慢性疼痛应激对雄性SD大鼠生殖相关参数的影响

目的 观察不伺时间段慢性疼痛应激后,SD大鼠生殖相关参数的变化.方法 建立坐骨神经分支选择性损伤模型.经不同时间疼痛应激后,于14 d、21 d和28 d处死大鼠,取睾丸、附睾称重,并对附睾尾精子计数,HE染色显示睾丸结构变化,western blot检测3 β-HSD蛋白表达的改变.结果 14 d和21 d手术组大鼠体重均略低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).不同时间段各组大鼠睾丸和附睾系数均无明显变化.28 d后手术组附睾尾精子相对计数显著低于对照组(P<0.05).HE染色显示,坐骨神经分支选择性损伤诱导疼痛应激28 d后睾丸生精上皮中生精细胞减少,生精小管腔内精子数量减少.Western blot结果显示28 d手术组3 β-HSD表达显著低于正常照组和假手术组(P<0.05).结论 慢性疼痛应激如其他方式应激一样,能引起大鼠附睾尾精子相对计数减少,睾丸生精上皮中生精细胞减少,睾丸内3 β-HSD含量降低,慢性疼痛应激降低了大鼠的生精功能.     

地黄多糖干预对低剂量X线照射小鼠生精细胞P53和bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨地黄多糖干预对低剂量X线照射损伤小鼠生精细胞中p53和bcl-2蛋白水平表达的影响。方法选择70只雄性昆明小鼠(5~6周龄;体重22±2g),随机分为:单纯照射组(1~3组),给药照射组(4~9组)和正常对照组(10组)。所有小鼠自照射前5d开始每天灌胃一次,分别给予0.2mL生理盐水灌胃(1~3组和10组)和地黄多糖(溶于0.2mL生理盐水)200mg/Kg(4~6组)、800mg/Kg(7~9组),共24次。照射组自第6天起采用X线每天一次全身照射,共15次;单次照射剂量分别为0.025、0.075、0.100Gy,剂量率为0.025Gy/min。所有小鼠在末次照射结束后48小时内脱颈法处死摘取睾丸,经Bouin氏液固定24h后石蜡包埋、切片。采用HE染色观察睾丸生精小管形态结构,免疫组织化学法检测生精细胞中P53及bcl-2蛋白的表达水平。结果随着单次低剂量X线照射剂量增加,HE染色可见照射组小鼠睾丸生精小管各级生精细胞数目逐渐减少,结构排列出现不同程度的紊乱;免疫组织化学可见生精细胞中p53蛋白表达水平逐渐增加,而bcl-2蛋白表达水平则逐渐下降。给予200mg/Kg及800mg/Kg地黄多糖灌胃能下调生精细胞中p53蛋白和上调bcl-2蛋白表达水平,但后者对p53及bcl-2蛋白表达水平调节作用更明显,两者具有显著统计学意义(P0.05)。结论地黄多糖对低剂量X线全身照射小鼠的损伤生殖功能有一定保护作用,其抗辐射作用机制部分可能与下调生精细胞中p53蛋白、上调bcl-2蛋白表达水平有关。     

毓嗣颗粒对甲基磺酸甲酯诱导少弱精子症小鼠的治疗机制研究

目的:探讨毓嗣颗粒对甲基磺酸甲酯(MMS)诱导少弱精子症(OAZ)小鼠模型的治疗作用。方法:30只雄性成年小鼠随机平均分为3组:正常对照组、OAZ模型对照组及毓嗣颗粒组。使用MMS建立小鼠少弱精子症模型,对建模成功后的小鼠采用毓嗣颗粒治疗,检测附睾精子数量和活率,对小鼠睾丸进行HE染色观察生精小管形态,使用RT-PCR检测生殖细胞、支持细胞及血-睾屏障等相关基因的表达,使用氧化应激指标检测小鼠血液中氧化应激的水平变化。结果:正常对照组、OAZ模型对照组、毓嗣颗粒组附睾精子计数分别为(49.2±0.7)、(23.6±0.4)、(38.4±0.5)×10~7/(ml·g),活率分别为(76.3±0.7)%、(5.0±5.8)%、(71.5±0.5)%,与正常对照组比较,OAZ模型对照组精子计数和活率均显著下降(P<0.05);毓嗣颗粒治疗后,与OAZ模型对照组比较都明显增加(P<0.05)。与正常对照组比较,OAZ模型对照组小鼠睾丸的生精小管退化、萎缩,生精上皮变薄,各级细胞排列紊乱,管腔内精子数目减少,各生精细胞之间的层次不够清晰;毓嗣颗粒治疗后小鼠睾丸的生精小管排列规则,整齐,层次清晰,排列有序,毓嗣颗粒能够显著恢复MMS造成的生精小管退化。MMS、毓嗣颗粒均可以影响原始生殖细胞基因(Vasa、Dazl)的表达,也影响精细胞相关基因(Snd1)表达(P<0.05)。但是不影响精原干细胞标志相关基因(Gfra、Plzf)、减数分裂起始相关基因Stra8、精母细胞相关基因(Spo11、Sycp3)、支持细胞相关基因Sox9以及血睾屏障相关基因Vim的表达(P>0.05)。与正常对照组比较,SOD在MMS处理后显著降低(P<0.05),毓嗣颗粒喂药后较OAZ模型对照组的水平显著升高(P<0.05);超氧阴离子的表达则与SOD相反。结论:MMS会导致少弱精子症,可能与氧化损伤有关,毓嗣颗粒对MMS导致的少弱精子症有一定的恢复作用,可能与氧化应激相关。     

多次低剂量X线照射对小鼠睾丸组织形态及生精细胞P53和bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨多次低剂量X线照射对小鼠睾丸组织形态及生精细胞P53和bcl-2蛋白表达的影响.方法采用0、0.025、0.075及0.1Gy X线多次照射小鼠,以HE染色观察睾丸生精小管形态结构,免疫组织化学法测定生精细胞中P53及bcl-2蛋白的表达水平.结果随着单次低剂量X线照射剂量增加,HE染色结果显示照射组小鼠睾丸出现生精小管各级生精细胞数目逐渐减少,结构排列紊乱等不同程度的组织病理改变;免疫组织化学可见生精细胞中P53蛋白表达水平逐渐增加,而bcl-2蛋白表达水平则逐渐下降.结论低剂量X线多次全身照射可引起小鼠睾丸组织病理改变,并上调生精细胞P53蛋白、下调bcl-2蛋白表达水平,从而诱导凋亡.     

吸烟对雄性小鼠睾丸间质细胞、睾酮及精子数量的影响

目的探讨吸烟对雄性小鼠的睾丸间质细胞、血清睾酮含量及附睾精子数量的影响。方法雄性小鼠50只,随机分为5组,即经吸烟处理后6周、12周(吸烟组),未经特殊处理的6周、12周小鼠(对照组),及吸烟6周后戒烟6周(戒烟组)小鼠。对5组小鼠睾丸组织进行HE染色,光镜下观察支持细胞、问质细胞形态及结构;免疫组化方法分别计数5组小鼠睾丸支持细胞及问质细胞数量;利用酶联免疫法(ELIsA)测定小鼠体内睾酮含量:用石墨炉原子吸收光谱法测定血清镉含量;同时计数附睾精子数。结果 HE染色可见吸烟6周小鼠睾丸问质细胞数量减少;吸烟12周小鼠睾丸问质细胞数量稀少甚至消失:而睾丸支持细胞数量及形态与对照组相比未见明显改变。免疫组化发现吸烟组小鼠睾丸支持细胞数量与对照组相比无显著差异(P0.05)。问质细胞数量随吸烟时间延长而显著减少(P0.01);小鼠血清中睾酮水平吸烟组明显低于对照组(P0.01),且随吸烟时间的延长而下降(P0.01):吸烟组小鼠附睾精子汁数较对照组显著下降(P0.01),并且与吸烟时间呈正相关(P0.01)。而戒烟组中,睾丸问质细胞、血清睾酮含量、附睾精子数量3组数据都较吸烟组增高。结论吸烟可导致睾丸间质细胞的破坏,影响体内睾酮的生成,进而导致生精障碍,而戒烟可逆转此现象。     

麒麟丸对无精子症模型小鼠睾丸生精功能的影响

目的:探讨麒麟丸是否促进无精子症模型小鼠生精功能恢复,揭示其调控睾丸生精功能的机制。方法:取15只4周龄ICR雄性小鼠,随机分成模型组、麒麟丸低剂量组、麒麟丸高剂量组,每组5只。采用白消安建立无精子症小鼠模型。建模后麒麟丸组每天给予不同剂量麒麟丸灌胃给药[低剂量组和高剂量组分别为2 000、8 000 mg/(kg·d)],模型组予正常饮食处理,28 d后颈椎脱臼法处死小鼠。HE染色检测小鼠附睾和睾丸组织显微结构,Western印迹检测小鼠睾丸中各级生精细胞、支持细胞和间质细胞特异性标志物表达情况,免疫荧光染色检测睾丸内这些标志物的定位与表达情况。结果:模型组小鼠睾丸中各级生精细胞数量明显减少,大多数附睾管中未见精子; Johnsen评分(5. 2±0. 5)分。麒麟丸高剂量组小鼠生精小管腔内生精细胞排列紧密、层次分明,附睾管腔中见大量精子,未见非精子细胞成分; Johnsen评分(9. 4±0. 6)分。麒麟丸低剂量组小鼠睾丸中各级生精细胞数量相比较模型组有所提升,但是对比高剂量组仍明显减少,部分附睾管中可见精子; Johnsen评分(7. 6±0. 6)分。Johnsen评分模型组显著低于麒麟丸高、低剂量组(P 0. 01),而且麒麟丸高、低剂量组间也有统计学差异(P 0. 05)。Western印迹结果显示,支持细胞标志物GATA4、WT1、SCF、BMP4的表达水平模型组均显著低于麒麟丸高、低剂量组(P 0. 01),高剂量组显著高于低剂量组(P 0. 05或0. 01);精原干细胞和未分化精原细胞标志物UCHL1、STRA8、NGN3、PLZF 3组小鼠间无显著差异;精母细胞标志物DMC1、SYCP3模型组也均显著低于麒麟丸高、低剂量组(P 0. 05或P 0. 01),高剂量组显著高于低剂量组(P 0. 05或P 0. 01)。免疫荧光染色结果显示,SYCP3的表达与Western印迹结果一致; Ki67荧光信号分布在精原细胞,其荧光信号强度模型组低于麒麟丸高、低剂量组;精子顶体标志物PNA主要分布在生精小管内,模型组小鼠没有出现明显的点状信号,麒麟丸高、低剂量组可见大量的荧光信号。结论:麒麟丸可能是通过改善睾丸中支持细胞的功能,从而促进精原细胞进入减数分裂,增加精子的生成。     

抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠睾丸和精原干细胞相关因子表达的影响分析

目的 探讨抗肿瘤药物环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对雄性大鼠睾丸、精原干细胞及相关因子八聚体结核转录因子4(OCT-4)、胶质细胞源神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响.方法 选取16只8周龄Wister雄性大鼠采用随机数字表法分为CTX组和对照组各8只,CTX组采取连续3d腹腔注射CTX(50 mg/kg),对照组采取等量生理盐水,对比两组大鼠给药后1、2、4周的精子细胞凋亡数及S期细胞所占比例的变化;对比两组大鼠给药4周后的睾丸、附睾重量、生精小管直径差异;采用免疫组化染色检测两组睾丸OCT-4、GDNF蛋白的表达情况.结果 CTX组大鼠在给药后1、2、4周的生精细胞凋亡数均显著的高于同期的对照组(P＜0.05);CTX组大鼠在给药后1、2、4周的生精细胞S期所占细胞比例均显著的低于同期的对照组(P＜0.05);CTX组大鼠在给药4周的睾丸、附睾重量显著地低于同期的对照组(P＜0.05);两组大鼠的生精小管直径差异无统计学意义(P＞0.05);CTX组大鼠睾丸组织中GDNF蛋白阳性表达显著地低于对照组大鼠(P＜0.05);两组大鼠的OCT-4蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CTX具有诱导精原细胞凋亡的作用,干扰精原细胞增殖分化功能,可能与下调睾丸组织中GDNF有关.     

JQ1对脂多糖所致小鼠生精功能障碍的影响

目的 探讨JQ1对脂多糖(LPS)所致小鼠生精功能障碍的影响及相关机制。方法 40只8周龄雄性C57BL/6J小鼠，随机分为溶媒对照组(DMSO+NS)、模型组(DMSO+LPS)和药物干预组(JQ1+LPS),每组小鼠的数量分别为n=13、n=15和n=12,单次腹腔注射LPS诱导炎症动物模型。取材后，称量睾丸、附睾尾的重量，采用精子计数法检测小鼠精子数量，伊红染色检测精子的畸形率，苏木精-伊红(HE)染色检测睾丸形态变化；TUNEL试剂盒检测睾丸生殖细胞凋亡情况；Western blot检测凋亡基因(Bax和Bcl2)的表达情况；生化试剂盒检测睾丸丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)表达情况。结果 LPS导致小鼠附睾尾重量显著下降(P<0.05),精子数量显著下降(P<0.001);精子畸形率显著升高(P<0.01);睾丸形态结构破坏，生精小管萎缩，管腔直径变小，各级生精细胞排列紊乱，管腔内精子数量减少；睾丸中凋亡细胞数量显著上调(P<0.01);Bax/Bcl2的比值显著上升(P<0.01);MDA含量显著增加(P<...     

单次热应激处理对小鼠睾丸生精细胞的影响

目的:探讨单次热应激对小鼠睾丸生精功能可复性研究。方法:C57雄性小鼠36只,随机按1、7、14 d各分为对照组(n=6)和热应激组(n=6)。热应激组和对照组小鼠下腹部分别在43℃和25℃水浴中干预15 min,于处理后1、7、14 d取材。计算睾丸器官指数,HE染色观察睾丸组织结构变化,免疫组化染色检测早幼粒白血病锌指蛋白(PLZF)和联会复合体蛋白3(SCP-3)在睾丸组织中的定位及表达,Western印迹检测PLZF蛋白表达水平。结果:热应激组小鼠睾丸器官指数明显低于对照组(P0.01)。HE染色可见,热应激组与对照组相比,热应激后第1天生精细胞排列松散,散落在生精小管中;第7天生精小管萎缩,排列疏松,生精细胞明显减少;第14天生精小管排列较为紧密,生精细胞数量增加,生精细胞层数增多。与对照组相比第1、7天热应激组SCP-3标记的精母细胞明显减少,第14天精母细胞数量开始恢复。Western印迹检测结果显示,PLZF蛋白在热应激处理后1 d表达量显著降低(0.19±0.02 vs 0.64±0.03,P0.01),第7、14天又迅速增加(0.77±0.02、0.77±0.02),且显著高于对照组(P0.01)。结论:小鼠睾丸热应激处理后可致生精功能发生障碍,随着时间的推移,这种损伤具有可复性。     

环磷酰胺小鼠少精子模型的构建及枸杞煎提液的治疗作用

目的研究环磷酰胺(CP)小鼠少精子模型的构建方法,以及评价枸杞煎提液对少精子症的治疗作用。方法小鼠分别以60、80、100mg/kg CP腹腔注射,qid,连续5d,测定精子相对数和睾丸组织切片,得出最适CP剂量;再以高低剂量(20g/kg、10g/kg)枸杞煎提液给最适CP剂量构建的少精子小鼠灌胃14d,测定精子相对数、睾丸组织切片和流式细胞仪检测生精细胞倍性。结果 3种剂量CP处理组精子相对计数、生精小管面积、直径、生精上皮细胞层数(CMSE)均显著低于空白对照组和生理盐水组(P0.001);枸杞高低剂量组精子相对计数、生精小管面积、直径、CMSE显著高于阳性对照组(P0.001);枸杞高剂量组与阳性对照组比在单倍体细胞(1C细胞)比例上显著降低,四倍体细胞(4C细胞)比例上显著升高(P0.05),枸杞低剂量组与阳性对照组比在二倍体细胞(2C细胞)比例上显著升高(P0.05)。结论 60mg/kg CP为构建小鼠少精子模型的适宜剂量;枸杞煎提液对少精子症有一定治疗效果,可能与促进4C细胞增殖有关。     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。