首次从家燕分离到1株乙型脑炎病毒

首次从家燕分离到１株乙型脑炎病毒刘行知，袁庆虹，李兆祥，白登云，张海林（云南省流行病防治研究所，大理市６７１０００）李炎，杨灿辉，李连英，李廷芬，石学雷（云南省宾川县卫生防疫站）关键词乙型脑炎，病毒．，家燕，云南省１９９１年７～１０月云南省宾川县发生...     

内蒙古大兴安岭林区森林脑炎自然疫源地调查报告

１９９２－１９９３年，我们对内蒙古大兴安岭林区进行森林脑炎自然疫源地调查。选择南，北，中三个方位，共捕蜱９８２只，分离到３株森林脑炎病毒（编号９３０２，９３０５，９３０８）。并从可疑森脑死亡者脑组织中分离到１株森林脑炎病毒（９３Ｈ）。从而证实内蒙古大兴安岭为森林脑炎自然疫源地。     

新疆阿勒泰山地蜱传脑炎疫源地调查北大核心CSCD

目的调查新疆阿勒泰山地蜱传脑炎疫源地特征,分离鉴定蜱传脑炎病毒。方法通过家畜体表捡法采集寄生蜱;利用间接免疫荧光法检测当地健康人群血清中蜱传脑炎病毒IgG抗体;通过将蜱研磨液接种实验小鼠进行病原动物分离;通过接种BHK-21细胞对蜱传脑炎病毒进行分离培养;利用RT-PCR方法对病毒E蛋白基因片段进行扩增和测序,通过序列分析明确病毒系统进化特征。结果新疆阿勒泰山地白哈巴地区分布有2种蜱,森林革蜱为优势种(55.6%),其次为边缘革蜱(44.4%);当地人群蜱传脑炎IgG抗体阳性率5.31%(6/113);通过动物试验和细胞分离培养,从森林革蜱中分离出一株森林脑炎病毒;对病毒E蛋白基因序列的系统进化分析表明,蜱传脑炎病毒阿勒泰分离株属于远东亚型。结论首次从病原学上证实新疆阿勒泰山地存在蜱传脑炎疫源地,媒介为森林革蜱,病毒流行株为远东亚型。     

新疆阿勒泰山地蜱传脑炎疫源地调查

目的 调查新疆阿勒泰山地蜱传脑炎疫源地特征,分离鉴定蜱传脑炎病毒。方法 通过家畜体表捡法采集寄生蜱;利用间接免疫荧光法检测当地健康人群血清中蜱传脑炎病毒IgG抗体;通过将蜱研磨液接种实验小鼠进行病原动物分离;通过接种BHK-21细胞对蜱传脑炎病毒进行分离培养;利用RT-PCR方法对病毒E蛋白基因片段进行扩增和测序,通过序列分析明确病毒系统进化特征。结果 新疆阿勒泰山地白哈巴地区分布有2种蜱,森林革蜱为优势种(55.6%),其次为边缘革蜱(44.4%);当地人群蜱传脑炎IgG抗体阳性率5.31%(6/113);通过动物试验和细胞分离培养,从森林革蜱中分离出一株森林脑炎病毒;对病毒E蛋白基因序列的系统进化分析表明,蜱传脑炎病毒阿勒泰分离株属于远东亚型。结论 首次从病原学上证实新疆阿勒泰山地存在蜱传脑炎疫源地,媒介为森林革蜱,病毒流行株为远东亚型。     

白纹伊蚊经实验感染后涎腺中基孔肯雅病毒和乙型脑炎病毒抗原检测

用基孔肯雅和乙型脑炎病毒经口感染白纹伊蚊，采用免疫荧光试验对雌蚊涎腺作病毒抗原检查，结果于感染后第８￣１４天基孔肯雅的阳性为５０％￣９１．６７％，乙型脑炎为７０％￣８０％。试验认为，白纹伊蚊在感染后第６￣８天即可传播基孔肯雅和乙型脑炎病毒。     

从云南省宾川县蝙蝠体内分离到乙型脑炎病毒

１９９１年９月，从捕自云南省宾川县的１３２只双色帝蝙蝠和棕果蝙蝠体内分离到４株病毒。经电镜观察、血凝抑制试验和单克隆抗体免疫荧光试验证实为乙型脑炎病毒。结果表明蝙蝠在乙型脑炎病毒保存和传播中起重要作用。     

小儿病毒性脑炎的病原学研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术和病毒分离为主的方法对５０例病毒性脑炎患儿的脑脊液（ＣＳＦ）进行了病原检测，结果显示，单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）为重症脑炎的主要病原；柯萨奇病毒（ＣＯＸ）为夏秋季脑炎的主要病原，有时可造成流行。认为ＰＣＲ技术用于脑炎病毒诊断简便、快速，敏感性及特异性均高；病毒分离特异性强，为病毒诊断的一种重要方法。     

云南森林脑炎病毒生物学性状研究

1989年从云南省怒江州捕获的两组卵形硬蜱和一高热患者血中分离到3株病毒,对乳小白鼠和鸡胚敏感,并能在多种组织培养细胞上增殖产生病变。能凝集多种动物红细胞,血凝最适pH为6.2和6.6。电镜观察病毒呈球形,有包膜,直径40～62nm.不耐酸,不耐乙醚,属RNA病毒。保护力试验表明森林脑炎病毒免疫血清对新分离株有保护作用,经交叉血抑试验、交叉中和试验鉴定属披膜病毒科黄病毒属蜱媒脑炎亚组中的森林脑炎病毒。     

云南省通海县蚊虫2株乙型脑炎病毒的分离鉴定北大核心CSCD

目的了解云南省通海县蚊虫携带的乙型脑炎病毒(JEV)情况、分子特征及基因分型。方法2015年7月在云南省玉溪市通海县采用诱蚊灯在调查点通宵捕捉蚊虫,蚊虫研磨后分别接种BHK-21和C6/36细胞进行病毒分离,使用黄病毒属特异引物进行初步鉴定,使用乙型脑炎病毒E基因特异引物进行RT-PCR扩增及测序,使用Megalign、Genedoc、Mega7等软件进行序列分析。结果共捕获三带喙库蚊、中华按蚊、致倦库蚊和骚扰阿蚊2300只,其中三带喙库蚊为优势蚊种(78%)。分46批进行病毒分离,获得2株阳性分离物,接种BHK-21细胞96h,引起细胞病变。使用黄病毒属特异引物和乙型脑炎病毒E基因特异引物扩增均为阳性。序列分析结果显示,2株新分离乙型脑炎病毒与疫苗株SA14-14-2在E基因存在12个氨基酸差异位点,在8个与乙脑病毒毒力相关的位点上存在6个差异位点。E基因遗传进化分析显示,2株新分离病毒与基因Ⅰ型乙型脑炎病毒位于同一进化分支,核苷酸和氨基酸同源性分别为91.8%~99.1%和98.0%~100%。遗传进化分析显示,其与云南2016年蚊虫中分离的乙脑病毒株JEV/mosq/YN/2016亲缘关系较近,核苷酸和氨基酸同源性分别为99.1%和99.8%。结论云南省通海县分离的2株病毒鉴定为基因Ⅰ型乙型脑炎病毒,其与云南省近年来流行的毒株遗传进化关系较近。2毒株的E基因上与毒力相关的关键位点中有2个位点发生突变,结构域Ⅲ的关键抗原未发生改变,因此SA14-14-2减毒疫苗株仍可用于该地区人群的免疫接种,以预防乙型脑炎的发生和流行。     

云南省洱源县流行性乙型脑炎暴发流行的病原分离与鉴定

１９９１年７￣１０月,云南省洱源县发生流行性乙型脑炎暴发流行,采用滤过性试验,免疫荧光试验,交互ＨＩ试验,交互ＣＦ试验和中和试验方法,对从该县流行期采集的病人血清分离的２株病毒和从三带喙库蚁分离到的２株病毒进行鉴定,证实４株病毒均为流行性乙型脑炎病毒,从病原学证实为流行性乙型脑炎暴发流行,同时还查明了三带喙库蚊是本次乙型脑炎流行的主要传播媒介。     

云南省德宏州蚊虫分布特点及乙型脑炎病毒分离

１９８３年５月以及１９８４年和１９８９年７￣８月，在云南省德宠州路西，瑞丽和盈江三县，市捕获成年雌性蚊虫９属４４种１９０８３只。三带喙库蚊，霜背库蚊，棕头库蚊和中华按蚊是农村畜圈的主要蚊种。伪白纹伊蚊和白纹伊蚊是野外竹林区的优势蚊种。对所获蚊虫用Ｃ６／３６细胞和乳鼠方法分离病毒，结果从三带喙库蚊中分离到乙型脑炎病毒２株，从霜背库蚊，白纹伊蚊和窄翅伊蚊中各分离出１株乙型脑炎病毒。分析认为，三带喙库蚊     

固定床生物反应器生产高滴度乙型脑炎病毒的研究

目的 研究用固定床生物反应器生产乙型脑炎病毒的工艺。方法 在生物反应器中培养Vero细胞,接种并培养乙型脑炎病毒。结果 用工作体积3．5L的生物反应器生产出病毒滴度〉8．01gLD50／ml的乙型脑炎病毒80L。结论 用固定床生物反应器可以生产出高滴度的乙型脑炎病毒,为进一步生产高质量的乙型脑炎疫苗打下良好基础。     

西尼罗病毒诊断的研究进展

西尼罗病毒（WestNileVirus，WNV）首次于1937年12月在乌干达西尼罗地区的一名发热成年女性血液标本分离到，属黄病毒科（Flavivirdae）黄病毒属（Flavivirus）的乙型脑炎病毒血清群。可导致人类西尼罗热（westNileFever）或西尼罗脑炎（WestNileEncephalitis）。发病者常常出现发烧、头痛、皮疹、淋巴结肿大等症状，严重时表现为无菌性脑膜炎，甚至死亡。该病毒在自然界的传播循环     

新疆中哈边境地区分离到远东型和西伯利亚型蜱传脑炎病毒

目的研究新疆中哈边境阿拉套山夏尔西里自然保护区蜱传脑炎疫源地病原的基因型及生物学特征。方法采用布旗法采集蜱,活蜱保存或液氮冻存;采用BALB/c小鼠与BHK-21细胞进行蜱传脑炎病毒分离培养;采用RT-PCR扩增蜱传脑炎病毒远东型FE和西伯利亚型S特异基因片段并测定其序列。结果从新疆中哈边境阿拉套山夏尔西里自然保护区全沟硬蜱和森林革蜱中分离出16株蜱传脑炎病毒株,通过对扩增基因序列比对分析,明确其中13株为远东型,3株为西伯利亚型。结论从新疆中哈边境阿拉套山夏尔西里自然保护区分离到远东型和西伯利亚型蜱传脑炎病毒,该地区为两种亚型病毒共存的蜱传脑炎自然疫源地。     

从云南蝙蝠及牛蜱中分离出两株森林脑炎病毒

1990年7月从捕自云南省临沦地区的微小牛蜱及大马蟑蝠脑组织中分离出两株病毒。对其进行了理化特性、电子显微镜、交叉血凝抑制、间接免疫荧光、交叉中和等试验的检测鉴定,结果表明这两株病毒为蜱媒森林脑炎病毒。对我省森林脑炎流行病学的研究具有重要参考价值。     

实时RT-PCR法检测感染小鼠不同组织标本中的委内瑞拉马脑炎病毒

目的为委内瑞拉马脑炎病毒所致疾病的早期诊断和流行病学研究提供技术支持。方法建立了委内瑞拉马脑炎病毒特异、敏感和快速的实时RT-PCR法,并对委内瑞拉马脑炎病毒感染昆明小鼠的不同组织标本中的病毒载量进行了定量检测。结果本研究建立的实时RT-PCR法敏感(10TCID50/ml)、特异(对其它甲病毒成员,如东部马脑炎病毒和西部马脑炎病毒检测为阴性)。该方法可从委内瑞拉马脑炎病毒感染小鼠后第1d的血液、脾脏、脑组织中检测到不同含量的病毒核酸,而在感染后第3d仅从脾脏和脑组织中检测到病毒核酸。结论实时RT-PCR法不仅是一种敏感、准确的检测方法,可用来了解病毒感染量与疾病严重程度的关系和评价病毒病疫苗的免疫效果,而且也为VEEV疾病的临床诊断和流行病学监测提供工具。     

基因Ⅲ型乙型脑炎病毒Real-time PCR检测方法的建立及应用

目的建立针对云南地区流行的基因Ⅲ型乙型脑炎病毒株Real-time PCR检测方法。方法根据云南地区分离株乙型脑炎病毒株(Yunnan0901)基因组核苷酸序列设计特异性引物,构建pMD18-T-JEV-E质粒,以此为模板进行SYBR GreenⅠReal-time PCR扩增并制作标准曲线,摸索最佳反应体系条件,建立乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测方法,并与普通RT-PCR方法相比较。结果建立的SYBR GreenⅠReal-time PCR标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系。与RT-PCR方法相比,SYBR GreenⅠReal-time PCR的灵敏度高10倍,而且不与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、基孔肯雅病毒、辛德毕斯病毒核酸发生非特异性扩增,具有良好的特异性。用该方法检测云南部分地区的蚊虫样品,其中库蚊、按蚊乙型脑炎病毒阳性率分别为17.4%和30.7%,且主要为基因型Ⅲ型。结论本实验建立的检测基因Ⅲ型乙型脑炎病毒的SYBR GreenⅠReal-time PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等特点,可应用于乙型脑炎疫情的监测。     

基因Ⅲ型乙型脑炎病毒Real-time PCR检测方法的建立及应用北大核心CSCD

目的建立针对云南地区流行的基因Ⅲ型乙型脑炎病毒株Real-time PCR检测方法。方法根据云南地区分离株乙型脑炎病毒株(Yunnan0901)基因组核苷酸序列设计特异性引物,构建pMD18-T-JEV-E质粒,以此为模板进行SYBR GreenⅠReal-time PCR扩增并制作标准曲线,摸索最佳反应体系条件,建立乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测方法,并与普通RT-PCR方法相比较。结果建立的SYBR GreenⅠReal-time PCR标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系。与RT-PCR方法相比,SYBR GreenⅠReal-time PCR的灵敏度高10倍,而且不与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、基孔肯雅病毒、辛德毕斯病毒核酸发生非特异性扩增,具有良好的特异性。用该方法检测云南部分地区的蚊虫样品,其中库蚊、按蚊乙型脑炎病毒阳性率分别为17.4%和30.7%,且主要为基因型Ⅲ型。结论本实验建立的检测基因Ⅲ型乙型脑炎病毒的SYBR GreenⅠReal-time PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等特点,可应用于乙型脑炎疫情的监测。     

我国乙型脑炎病毒优势基因型转换及其风险和对策

乙型脑炎是由乙型脑炎病毒引起的人畜共患病,在自然界中主要是通过蚊虫叮咬进行传播,能够引起人的中枢神经系统损伤和猪的繁殖障碍等疾病,对公共卫生安全造成了严重威胁。 由于乙型脑炎病毒在水禽宿主中的适应性差异,导致了病毒优势基因型由 GⅢ型逐渐向 GⅠ型转变。 乙型脑炎病毒优势基因型的转换和流行范围的扩大给疾病防控带来了新挑战,本文对我国乙型脑炎病毒优势基因型转换及其风险和对策进行了综述。