虾青素在奥硝唑致少弱精子症大鼠氧化损伤中的保护作用研究

目的:探讨虾青素(AST)对奥硝唑(ORN)致少弱精子症大鼠精子质量的改善作用及其机制。方法:40只成年雄性SD大鼠,随机分成5组,每组8只。分别为A组(溶剂对照组):0.5%羧甲基纤维素钠溶剂+1 ml玉米油、B组(ORN低剂量造模组):ORN 400 mg/(kg·d)、C组(ORN高剂量造模组):ORN 800 mg/(kg·d)、D组(ORN低剂量造模+AST治疗组):ORN 400 mg/(kg·d)+AST 20 mg/(kg·d)、E组(ORN高剂量造模+AST治疗组):ORN 800 mg/(kg·d)+AST 20 mg/(kg·d),灌胃3周后水合氯醛腹腔麻醉大鼠;取1侧附睾尾部检测精子浓度和活力,另1侧附睾组织匀浆,检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果:与A组相比,B组附睾尾精子活力,附睾GSH-Px、SOD活性显著降低,MDA含量显著上升(P﹤0.05);C组附睾尾精子活力、浓度、睾丸系数,附睾组织GSH-Px、GR、CAT、SOD活性均显著降低,而MDA含量显著上升(P﹤0.05)。AST治疗组:与B组相比,D组附睾尾精子活力和附睾组织SOD活性显著增加[(45.3±8.7)%vs(66.3±8.9)%;(116.7±25.3)U/mg prot vs(146.1±23.8)U/mg prot,P﹤0.05],而MDA含量显著下降[(1.68±0.45)nmol/mg prot vs(1.19±0.42)nmol/mg prot,P﹤0.05];与C组相比,E组实验后体重增量、精子活力显著增加,而MDA含量显著下降[(89.0±9.5)%vs(99.9±4.1)%;(17.9±3.5)%vs(27.3±5.3)%;(2.03±0.30)nmol/mg prot vs(1.52±0.41)nmol/mg prot,P﹤0.05]。结论:AST可提高ORN致大鼠少弱精子症模型的精子质量,其机制可能是提高了大鼠附睾的抗氧化能力。     

L-肉碱在奥硝唑所致大鼠睾丸和附睾损伤中的保护作用

目的:探讨L-肉碱(LC)在奥硝唑(ORN)所致大鼠附睾和睾丸损伤中的的保护作用。方法:40只雄性SD大鼠(200～230g)随机均分为5组:①A组:给予0.5%的羧甲基纤维素钠(溶剂)灌胃;②B组:每天给予400mg/kgORN灌胃;③C组:每天给予800mg/kgORN灌胃;④D组:每天给予[ORN(400mg/kg)+LC(100mg/kg)]灌胃;⑤E组:每天给予[ORN(800mg/kg)+LC(100mg/kg)]灌胃。上述各组均连续灌胃20d,末次给药24h后,所有大鼠麻醉后处死,分别取睾丸、附睾,进行称重和HE染色,计算睾丸、附睾系数并观察睾丸和附睾病理组织学改变。结果:①与A组相比,B组睾丸、附睾系数明显降低(P<0.05);而C组睾丸、附睾系数为极显著性降低(P<0.01);D组与A组相比无差异,E组与A组相比有极显著性差异(P<0.01);②HE染色显示,与A组相比,B组睾丸生精小管内各级生精细胞排列基本整齐,部分生精小管管腔内有脱落的生精细胞,附睾管腔中精子数目下降,有时可见散在的生精细胞;C组大鼠睾丸生精小管管腔内均可见坏死脱落的生精细胞,附睾管腔中精子数目明显减少,且有较多的非精子细胞成分。D组睾丸生精小管无明显改变,附睾管腔中精子数目也未见明显下降;E组睾丸生精小管管腔内精子数目减少,可见坏死脱落的生精细胞,附睾腔中精子数目明显减少,并伴有较多的非精子细胞成分。结论:奥硝唑(ORN)可导致雄性大鼠附睾和睾丸病理组织学改变,LC对ORN引起大鼠附睾和睾丸损伤具有一定的保护作用。     

还少胶囊对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠生殖功能损伤的保护机制研究

目的:探讨还少胶囊对奥硝唑(ORN)诱导的弱精子症模型大鼠生殖功能损伤可能的保护机制。方法:将SD雄性大鼠随机分为4组,每组10只,分别是空白对照组、模型组、还少胶囊组和左卡尼汀组,除空白对照组外,其余3组采用ORN 400 mg/(kg·d)灌胃大鼠28 d,制成弱精子症大鼠模型。并同时连续给药28 d后,处死大鼠,检测大鼠附睾中左卡尼汀的含量,精子浓度、活率,附睾组织中有机阳离子转运子2(OCTN2)mRNA的表达,并观察大鼠睾丸组织病理结构。结果:还少胶囊组、阳性对照药左卡尼汀组与模型组相比,附睾左卡尼汀的含量均可明显提高(6 366.5、6 934.7 mg/L vs 2 880.3 mg/L,P<0.01);改善精子浓度[(46.19±14.23)、(42.25±6.11)×10~6/ml vs(34.58±10.25)×10~6/ml,P<0.01]、活率[(61.34±7.98)%、(61.34±7.98)%vs(42.59±7.54)%,P<0.01];上调附睾OCTN2 mRNA的表达量(27.26、27.15 vs 26.07,P<0.01);同时还少胶囊组能保护ORN造模导致的睾丸生精细胞的病理损伤,使生精细胞在生精小管形态、排列方式、生精细胞的活跃程度上与空白对照组更加接近。结论:还少胶囊对ORN诱导的弱精子症大鼠模型生殖功能损伤具有保护作用,能提高模型大鼠的精子浓度与活率,其机制可能与上调附睾OCTN2 mRNA的表达量、提高附睾左卡尼汀的含量有关。     

基于L-肉碱通路探讨灵归方对弱精子症大鼠生殖系统保护作用的实验研究

目的:探讨灵归方对奥硝唑(ORN)所致弱精子症大鼠生殖系统保护作用及其可能机制。方法:将40只体重200～230 g的雄性SD大鼠随机将其分为空白组、模型组、灵归方组、左卡尼汀组各10只。模型组:予400 mg/kg ORN灌胃;灵归方组:予灵归方浓缩液,按17.5 g生药/kg体重+400 mg/kg ORN灌胃;左卡尼汀组:予左卡尼汀100 mg/kg+400 mg/kg ORN灌胃;空白组:予等量0.5%羧甲基纤维素钠(CMC2Na);均1次/d,连续灌胃4周后,检测各组大鼠精液质量、附睾中L-肉碱的含量,大鼠附睾OCTN2 mRNA的表达并观察睾丸组织病理。结果:与模型组相比,各组精子浓度无统计学差异(P0.05),前向运动精子(PR)和前向+非前向运动(NP)精子百分率均高于模型组,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组相比,各组附睾的肉碱含量均提高,有统计学差异(P0.01)。灵归方组、左卡尼汀组OCTN2 mRNA表达量明显高于模型组,有统计学差异(P0.05)。睾丸病理观察结果发现,与空白组比较,模型组异常结构生精小管明显增多,排列不整齐,生精小管管腔缩小加重,管腔内精子及精子细胞数量减少,空腔型生精小管明显增多,生精小管内部各级生精细胞缺失,排列层次紊乱,上皮部分变性并出现空泡征;左卡尼汀组及灵归方组大鼠睾丸组织结构趋于正常,生精小管中各级生精细胞排列基本规整,生精小管结构基本正常。结论:①ORN可诱导大鼠产生弱精子症,且与降低附睾L-肉碱含量可能有关;②灵归方可以改善奥硝唑诱导的弱精子症大鼠精液活力;③灵归方可以改善ORN诱导睾丸的病理组织结构;④灵归方可以提高附睾中OCTN2 mRNA在附睾中的表达,其可能与提高附睾肉碱浓度有关。     

葆生精改善少弱精子症模型大鼠生殖功能的实验研究

目的研究葆生精对奥硝唑所致少弱精子症模型大鼠生殖功能的保护作用。方法取34只雄性SD大鼠,将大鼠按体质量随机分为溶剂对照组(7只)、少弱精子症模型组(8只)、生理盐水对照模型组(9只)和葆生精治疗模型组(10只)。除溶剂对照组外,其他各组灌服奥硝唑400 mg/(kg·d)。从奥硝唑灌胃的第15天开始,葆生精治疗模型组加用葆生精514 mg/(kg·d),生理盐水模型组加用葆生精等体积的生理盐水,连续给药三周。观察各组大鼠附睾精子浓度、活力和运动参数等指标变化,睾丸作HE染色观察组织形态学改变,检测睾丸中抗氧化酶SOD、GSH-Px酶活性,抗凋亡蛋白Bcl-2和凋亡蛋白Caspase-3的表达变化。结果与溶剂对照组相比,少弱精子症模型组大鼠附睾精子密度明显降低[(16.92±1.31)×10~6/m L vs (31.62±4.44)×10~6/m L],活力也明显降低[(54.13±2.58)%vs (88.33±4.04)%],差异均有统计学意义(P均0.01)。葆生精治疗模型组大鼠附睾的精子密度和活力比少弱精子症模型组明显增加,两组的密度分别为(26.34±3.16)×10~6/m L和(16.92±1.31)×10~6/m L,两组的活力分别为(78.4±2.43)%和(54.13±2.58)%,两组比较,P均0.01,而生理盐水对照组与少弱精子症模型组无明显差异,各组中直线速率、曲线速率等精子运动参数也表现为相同趋势。少弱精子症模型组大鼠睾丸组织中部分生精细胞脱落,层次排列紊乱,生精上皮细胞变薄,管腔内精子数量明显减少;葆生精治疗组大鼠睾丸中虽然各级生精细胞排列略稀疏,但生精上皮形态基本恢复,各级生精细胞及管腔内精子数目都有明显增加。与溶剂对照组相比,少弱精子症模型组大鼠睾丸中SOD和GSH-Px的酶活力均明显降低,分别为[(10.71±1.34) U/mg vs (30.02±5.42) U/mg和(58.33±20.23) U/mg vs (175.00±27.9) U/mg,差异均有统计学意义(P均0.01),葆生精治疗组两种酶活力均明显增加,分别为(34.30±8.24) U/mg和(220±55.41) U/mg。同时我们观察到与对照组相比,少弱精子症模型大鼠睾丸组织中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有所下降而凋亡蛋白Caspase-3的表达明显增加,葆生精治疗组Bcl-2表达增加而Caspase-3的表达下降。结论葆生精可通过提高少弱精子症模型大鼠的抗氧化能力,修复生殖系统的氧化损伤,抑制生精细胞凋亡,从而提高精子密度和活力,发挥对生殖系统的保护作用。     

大鼠精索静脉曲张模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及其IL-1和NO含量的变化

目的:研究大鼠左侧精索静脉曲张(VC)模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及白细胞介素-1(IL-1)和一氧化氮(NO)含量的变化。方法:选用雄性SD大鼠60只,均选择左侧精索静脉作为研究对象,建立VC模型。将大鼠随机分为3组:假手术组(SO)15只,VC后高位结扎组(VCT)组15只和VC模型对照组30只。模型对照组中随机选取15只大鼠作为VC1组,余下15只大鼠作为VC2组,分别测定VC1组和SO组、VC2组和VCT组大鼠精液质量及睾丸组织中IL-1和NO的含量并加以比较,采用TUNEL检测睾丸生精细胞凋亡情况。结果:所有大鼠均建模成功,VC1组精子浓度[(1.54±1.16)×10~6/ml]和精子活力[(44.23±15.46)%]均显著低于SO组[2.80±1.62)×10~6/ml、(72.34±12.62)%](P0.05),VCT组精子浓度[1.82±1.34)×10~6/ml]和精子活力[(51.21±12.62)%]较VC2组有显著提高[(1.04±1.21)×10~6/ml、(39.23±13.21)%](P0.05)。大鼠左侧睾丸NO[(0.172±0.030)ng/ml]、IL-1[(1.468±0.080)mg/ml]含量VC1组明显高于SO组[(0.134±0.021)ng/ml、(0.782±0.079)mg/ml](P0.05),VC2组左侧睾丸NO[(0.198±0.020)ng/ml]、IL-1[(1.994±0.090)mg/ml]含量明显高于VCT组[(0.141±0.010)ng/ml、(0.781±0.036)mg/ml](P0.05),而右侧睾丸2组比较差异无显著性(P0.05),而且NO与IL-1含量之间呈正相关关系(r=0.492,P0.01)。VC1组大鼠双侧睾丸生精细胞大量凋亡,左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05),SO组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01);VCT组大鼠左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05);VC2组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05);2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。VC2组、VCT组组内同侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),但VC2组、VCT组2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。结论:VC致睾丸组织中NO和IL-1含量升高,并加重睾丸生精细胞凋亡,可能是其致睾丸损伤、影响睾丸生精功能障碍的原因之一。     

参精固本丸对大鼠睾丸氧化应激损伤后生精功能的修复

目的:探讨补肾活血中药参精固本丸对氯化镉造模的氧化应激损伤大鼠睾丸、附睾、精子的抗氧化及生精功能修复作用。方法:将SPF级Wistar大鼠随机分为6组,每组12只,分别为正常对照组、模型对照组、五子衍宗丸组、参精固本丸高剂量组、参精固本丸中剂量组、参精固本丸低剂量组。除正常对照组外,各组腹腔注射氯化镉1 mg/kg,24 h后各组分别灌胃给药,每天1次,共给药56 d。模型对照组和正常对照组予等体积生理盐水灌胃,参精固本丸高、中、低剂量组分别予以8倍等效剂量(11.2 g/kg)、4倍等效剂量(5.6 g/kg)、2倍等效剂量(2.8 g/kg)参精固本丸溶液灌胃,五子衍宗丸组予以4倍等效剂量(4.5 g/kg)五子衍宗丸溶液灌胃。56 d后,处死实验动物,分别称取大鼠精囊、附睾、睾丸的质量并计算相应脏器系数,大鼠睾丸、附睾、精囊行病理组织学检测。留取附睾内精液,测定大鼠附睾精子浓度、活力、正常形态精子百分率。同时测定大鼠睾丸组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,血清睾酮(T)水平。结果:①参精固本丸高、中、低剂量组睾丸系数分别为(0.403±0.090)、(0.357±0.150)、(0.348±0.140)g/100 g,精囊系数分别为(0.347±0.115)、(0.336±0.090)、(0.320±0.065)g/100 g,高剂量组附睾系数为(0.156±0.030)g/100 g,均显著高于模型对照组[(0.237±0.098)、(0.241±0.118)、(0.099±0.088)g/100 g](P0.05或P0.01);②高、中、低剂量组精子浓度分别为(58.1±32.2)、(36.0±36.2)、(31.9±32.7)×10~6/ml,显著高于模型对照组[(10.5±17.7)×10~6/ml](P0.05或P0.01);高、中剂量组精子总活力分别为(26.5±15.5)%、(18.9±8.2)%,高、中剂量组正常形态精子百分率分别为(85.3±23.3)%、(65.8±28.1)%,均显著高于模型对照组[(9.5±13.0)%、(36.2±40.2)%](P0.05或P0.01);③参精固本丸高、中剂量组睾丸的GSH-PX水平分别为(5.70±1.73)、(5.42±2.35) U/mg prot,SOD水平分别为(52.7±14.6)、(51.3±14.7) U/mg prot,均显著高于模型对照组[(3.62±2.22)、(41.3±8.8)U/mgprot](P0.05或P0.01);高、中、低剂量组睾丸MDA水平分别为(0.41±0.29)、(0.44±0.19)、(0.47±0.20) nmol/mgprot,显著低于模型对照组[(0.69±0.28) nmol/mgprot](P0.05或P0.01);高、中、低剂量组大鼠血清T水平分别为(3.62±0.96)、(3.48±1.33)、(3.24±0.83)nmol/L,显著高于模型对照组[(2.56±0.75) nmol/L](P0.05或P0.01);④模型对照组全部生精小管均发生凝固性坏死并钙化,生精细胞及支持细胞消失,精囊管腔内分泌物减少,上皮乳头萎缩;附睾萎缩,管腔缩小,管腔内未见精子。与模型对照组相比,随着剂量增加,参精固本丸组具有生精功能的生精小管面积逐渐增加,精囊上皮恢复为高柱状,附睾管管腔逐渐增大,管腔内精子逐渐增多,疗效与剂量间有依从关系,参精固本丸高、中剂量组疗效明显好于五子衍宗丸组。结论:参精固本丸可以拮抗氧化应激损伤,提高实验大鼠睾丸抗氧化物酶、血清T水平、精液质量,修复睾丸、附睾、精囊组织病理损伤,改善生精功能。     

“生精散”对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响及其机制研究

目的:研究"生精散"对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响及其机制。方法:40只雄性SD大鼠随机分为假手术组(A组),对照组(B组),生精散组小(C组)、中(D组)、大剂量组(E组),每组8只。建立左侧睾丸扭转模型,B组自扭转前1 h开始给予每日灌胃生理盐水1 ml/d,C组(0.01 g/kg.d)、D组(0.02 g/kg.d)、E组(0.03 g/kg.d)分别按体重给予灌服生精散,连续35 d后处死大鼠,对大鼠进行精液常规分析,用RT-PCR检测大鼠精子CatSper1的表达。结果:a+b级精子百分率、精子存活率、精子浓度,CatSper1基因表达,与A组[(51.30±6.60)%、(69.01±7.20)%、(40.53±7.01)×106/ml、2.04±0.77]相比,B组[(15.30±6.30)%、(44.42±6.36)%、(21.00±6.14)×106/ml、1.12±0.50),均显著降低(P<0.01);与B组相比,D组[(51.63±3.20)%、(72.09±2.20)%、(55.30±5.90)×106/ml、2.11±0.20]、E组[(55.93±3.17)%、(73.01±2.11)%、(58.33±4.90)×106/ml、2.31±0.17]均显著升高(P<0.01),而C组[(18.02±0.23)%、(48.04±7.01)%、(22.87±2.10)106/ml、1.19±0.51]升高不明显(P>0.05)。结论:生精散可以促进睾丸扭转复位后精子质量的恢复,其机制可能与调节生精功能,提高精子细胞CatSper1基因的表达有关。     

强精片对不育模型SD大鼠细胞凋亡通路Fas/FasL的影响

目的:观察强精片对不育模型SD大鼠精液质量及Fas/Fas L通路的影响。方法:70只雄性SD大鼠随机分为空白组20只与雷公藤多甙片(GTW)灌胃造模组50只,灌胃3周后两组各取10只进行模型验证。证明模型成功后,将40只模型组大鼠,随机分为模型组、强精片低、中、高剂量组(剂量分别为GTW 20 mg/(kg·d)、GTW 20 mg/(kg·d)+强精片58 mg/(kg·d)、GTW 20 mg/(kg·d)+强精片105 mg/(kg·d)、GTW 20 mg/(kg·d)+强精片233 mg/(kg·d)),灌胃4周后取血处死,检测精液质量及睾丸组织Fas L凋亡因子表达。结果:模型组大鼠精子浓度[(10.94±3.58)×10~6/ml]、活力[(9.31±5.79)%]、活率[(24.03±6.93)%]降低明显,与空白组[(71.99±9.72)×10~6/ml]比较差异显著(P0.01);强精片各组在用药4周后精子浓度、活力、活率均有提高,其中强精片高[(59.66±4.53)×10~6/ml、(35.45±5.21)%、(61.97±9.75)%]、中剂量组[(40.89±4.90×10~6/ml、(24.41±4.79)%、(60.06±10.62)%]与模型组间存在极显著差异(P0.05或P0.01),并降低模型大鼠睾丸内凋亡因子Fas L表达(P0.05或P0.01)。结论:雷公藤多甙可能通过上调Fas/Fas L信号通路,诱导生精细胞凋亡,导致精子浓度、活力、活动率等指标降低,造成不育。而中药强精片可能通过降低睾丸内Fas L凋亡因子表达,提高大鼠生殖功能。     

L-肉碱对奥硝唑所致弱精子症大鼠的治疗作用

目的:探讨L-肉碱(LC)对奥硝唑(ORN)所致的弱精子症雄性大鼠的治疗作用。方法:性成熟雄性SD大鼠(200～230g)40只,随机均分为5组,连续灌胃20d,1次/d,每次1ml。A组(对照组):0.5%的羧甲基纤维素钠(溶剂);B组:ORN[400mg/(kg.d)];C组:ORN[400mg/(kg.d)]+LC[100mg/(kg.d)];D组:ORN[800mg/(kg.d)];E组:ORN[800mg/(kg.d)]+LC[100mg/(kg.d)]。将各组半数大鼠末次给药24h后,麻醉处死,取附睾,进行精子活力检测,并对附睾尾精子进行计数,剩余大鼠进行交配实验。结果:①与A组相比,B组,D组附睾头和附睾尾精子活力显著降低(P<0.05);精子数目显著减少(P<0.05)。②与B组相比,C组精子活力明显升高(P<0.05),精子数目明显增多(P<0.05),与A组比较无显著差异(P>0.05)。③E组大鼠的精子活力没有显著的提高,精子数目无明显增多,并且与D组相比没有差别(P>0.05)。结论:LC治疗后能提高ORN所致弱精子症大鼠的精子活力,增加精子密度。