刚地弓形虫培养上清对THP-1增殖的影响及可能机制

 利用弓形虫速殖子细胞内寄生的特性和对宿主细胞生物学行为的影响,提取弓形虫体外细胞共培养上清,并研究上清对人急性单核细胞白血病细胞THP-1增殖及细胞周期的影响。方法 取对数生长期的THP-1细胞（浓度为5×105）分别接种于不同细胞培养瓶,对照组加入含10%胎牛血清RPMI-1640,试验组加入相同体积不同数量(2×107mL-1、 4×107mL-1、 8×107 mL-1 )弓形虫速殖子培养上清孵育不同时间后, MTT法检测THP-1细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞周期改变;以Western印迹方法分析上清作用48h后细胞核转录因子NF-κB/p65与周期蛋白cyclinD1表达或活性的变化。结果 MTT法检测结果显示弓形虫培养上清抑制THP-1细胞株增殖,且呈时间剂量依赖性。流式细胞仪检测显示处理组细胞周期在G0/G1期产生阻滞; Western印迹方法分析THP-1细胞株的NF-κB/p65、cyclin D1 蛋白表达量下降,结论 刚地弓形虫培养上清能够抑制人急性单核细胞白血病细胞THP-1细胞株增殖并可通过细胞株的NF-κB信号途径来下调cyclin D1蛋白表达引起人急性单核细胞白血病细胞THP-1细胞株G0/G1期阻滞。     

刚地弓形虫培养上清抑制肺癌A549细胞系增殖

目的研究刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)培养上清对体外培养的肺癌细胞A549增殖及细胞周期的影响。方法取对数生长期的A549细胞(浓度为5×104mL-1)分别接种于不同细胞培养板,对照组加入RPMI-1640孵育,试验组加入相同体积不同数量(4×107mL-1、8×107mL-1、16×107mL-1)弓形虫速殖子培养上清孵育不同时间后,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A490值);PI染色后检测细胞周期;以Western blot检测细胞周期蛋白cyclinB1、cdc2表达或活性。结果弓形虫培养上清呈时间剂量依赖性抑制A549细胞系增殖,处理组细胞周期在G2/M期产生阻滞;A549细胞系的cyclinB1、cdc2蛋白表达量下降。结论刚地弓形虫培养上清能够抑制肺癌A549细胞系增殖,并通过调节cyclinB1、cdc2等蛋白表达或活性改变引起肺癌A549细胞系G2/M期阻滞。     

IL-32γ对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖与细胞周期的影响

目的:研究IL-32γ对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖与细胞周期的影响及机制。方法:体外培养活动性类风湿关节炎和骨关节炎(OA)患者成纤维样滑膜细胞并以IL-32γ处理,应用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Western印迹方法检测cyclinD1及NF-κBp65蛋白含量;免疫细胞化学染色法检测PCNA表达的变化。结果:IL-32γ对OA-FLS增殖没有影响;不同浓度的IL-32γ(10～100 ng/ml)在72～120小时范围内,浓度和时间依赖性促进RA-FLS增殖;100 ng/ml的IL-32γ作用RA-FLS 48小时后促进了细胞周期由G1期向S期,进而G2/M期转化,同时上调了cyclin D1、NF-κBp65和PCNA的蛋白表达水平。结论:IL-32γ可促进RA-FLS增殖和加速细胞周期转化。上调NF-κBp65和cyclin D1的表达可能是其作用机制之一。     

NF-κB抑制剂PDTC对人骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨NF-κB特异性抑制剂PDTC对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法:采用不同浓度PDTC(25、50、100和200μmol/L)处理U266细胞,CCK-8法和活细胞计数检测U266细胞的增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;RT-qPCR及Western blot检测PDTC处理前后DNA甲基转移酶1(DNMT1)mRNA和蛋白的表达;Western blot检测NF-κB(P65)、DNMT1、Bcl-2、cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8的蛋白水平。结果:PDTC处理U266细胞48 h后,NF-κB(P65)的蛋白水平被抑制;PDTC抑制U266细胞增殖,作用呈浓度及时间依赖性;PDTC作用48 h后,与对照组比较,细胞凋亡率呈浓度依赖性增高(P0.05),细胞被阻滞在G2期;DNMT1的mRNA及蛋白水平均降低;Western blot结果显示PDTC可通过抑制NF-κB下调Bcl-2的表达,使cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平增加。结论:PDTC抑制NF-κB信号通路,通过诱导U266细胞凋亡从而抑制细胞增殖,其机制可能与抑制DNMT1的表达、阻滞细胞周期和启动凋亡途径有关。     

姜黄素通过下调IκBα磷酸化抑制食管鳞癌细胞的体外增殖

目的探讨姜黄素是否能够通过下调IκBα的磷酸化而抑制食管鳞癌细胞的增殖并对其细胞周期产生影响。方法 MTT法检测姜黄素作用下食管鳞癌细胞的增殖;Western blot法检测EC9706和Eca109细胞在姜黄素作用下pIκBα和细胞周期蛋白cyclin D1的表达情况。两种细胞中加入姜黄素培养72 h,或联合5-FU培养72 h,流式细胞仪检测细胞周期。结果 EC9706和Eca109细胞的存活率均随着姜黄素浓度的增加逐渐下降;姜黄素作用下EC9706和Eca109细胞中pIκBα和cyclin D1蛋白的表达水平随着时间的延长逐渐下降,且G0/G1期的细胞开始增加,S期的细胞逐渐减少;当姜黄素联合使用5-FU时,G0/G1期的细胞明显增加,S期的细胞明显减少。结论 姜黄素通过下调IκBα及cyclin D1的表达而抑制食管鳞癌细胞的增殖,或许有望成为食管癌治疗中的一个辅助用药。     

三七总皂甙对兔血管平滑肌细胞核因子κappaB和细胞周期的影响

目的观察三七总皂甙对兔VSMC生长增殖、细胞周期和NF-κB活性的影响,以探讨其药理机理.方法胎牛血清刺激体外培养的兔VSMC使其快速增殖生长,加入不同浓度的三七总皂甙作用一定时间后,通过MTT法测定三七总皂甙对VSMC生长的抑制率、流式细胞技术测定细胞周期和NF-κB活性的影响.结果三七总皂甙能明显抑制胎牛血清刺激的VSMC的增殖(IC60为14.8μg/ml).三七总皂甙还以浓度依赖方式减少S期细胞,阻滞细胞于G0/G1期,并下调NF-κB活性,与对照组相比具有显著差异(P＜0.01).结论三七总皂甙能显著抑制VSMC的增殖生长,其抗动脉粥样硬化的作用机理之一可能是通过调控VSMC的NF-κB活性来实现的.     

脂连蛋白抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖并诱导其凋亡北大核心CSCD

目的探讨血清脂连蛋白(adiponectin)水平与结直肠癌风险之间的关系,并研究重组脂连蛋白对结直肠癌HCT116细胞增殖、凋亡的影响。方法 ELISA检测结直肠癌患者和健康对照人员血清脂连蛋白水平;以脂连蛋白水平作为风险因子,采用SPPS软件绘制受试者工作特征(ROC)曲线;采用(2.5、5、10、20)μg/mL重组脂连蛋白处理HCT116细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞p21、核因子κBp65(NF-κBp65)、磷酸化的NF-κBp65(p-NF-κBp65)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平。结果直肠癌患者血清脂连蛋白水平明显低于对照组,脂连蛋白作为风险因子绘制的ROC曲线下面积为0.887(95%CI:0.807～0.966)。重组脂连蛋白抑制HCT116细胞的存活,具有时间和剂量依赖性。脂连蛋白处理后,HCT116细胞G1/G0期细胞百分比增加,p21上调,p-NF-κBp65和cyclin D1下调;同时c-caspase-3蛋白水平增加,细胞凋亡百分比增加。结论血清脂连蛋白水平降低与结直肠癌风险存在紧密相关性,重组人脂连蛋白能够抑制HCT116结直肠癌细胞的增殖,诱导细胞发生G1/G0期阻滞和凋亡,这些作用可能与下调NF-κB、cyclin D1,激活p21和caspase-3有关。     

三七总皂甙对兔血管平滑肌细胞核因子κappaB和细胞周期的影响

目的观察三七总皂甙对兔VSMC生长增殖、细胞周期和NF-κB活性的影响 ,以探讨其药理机理。方法胎牛血清刺激体外培养的兔VSMC使其快速增殖生长 ,加入不同浓度的三七总皂甙作用一定时间后 ,通过MTT法测定三七总皂甙对VSMC生长的抑制率、流式细胞技术测定细胞周期和NF -κB活性的影响。结果三七总皂甙能明显抑制胎牛血清刺激的VSMC的增殖 (IC50 为14.8μg/ml)。三七总皂甙还以浓度依赖方式减少S期细胞 ,阻滞细胞于G0/G1 期 ,并下调NF-κB活性 ,与对照组相比具有显著差异 (P<0.01)。结论三七总皂甙能显著抑制VSMC的增殖生长 ,其抗动脉粥样硬化的作用机理之一可能是通过调控VSMC的NF-κB活性来实现的     

脂连蛋白抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖并诱导其凋亡

目的探讨血清脂连蛋白(adiponectin)水平与结直肠癌风险之间的关系,并研究重组脂连蛋白对结直肠癌HCT116细胞增殖、凋亡的影响。方法 ELISA检测结直肠癌患者和健康对照人员血清脂连蛋白水平;以脂连蛋白水平作为风险因子,采用SPPS软件绘制受试者工作特征(ROC)曲线;采用(2.5、5、10、20)μg/mL重组脂连蛋白处理HCT116细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞p21、核因子κBp65(NF-κBp65)、磷酸化的NF-κBp65(p-NF-κBp65)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平。结果直肠癌患者血清脂连蛋白水平明显低于对照组,脂连蛋白作为风险因子绘制的ROC曲线下面积为0.887(95%CI:0.807～0.966)。重组脂连蛋白抑制HCT116细胞的存活,具有时间和剂量依赖性。脂连蛋白处理后,HCT116细胞G1/G0期细胞百分比增加,p21上调,p-NF-κBp65和cyclin D1下调;同时c-caspase-3蛋白水平增加,细胞凋亡百分比增加。结论血清脂连蛋白水平降低与结直肠癌风险存在紧密相关性,重组人脂连蛋白能够抑制HCT116结直肠癌细胞的增殖,诱导细胞发生G1/G0期阻滞和凋亡,这些作用可能与下调NF-κB、cyclin D1,激活p21和caspase-3有关。     

熊果酸对THP-1细胞HMGB1表达和NF-кB活性的影响

目的研究熊果酸(UA)对人单核细胞系THP-1细胞HMGB1表达和NF-кB活性的影响。方法用不同浓度的UA(0、0.1、1、5和10μmol/L)作用细胞后进行如下检测:1)MTT检测细胞增殖;2)RT-PCR法检测HMGB1和P65 mRNA表达;3)Western blot检测HMGB1和P65蛋白的表达;4)荧光素酶报告基因转染,质粒p NF-κB-luc瞬时转染THP-1细胞,转染40 h后加1μmol/L UA作用,于转染48 h后进行荧光素酶活性测定。结果 1)随着UA浓度的增高,可明显抑制THP-1细胞的增殖;2)不同浓度的UA对THP-1细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达,呈现出一定的双向性,且以1μmol/L UA作用最强(P0.05);3)UA可增强P65 mRNA和蛋白表达以及NF-κB活性。结论UA可影响单核细胞HMGB1表达和NF-кB活性。     

On the possible origin of extra-epithelial enterochromaffin cells by budding from the crypts of Lieberkuhn

This study was undertaken to test Pierre Masson's still unconfirmed theory that extra-epithelial enterochromaffin cells in the gut arise in adult life by budding from the crypts of Lieberkuhn under conditions of low grade inflammation. Appendices (900) were reviewed and 19 were selected for serial section study because in random sections they showed lateral fusion of the crypts, one of the key features described by Masson. Ten specimens without crypt fusion served as controls. Sixteen of the 19 study specimens and one of the control specimens showed budding, averaging one bud in every 88 sections. Most buds were in direct contact with Schwann cells in the adjacent lamina propria and 45 per cent of them contained enterochromaffin cells. There was also histologic evidence linking buds and lateral crypt fusion to low grade inflammation. Masson's ideas are, therefore, confirmed insofar as the existence of buds and their relationship to enterochromaffin cells, Schwann cells, and inflammation is concerned. The actual separation of buds from the crypts to form extra-epithelial enterochromaffin cells has yet to be proved.     

大鼠肝卵圆细胞的诱导、分离及鉴定

目的建立大鼠肝卵圆细胞的增殖模型,并探索其分离及鉴定方法。方法雄性Wistar大鼠每天1次连续灌胃给予不同剂量二乙酰氨基芴(2-AAF熏5、10、15、20、25mg/kgBW),第5天行标准的2/3肝切除术,术后按各自剂量继续给予11天,不同时间取肝脏组织,行甲胎蛋白、细胞角蛋白18及19染色并观察。以确定的2-AAF最佳剂量制备大鼠肝干细胞增殖模型,Seglen胶原酶原位灌注结合Percoll密度梯度离心分离纯化大鼠肝卵圆细胞,光镜、电镜下观察细胞特点,并进行上述细胞表型标志免疫组化染色。结果2-AAF15mg/kgBW能建立较理想的肝卵圆细胞增殖模型。HE染色可见汇管区及中央静脉周围大量增殖的嗜碱性小细胞,电镜下观察此种细胞具有卵圆形细胞核、细胞质少而淡、核/浆比例较大等特点,免疫组化染色证实甲胎蛋白、细胞角蛋白18和19染色阳性,白蛋白及白细胞共同抗原(LCA)染色阴性。分离所得底层细胞,光镜下表现大小不等、不规则圆形细胞,体积较小,细胞核/浆比例较大,电镜下细胞表面可见少量短而小的微绒毛状突起,余同增殖细胞特点,免疫组化染色与增殖细胞表现相同细胞表型特点。结论本方法可成功诱导、分离、纯化大鼠肝卵圆细胞,符合肝卵圆细胞的形态特点、超微结构及细胞表型标志特点。     

两种不同纯度的嗅鞘细胞在体外存活与生长的比较

比较80%和50%两种纯度的嗅鞘细胞在体外培养条件下的存活与生长,为嗅鞘细胞体内移植选用最佳纯度提供依据。分离、培养并纯化成年SD大鼠嗅鞘细胞,将纯化的嗅鞘细胞和收集到的贴壁成纤维细胞进行约80%和50%的比例混合后接种,继续培养1d或3d。所有细胞于不同时间点行P75免疫细胞化学荧光染色,以鉴定嗅鞘细胞的初始及其后培养过程中数量和纯度的变化。观察细胞状态,计数细胞总数和P75免疫阳性细胞数目,求得各组嗅鞘细胞数量和纯度并行统计学分析。结果显示:两种不同纯度嗅鞘细胞在培养1d时形态正常,3d时纯度为50%的嗅鞘细胞胞体依然饱满,突起更加纤长,数量和纯度亦无明显下降。而纯度为80%的嗅鞘细胞在培养3d时已出现胞体萎缩和突起变短,数量从1d时每一观察区域内的35±13显著下降为23±5(P=0.02),但纯度未发生明显变化。结果表明50%纯度嗅鞘细胞的存活及生长状态优于80%者,提示细胞体内移植时应考虑选取50%纯度的嗅鞘细胞。     

Diversity of tissue-resident NK cells

Although natural killer (NK) cells were initially named for their spontaneous tumor-killing capacity, their concept has been greatly expanded with more than 40 years of extensive investigation. Currently, NK cells are known as a heterogeneous population of innate lymphoid cell (ILC) family, consisting of different subsets with unique phenotypic and functional features. Recent studies have shown that tissue-resident NK (trNK) cells, which are distinct from conventional NK (cNK) cells, preferentially distribute in non-lymphoid tissues, such as the liver, uterus, salivary gland, and adipose. In this review, we provide a comprehensive overview of the current knowledge about the phenotype, function and development of trNK cells across different tissues and describe the similarities and differences between diverse trNK cells and cNK cells, with a particular focus on the tissue-specific characteristics of different trNK cells.     

The molecular makeup and function of regulatory and effector synapses

Summary:  Physical interactions between T cells and antigen-presenting cells (APCs) form the basis of any specific immune response. Upon cognate contacts, a multimolecular assembly of receptors and adhesion molecules on both cells is created, termed the immunological synapse (IS). Very diverse structures of ISs have been described, yet the functional importance for T-cell differentiation is largely unclear. Here we discuss the principal structure and function of ISs. We then focus on two characteristic T-cell–APC pairs, namely T cells contacting dendritic cells (DCs) or naive B cells, for which extremely different patterns of the IS have been observed as well as fundamentally different effects on the function of the activated T cells. We provide a model on how differences in signaling and the involvement of adhesion molecules might lead to diverse interaction kinetics and, eventually, diverse T-cell differentiation. We hypothesize that the preferred activation of the adhesion molecule leukocyte function-associated antigen-1 (LFA-1) and of the negative regulator for T-cell activation, cytotoxic T-lymphocyte antigen-4 (CTLA-4), through contact with naive B cells, lead to prolonged cell–cell contacts and the generation of T cells with regulatory capacity. In contrast, DCs might have evolved mechanisms to avoid LFA-1 overactivation and CTLA-4 triggering, thereby promoting more dynamic contacts that lead to the preferential generation of effector cells.     

血清浓度对雪旺细胞诱导神经上皮干细胞分化的影响

目的:探讨血清对雪旺细胞诱导神经上皮干细胞分化的影响。方法:从新生鼠坐骨神经及臂丛神经分离纯化雪旺细胞,从孕11.5 d大鼠胚胎分离培养神经上皮干细胞,含0%、1%、5%、10%胎牛血清的培养液联合培养雪旺细胞与神经上皮干细胞,收集上清作为条件培养液诱导神经上皮干细胞分化,1周后MAP-2和GFAP细胞免疫化学染色,显微镜下观察统计神经上皮干细胞分化为神经元与星形胶质细胞的比例。结果:条件培养液促进神经上皮干细胞存活和分化,分化形成的神经元大体形态与成熟神经元相似,0%、1%、5%、10%血清条件培养液组神经元与星形胶质细胞比例分别为1.53:1、1.13:1、1.03:1、0.75:1。结论:血清影响雪旺细胞诱导神经上皮干细胞向神经元分化,血清浓度增加,神经上皮干细胞分化形成的神经元减少。     

人羊膜上皮细胞上清液对人肝癌BEL-7402细胞的体外抗肿瘤作用

目的探讨人羊膜上皮细胞(h AECs)上清液对体外培养的肝癌细胞系BEL-7402细胞迁移、增殖与凋亡的影响。方法 BEL-7402细胞随机分为5组,其中对照组不加h AECs上清液,其余4组加入体积分数分别为6.25%、12.5%、25%和50%的h AECs上清液作用24 h后,通过划痕实验、MTT试验和流式细胞术检测BEL-7402细胞迁移、增殖和凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达量。结果 h AECs上清液能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞迁移、增殖并诱导凋亡(P0.05);25%和50%h AECs上清液组BEL-7402细胞caspase-3和caspase-8蛋白的切割片断蛋白定量明显高于对照组(P0.05)。结论 h AECs上清液对体外培养的BEL-7402细胞具有一定的抗肿瘤作用。     

人外周血树突状细胞-乳腺癌细胞融合细胞

目的：探讨树突状细胞—肿瘤细胞融合细胞的形态特性，为研制融合细胞疫苗提供形态学依据。方法：将免疫磁珠法分离的人外周血树突状细胞与人乳腺癌细胞株MCF7融合，瑞氏—姬姆萨染色观察；扫描电镜观察树突状细胞、融合细胞的表面超微结构。结果：树突状细胞与MCF细胞按10：1比例融合后，一个乳腺癌细胞可以与一个或多个树突状细胞相融合；扫描电镜下可见分离的树突状细胞表面有突起，树突状细胞/MCF7融合细胞具两种亲代细胞的表面超微结构特点。结论：树突状细胞与人乳腺癌细胞融合后无明显的形态改变。     

Transitional cell carcinoma of the urinary bladder with osteoclast-type giant cells: a report of two cases and review of the literature

We report two transitional cell carcinomas of the urinary bladder containing numerous osteoclast-type giant cells that stained for vimentin and acid phosphatase (with and without tartrate) and were negative for cytokeratin and lysozyme. One tumour, in a 65-year-old man, was composed of papillary transitional cell carcinoma, invasive poorly differentiated carcinoma with a prominent spindle cell component and numerous osteoclast-type giant cells; repeat curettage 2 months later showed no residual tumour. The second tumour occurred in a 75-year-old woman who underwent a radical cystectomy for a deeply invasive transitional cell carcinoma with a spindle and anaplastic giant cell component and areas containing numerous osteoclast-type giant cells. Osteoclast-type giant cells, which appear to be reactive, should be distinguished from the neoplastic giant cells of giant cell carcinoma.