vMIP-ⅡN端肽对趋化因子受体CXCR4表达调控的机制研究

目的:探讨病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ（vMIP-Ⅱ）对乳腺癌细胞CXCR4表达的影响及分子机制。方法:设计并合成扩增CXCR4核心启动子基因序列,构建荧光素酶报告载体,酶切鉴定;通过检测报告基因荧光素酶活性反映病毒巨噬细胞炎性蛋白N端21肽（NT21MP）对CXCR4启动子的作用;通过荧光定量PCR技术和Western blot检测CXCR4干扰或过表达、HER-2干扰,以及miRNAs抑制剂和类似物转染后相关基因及miRNAs表达;采用磺酰罗丹明B（SRB）染色法检测细胞增殖活性,PI染色法检测细胞周期,Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡。结果:NT21MP下调CXCR4的表达,并上调miR-125b、miR-135a和miR-146a的表达（P < 0.05~P < 0.01）;NT21MP降低CXCR4核心启动子的活性;SP1为CXCR4核心启动子高频结合转录因子,miR-135a可下调SP1的表达（P < 0.01）;过表达CXCR4上调HER-2表达（P < 0.01）,而干扰CXCR4表达则下调HER-2表达（P < 0.01）;miR-125b可下调HER-2的表达（P < 0.01）;HER-2表达下调诱导miR-146a的表达;miR-146a抑制CXCR4表达（P < 0.01）;相对于空白对照组,miR-146a和miR-135a均可抑制细胞增殖,阻断细胞周期,并诱导凋亡（P < 0.01）。结论:NT21MP通过诱导miR-125b、miR-135a和miR-146a负调控CXCR4的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖能力,为NT21MP应用于乳腺癌患者的治疗提供了理论基础。     

免疫性血小板减少症患者外周血中microRNA-181a、microRNA-146a、microRNA-326及microRNA-142-3p的表达

目的 通过检测4种免疫相关的microRNAs （miR-181a、miR-146a、miR-326和miR-142-3p）在免疫性血小板减少症（ITP）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中的表达,探讨miRNA在ITP中的作用及意义。方法 采用实时定量PCR（RT-PCR）法,检测34例ITP患者（ITP组）及31例健康人（正常对照组）外周血PBMCs中4种miRNAs的表达水平;改良MAIPA法检测ITP组中22例患者抗血小板自身抗体GPIIb/IIIa、GPIb/IX,分析miRNA与抗血小板自身抗体的关系,以及与血小板计数等临床指标的相关性。结果 ITP组PBMCs中miR-146a、miR-326和miR-142-3p表达水平与正常对照组相比明显降低（P<0.05）,miR-146a与miR-326 (r=0.437, P=0.011）,miR-146a与miR-181a (r=0.652, P<0.001),miR-326与miR-181a(r=0.745, P<0.001）的表达水平均呈显著正相关,且miR-146a与ITP患者血小板计数呈正相关（r=0.468,P=0.016）。ITP组不同性别间4种miRNAs表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。ITP组中26例患者接受糖皮质激素治疗后,有效组与无效组4种miRNAs表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。GPIb/IX、GPIIb/IIIa单阳性组、双阳性组和双阴性组间miRNAs的表达水平均无显著性差异（P>0.05）。结论 miR-146a、miR-326及miR-142-3p表达异常在ITP的发生和发展中可能发挥了一定的作用。     

微小RNAs与肿瘤关系的研究进展

微小RNAs(miRNAs)是一类非编码的内源性小分子RNA,在生物体内发挥着重要作用,是基因表达重要的调节分子。其中let-7miR-143、miR-145、miR-181a、miR-181b、miR-181c、miR-199a*、miR-195、miR-199a、miR-200a、miR-125a和miR-125b-1对人类某些肿瘤的发生或发展过程中通过调节其相应的靶基因,发挥抑癌基因的作用;而miR-372、miR-373、miR-155、miR-21以及miR-17-92基因簇均对某些肿瘤具有促进作用,在肿瘤的发生或发展中发挥癌基因的作用。     

miRNAs在甲状腺乳头状癌中的表达及临床病理意义

目的：探讨甲状腺乳头状癌（PTC）中特征性的miRNA表达谱以及临床病理意义。方法对52例PTC及7例良性甲状腺肿瘤手术切除标本采用基因芯片技术及RNA印迹杂交法检测miRNA的表达,对过表达的miRNA表达水平与PTC临床病理特征之间的关系进行分析。结果（1）用基因芯片技术筛检发现 PTC 组织中5例过表达的 miRNAs（miR-375、miR-34a、miR-146b、miR-222、miR-31）。（2）RNA印迹杂交法验证芯片结果及检测其他miRNAs结果显示：miR-34a、miR-146b、miR-31、miR-21和miR-221在PTC组织中的表达水平较癌旁正常甲状腺组织显著升高（P＜0.05）。MiR-146b和miR-221在PTC组织中的过表达率较良性甲状腺肿瘤组织显著升高（P＜0.01）。PTC患者中包膜侵犯组、淋巴结转移组、TNM分期III- IV期组及AGES系统评分≥5分组miR-221的表达水平均明显高于相应对照组（P＜0.05或0.01）;而男性PTC患者的miR-146b表达水平明显高于女性PTC患者（P＜0.05）。结论 miR-146b、miR-221、miR-21和miR-31的过表达与PTC的发生、发展有关;过表达的miR-221和miR-146b与PTC的预后不良有关。     

外周血中miRNAs表达水平对精神分裂症的诊断价值

目的:探讨外周血中miRNAs的表达水平对精神分裂症的诊断价值.方法:选取40例精神分裂症患者作为观察组,40例健康体检者作为对照组.实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)鉴定精神分裂症患者外周血液中miRNAs表达情况.通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价miRNAs的诊断效能.采用可视化和集成发现数据库(DAVID)工具对miRNAs靶基因进行基因功能和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果:两组受试对象外周血miR-30d-5p、miR-181b-3p、miR-652-5p、miR-193a-3p、miR-181b-5p、miR-346、miR-572、miR-7-5p、miR-564、miR-548d-3p和miR-30a-5p表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p表达水平高于对照组(P<0.05);miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p的ROC曲线下面积(AUC)值分别为0.763,0.659和0.725,三者联合检测的AUC值为0.802.miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p靶基因与突触结构和神经功能密切相关,三者共同靶基因SATB2和PER2在精神分裂症患者中异常表达(P<0.05).结论:miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p在精神分裂症中异常表达,三者及其靶基因结合有望作为精神分裂症诊断规范和治疗监测的生物标记物.     

阿尔茨海默病患者血清miR-6867-5p表达水平及诊断价值研究

目的 研究miR-6867-5p在阿尔茨海默病（AD）患者血清中的表达水平及其诊断价值,分析其参与AD的可能机制。方法 选取2021年11月-2022年6月就诊于江苏大学附属医院神经内科门诊的52例AD患者作为AD组,另选取同期在医院体检中心进行常规体检的28名健康体检者为对照组,收集两组血清标本及临床基本资料。使用实时荧光定量PCR方法检测AD组在治疗前及盐酸多奈哌齐治疗6个月后的血清miR-6867-5p表达水平,简易智力状态检查（MMSE）、蒙特利尔认知评估（MoCA）量表评价AD患者的认知功能,分析血清miR-6867-5p与量表评分之间的相关性。使用受试者工作特征（ROC）曲线评估miR-6867-5p在AD中的诊断效能。利用在线预测工具预测miR-6867-5p的靶基因,通过R语言分析包对其进行功能及信号通路富集分析。结果 AD组在治疗前血清miR-6867-5p表达水平高于对照组（Z=-4.65）,治疗后血清miR-6867-5p低于治疗前（Z=-5.54）,差异均有统计学意义（P均<0.01）。血清miR-6867-5p的表达水平与MMSE和MoCA评分成负相关（...     

MicroRNA-181b和microRNA-130a在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血浆中的表达及临床意义

目的探讨microRNA-181b（miR-181b）和microRNA-130a（miR-130a）在冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）患者血浆中的表达及临床意义。方法选取106 例冠心病患者和40 例健康者作为对照组,收集临床资料,行冠状动脉造影检查及Gensini评分,利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测冠心病患者和对照组血浆中miR-181b 和miR-130a 的表达,利用受试者工作特征曲线（ROC 曲线）对血浆中miR-181b 和miR-130a 的相对表达量在评估冠心病患者病程进展中的价值进行分析。结果冠心病患者血浆中miR-181b 和miR-130a 相对表达量与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,冠心病患者血浆中miR-181b 相对表达量低于对照组,而miR-130a 相对表达量则高于对照组,冠心病患者中,中重度组患者血浆miR-181b 相对表达量低于轻度组,而miR-130a 相对表达量则高于轻度组;Pearson 相关分析显示,冠心病患者血浆中miR-181b 相对表达量均与Gensini 积分、脂蛋白a（Lp-a）、高敏C 反应蛋白（hs-CRP）呈负相关（r =-0.504、-0.382 和-0.415,p <0.05）,血浆中miR-130a 相对表达量均与Gensini 积分、Lpa 和hs-CRP 呈正相关（r =0.586、0.335 和0.394,p <0.05）;ROC 曲线分析显示,冠心病患者血浆中miR-181b 相对表达量在评估患者病程进展时,曲线下面积0.871（95%CI：0.807,0.936）,敏感性75.0%,特异性82.3%,血浆中miR-130a 相对表达量在评估患者病程进展时,曲线下面积0.931（95%CI：0.887,0.976）,敏感性93.2%,特异性81.2%。结论冠心病患者血浆中miR-181b 表达水平降低,而miR-130a 表达水平升高,且均与患者病情严重程度有关,可作为评估患者病情进展的指标。     

血清miR-146a／b实时荧光定量分析及其作为分子标志物的初步评价

目的：以特异性调节Toll样受体信号通路的miR-146a／b为检测靶标,建立血清miRNAs分子荧光定量检测方法,并对其作为血清炎症分子标志物的潜在价值进行初步评价。方法：采集正常体质量儿童血清20例（对照组）、超重儿童血清20例（超重组）、肥胖儿童血清20例（肥胖组）及健康成年人血清50例（健康成人组）,酚-氯仿法提取血清总RNAs,SYBRGreen实时荧光定量技术定量检测血清中miR-146a／b拷贝数,GraphpadPrism5．0软件进行统计分析并绘图。结果：对照组血清中miR-146a的拷贝数显著低于超重组（P=-0．0061）和肥胖组（P=-0．0262）,超重组和肥胖组之间差异无统计学意义（P=0．0656）。miR-146a表达量的受试者工作特征曲线下面积（AUC）分析显示：对照组vs超重组AUC=O．8475,P=-0．0002;对照组vs肥胖组AUC=0．6050,P=-0．2560;超重组vs肥胖组AUC=0．5475,P=0．6073。miR-146b与miR-146a呈不同表达趋势,超重组儿童血清miR-146b拷贝数显著高于对照组（P=-0．0090）和肥胖组儿童（P=0．0023）,肥胖组儿童血清中miR-146b的拷贝数均值虽略低于对照组,但差异无统计学意义（P=-0．1556）。miR-146b表达量的AUC分析显示：正常组vs超重组AUC=0．7425,P=O．0087;正常组vs肥胖组AUC=0．6325,P=0．1517;超重组vs肥胖组AUC=0．7825,P=0．0023。miR．146a／b拷贝数值变异系数（CV）大：对照组、超重组和肥胖组儿童血清中miR。146a拷贝数的cv值分别为80．94％、110．94％、175．88％;miR-146b拷贝数的cV值分别为164．11％、189．72％、152．00％。在健康成人血清中miR-146a／b呈现相近表达模式,miR-146a和miR-146b的cV值分别是37．86％、74．82％。结论：miR-146a在对照组、超重组和肥胖组的表达量变化显示其与儿童肥胖具有-定相关性,可以从整体水平说明miR-146a与体内炎症水平呈正相关关系,但是由于其在血清中拷贝数值变异较大且各组问无明确分界,不能确定其参考值范围。因此,血清miR-146a／b拷贝数差异不足以用于临床个体化诊断,血清miR-146a／b作为炎症相关分子标志物的价值尚需进一步探讨。     

血清miR-210、miR-181a表达水平与慢性阻塞性肺疾病稳定期患者糖皮质激素治疗效果的关系及其预测价值研究

背景 吸入性糖皮质激素（ICS）是慢性阻塞性肺疾病（COPD）的常用治疗药物,但其治疗效果评价研究较为缺乏。微小核糖核酸（miR）被证实参与COPD的发病,其中miR-210、miR-181a与COPD患者关系密切。目前临床有关miR-210、miR-181a与COPD患者ICS治疗效果的关系研究较为缺乏。 目的 探讨血清miR-210、miR-181a表达水平与COPD稳定期患者ICS治疗效果的关系及其预测价值。 方法 收集2017年1月至2020年6月于三六三医院门诊治疗的COPD稳定期患者86例,行布地奈德福莫特罗粉吸入剂治疗4周后进行治疗效果评价,将肺功能分级降低≥1个级别或慢性阻塞性肺疾病评估测试（CAT）评分降低≥2分判断为有效并归为有效组,其余纳入无效组。检测患者治疗前后的肺功能指标〔包括用力肺活量（FVC）、第一秒用力呼气容积（FEV1）、最大呼气流量（PEF）〕、CAT评分与血清miR-210、miR-181a表达水平。采用Pearson相关分析探讨ICS治疗前与治疗4周后血清miR-210、miR-181a表达水平与肺功能指标、CAT评分的相关性,并绘制ROC曲线以分析血清miR-210、miR-181a表达水平对COPD稳定期患者ICS治疗效果的预测价值。 结果 ICS治疗后,COPD稳定期患者FVC、FEV1、PEF等高于治疗前,CAT评分及血清miR-210、miR-181a表达水平低于治疗前（P<0.05）。ICS治疗前患者血清miR-210、miR-181a表达水平与CAT评分呈正相关（P<0.05）。ICS治疗后患者血清miR-210、miR-181a表达水平与FEV1呈负相关（P<0.05）。有效组治疗前与治疗后的血清miR-210、miR-181a表达水平低于无效组（P<0.05）。治疗前miR-210、miR-181a表达水平预测COPD患者ICS治疗效果的ROC曲线下面积为0.807、0.844。 结论 ICS治疗有效的COPD稳定期患者治疗前与治疗后的血清miR-210、miR-181a表达水平均低于无效患者,且治疗前血清miR-210、miR-181a表达水平可较好地预测ICS治疗效果。     

The pathophysiological and molecular basis of Bartter's and Gitelman's syndromes

Molecular defects affecting the transport of sodium, potassium and chloride in the nephron through the ROMK K⁺ channel, Na⁺/K⁺/2Cl^- cotransporter, the Na⁺/Cl^- cotransporter and chloride channel have been identified in patients with Bartter''s and Gitelman''s syndromes. Defects of the angiotensin II type I receptor and CFTR have also being described. These defects are simple (ie, most are single amino acid substitutions) but affect key elements in tubular transport. The simplicity of the genetic defects may explain why the inheritance of these conditions remains unclear in most kindreds (ie, not just recessive or dominant) and emphasises the crucial importance of the conformational structure of these channels. Application of this molecular information will allow the early genetic identification of patients with these syndromes and enable us to differentiate between the various disorders at a functional level. It may also identify a sub-group in which the heterozygous form may make patients potentially exquisitely sensitive to diuretics.


     

Gradenigo's syndrome

Gradenigo's syndrome, which is characterised by the triad of suppurative otitis media, pain in the distribution of the trigeminal nerve, and abducens nerve palsy may give rise to potentially fatal complications. Knowledge of the aetiology and appropriate investigations can lead to early diagnosis. A case is reported which illustrates this.     

Fournier's gangrene and its emergency management

Fournier's gangrene (FG) is a rare but life threatening disease. Although originally thought to be an idiopathic process, FG has been shown to have a predilection for patients with diabetes as well as long term alcohol misuse; however, it can also affect patients with non-obvious immune compromise. The nidus is usually located in the genitourinary tract, lower gastrointestinal tract, or skin. FG is a mixed infection caused by both aerobic and anaerobic bacterial flora. The development and progression of the gangrene is often fulminating and can rapidly cause multiple organ failure and death. Because of potential complications, it is important to diagnose the disease process as early as possible Although antibiotics and aggressive debridement have been broadly accepted as the standard treatment, the death rate remains high.     

Management of non-Hodgkin's lymphomas

The non-Hodgkin''s lymphomas (NHL) are a heterogenous group of disorders characterised by malignant proliferation of lymphoid cells. The cellular origin is relatively well established with subtypes corresponding to the various stages of lymphocyte differentiation. The term encompasses a hotchpotch of conditions with very different morphological appearance, behaviour and clinical outcome. NHL comprise 2.4% of all cancers, with incidence increasing with age. The commonest presentation is with progressive lymphadenopathy, though extranodal manifestations are present in a significant proportion. The clinical behaviour ranges from a benign, indolent course to rapidly progressive disease; prognosis varies from weeks to many years. Treatment is correspondingly diverse, from `watchful waiting'' to high-dose chemotherapy with bone marrow stem cell transplantation. Cure is possible in an increasing number of patients and much interest currently lies in identifying patients with high-risk disease necessitating the use of intensive treatment regimens.


     

两种不同方法在黑热病诊断中的应用比较

目的:比较用骨髓检查和rK39试纸条2种不同方法对于临床黑热病现症患者检测的效果.方法:以rK39试纸条样品带区出现红色条带为阳性,骨髓检查中查到利什曼原虫为阳性,并比较两种不同方法对诊断黑热病的效果.结果:检测病例372例.354例做骨髓检查,阳性254例(阳性率(71.75%),阴性100例,未做18例(rK39均阳性);做rK39检测125例,阳性110(阳性率88.0%),阴性15(骨髓检查阳性13例);骨髓+rK39均做107例,双阳性51例,双阴性2例,骨髓阳性,rK39阴性13例,骨髓阴性,rK39阳性41例.结论:两种方法单一阳性检出率统计学差异有显著性,说明rK39试纸条法在诊断黑热病中更具有优势,该法快速、简便、敏感性和特异性高,费用相对低、患者痛苦小,更适于黑热病的诊断.骨髓检查做为病原学检查,是确诊实验,两者结果应互为参考.     

3''R,4''R-二取代角型吡喃香豆素的不对称合成

目的:寻找具有钙离子拮抗作用和乙酰胆碱酯酶抑制活性双重作用机制的早老性痴呆(Alzheimer′sDisease,AD)新型抑制剂。方法:间二苯酚为底物,AD-mix-β作不对称双羟基化试剂进行凯林内酯类香豆素的全合成;所有产物进行乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制活性测试。结论:立体选择性地合成cis3′-R,4′R-二取代角型二氢吡喃香豆素,但AchE抑制活性明显低于cis3′-R,4′R-二取代线型二氢吡喃香豆素。     

抗菌肽PR39真核表达载体的构建及其在巨噬细胞中的表达和抗菌作用

目的 构建抗菌肽PR39的真核表达载体,转染后观察PR39在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达及抗菌作用.方法 采用拼接PCR法合成抗菌肽PR39基因,克隆到真核表达载体pIRES2-GFP中,经鉴定后用阳离子脂质体转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过RT-PCR和免疫荧光法检测目的 基因的表达,并对其抗菌活性进行初步检测.结果 成功构建了抗菌肽PR39的真核表达载体pIRES2-GFP/PR39,并能在小鼠巨噬细胞RAW264.7中表达抗菌肽PR39.表达抗菌肽PR39的巨噬细胞杀灭和清除胞内菌的能力明显增强.结论 抗菌肽PR39基因能够在小鼠巨噬细胞RAW264.7中表达并发挥抗菌作用.     

基于蒙特利尔病变部位分型的克罗恩病患者临床特征分析

目的 探讨回肠末段型（L1）、结肠型（L2）及回结肠型（L3）克罗恩病（CD）患者的临床特征、实验室检查、疾病行为等方面的差异。方法 回顾性研究2021年1月—2022年6月武汉大学人民医院181例CD患者的临床资料,其中L1型CD患者66例,L2型CD患者20例,L3型CD患者95例。收集患者临床资料和实验室检查结果等,分析3组患者在临床特征和实验室检查结果等方面的差异。多因素二元Logistic回归分析L1、L2和L3型CD患者临床特征。绘制受试者工作特征（ROC）曲线,分析部分临床特征预测CD病变部位的效能。结果 L1组患者平均年龄大于L3组患者（P <0.05）。L1组患者黏液脓血便构成比低于L2和L3组患者（P <0.05）。L1组患者平均血小板计数低于L3组患者（P <0.05）。L1组患者肛周病变构成比低于L2和L3组患者（P <0.05）。多因素二元Logistic回归分析结果显示,L2型CD［O^R =1.017（95% CI：1.004,1.031）］和L3型CD［O^R =1.026（95% CI：1.016,1.037）］与CD疾病活动指数（CDAI）相关（P <0.05）,L3型CD［O^R =7.088（95% CI：2.390,21.018）］与肛周病变风险增加相关（P <0.05）。ROC曲线分析结果显示,与L1型CD比较,当血沉为29.50 mm/h时,L2型CD的ROC曲线下面积（AUC）为0.724（95% CI：0.579,0.868）,此时预测L2型CD敏感性为77.8%（95% CI：0.519,0.926）,特异性为64.1%（95% CI：0.510,0.754）;当血小板计数取临界值307×10⁹/L时,L3型CD的AUC为0.702（95% CI：0.618,0.785）,此时预测L3型CD敏感性为72.3%（95% CI：0.602,0.826）,特异性为65.2%（95% CI：0.554,0.752）。结论 L1型、L2型及L3型CD患者的临床表现、实验室检查、疾病行为等均存在差异,基于这些特征将有助于鉴别CD患者的不同病变部位。