超声介导微泡造影剂对人脐静脉血管内皮细胞膜作用的研究

目的 探讨超声介导微泡造影剂(MBCA)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)膜的作用.方法 向两皿HUVEC中加入MBCA(商品名:SonoVue),用超声辐照,辐照后立即取一皿细胞送电镜室进行SEMS观察.另一皿细胞继续培养24 h后进行SEMS观察.结果 超声介导SonoVue可使HUVEC细胞膜的形态和结构发生明显异常改变.约23%细胞的细胞膜可见大小不等、数量不一的小孔.细胞继续培养24 h后再进行SEMS观察,发现细胞膜的形态未见小孔样结构改变.结论 超声介导SonoVue可使HUVEC细胞膜产生可逆性的小孔.     

重组C反应蛋白促进脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2

目的 观察重组C反应蛋白(CRP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响.方法 采用逆转录聚合酶链反应及蛋白质免疫印迹分析检测MMP-2 mRNA转录和蛋白水平表达,观察不同浓度CRP及不同孵育时间对HUVEC MMP-2表达的影响.结果 CRP呈浓度和时间依赖性增加培养HUVEC的MMP-2 mRNA转录和蛋白水平的表达.结论 CRP可上调HUVEC MMP-2表达.     

甲状腺激素对血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨甲状腺激素对血管内皮细胞凋亡的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度的三碘甲状腺原氨酸( T3,0、0.1、1.0、10.0、50.0、100.0 nmol/L)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长的影响；Hochest 33258染色和流式细胞术检测不同浓度T3作用于HUVEC细胞48小时后的凋亡.结果 T3在0.1～ 10.0 nmol/L浓度范围时,尤其是1.0 nmol/L对HUVEC具有保护作用,而＞ 10.0 nmol/L或＜0.1 nmol/L浓度时,HUVEC细胞凋亡增加(P＜0.05).结论 生理浓度( 1.0 nmol/L)的T3对HUVEC保护作用最大.     

Diplacone对同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的采用同型半胱氨酸(Hcy)孵育体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立血管内皮细胞炎性损伤模型,后用Diplacone加以干预,观察Diplacone对HUVEC的影响,探讨Diplacone对血管内皮细胞可能的保护作用。方法先用不同浓度的Hcy预处理HUVEC,选出Hcy的最适损伤浓度(2 mmol/L)和时间(12 h),在HUVEC培养基中加入不同浓度Diplacone预处理2 h后加入2 mmol/L Hcy作用12 h,通过MTT法检测细胞活性变化,Hoechst33342核染色检测细胞核损伤程度,Western blot检测与细胞损伤有关的血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和P-选择素的表达水平,以此衡量Diplacone对Hcy诱导的HUVEC损伤的保护作用。结果与对照组相比,2 mmol/L Hcy组细胞活性显著降低(P0.01),10μmol/L以内Diplacone具有明显的剂量依赖性抑制2 mmol/L Hcy诱导的HUVEC活性损伤并抑制Hcy所致的VCAM-1和P-选择素的表达升高(P0.01)。结论 Diplacone对Hcy所致的HUVEC内皮损伤具有保护作用。     

氧化型低密度脂蛋白和血脂康对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮合酶和细胞间黏附分子-1的影响

目的 :观察人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)在氧化型低密度脂蛋白 (ox LDL)作用下内皮源性一氧化氮合酶 (eNOS)和细胞间黏附分子 1(ICAM 1)的变化及血脂康的干预作用。方法 :体外培养HUVEC ,制备ox LDL。用不同浓度 (5 0、10 0、2 0 0mg/L)的ox LDL和血脂康 (0 .1、0 .2 g/L)分别作用于HUVEC。 2 4h后 ,测定各组和对照组的eNOS和ICAM 1的含量 ;用免疫组化技术和图像分析法观察eNOS表达的变化 ;用酶联免疫吸附法测定细胞表面表达的黏附分子。结果 :ox LDL能抑制HUVEC产生的NOS活性和增强HUVEC产生的I CAM 1含量 ,与对照组比较差异均有统计学意义 ,且随ox LDL浓度增加 ,NOS活性减低呈剂量依赖性效应。血脂康能刺激HUVEC产生的NOS活性和减少ICAM 1的产生 ,与对照组比较差异均有统计学意义。结论 :ox LDL使HUVEC的NOS活性下降及ICAM 1增强 ,这对动脉粥样硬化 (AS)的发生起一定的作用。血脂康使HU VEC的NOS活性增强并减少ICAM 1的产生 ,对防治AS的发生起一定的作用。     

17β-雌二醇对人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶和一氧化氮的影响

背景门静脉高压时门静脉系统血管内皮广泛受损,除压力增高、血流冲击等因素外,体液因子的变化也是重要损伤因素之一.目的研究雌激素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和一氧化氮(NO)的影响,探讨其在门静脉高压血管内皮病变中的意义.方法以不同浓度17β-雌二醇和雌激素受体拮抗剂他莫昔芬单独或联合作用于体外培养的HUVEC,检测eNOS活性和NO含量变化.结果与对照组相比,1×10-9～1×10-7 mol/L 17β-雌二醇均可增加HUVEC eNOS活性,提高NO含量;1×10-8～1×10-6 mol/L他莫昔芬对HUVEC eNOS活性和NO含量均无明显影响;1×10-7 mol/L 17β-雌二醇对经1×10-6 mol/L他莫昔芬预处理的HUVEC eNOS活性和NO含量无明显影响.结论17β-雌二醇可显著增加HUVEC eNOS活性,提高NO含量,他莫昔芬则可阻断其作用.门静脉高压血管内皮病变的形成与雌激素的作用有一定关系.     

阿司匹林抑制肿瘤坏死因子α诱导的人脐静脉内皮细胞分形趋化因子表达

背景 分形趋化因子通过介导炎症细胞的趋化与血管内皮损伤相关,阿司匹林具有抗炎作用,抑制多种细胞因子表达,其对分形趋化因子的影响尚无报道.目的 探讨阿司匹林对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分形趋化因子表达的影响和作用机制.方法 将HUVEC随机分为:空白组(无TNF-α刺激和药物干预),TNF-α刺激组,TNF-α PDTC干预组(PDTC系核因子κB的特异性活性抑制剂),TNF-α NS398干预组(NS398是COX-2的特异性活性抑制剂).TNF-α 阿司匹林0 02 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林0 2 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林1 mol/L干预组,TNF-α 阿司匹林5 mol/L干预组,共8组,每组3例.分别用RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞分形趋化因子(分形素)和核因子κB p65(NF-κB p65)的mRNA水平和蛋白表达.结果 1)4 μg/L TNF-α使HUVEC的分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达明显增加(P<0 01).2)阿司匹林浓度依赖性抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(P<0 01);阿司匹林浓度依赖性地抑制HUVEC的NF-κB p65 mRNA水平和蛋白表达(P<0 01).3)PDTC抑制TNF-α诱导的HUVEC分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达(均P<0 01).结论 阿司匹林通过NF-κB p65途径抑制TNF-α诱导的HUVEC 分形趋化因子mRNA水平和蛋白表达,并可能借此发挥抗动脉粥样硬化作用.     

纳米细菌对人脐静脉内皮细胞的损伤及超氧化物歧化酶分泌的影响

目的探讨纳米细菌对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤及超氧化物歧化酶(SOD)分泌的影响。方法用含有不同浓度纳米细菌的培养液培养HUVEC,采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力;用浓度为0.5 Mcfarland纳米细菌攻击HUVEC,分别于0、6、12、24、48、72 h检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和SOD水平。结果与对照组比较,纳米细菌(吸光度值为0.001、0.005和0.02)处理HUVEC CRL2480细胞48、72 h后,细胞活力显著降低(P0.05);与对照组比较,纳米细菌处理组细胞培养液中LDH和SOD浓度显著增高(P0.05),而MDA含量无显著变化(P0.05)。结论纳米细菌能损伤HUVEC,同时增加HUVEC中SOD活性。     

重组C反应蛋白促进脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2

目的观察重组C反应蛋白(CRP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应及蛋白质免疫印迹分析检测MMP-2mRNA转录和蛋白水平表达,观察不同浓度CRP及不同孵育时间对HUVEC MMP-2表达的影响。结果CRP呈浓度和时间依赖性增加培养HUVEC的MMP-2mRNA转录和蛋白水平的表达。结论CRP可上调HUVEC MMP-2表达。     

蒲黄提取物对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的 研究蒲黄提取物对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用.方法　体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用MTT法测定不同浓度蒲黄提取物对HUVEC的影响.以蒲黄提取物(100,50,10 mg/L)预处理细胞24 h,再加入100 mg/L ox-LDL造成细胞损伤,取培养细胞上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,HUVEC用于测定细胞细胞间黏附因子(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)mRNA的表达.结果 各剂量蒲黄提取物有显著的促进血管内皮细胞增殖的作用.与正常对照组比较,HUVEC经ox-LDL作用后,细胞活性显著下降,LDH的释放量和ICAM-1、MCP-1 mRNA的表达显著升高;100、50、10 mg/L 蒲黄提取物可显著降低LDH活性,下调ICAM-1、MCP-1 mRNA的表达.结论 蒲黄提取物具有促进脐静脉内皮细胞增殖的作用,并可抑制Ox-LDL诱导的HUVECs ICAM-1、MCP-1 mRNA表达的上调和LDH的释放,从而起到保护血管内皮细胞的作用.