p16及p15基因在子宫颈癌中的纯合性缺失及其临床意义

目的 :探讨抑癌基因p16、p15基因的纯合性缺失在子宫颈癌的发生发展中的作用。方法 :应用比较PCR技术检测 34例子宫颈癌组织和 2 0例正常宫颈组织中p16、p15基因的纯合性缺失。结果 :p16、p15基因的纯合性缺失率分别为 11 8%、14 7% ,p16、p15基因的纯合性缺失与组织学类型、临床分期及组织学分级无关。结论 :p16、p15基因的纯合性缺失在子宫颈癌的发生发展中可能起到一定的作用     

子宫基癌的p16,p15基因缺失研究

目的 探讨ｐ１６、ｐ１５基因的原纯合性缺失与子宫颈癌发生及发展的相关性。方法 本文采用ＰＣＲ技术对５７例治疗前子宫颈癌组织的ｐ１６、ｐ１５基因的纯合性缺失进行检测。结果 ｐ１６的纯合性缺失率为１５．７％（９／５７），Ⅰ～Ⅲ期宫颈癌的不同病理类型均有ｐ１６基因的缺失，但没有显著性差异。ｐ１５基因未发现缺失。结论 ｐ１６基因的纯合性缺失与子宫颈癌的发生有关，未发现缺失ｐ１５基因。     

子宫内膜癌中p16基因缺失及CpG岛甲基化的研究

目的　研究子宫内膜癌中 p16基因缺失及CpG岛甲基化情况。 方法　用PCR技术检测 p16基因在子宫内膜癌中的纯合性缺失及第一外显子异常甲基化。结果　 36例癌组织中 9例发生基因缺失 ,12例发生甲基化 ,未发现基因缺失与甲基化同时存在的病例。结论　 1.p16基因缺失与子宫内膜癌组织学分级严重程度和临床分期呈正相关 ;2 .5’CpG甲基化可能是 p16基因失活的重要机理 ,参与子宫内膜癌发生、发展。     

胰腺癌组织中p16基因缺失及其对p16蛋白表达的影响

目的 探讨胰腺癌组织中p16基因缺失状态及其对p16蛋白表达的影响。方法 采用聚合酶链反应技术分别检测经显微切割方法获取的p16蛋白免疫组化染色阳性和阴性的胰腺癌组织中p16基因纯合性缺失状态并将结果与p16蛋白表达之间的关系进行分析。结果 32例胰腺癌中分别有20例（62．5％）和21例（65．6％）表现为p16蛋白表达丢失和p16基因纯合性缺失,其中有5例发生于p16基因的第1外显子,12例缺失发生于第2外显子,1例发生于第3外显子,另有3例同时发生于第1和第2外显子。此外还发现无p16蛋白表达的胰腺癌组织发生p16基因纯合性缺失的比例（18／20,90．0％）高于有p16蛋白表达的胰腺癌（3／12,25．0％）;在无p16蛋白表达并伴有p16基因缺失的7例胰腺癌病人中仅有1例生存期超过5mo,而二者均无异常的3例胰腺癌的生存期均超过8mo。结论 胰腺癌组织中的p16基因纯合性缺失可以影响p16蛋白的表达,促使胰腺癌病人的预后更差。     

p16及p15基因在子宫颈癌中的纯合性缺失及其临床意义

目的：探讨抑癌基因ｐ１６、ｐ１５基因的纯合性缺失在子宫颈癌的发生发展中的作用。方法：应用比较ＰＣＲ技术检测３４例子宫颈癌组织和２０例正常宫颈组织中ｐ１６、ｐ１５基因的纯合性缺失。结果：ｐ１６、ｐ１５基因的纯合性缺失率分别为１１．８％、１４．７％，ｐ１６、ｐ１５基因的纯合性缺失与组织学类型、临床分期及组织学分级无关。结论：ｐ１６、ｐ１５基因的纯合性缺失在子宫颈癌的发生发展中可能起到一定的作用。     

不对称PCR-SSCP检测鼻咽癌p130基因研究

目的:探讨p130基因改变与鼻咽癌发生、发展的关系。方法:提取鼻咽癌组织DNA,用不对称单链构象多态性(SSCP)PCR技术,分别对20例散发性鼻咽癌患者及3个鼻咽癌高发家系进行性p130基因第11、17和19外显子纯合性缺失及突变研究,以20例慢性鼻咽炎患者的鼻咽部组织做为对照。结果:散发性鼻咽癌患者有相同的p130 E11、E17纯合性缺失2例,未发现p130E19缺失;对照组中检出1例p130E11、E17纯合性缺失,也无p130E19缺失;鼻咽癌家系未发现缺失和突变。结论:鼻咽癌中p130 E11、E17纯合性缺失可能涉及到p130/Rb2基因的改变,在鼻咽癌的发生发展中起一定的作用,而且p130/Rb2基因作为一种抑癌基因可能成为鼻咽癌新的基因治疗手段的候选基因。     

脑胶质瘤 p16基因的纯合性缺失、高甲基化、突变及表达

目的：研究p16基因在脑胶质瘤中的纯合性缺失、高甲基化和突变等结构变化及其与表达之间的关系。方法：应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)和PCR甲基化银染分析技术（PCR-methylation assay with silver staining,PCR-MASS)对50例脑胶质瘤标本进行了p16基因纯合性缺失和甲基化检测；用PCR－SSCP和DNA测序技术进行了p16基因突变分析，用免疫组化检测了p16蛋白的表达。结果：50例脑胶质瘤中23例p16蛋白表达阳性，27例表达阴性，表达缺失率54％；9例（18％）纯合性缺失、7例（14％）高甲基化、2例（4％）突变。结论：p16基因在脑胶质瘤中有多种形式的结构异常，其结构的变化使p16蛋白表达障碍。p16基因纯合性缺失和高甲基化是基因失活的重要机制，在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用。     

原发性胃癌p16INK4a基因缺失和突变的研究

目的探讨p16INK4a基因缺失和突变在胃癌发病机制中所起的作用。方法采用多重PCR、PCR-SSCP和DNA测序对62例胃癌、癌旁组织及10例正常胃黏膜标本中p16INK4a基因纯合性缺失和突变进行检测。结果62例胃癌中发现p16INK4a基因第一外显子和第三外显子各有2例纯合性缺失,缺失率6.5%(4/62),PCR-SS-CP和DNA测序发现1例p16INK4a基因第一内含子区碱基插入,突变率1.6%(1/62),癌旁和正常胃黏膜均未发现缺失和突变。结论在原发性胃癌中,p16INK4a基因纯合性缺失率很低、突变罕见。     

子宫内膜癌中p16基因状态对端粒酶活性的影响

目的探讨子宫内膜癌中p16基因状态对端粒酶活性的影响。方法用PCR技术检测癌组织中p16基因的纯合性缺失及第一外显子异常甲基化,用原位杂交法检测端粒酶的表达。结果36例癌组织中,9例发生p16基因缺失,12例发生甲基化,未发现基因缺失与甲基化同时存在的病例;29例内膜癌端粒酶表达阳性,阳性率为80.56%。9例基因缺失标本中均有端粒酶的阳性表达,p16甲基化与否对端粒酶的表达影响无差异,但端粒酶阳性率在p16基因失活组明显高于p16基因未失活组。结论p16基因失活可以导致激活端粒酶端粒,p16基因失活的不同状态端粒酶激活的影响存在差异。     

中国人脑瘤中p16、p15基因缺失分析

目的　为了解 p16、p15基因与中国人脑肿瘤遗传易感性的关系。 方法　应用PCR、银染PCR SSCP及免疫组化法对 88例脑肿瘤及相应手术切除正常组织DNA标本 p16、p15基因进行研究。 结果　结果显示在不同病理分级脑胶质瘤中p16、p15基因缺失率分别为Ⅰ -Ⅱ级 4%、0 % ,Ⅲ级 3 2 %、2 8% ,Ⅳ级 3 6 %、2 7% ,p16、p15基因缺失主要见于Ⅲ -Ⅳ级肿瘤中 ;脑转移瘤中也检出缺失该基因 ( 2 /3 ) ,而原发性非胶质细胞瘤 (脑膜瘤、垂体瘤、听神经瘤等 )中未见p16、p15基因缺失 ,各类肿瘤标本PCR SSCP分析均未见 p16、p15基因点突变。 结论　表明国人脑瘤中p16、p15基因异常以缺失为主 ,p16、p15基因缺失在脑胶质瘤中发生频率较高 ,促进肿瘤细胞由良性向恶性演进 ,而对良性非胶质细胞瘤的发病没有作用。     

子宫内膜癌p16／MTS1基因失活的研究

目的:探讨p16/MTS1基因在子官内膜癌组织的表达及意义.方法:采用显微切割-聚合酶链反应方法,对29例子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中p16/MTS1基因纯合缺失进行检测.并用Fisher精确检验的方法,对p16/MTS1基因纯合缺失与临床病理关系进行统计分析.结果:29例子宫内膜癌组织,p16/MTS1基因纯合缺失率为24.14%.Ⅰ期纯合缺失率为24.00%,Ⅱ期纯合缺失率为33.33%.结论:p16/MTS1基因纯合缺失与子宫内膜癌的发生有关.     

乳腺癌MTS1/p16基因缺失及表达异常的初步研究

采用ＰＣＲ和免疫组化等方法对５１例乳腺肿瘤ＭＴＳ１／ｐ１６基因的缺失及表达异常情况进行了分析，结果显示，ＭＴＳ１／ｐ１６基因在乳腺癌中的阴性表达率为３２．６％（１５／４６），而其中６０％（９／１５）因纯合性缺失而无转录和表达产物，占总检测病例的１９．５％（９／４６）。ＭＴＳ１／ｐ１６基因缺失的病例多为淋巴结转移阳性，组织浸润程度高和分化程度低，提示ＭＴＳ１／ｐ１６基因的纯合性缺失与乳腺癌的发生发展及恶性程度密切相关。另外，在ｐ１６蛋白阴性表达的病例中除了基因的纯合性缺失造成的蛋白失表达外，还有４０％（６／１５）的病例有ＭＴＳ１／ｐ１６基因的扩增但没有表达产物，则可能是ＤＮＡ的异常甲基化，基因位移，点突变等其它基因变异作用的结果，进一步的研究正在进行中     

外源性p16基因表达可抑制人胃癌细胞的恶性增殖

目的探讨ｍｔｓｌ／ｐ１６基因在肿瘤发生发展过程中的作用及在临床基因诊断和基因治疗中的应用前景。方法构建ｍｔｓｌ／ｐ１６基因的表达载体并导入表达水平下调的ＰＡＭＣ８２细胞,用ＰＣＲ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、ｍＲＮＡ原位杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交对获得Ｇ４１８抗性的细胞进行外源性ｍｔｓｌ／ｐ１６基因整合及表达的鉴定。对导入外源性ｐ１６基因的细胞进行裸鼠致瘤能力及病理学特性分析。结果转染ｐ１６基因的ＰＡＭＣ８２细胞（命名为ＰＡＭＣｐ１６）有外源性ｍｔｓｌ／ｐ１６基因的整合及表达,在裸鼠中的致瘤性显著降低。肿瘤组织病理分析结果显示,ＰＡＭＣｐ１６细胞形成的肿瘤,其分化程度优于ＰＡＭＣ８２细胞。结论导入外源性ｍｔｓｌ／ｐ１６基因可抑制肿瘤细胞的恶性增殖和促进细胞分化。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

 目的 比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法 采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选，免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达，通过细胞生长曲线检测细胞活力，流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析，采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果 转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达；与对照细胞相比，实验组细胞生长受到明显的抑制，G1期细胞数增加，S期细胞减少。与p16INK4a相比，抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加，显示出更强的致凋亡现象，尤其在HL60细胞株。结论 抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长，可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

目的比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选,免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达,通过细胞生长曲线检测细胞活力,流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析,采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达;与对照细胞相比,实验组细胞生长受到明显的抑制,G1期细胞数增加,S期细胞减少。与p16INK4a相比,抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加,显示出更强的致凋亡现象,尤其在HL60细胞株。结论抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长,可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

子宫内膜癌p16/MTS1基因失活的研究

目的　探讨 p16 /MTS1基因在子宫内膜癌组织的表达及意义。 方法　采用显微切割 聚合酶链反应方法 ,对 2 9例子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中 p16 /MTS1基因纯合缺失进行检测。并用Fisher精确检验的方法 ,对p16 /MTS1基因纯合缺失与临床病理关系进行统计分析。结果　 2 9例子宫内膜癌组织 ,p16 /MTS1基因纯合缺失率为 2 4.14 %。Ⅰ期纯合缺失率为 2 4.0 0 % ,Ⅱ期纯合缺失率为 3 3 .3 3 %。结论　p16 /MTS1基因纯合缺失与子宫内膜癌的发生有关。     

Genistein抑制乳腺癌细胞生长的机制

目的 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ抑制乳腺癌细胞生长的机制。方法 研究主要应用于Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交,质粒转染技术以及细胞凋亡检测法,探讨Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ抑制乳腺癌细胞生长的机制。结果 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可明显抑制不同ＥＲ状态和不同ｐ５３状态的乳腺癌细胞系的生长,同时显著诱导ｐ５３下游基因ｐ２１＾ＷＡＦ／ＣＩＰＩ蛋白和ｍＲＮＡ的表达,而导致ｐ２１＾ＷＡＦＩ／ＣＩＰＩ的表达增强主     

小细胞肺癌组织中p53基因改变的研究

为探讨小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）发生的分子机制，应用免疫组化和聚合酶链反应—单链构象多态性分析的方法，对１４例ＳＣＬＣ组织进行ｐ５３基因突变研究。结果显示，有９例出现ｐ５３蛋白阳性，阳性率为６４．３％（９／１４）。ｐ５３基因第５，６，７，８外显子突变率分别为２１．４％（３／１４），１４．３％（２／１４），１４．３％（２／１４），７．１％（１／１４），总突变率为５７．１％（８／１４）。结果表明，ＳＣＬＣ组织中存在较高的ｐ５３基因突变率，故ｐ５３基因可能是人类肺癌发生的关键基因。     

逆转录病毒介导p53基因对食管癌细胞株的生长抑制作用

目的观察人类野生型p53(wt p53)基因对人食管癌细胞系的抑制作用.方法用逆转录病毒为载体将外源性wt p53基因导入人食管癌细胞系ECA109,通过体外及小鼠体内实验研究转入基因的表达及对肿瘤的抑制作用.结果 p53在转染细胞ECA109/p53中表达水平提高.外源性wt p53基因的导入和表达能使ECA109细胞的生长速率减低,软琼脂集落形成能力下降,G0 G1期细胞比例增加、S期细胞比例降低,凋亡指数升高,裸鼠体内成瘤能力明显下降.结论逆转录病毒载体介导的外源性野生型p53能够抑制人食管癌细胞生长.