狼疮方-2与强的松治疗BXSB小鼠的实验研究

目的研究中药复方狼疮方二号(LCF-2)与强的松对BXSB狼疮鼠体重、死亡率及脾脏T淋巴细胞亚群的影响,探讨中、西药对狼疮小鼠的作用机制。方法将BXSB狼疮鼠随机分成4组:空白对照组、中药组、西药组、中西药合用组。采用动态观察方法测定小鼠体重变化,死亡率;间接免疫荧光法测定小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的阳性率;结果(1)LCF-2组及中西药合用组小鼠体重增长明显,与空白对照组比较有显著差异(P<0.05);(2)中药组死亡率为0,与空白对照组有明显差异(P<0.05),中西药组死亡率虽很低,但与空白对照组比较统计学无明显差异;(3)中药与中西药组对CD3 、CD4 、CD8 以及CD 4/CD 8T细胞均有显著的上调作用,而西药组对CD4 和CD4 /CD8 T细胞有明显的下调作用,对CD3 、CD8 T细胞作用不明显。结论中药复方LCF-2与强的松均对BXSB狼疮小鼠有明显的治疗作用,但二者对淋巴细胞的调节作用各有差异。     

苏木提取物对NOD小鼠1型糖尿病的免疫干预作用研究

目的 研究苏木提取物对NOD小鼠1型糖尿病发病的免疫干预作用,并初步探讨其作用机制. 方法 采用4周龄NOD小鼠,不同剂量的苏木乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物分别灌胃给药,连续观察对NOD小鼠糖尿病发病率的影响. 28周龄时处死小鼠,取胰腺组织做苏木精-伊红（HE）染色,行胰岛炎评分. 分离脾脏淋巴细胞,噻唑蓝（MTT）法测定小鼠脾淋巴细胞增殖反应,ELISA法测定脾淋巴细胞培养上清液中细胞因子干扰素（IFN）-γ和白细胞介素（IL）-10含量. 结果 不同剂量的两种苏木提取物均可剂量依赖性地降低NOD小鼠的发病率,并显著改善小鼠体内胰岛炎的严重程度. 体外实验发现,与模型对照组相比,苏木提取物可显著抑制脾脏淋巴细胞增殖能力,并抑制Th1型细胞因子IFN-γ的产生,促进Th2型细胞因子IL-10的分泌. 结论 苏木提取物免疫干预后可显著降低NOD小鼠的糖尿病发病率,其机制与改善体内Th型细胞因子失衡状态并抑制淋巴细胞增殖有关.     

甲强龙调控CD4＋CD25＋Treg对狼疮肾炎治疗作用的研究

目的通过狼疮肾炎模型经甲强龙治疗后CIM＋CD25＋调节性T细胞（Treg）数量和功能基因的变化,探讨Treg在狼疮肾炎发病中的作用。方法采用慢性移植物抗宿主病（cGYHD）的方法诱导狼疮肾炎小鼠模型,分为正常对照组、模型未治疗组及模型治疗组。观察甲强龙治疗后狼疮肾炎小鼠尿蛋白和肾脏病理的改变,并检测Treg数量及其功能基因的变化。结果cGVHD的方法成功诱导狼疮肾炎模型,治疗组较未治疗组小鼠狼疮症状明显改善。未治疗组与对照组相比,治疗组和未治疗组Treg数量虽无明显差别,但Treg功能基因Foxp3表达增强,而CTLA-4表达水平则明显减低。结论甲强龙治疗后SLE模型鼠中枢和外周耐受异常的恢复,而T细胞活化受抑制,可能为狼疮肾炎好转的原因之一,为狼疮性肾炎的治疗提供了新的靶点。     

B淋巴细胞刺激因子相关生物制剂治疗系统性红斑狼疮研究进展

B淋巴细胞在系统性红斑狼疮(SLE)的发病机制中起重要作用,针对B淋巴细胞的治疗药物成为生物学疗法的焦点.B细胞主要针对病原体产生特异性抗体,但在SLE中B细胞则产生自身抗体.这已在SLE小鼠模型得到证实,B细胞缺陷的小鼠不能诱导出SLE.另外,研究表明,狼疮小鼠及SLE患者体内B淋巴细胞刺激因子(Blys)水平增高,阻断Blys的作用可以使狼疮小鼠的病情缓解,存活时间延长.因此,利用抗Blys单克隆抗体、Blys受体融合蛋白、Blys的抑制性短肽、Blys的免疫抑制重组子、Blys类似物及BAFF受体阻滞剂等Blys相关生物制剂可靶向治疗SLE,但生物靶向疗法治疗自身免疫病尚处在初级阶段,本研究对部分生物制刺治疗SLE最新进展作一综述.     

孕早期水平雌孕激素对小鼠体内调节性T细胞的影响

目的 探讨孕早期的雌、孕激素对小鼠调节性T细胞在体内的影响及其相关性. 方法 建立去势C57BL/6小鼠模型, 2周后分别皮下注射雌激素、孕激素及雌孕激素联合重建小鼠性激素水平, 模拟妊娠早期小鼠激素水平.维持2周后, 用流式细胞术和免疫组化检测给药后小鼠外周血、脾脏、髂窝淋巴结、胸腺中调节性T细胞比例变化情况. 结果 实验 结果 显示, 雌鼠去势后, 单独的雌激素干预可明显提高脾脏、髂窝淋巴结、外周血CD⁺₄CD⁺₂₅Foxp3⁺调节性T细胞在CD⁺₄T细胞中的比例, 分别为（8.56±1.85）%, （7.63±1.68）%, （6.13±1.32)%; 与溶剂组比较差异有显著性（P< 0.05）.但胸腺中调节性T细胞比例与溶剂组差异无显著性（P＞0.05）.单独妊娠早期水平的孕激素与溶剂组比较, 调节性T细胞比例有所升高, 但差异无显著性（P＞0.05）.而联合应用雌、孕激素对调节性T细胞的影响与单独应用雌激素的 结果 类似, 两者差异无显著性.不同性别组给予相同干预药物, 调节性T细胞的变化比例, 雌雄两组差异无显著性（P＞0.05）.免疫组化也得到了类似的 结果 .结论 单独应用相当于孕早期水平的雌激素可明显提高小鼠外周血, 脾脏, 髂窝淋巴结CD⁺₄CD⁺₂₅Foxp3⁺调节性T细胞比例, 而孕激素对外周调节性T细胞没有影响, 两种激素对中枢淋巴器官的调节性T细胞均没有影响.小鼠T淋巴细胞中雌孕激素的受体分布及其功能与性别遗传没有相关性.     

淋巴细胞活性染色质诱导系统性红斑狼疮样小鼠模型

目的建立活性染色质诱导系统性红斑狼疮(SLE)样小鼠模型。方法从ConA活化的BALB/c小鼠脾淋巴细胞中提取活性染色质,分别于d 0、d 14、d 21和d 28以染色质100μg在BALB/c小鼠尾根部及背部皮内注射免疫4次,诱导SLE样小鼠模型。目测半定量尿蛋白试纸法检测动物的尿蛋白变化,HE染色法检查动物的肾脏、脾脏病理改变,计算动物的胸腺和脾脏指数,MTT法检测ConA和LPS诱导的T、B淋巴细胞增殖反应,全自动生化分析仪检测血清中Crea和BUN水平,ELISA法检测小鼠血清中ANA、抗dsDNA、IgG1、IgG2a、IL-10、IFN-γ水平,流式细胞术检测脾脏T、B淋巴细胞亚群变化。结果诱导模型小鼠尿蛋白水平升高,出现肾小球肾炎、脾脏增生等病理改变;脾脏指数明显升高,LPS诱导的B淋巴细胞增殖反应增强;血清Crea、BUN、ANA、抗dsDNA、IgG1、IgG2a、IL-10和IFN-γ水平明显升高;脾脏CD19+、CD19+CD21+、CD19+CD23+、CD19+IgD+B淋巴细胞亚群百分比明显升高,CD4+CD25+T淋巴细胞百分比明显下降。结论 ConA活化淋巴细胞的染色质免疫同系BALB/c小鼠成功诱导了SLE样小鼠模型,其血清学、组织病理学及免疫学方面特征与人类SLE临床特征表现相似。     

马齿苋多糖对衰老小鼠免疫调节作用的研究

目的：本研究旨在探讨中药马齿苋多糖对衰老小鼠免疫调节作用。方法：皮下注射D-半乳糖建立衰老小鼠模型,用马齿苋多糖进行治疗,同时设正常对照组、阳性对照组和阴性对照组,用药30d后处死小鼠,进行免疫指标检测。结果：用D-半乳糖造模以后,小鼠胸腺指数、脾脏指数和T淋巴细胞转化值都降低（P〈0.05）。用马齿苋治疗后,小鼠胸腺指数、脾脏指数和T淋巴细胞转化值都增生（P〈0.05）。结论：马齿苋多糖增强机体免疫力,马齿苋多糖对衰老小鼠具有免疫调节作用。     

rIL-6对小鼠血液系统的体内调节效应

为了探讨rIL-6对小鼠血液系统的调节效应,我们进行了rIL-6对小鼠胸腺、脾脏细胞总数和外周血细胞总数影响的体内实验研究。实验采用C57BL/6荷瘤或正常小鼠。给予rIL-6或生理盐水,15d后取小鼠外周血及胸腺、脾脏进行细胞计数。结果表明（1）rIL-6可以明显提高小鼠外周血白细胞和血小板总数,正常鼠分别为158.18％和29.15％,荷瘤鼠分别为81.24％和11.32％;（2）rIL-6可以提高小鼠胸腺和脾脏细胞总数,正常鼠分别为273％和95.8/,荷瘤鼠分别为30.4％和27.3％;（3）rIL-6对外周血红细胞无作用。     

狼疮静颗粒对NZB/NZW F1小鼠TNF-α的影响

目的观察中药狼疮静颗粒（LCG）对NZB／NZWF1小鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响。方法将NZB／NZWF1狼疮模型鼠随机分为模型对照组、中药小剂量组、中药大剂量组和强的松组,灌胃给药54d;用双抗夹心酶联免疫吸附试验（EusA）测定小鼠血清中TNF-α的含量。结果LCG可上调NZB／NZW FI小鼠血清TNF-α水平。结论中药LCG具有类激素样作用和双向免疫调节作用。     

B淋巴细胞刺激因子相关生物制剂治疗系统性红斑狼疮研究进展

B淋巴细胞在系统性红斑狼疮(SLE)的发病机制中起重要作用,针对B淋巴细胞的治疗药物成为生物学疗法的焦点。B细胞主要针对病原体产生特异性抗体,但在SLE中B细胞则产生自身抗体。这已在SLE小鼠模型得到证实,B细胞缺陷的小鼠不能诱导出SLE。另外,研究表明,狼疮小鼠及SLE患者体内B淋巴细胞刺激因子(Blys)水平增高,阻断Blys的作用可以使狼疮小鼠的病情缓解,存活时间延长。因此,利用抗Blys单克隆抗体、Blys受体融合蛋白、Blys的抑制性短肽、Blys的免疫抑制重组子、Blys类似物及BAFF受体阻滞剂等Blys相关生物制剂可靶向治疗SLE,但生物靶向疗法治疗自身免疫病尚处在初级阶段,本研究对部分生物制刺治疗SLE最新进展作一综述。     

超抗原SEA对两种小鼠脾脏淋巴细胞的不同活化作用的探讨

目的研究超抗原SEA(葡萄球菌肠毒素A)对C57BL／6小鼠和昆明种小鼠脾脏淋巴细胞的不同活化作用。方法淋巴细胞转化实验采用MTT法;细胞因子IL-2检测采用酶联免疫吸附测定法(双抗夹心法)。结果超抗原SEA对C57BL／6小鼠和昆明种小鼠脾脏淋巴细胞均有明显的促增殖作用,但对C57BL／6小鼠脾脏淋巴细胞活化作用强于对昆明种小鼠。结论超抗原SEA对体外小鼠脾脏淋巴细胞的促增殖作用与其浓度、刺激时间及小鼠的种类有关。     

虎杖提取物对去卵巢小鼠下生殖道类雌激素样作用研究

目的研究虎杖提取物对去卵巢小鼠下生殖道的类雌激素样作用。方法昆明种小鼠40只,体质量22~26g,清洁度II级,其中30只小鼠进行动物造模后,将合格鼠随机分为3组:虎杖提取物组(Em)、乙烯雌酚组(E2)和对照组即空白基质组,另外10只小鼠不造模设为正常组。Em组和E2组,根据各鼠实际体质量精密称取虎杖提取物和乙烯雌酚,用眼科小镊子或微量加样器分别将药物注入实验鼠阴道深处,对照组同法给予相应量的空白基质栓,连续7d,于给药后5,6和7d及最后1次给药后24~48h各作l~2次阴道涂片检查,观测小鼠阴道角化细胞阳性率、乳酸杆菌菌群变化、pH值变化及阴道黏膜组织病理学分级,以此4个指标来研究虎杖提取物对去卵巢小鼠下生殖道类雌激素样作用。结果虎杖提取物对去卵巢小鼠下生殖道有一定的类雌激素样作用,与对照药一样能显著提高阴道角化细胞阳性率,显著增加阴道乳酸杆菌菌群数,恢复阴道酸性环境,改善阴道局部炎症的病理变化。结论虎杖提取物具有类雌激素样活性,有进一步研发的价值。     

半边莲煎剂对小鼠H22肝癌荷瘤细胞系C-erbB-2和P53表达的影响

目的观察半边莲煎剂对实验性小鼠H22型肝癌的抑制作用。方法小鼠右腋下皮下种瘤造成实体瘤模型,昆明种小鼠24只（♀♂各半）,随机分为3组,即中药组、西药组、对照组,每组8只。造模后分别给予半边莲煎剂灌胃、5-FU腹腔注射、生理盐水灌胃给药,连续给药14d。第15天以颈椎脱臼法处死,并将肿瘤组织取出称其质量,计算抑瘤率;制作小鼠肿瘤细胞切片,用免疫组织化学方法对肿瘤细胞切片进行染色,检测半边莲煎剂对肿瘤的抑制作用及对C-erbB-2和P53表达的影响。结果半边莲煎剂对小鼠肝癌细胞的生长抑制率为33．98％,C-erbB-2及P53在3组中均呈阳性表达,中药组C-erbB-2表达减弱,P53表达升高,与对照组比较差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论半边莲煎剂对小鼠H22型肝癌有明显的抑制作用,其机制可能与肿瘤细胞内C-erbB-2、P53蛋白表达有关。     

咳喘凝胶贴膏的初步药效学研究

摘 要 目的：观察皮肤外用制剂咳喘凝胶贴膏的镇咳、平喘和化痰的作用,为传统黑膏药制剂的剂型改进和工艺优化提供药理学依据。 方法: 昆明种小鼠40只,随机分成高剂量样品组( 含生药量18 g·kg-1 )、低剂量样品组(含生药量9 g·kg-1)、空白对照组 、阳性对照组,每组10只。采用氨水诱发小鼠咳嗽法和小鼠气管段酚红排泌法,考察咳喘凝胶贴膏的镇咳、平喘作用;豚鼠40只,同上分组方法,采用乙酸胆碱(ACH)和磷酸组胺(HA)诱发豚鼠哮喘试验,考察咳喘凝胶贴膏的平喘作用。结果: 咳喘凝胶贴膏高、低剂量组均可明显抑制小鼠的咳嗽次数,且高剂量组抑制作用较阳性对照组更明显（P＜0.05);用药后4 h,高剂量组可明显延长引喘潜伏期（P＜0.05）;高、低剂量及阳性组均能够明显增加小鼠呼吸道酚红的排泌量,且高、低剂量组更优于阳性对照组（P＜0.05）。 结论: 咳喘凝胶贴膏具有一定的镇咳、平喘和化痰作用,为中医院传统黑膏药敷贴的剂型更迭提供实验依据。     

基于生物标志物探索系统性红斑狼疮中医药治疗机制的研究进展

系统性红斑狼疮（SLE）是一种多器官受累的自身免疫性疾病,目前基于糖皮质激素和免疫抑制剂的治疗,仍然存在很多局限性和个体差异。近年来,越来越多的研究表明,联合中医药治疗SLE具有疗效好,不良反应低和安全性高等优点。但是,中医药治疗SLE的确切调节机制和作用环节尚不明确,本文从代谢组学、免疫细胞、淋巴细胞因子和细胞凋亡等,对中医药治疗SLE机制的研究进行综述,为利用现代化方法探索祖国传统医学治疗SLE的机制研究提供思路。     

Accumulation of immature B and null lymphocytes in the periphery after intraperitoneal administration of traditional Chinese medicine, xiao-chai-hu-tang (Japanese name: shosaiko-to)

Accumulation of lymphocytes after an intraperitoneal (ip) injection of a traditional Chinese herb medicine, XIAO-CHAI-HU-TANG (Japanese name: shosaiko-to), was investigated. Shosaiko-to induced marked accumulation of lymphocytes rather than macrophages in the peritoneal cavity of ICR mice, whereas various kinds of irritants, e.g. proteose-pepton, Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS), OK-432 and Corynebacterium parvum, induced preferential accumulation of macrophages rather than lymphocytes. By means of analysis using two-color fluorescence-activated cell sorter (FACS), it was revealed that the increased lymphocyte subpopulations not only in the peritoneal cavity but also in the spleen of C3H/He mice by the injection of shosaiko-to were comprised of both immature B (IgM+ and IgD-) and null (thyl- and Ig-) cells. This effect of shosaiko-to was observed in other C5 normal strains, C3H/HeJ (LPS-nonresponder), C57BL/6, BALB/c and athymic nu/nu (ICR background) mice, but not in C5 deficient strains, AKR/J, A/J and DBA/2 mice, indicating that the accumulation of immature B and null cells in the periphery induced by shosaiko-to is closely related to the complement system.     

Population of CD40L-expressing cells was slightly but not significantly decreased in lymphoid tissues of collagen-induced arthritic mice treated with Hochu-Ekki-To

OBJECTIVE: To clarify the mechanism of the action of Hochu-Ekki-To (HET) on collagen-induced arthritic (CIA) mice by analyzing the CD40L-expressing cells population. METHODS: CIA was induced in male DBA/1J mice by immunization with two injections of bovine type II collagen (CII). HET or water was orally administered. The subpopulations of lymphocytes obtained from lymph nodes and spleen were detected at 3 weeks after boost using flow cytometry. RESULTS: Although the population of CD4+CD40L+ cells tended to be decreased in the HET group compared to that in control mice, there was no significant difference between the two groups. These findings were observed in lymphocytes obtained from both lymph nodes and spleen. CONCLUSION: HET suppresses the development of CIA. These effects may be partially induced via the decrease in the population of CD4+CD40L+ cells, but the role of this action is probably limited.     

Protective effect of a traditional Japanese medicine Hochu-ekki-to (Chinese name: Bu-zhong-yi-qi-tang), on the susceptibility against Listeria monocytogenes in infant mice

In this study, the effect of traditional Japanese (Chinese) medicine, Hochu-ekki-to, HOT (Chinese name: Bu-zhong-yi-qi-tang), on the susceptibility against Listeria monocytogenes in postneonatal infant mice was examined. Numbers of bacteria in infant mice (infected at 4 weeks of age) were significantly higher than those in adult mice (infected at 8 weeks of age) on day 3 (non-specific resistance phase) and day 5 (specific resistance phase) after infection. Oral administration of 1,000 mg/kg of HOT for 7 days to infant mice reduced bacterial numbers in the liver and spleen at 5 days after the infection. The amount of IFN-gamma and the number of IFN-gamma-producing CD4+ T cells were lower in infant mice than adult mice but those in infant mice enhanced by HOT treatment. HOT also enhanced the antigen-presenting function along with the expression of MHC class II in infant macrophages induced by heat-killed L. monocytogenes. Further, HOT enhanced the IFN-gamma production from infant CD4+ T cells independent of the deficiency in the antigen-presenting function. These findings suggest that HOT induced simultaneously functional maturation of both infant antigen-presenting cells and T cells, and consequently developed an anti-listerial Th1 response.     

辐射对小鼠脾脏损伤及香菇多糖的保护作用

目的 研究辐射对小鼠脾脏的损伤以及香菇多糖对其保护作用。方法 建立小鼠低剂量长期辐射的损伤模型。小鼠随机分为五组,对照组、模型组、香菇多糖组(低、中、高剂量组)。测定各组小鼠的脾脏系数、MTT法测定小鼠脾脏淋巴细胞的增殖情况,法分析脾脏组织的病理变化,用投射电镜法分析脾脏细胞的超微结构。结果：与对照组相比,低剂量慢性辐射能降低小鼠的脾脏系数、抑制脾脏淋巴细胞的增殖,对小鼠脾脏造成病理损伤,破坏脾脏细胞的超微结构。香菇多糖中、高剂量组可明显抑制辐射造成的脾脏的上述损伤。结论：香菇多糖对辐射造成的脾脏损伤具有保护作用。