Erk1/2蛋白表达量。结果　丹参酮对VSMC增殖具有抑制作用,并具有浓度依赖性;2,10,50μg·mL^-1丹参酮可浓度依赖性抑制pp-Erk1/2表达,抑制率分别为(17.7±3.6)%,(26.2±4.1)%,(72. 7±3.8)%,与对照组相比P<0.05。结论　丹参的脂溶性有效成分丹参酮可能通过抑制ERK途径抑制血管平滑肌细胞增殖。     

丹参注射液对活性氧诱导的平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨丹参注射液对H2 O2 诱导的血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。方法　用H2 O2 刺激VSMC增殖 ,应用氚 -胸腺嘧啶核苷 (3H -TdR)掺入实验观察VSMC的DNA合成 ,同时测定培养液中脂质过氧化物 (LPO)的含量。结果　丹参注射液剂量依赖性地抑制H2 O2 诱导的VSMC的3H -TdR掺入量 ,降低LPO的含量。结论　丹参注射液对预防由活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖所引起的疾病可能具有重要作用。     

益气活血化瘀方药对血管胶原转换及相关基因表达的影响

目的：观察益气活血化瘀中药对大鼠血管细胞外基质(ECM)重塑的影响并探讨其分子机制。方法：采用^3H—TdR和^^3H—Pro掺入实验和血管壁羟脯氨酸含量测定检查血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性及胶原合成与降解程度;应用Northern印迹和Ⅳ型胶原酶(MMP-2)酶图分析检测MMP-2和骨桥蛋白表达的变化。结果：益气活血化瘀中药可显著抑制bFGF对VSMC的促胶原合成作用,降低血管内皮剥脱大鼠血管壁胶原转换速率,下调MMP-2和骨桥蛋白在体外培养的VSMC及血管壁中的表达水平,抑制VSMC增殖。中药血清去蛋白后对VSMC的影响不发生明显变化。结论：益气活血化瘀中药通过调节MMP-2和骨桥蛋白基因表达及降低胶原转换速率可抑制和(或)减缓ECM重塑。     

软脉冲剂对mox-LDL引起的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察软脉冲剂对mox-LDL诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:培养的血管平滑肌细胞分为对照组、mox-LDL组和用药组(mox-LDL+不同剂量软脉冲剂),应用MTT法和流式细胞仪分别测定细胞含量和细胞周期,用硫代巴比妥酸比色法测定细胞培养液中丙二醛(MDA)的水平。结果:软脉冲剂能明显降低细胞培养液中MDA的水平,MTT检测显示软脉冲剂具有浓度依赖性抑制VSMC的增殖的的作用,流式细胞仪检测表明,用药组(S+G2M)期降低。结论:软脉冲剂能抑制mox-LDL刺激的SMC的增殖,并具有抗脂质过氧化作用。     

葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 :研究葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并探讨其机制。方法 :分离培养人脐动脉平滑肌细胞 ,不同浓度葛根素、大豆苷元与细胞共孵育 ,使用MTT法检测细胞活性 ,同时用Rt PCR法检测Survivin ,Bcl xl,Bax ,GapdhmRNA的表达。结果 :葛根素与大豆苷元都可降低细胞增殖活性 ,升高Bax/Gapdh/Bcl xl/Gapdh的比值。与葛根素组相比 ,相同浓度的大豆苷元组细胞活性较低 ,Bax/Gapdh/Bcl xl/Gapdh比值较高。结论 :与葛根素相比 ,大豆苷元抑制血管平滑肌细胞增殖的作用更强。