Gas6对类风湿关节炎小鼠Th17/Treg细胞平衡和炎症反应的调控作用

目的探讨生长停滞特异性蛋白6（Gas6）对类风湿关节炎小鼠的保护作用及与辅助性T细胞（Th）17/调节性T细胞（Treg）的关系。方法将24只雄性DBA/1J小鼠按照随机数字表法分为对照组、胶原诱导的关节炎（CIA）组、CIA+生理盐水组和CIA+Gas6组,每组6只。在小鼠尾根部皮下注射弗氏完全佐剂与牛II型胶原蛋白混合乳剂0.1ml,21d后再次以弗氏不完全佐剂与牛II型胶原蛋白混合乳剂0.1ml构建CIA小鼠模型。模型建立后第42天记录小鼠关节炎指数（AI）评分;采集下腔静脉血1ml,以酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞因子IL-17和IL-10的表达;无菌切取脾脏,采用流式细胞术检测CD4+IL-17+细胞和CD4+Foxp3+细胞的比例;切取右踝关节,HE染色观察关节损伤情况。结果与对照组小鼠相比,CIA小鼠AI评分增高,踝关节存在明显的炎症细胞浸润和软骨破坏,血IL-17和IL-10水平均显著增加（均P＜0.05）;CIA小鼠脾脏CD4+IL-17+细胞比例升高,而CD4+Foxp3+细胞的比例下降（均P＜0.05）。与CIA组小鼠相比,CIA+Gas6组小鼠AI评分下降,踝关节炎症细胞浸润明显,软骨破坏减轻,血IL-17水平下降而IL-10水平升高（均P＜0.05）;同时CD4+Foxp3+细胞比例明显增加,而CD4+IL-17+细胞比例下降（均P＜0.05）。结论Gas6能够减轻CIA小鼠的关节损伤,机制可能与其抗炎和对Th17/Treg细胞平衡的调控作用有关。     

甲氨蝶呤对小鼠胶原诱导性关节炎的治疗作用及其机制

目的： 研究甲氨蝶呤关节周围注射后对小鼠胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis,CIA）的治疗作用及其机制。方法： 从初次免疫后第22天开始至50天止,每周3次关节周围注射甲氨蝶呤,PBS作阴性对照,对CIA小鼠关节炎严重程度进行评分并比较各组关节炎发生率,石蜡切片观察组织病理学变化,流式细胞术检测腹股沟淋巴结细胞中Th17细胞与Treg细胞的比例变化情况。结果： 甲氨蝶呤可以有效降低小鼠关节炎的发病率及平均关节炎指数(P＜0.001);石蜡切片显示甲氨蝶呤对炎症细胞浸润、血管翳的形成、软骨以及骨的破坏具有较好的抑制作用;流式细胞术检测显示甲氨蝶呤组Th17细胞比例降低,Treg细胞比例增加(P＜0.05)。结论： 甲氨蝶呤关节周围注射可以有效抑制类风湿关节炎的发展,其机制可能与下调Th17/Treg细胞的比率有关。     

艾灸调节胶原诱导的关节炎小鼠Treg/Th17细胞及Galectin-9实验研究

目的:探讨艾灸对小鼠胶原诱导的关节炎(CIA)炎症、Th17和Treg细胞的影响及Galectin-9在其中的作用。方法:复制Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎小鼠模型并予以艾灸治疗,观察艾灸治疗及Galectin-9注射对关节肿胀、关节滑膜病理表现的影响,流式细胞术分析Th17、Treg细胞变化,ELISA检测相关细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β、Galectin-9的含量。结果:CIA模型建立后,小鼠关节明显红肿,关节面粗糙、滑膜层变薄。经治疗,艾灸组、Galectin-9组小鼠关节红肿相对模型组有较明显的消退;而不治疗组、PBS组小鼠关节红肿无明显消退。上述4组小鼠关节评分组间差异经秩和检验比较,有统计学意义(P=0.04)。经艾灸治疗的小鼠病变关节面恢复平整,滑膜层较治疗前变厚,接近正常组。CIA模型小鼠Treg细胞显著下降、Th17细胞明显上升(P0.01);艾灸治疗和Galectin-9注入后,Treg细胞的数量有显著上升(P0.01),且两组无明显差异(P=0.36);艾灸治疗和Galectin-9注入后,Th17细胞数量显著性下降(P0.01),且两组无明显差异(P=0.71)。细胞因子Galectin-9在CIA模型小鼠脾脏中含量降低(P0.01),艾灸治疗和Galectin-9均能使其增高(P0.01),但艾灸治疗组不及Galectin-9组(P0.01)。CIA模型小鼠脾脏中IL-1β、IL-6、IL-17等致炎因子表达增高(P0.01);艾灸治疗及注入Galectin-9后它们的含量相应降低(P0.01),与不治疗组、PBS组比较差异有显著的统计学意义(P0.01);而抑炎因子IL-10、TGF-β在CIA模型小鼠脾脏中表达降低,艾灸治疗及Galectin-9注入后它们的表达明显提高(P0.01),与不治疗组、PBS组比较有显著的统计学差异(P0.01);Galectin-9注入后,Galectin-9组IL-1β、IL-6、IL-17含量提高(P0.01),与PBS组比较有显著的统计学差异(P0.01)。艾灸组中IL-1β、IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β含量与Galectin-9组比较有显著差异(P0.01,P0.01,P0.01,P0.01,P=0.01)。结论:艾灸治疗能改善CIA小鼠关节炎症,调节Th17/Treg细胞失衡;其机制可能与促进Galectin-9分泌有关。     

薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎小鼠Th17细胞分化作用研究

目的研究薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠体内Th17细胞及其细胞因子白细胞介素-17(IL-17A)的作用。方法健康SPF级DBA/1 7~8周雄性小鼠20只,测定造模对照组(经生理盐水治疗后CIA小鼠)、薏苡仁酯组(经薏苡仁酯注射液治疗后CIA小鼠)小鼠脾脏Th17细胞及血清中IL-17变化。应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏中Th17细胞的比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中IL-17A含量。结果经薏苡仁酯注射液治疗后,薏苡仁酯组CIA小鼠脾脏中Th17细胞比例较造模对照组显著降低(1.82%比4.99%,P0.05),小鼠血清中IL-17A的含量也明显低于造模对照组[(3.54±0.61)pg/m L比(8.31±0.25)pg/m L,P0.05]。结论薏苡仁酯对CIA小鼠Th17细胞具有分化作用。     

蜂毒肽对胶原诱导关节炎大鼠模型Th17/Treg平衡及炎症的影响

目的探讨蜂毒肽干预胶原诱导关节炎大鼠模型后对Th17/Treg平衡调控及关节炎症的影响。方法将30组SD大鼠随机分为正常对照组6只,其余24只SD大鼠于第1天尾根部注射牛II胶原,第10天再次注射II胶原建立胶原诱导关节炎模型,第14天淘汰6只未建模成功的大鼠,筛选出18只建模成功的大鼠按随机数字表法分为模型组、蜂毒肽组、甲氨蝶呤组,每组6只。第14天蜂毒肽组腹腔注射蜂毒肽(0. 5 mg/kg,隔日1次),甲氨蝶呤注射组注射甲氨蝶呤(每只1 mg,每周1次,共3次),模型组、正常组腹腔注射等量灭菌注射用水,第32天麻醉处死后,收集血清,ELISA法检测血清中TNF-α、IL-10、IL-17 A浓度,分离大鼠脾脏,提取淋巴细胞,MTS检测单个核细胞活性,流式细胞术检测Th17、Treg细胞的比例,HE染色观察踝关节病理变化。结果蜂毒肽、甲氨喋呤降低血清中TNF-α、IL-17 A浓度(P0. 01,P0. 05),升高IL-10浓度(P0. 05);蜂毒肽、甲氨喋呤抑制淋巴细胞活性(P0. 05);蜂毒肽、甲氨喋呤能下调Th17细胞比例(P0. 05),上调Treg细胞比例(P0. 01,P0. 05);蜂毒肽、甲氨喋呤组减少滑膜增生,抑制炎性细胞浸润,延缓骨和关节软骨破坏。结论蜂毒肽能调节胶原诱导关节大鼠模型Th17/Treg平衡,抑制关节的炎症。     

糖皮质激素对支气管哮喘小鼠Th17细胞的调节作用

目的 探讨地塞米松对支气管哮喘小鼠辅助性T细胞(Th)17表达的影响.方法 36只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和地塞米松组,每组12只.建立哮喘小鼠模型;采用肺功能仪测定气道呼气阻力(Re);HE染色观察肺组织炎症改变;收集BALF进行细胞计数;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺匀浆中IL-17和IL-23水平;流式细胞术检测脾脏单个核细胞中Th17细胞比例.结果 地塞米松组Re及气道炎症较哮喘组明显减轻;哮喘组IL-17和IL-23水平明显高于对照组,地塞米松组明显低于哮喘组;哮喘组Th17细胞显著高于对照组,地塞米松组则明显低于哮喘组.结论 地塞米松可下调哮喘小鼠中Th17细胞数量及相关细胞因子IL-17和IL-23水平,减轻哮喘小鼠的气道炎症.     

栀子苷对类风湿性关节炎大鼠Th17/Treg平衡和局部炎症因子的影响

目的考察栀子苷对类风湿性关节炎大鼠Th17/Treg平衡和局部炎症因子的影响。方法建立大鼠胶原诱导关节炎模型,通过病理切片观察踝关节组织变化,ELISA检测血清TNF-α,Western blot法检测转录因子Foxp3和ROR-γt的蛋白表达,免疫组化法检测关节滑膜组织IL-10、IL-17表达。结果模型组血清TNF-α、IL-17以及ROR-γt和关节滑膜IL-17表达较正常组显著升高(P0.01),而模型组血清IL-10浓度以及Foxp3和关节滑膜IL-10表达较正常组显著降低(P0.01),栀子苷中、高剂量组血清TNF-α、IL-17浓度以及ROR-γt和关节滑膜IL-17表达较模型组显著降低(P0.05~0.01),而血清IL-10浓度、Foxp3和关节滑膜IL-10表达较模型组显著升高(P0.05~0.01)。结论大鼠胶原诱导关节炎模型成模之后Treg/Th17会失衡,栀子苷可升高IL-10、Foxp3表达,降低IL-17、ROR-γt表达,提示其可能通过诱导Treg细胞生成同时抑制Th17细胞分化,从而恢复病变部位Treg/Th17的平衡。     

薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎小鼠Thl7细胞分化作用研究

目的：研究薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠体内Thl7细胞及其细胞因子白细胞介素-17(IL-17A)的作用。方法：测定造模对照组(经生理盐水治疗后CIA小鼠)、薏苡仁酯组(经薏苡仁酯注射液治疗后CIA小鼠)小鼠脾脏Th17细胞及血清中IL-17的变化。应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏中Thl7细胞的比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中IL-17A的含量。结果：经薏苡仁酯注射液治疗后,薏苡仁酯组CIA小鼠脾脏中Th17细胞的比例较造模对照组显著降低(P<0.05),小鼠血清中IL-17A的含量也明显低于造模对照组(P<0.05)。结论：薏苡仁酯对CIA小鼠Thl7细胞的分化作用。     

胶原诱导性关节炎小鼠Th17细胞的检测及意义

目的：研究Th17细胞及其相关细胞因子白细胞介素-17（IL-17）在胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）小鼠体内的变化。方法：利用Ⅱ型胶原蛋白建立小鼠CIA模型。应用流式细胞术（FCM）分析小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中IL-17的含量。结果：CIA小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例分别为（3．19&#177;0．70）％、（3．54&#177;0．97）％,显著高于正常对照组的（0．95&#177;0．34）％、（1．31&#177;0．47）％,P〈0．01。C1A小鼠血清中IL—17的含量也明显高于正常对照组（P〈0．05）。结论：Th17细胞及其分泌的细胞因子IL—17在CIA小鼠体内明显升高,并与疾病的发生密切相关。     

穴位埋线对大鼠CIA模型Treg/Th17相关细胞因子及滑膜组织病理形态学的影响

目的通过观察穴位埋线对大鼠胶元诱导型关节炎(CIA)模型血清Treg/Th17相关细胞因子及滑膜组织病理形态学的影响,从细胞因子角度以及组织病理形态学改变探讨其的作用机制。方法建立Ⅱ型胶原诱导大鼠胶原性关节炎模型,造模成功的大鼠随机分为模型组、来氟米特组、穴位埋线治疗组、来氟米特+穴位埋线治疗组。动态观察大鼠一般情况、各项关节炎活动指标、HE染色观察滑膜病理改变、ELISA法检测血清中IL-6、IL-17和TGF-β1含量。结果与模型组比较,各治疗组均能有效改善CIA大鼠关节肿胀以及关节炎指数;提高血清中TGF-β1含量和降低血清中IL-6、IL-17含量,各治疗组能有效减轻CIA模型滑膜组织关节炎炎症及病理形态的改变。结论穴位埋线治疗具有免疫调节作用,其可能调节Th17/Treg细胞平衡而显著减轻关节炎症和破坏。