Dualistic effects of tetrandrine on growth in human hepatoma 3b cells

目的 考察汉防已碱(tetrandrine,Tet)对肝癌Hep3b和Hep3b/5-Fu细胞生长的影响.方法 采用体外细胞培养,结合流式细胞术、MTT和Western blot方法研究Tet(0.33 ～ 1.0μg/ml)对肝癌Hep3b及Hep3b/5-Fu细胞生长的作用特点.结果 Tet在0.33～1.0 μg/ml时呈浓度依赖性降低Hep3b细胞存活率;0.5和1.0 μg/ml显著提高5-Fu对Hep3b细胞的IC50,但降低5-Fu对Hep3b/5-Fu细胞的IC50;0.33 μg/ml的Tet明显增加cDDP对Hep3b/5-Fu细胞的IC50,而0.5和1.0μg/ml显著降低cDDP对Hep3b/5-Fu细胞的IC50(P＜0.01).1.0 μg/ml的Tet作用48 h后使Hep3b细胞中的P-gp和MRP1表达明显上调(P＜0.05).Tet单用对Hep3b细胞生长有一定抑制作用,高浓度Tet逆转Hep3b/5-Fu细胞对5-Fu耐药和增强cDDP对Hep3b/5-Fu细胞生长的抑制作用,但低浓度分别促进Hep3b细胞和Hep3b/5-FU细胞对5-Fu和cDDP耐药.结论 Tet对Hep3b和Hep3b/5-Fu细胞生长呈浓度相关的双向作用,其促进耐药细胞发展的机制至少与提升P-gp和MRP1表达有关.     

汉防己碱对白血病K562细胞生长的促进耐药作用

目的考察汉防己碱(Tet)对白血病K562细胞生长的影响。方法采用体外细胞培养,即在37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养,培养液为含10%热灭活NBS的完全RPMI1640细胞培养基。待K562细胞与药物作用48 h后,收集并处理细胞,结合MTT和Western blot法研究Tet对K562细胞生长的作用特点。结果 Tet在0.33～1.00μg/ml仅使K562及K562/ADM细胞的存活率降低至75%～80%,低浓度Tet(0.33μg/ml)使阿霉素(ADM)和顺铂(cDDP)对K562细胞生长的IC50增加(P<0.01),1.0μg/ml Tet则降低IC50,使ADM对K562/ADM细胞的IC50增加,cDDP的IC50无明显变化。0.33μg/ml Tet有提升2种细胞的P-gp和MRP1表达的作用(P<0.05)。Tet各浓度对LRP表达无明显影响。结论 Tet对K562及K562/ADM细胞生长抑制作用具浓度依耐性,低浓度具加速耐药的作用,其促进耐药细胞发展的机制至少与提升P-gp和MRP1表达有关。     

程序性死亡配体1在索拉非尼耐药肝癌细胞中的表达和功能

目的 探究PD-L1在索拉非尼耐药肝癌细胞中表达及对其功能的影响。方法 采用浓度递增法构建索拉非尼耐药细胞Hep3B-SR和HepG2-SR,CCK-8法检测IC50并计算耐药系数,Western blot 和qPCR检测耐药基因（P-gp和MRP1）和PD-L1的表达变化。转染siRNA沉默耐药细胞PD-L1的表达并检测沉默效率。沉默PD-L1后,CCK-8法检测IC50并计算耐药系数,检测耐药基因的表达变化,细胞增殖实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Hep3B-SR和HepG2-SR的耐药指数分别为5.4和5.2。耐药细胞中P-gp、MRP1和PD-L1表达较亲本细胞明显上调（P均﹤0.01）。抑制PD-L1表达后,Hep3B-SR和HepG2-SR的耐药指数分别下降为1.8和1.5,P-gp和MRP1的表达明显下调（P均﹤0.01）,显著抑制耐药细胞的增殖、迁移、克隆形成和促进其凋亡（P均﹤0.01）。结论 PD-L1在索拉非尼耐药肝癌细胞中高表达。抑制PD-L1表达可部分逆转索拉非尼耐药肝癌细胞的耐药性使得索拉非尼的抗癌效果明显提高。抑制PD-L1表达后可有效抑制索拉非尼耐药肝癌细胞生长,合用索拉非尼其抗癌效果更强。     

苦参碱逆转人肝癌细胞株QGY/CDDP多药耐药性的实验研究

目的:探讨中药苦参碱(Mat)对QGY人肝癌细胞及其耐药细胞株QGY/CDDP的细胞生物学作用和可能的耐药逆转作用机制.方法:MIT法检测苦参碱对两细胞的半数抑制浓度(IC50值)并培养Mat作用的QGY/CDDP细胞.比较3组细胞在细胞生长曲线、倍增时间、细胞周期、化疗药物耐药及逆转和细胞内CDDP含量的差别.免疫细胞化学法测定3组细胞P-gP、MRP、Bax蛋白的表达.结果:苦参碱可抑制QGY及其耐药细胞株QGY/CDDP的生长,无交叉耐药性.Mat作用的QGY/CDDP细胞与QGY及其耐药细胞株QGY/CDDP在生物学特性方面表现出一定的差异,细胞的P-gp、MRP、Bax蛋白表达发生变化,降低QGY/CDDP细胞P-gp、MRP蛋白表达,增加了Bax蛋白的表达,增强CDDP对QGY/CDDP细胞的毒性,其逆转耐药倍数为1.9倍.结论:低毒剂量的苦参碱可增强CDDP对QGY/CDDP细胞的毒性,具有部分逆转人肝癌耐药细胞QGY/CDDP的耐药作用.     

奥沙利铂体外干预结直肠癌细胞株HT-29的耐药基因及相关蛋白的表达

目的:检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞株HT-29/L-OHP中多药耐药基因(multidrug resistance gene 1,MDR-1)、多药耐药相关蛋白的基因及他们编码的蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein,MRP)的表达,探讨其在L-OHP耐药中的作用。方法:利用MTT法检测L-OHP对原代细胞HT-29和耐药细胞HT-29/L-OHP的半数抑制率(IC50);利用RT-PCR及蛋白质印迹法检测HT-29/L-OHP中耐药基因及蛋白的表达情况。结果:L-OHP对HT-29和HT-29/L-OHP细胞的IC50分别为(4.15±0.17)μg.ml-1和(32.01±1.87)μg.ml-1,耐药指数为7.71;与原代细胞相比,HT29/L-OHP中耐药基因及蛋白表达均有所增加。结论:结直肠癌耐药细胞株中MDR-1、MRP基因及其编码的蛋白P-gp、MRP的表达高于原代细胞,这为预测CRC的多药耐药提供了新的依据。     

重组腺病毒介导MRP反义RNA逆转人肝癌细胞多药耐药表型的体外实验研究

目的探讨重组腺病毒介导的多药耐药相关蛋白（MRP）反义RNA对阿霉素诱导的人肝癌耐药细胞株SMMC-7721／ADM多药耐药表型的体外逆转作用。方法应用自行构建的携带反义MRP的重组腺病毒（Ad—Asmrp）,在体外转染人肝癌耐药细胞,测定转染后细胞对阿霉素（ADM）及柔红霉素（DNR）的半数致死量（IC50）并计算耐药倍数（RF值）;在转染后不同时间点用流式细胞仪动态测定细胞对DNR摄取的变化及细胞膜表面P。。表达、并用RT—PCR反映细胞MRP之mRNA水平的变化。结果携带MRP反义RNA的重组腺病毒转染后的人肝癌耐药细胞对ADM、DNR的IC50分别为0．487μg／ml、0．328μg／ml,RF值分别为97．4、109．3,RF值分别下降36．8和35．4。在转染后24h,MRPmRNA水平开始下降并呈持续下降趋势（P〈0．01）,48h后伴有P190蛋白表达的持续下降（P〈0．01）,二者趋势一致。转染后48h,经流式细胞仪测得细胞内DNR浓度明显上升（P〈0．01）。结论重组腺病毒介导的MRP反义RNA可有效封闭MRP基因表达,在体外实验中能增加人肝癌耐药细胞株对化疗药物的敏感性,对肝癌耐药细胞的MDR表型有较好的逆转作用。     

人宫颈癌顺铂耐药细胞系SiHa/cDDP的建立

目的建立人宫颈癌SiHa细胞对顺铂(cDDP)的耐药细胞系并分析其生物学特性。方法用化疗药物cDDP与人宫颈癌细胞系SiHa共培养,逐步增加培养液中cDDP浓度以诱导细胞产生耐药性,建立SiHa细胞对cDDP的耐药细胞系。利用MTT法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间并检测肿瘤细胞耐药指数(RI)。免疫细胞化学法检测细胞P-糖蛋白(P-gp)、胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)蛋白的表达。结果成功建立耐药细胞系SiHa/cDDP(耐cDDP 2μg/mL),倍增时间(45.82±3.69)h,对cDDP的RI为16.131,对多种化疗药物有不同程度交叉耐药。耐药细胞P-gp、GST-π表达较亲代细胞增多(P<0.01),TopoⅡ表达与亲代细胞间差异无统计学意义。结论本研究建立了人宫颈癌顺铂耐药细胞系SiHa/cDDP,为肿瘤细胞体外研究提供了理想的实验模型。     

含硅5-Fu衍生物抗瘤作用实验研究

本文用含硅的5-Fu衍生物IV进行了体外及体内抗癌试验，结果表明：化合物IV对Hela细胞、S-180内瘤腹水细胞均有明显的体外细胞毒作用，半数抑制浓度IC50分别为40.3μg/ml、36.8μg/ml.在体内抑瘤试验中，IV对S-180、L2、Hep等瘤株用25μg/kg及50μg/kg/d两个剂量组重复三次都有明显疗效，抑瘤率为S-180 46.6%-72.3%,L2 38.7%-61.5%,Hep 23.4%-48.9%,对EAC疗效显著，在剂量为50μg/kg/d时，小鼠生命延长率为167.4%,以上实验均有显著性差异。     

棘霉素对耐伊马替尼K562细胞SPK及P-gp表达的影响

目的研究棘霉素对耐伊马替尼K562细胞SPK及P-gp表达的影响。方法 MTT法检测细胞存活率,同位素掺入检测SPK的活性,流式细胞术检测细胞的P-gp表达。结果棘霉素对K562和耐伊马替尼细胞的IC50分别为0.82μg/L和0.87μg/L;棘霉素对耐药细胞中的SPK和P-gp活性有抑制作用;通过抑制SPK的活性可以下调P-gp的表达。结论棘霉素对敏感及耐药K562细胞均有较强的抑制作用,抑制K562/Ima存活的机制可能与影响细胞中SPK的表达,并通过下调SPK进一步影响P-gp的表达,从而增加药物在细胞内的累积浓度有关。     

卡铂诱导喉癌细胞凋亡的体外研究

目的 探讨卡铂对喉癌Hep—2细胞生长的影响及作用机制。方法 本研究采用四甲基偶氮唑盐比色分析法(MTT法)测定卡铂对喉癌细胞的抑制作用；透射电镜观察形态学变化；应用流式细胞仪研究不同浓度、不同时间细胞凋亡的发生和对细胞周期的影响。结果 卡铂明显抑制Hep—2细胞的生长，且存在时间—剂量依赖性。50％抑制浓度(IC50值)24h为201．2μg／ml，48h为90．5μg／ml。流式细胞技术证实，卡铂能非特异性地阻滞Hep—2细胞周期的全过程。结论 卡铂能够抑制喉癌细胞生长，其抑制作用是通过诱导喉癌细胞凋亡而起作用的。