葡萄籽多酚体外逆转胆囊癌细胞株GBC-SD多药耐药作用的研究

目的:研究葡萄籽多酚(GSP)逆转胆囊癌先天性耐药细胞株GBC-SD耐药的作用,寻找高效低毒的耐药逆转剂。方法:选择GBC-SD为研究对象,MTT比色法测定各化疗药物的半数抑制浓度(IC50),RT-PCR测定MDR1mRNA的变化,流式细胞仪检测P-gp蛋白和细胞内阿霉素浓度的变化。结果:①无毒(3μg/ml)和低毒(6μg/ml)剂量浓度的GSP处理后各化疗药物的IC50值均明显降低(P〈0.05),能明显逆转GBC-SD的多药耐药性;②无毒(3μg/ml)和低毒(6μg/ml)剂量浓度的GSP能下调GBC-SD细胞MDR1mRNA表达(P〈0.05);③无毒(3μg/ml)和低毒(6μg/ml)剂量浓度的GSP能下调GBC-SD细胞P-gp蛋白表达(P〈0.05);④GSP增加GBC-SD细胞内ADM药物浓度(P〈0.05)。结论:GSP能部分逆转先天性耐药细胞株GBC-SD多药耐药性,作用机制为下调GBC-SD细胞MDR1mRNA及P-gp蛋白表达。     

细胞外信号调节激酶通路在儿童原发性肾病综合征激素耐药中的作用机制探讨

目的探讨细胞外信号调节激酶（ERK）通路在儿童肾病综合征糖皮质激素耐药中的作用机制。方法①收集儿童肾病综合征激素耐药和激素敏感患儿外周血单个核细胞（PBMCs），Western-blot印迹法检测磷酸化ERK水平，激光共聚焦显微镜观察糖皮质激素受体GRa核转位情况，计算核浆比；②体外观察ERK抑制剂U0126对激素耐药患儿PBMCs GRa核转位的影响；③超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B型（SEB）体外诱导糖皮质激素抵抗模型中ERK活化时程；④观察ERK抑制剂U0126逆转超抗原SEB诱导的糖皮质激素抵抗作用；⑤观察ERK抑制剂U0126对激素抵抗细胞模型GRa核转位的影响。结果①激素耐药患儿PBMCs存在显著的ERK磷酸化以及糖皮质激素受体GRa核转位障碍；②ERK抑制剂U0126可以逆转激素耐药患儿PBMCs糖皮质激素受体GRa核转位障碍；③超抗原SEB体外诱导可以导致糖皮质激素抵抗发生，ERK抑制剂U0126后可解除SEB诱导的激素抵抗；④SEB作用1min后即出现p-ERK1／2，在24h仍维持在高水平表达。结论激素耐药患儿PBMCs存在显著的ERK活化，体外超抗原SEB刺激PBMCs后出现糖皮质激素抵抗，其作用机制显著持续的ERK活化，ERK抑制剂可逆转激素耐药患儿PBMCs及体外超抗原SEB诱导的糖皮质激素抵抗发生。     

肿瘤坏死因子α对人肺腺癌细胞耐顺铂的逆转作用

目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人肺腺癌细胞株A549/DDP耐顺铂(DDP)的逆转作用,探讨其逆转耐药的机制.方法 以噻唑蓝(MTT)法检测TNF-α 250、1000 U/ml与DDP联用对A549/DDP细胞的细胞毒性作用,以膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染法检测TNF-α 250、1000 U/ml与DDP联用对A549/DDP细胞的凋亡.结果 250、1000 U/ml TNF-α可使DDP对A549/DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)从7.12 mg/L分别降至5.02、4.28 mg/L,能够逆转A549/DDP对DDP的耐药,逆转倍数分别为1.418、1.663(P＜0.01).细胞凋亡试验中250、1000 U/ml TNF-α+DDP(7.12 mg/L)两组细胞凋亡率同无药组和DDP组比较,明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 TNF-α能够逆转A549/DDP对DDP的耐药,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

中药复方肝癌-1号逆转肝癌多药耐药的实验研究

目的分析中药复方肝癌-1号逆转阿霉素(ADM)诱导的HepG2/ADM细胞的多药耐药性的机制。方法以亲本细胞HepG2为对照,MTT法观察肝癌-1号对HepG2/ADM细胞的毒性作用;流式细胞仪检测肝癌-1号作用后细胞表面p-糖蛋白(P-gp)表达阳性率;逆转录聚合酶链式反应检查多药耐药基因(MDR1)mRNA表达水平;MTT法观察肝癌-1号处理后的HepG2/ADM细胞对阿霉素、表阿霉素、氟尿嘧啶耐药的逆转作用。结果肝癌-1号<50μmol/L对HepG2/ADM细胞无明显毒性,半数抑制率(IC50)为75μmol/L;50μmol/L的肝癌-1号可部分抑制HepG2/ADM细胞P-gp合成及MDR1 mRNA的表达,可逆转HepG2/ADM的耐药性,对阿霉素、表阿霉素、氟尿嘧啶的逆转倍数分别为3.94(P<0.01),1.72(P<0.05),1.67(P<0.05)。结论肝癌-1号通过抑制HepG2/ADM耐药细胞MDR1 mRNA的表达及P-gp合成,能部分逆转HepG2/ADM的耐药性。     

中药复方肝癌-1号逆转肝癌多药耐药的实验研究

目的 分析中药复方肝癌-1号逆转阿霉素（ADM）诱导的HepG2／ADM细胞的多药耐药性的机制。方法 以亲本细胞HepG2为对照，MTT法观察肝癌-1号对HepG2／ADM细胞的毒性作用；流式细胞仪检测肝癌1号作用后细胞表面p-糖蛋白（P-gp）表达阳性率；逆转录聚合酶链式反应检查多药耐药基因（MDR1）mRNA表达水平；MTT法观察肝癌-1号处理后的HepG2／ADM细胞对阿霉素、表阿霉素、氟尿嘧啶耐药的逆转作用。结果 肝癌-1号〈50μmol／L对HepG2／ADM细胞无明显毒性，半数抑制率（IC50）为75μmol／L；50μmol／L的肝癌-1号可部分抑制HepG2／ADM细胞P-gp合成及MDR1 mRNA的表达，可逆转HepG2／ADM的耐药性，对阿霉素、表阿霉素、氟尿嘧啶的逆转倍数分别为3．94（P〈0．01），1．72（P〈0．05），1．67（P〈0．05）。结论 肝癌-1号通过抑制HepG2／ADM耐药细胞MDR1 mRNA的表达及P-gp合成，能部分逆转HepG2／ADM的耐药性。     

红景天苷对缺氧肾小管上皮细胞Toll受体2、IL-6表达及其凋亡的影响

目的:观察红景天苷(salidroside Sal.)对氯化钴(cobaltous chloride,Co Cl2·6H2O)诱导的缺氧人肾小管上皮细胞(human kidney tubular epithelia cell,HKC)Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR-2)表达、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的分泌及细胞凋亡的影响。方法:HKC细胞置于六孔板培养,随机分为正常对照组、缺氧模型组、红景天苷(salidroside Sal.)干预组(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)。其中缺氧模型采用300μmol/L氯化钴处理6 h得到,红景天苷干预组在此模型基础上再用不同浓度的红景天苷处理缺氧细胞24 h。RT-PCR和Western blot检测TLR-2的表达,ELISA检测各组细胞上清中IL-6含量,流式细胞仪检测缺氧HKC凋亡情况。结果:氯化钴诱导HKC TLR-2蛋白(P<0.05)及RNA表达上调(P<0.01)、IL-6分泌增加(P<0.01)及细胞凋亡增加(P<0.01)。25μg/ml和50μg/ml的红景天苷能降低缺氧HKC细胞IL-6的水平(P<0.01),50μg/ml红景天苷抑制作用强于25μg/ml(P<0.05)。与缺氧模型组比较,尽管100μg/ml红景天苷能降低缺氧HKC细胞IL-6的绝对值水平,但差异无统计学意义(P>0.05)。25μg/ml,50μg/ml和100μg/ml红景天苷均能抑制TLR-2蛋白表达(P<0.01),且100μg/ml较25μg/ml红景天苷抑制作用显著(P<0.05),但25μg/ml与50μg/ml、50μg/ml与100μg/ml红景天苷比较,它们抑制作用的强弱差异无统计学意义(P>0.05)。三种浓度的红景天苷也能抑制缺氧HKC TLR-2的RNA表达(P<0.01),50μg/ml及100μg/ml红景天苷抑制作用强于25μg/ml红景天苷(P<0.05),但50μg/ml与100μg/ml红景天苷比较,二者抑制作用差异无统计学意义(P>0.05)。50μg/ml和100μg/ml红景天苷能抑制缺氧HKC凋亡(P<0.01),但25μg/ml红景天苷未表现出抑制凋亡的作用(P>0.05),50μg/ml与100μg/ml红景天苷比较,两者抑制凋亡的作用差异无统计学意义(P>0.05)。结论:红景天苷对缺氧HKC的TLR-2蛋白及RNA表达、IL-6的分泌及细胞凋亡均有抑制作用,但其抑制效应呈现非剂量依赖性。     

复方仙贞汤抑制成骨细胞凋亡的实验研究

目的 观察不同浓度的复方仙贞汤对TNF-α诱导的成骨细胞凋亡的影响。方法 TNF-α培养液诱导体外培养成骨细胞凋亡后，分别加入不同浓度的复方仙贞汤，用流式细胞仪检测其对成骨细胞的凋亡率。结果 复方仙贞汤1μg／ml组和500μg/ml组细胞凋亡率明显降低，与模型组和空白对照组相比，差异非常显著，其中1μg/ml组作用更强。500μg／ml可能是通过影响成骨细胞周期中的G0-G1和S期而达到抑制凋亡作用的，而1μg／ml组还能增加G2-M期成骨细胞。结论 复方仙贞汤能抑制TNF—α诱导的成骨细胞凋亡，以低浓度(1μg／ml)抑制作用较好。     

肿瘤坏死因子α对人肝癌多药耐药逆转作用的实验研究

目的研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）对体外培养的人肝癌耐阿霉素细胞系（HepG2／ADM）多药耐药现象的逆转作用。方法不同浓度（100、500及2500U／ml）TNF-α作用于HepG2／ADM细胞72h后进行以下试验：用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测各组多药耐药相关基因（MDR1）及脂质过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPAR-α）基因的mRNA表达情况;用罗丹明外排法检测各组P-糖蛋白活性;用Annexin V检测0．5mg／L阿霉素诱导的各组细胞凋亡情况;利用MTF法检测各组耐药性的改变。结果TNF-α能诱导HepG2／ADM细胞的MDR1基因表达下调,PPAR-α基因表达上调,且能增加阿霉素诱导的凋亡细胞的比例及细胞毒作用。结论TNF-α可能分别通过抑制MDR1表达及促进PPAR-α表达而逆转HepG2／ADM细胞的耐药性。     

地塞米松对马兜铃酸诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的：探讨地塞米松（DXT）对马兜铃酸（aristolochic acid,AA）诱导的人近端肾小管上皮细胞凋亡的影响及其可能机制。方法：应用不同浓度DXT处理经AA诱导的近端肾小管上皮细胞株（HK-2细胞）48h;应用Hoechst33258染色法和流式细胞技术检测HK-2细胞凋亡百分率;应用RT-PCR法测细胞Caspase-3 mRNA的表达;应用分光光度法测细胞Caspase-3酶活性。结果：40μg/mlAA可显著促进HK-2细胞凋亡,DXT可显著降低AA诱导的HK-2细胞凋亡百分率,并呈剂量依赖趋势;各组细胞Caspase-3mRNA表达水平无统计学差异;40μg/mlAA可显著升高HK-2细胞Caspase-3酶活性;而100MDXT组细胞Caspase-3酶活性较单纯40μg/mlAA刺激显著降低,而其他浓度DXT组细胞Caspase-3活性与单纯AA比较无统计学差异。结论：DXT对AA所致HK-2细胞凋亡有一定的保护作用,其机制可能是抑制细胞凋亡过程中Capease-3酶的激活。     

RNA干扰逆转人胃癌细胞多药耐药的研究

目的：研究RNA干扰沉默多药耐药（multidrug resistance,MDR）基因对胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-Fu生长的影响。方法：构建靶向MDR1的shRNA干扰质粒转染人胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-FU,噻唑蓝（MTT）法检测耐药细胞对5-Fu的敏感性,实时荧光定量PCR（Real-time-PCR）检测MDR1 mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞P-gp表达的变化,流式细胞术检测细胞周期变化、凋亡情况。结果：与RNAi-control组和normal组相比,RNAi-MDR1组细胞干扰质粒细胞的IC50明显降低,为2.104±0.242（P〈0.05）,敏感性的相对逆转率为76.8%;MDR1 mRNA表达明显下调（P〈0.05）;P-gp的表达水平降低（P〈0.05）;凋亡率明显升高至（5.757±0.684）%。结论：应用RNA干扰有效抑制了MDR1的表达,使P-gp的表达降低,增强了BGC-823/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性,为寻找逆转胃癌细胞多药耐药有效方法奠定了基础。     

Treatment strategy based on targeting P-glycoprotein on peripheral lymphocytes in patients with systemic autoimmune disease

Although corticosteroids, immunosuppressants and disease-modifying antirheumatic drugs (DMARDs) are widely used in the treatment of various systemic autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus (SLE), we often experience patients with systemic autoimmune diseases who are resistant to these treatments. P-glycoprotein (P-gp) of membrane transporters, a product of the multiple drug resistance (MDR)-1 gene, is known to play a pivotal role in the acquisition of drug resistance to chemotherapy in malignancy. However, the relevance of MDR-1 and P-gp to resting and activated lymphocytes, which are the major target in the treatment of systemic autoimmune diseases, remains unclear. Studies from our laboratories found surface expression of P-gp on peripheral lymphocytes in patients with SLE and a significant correlation between the expression level and disease activity. Such expression is induced not only by genotoxic stresses but also by various stimuli including cytokines, resulting in active efflux of drugs from the cytoplasm of lymphocytes, resulting in drug-resistance and high disease activity. However, the use of both P-gp antagonists (e.g., cyclosporine) and inhibition of P-gp synthesis with intensive immunosuppressive therapy successfully reduces the efflux of corticosteroids from lymphocytes in vitro, suggesting that P-gp antagonists and P-gp synthesis inhibitors could be used to overcome drug-resistance in vivo and improve outcome. In conclusion, lymphocytes activated by various stimuli in patients with highly active disease apparently acquire MDR-1-mediated multidrug resistance against corticosteroids and probably some DMARDs, which are substrates of P-gp. Inhibition/reduction of P-gp could overcome such drug resistance. The expression of P-gp on lymphocytes is a promising marker of drug resistance and a suitable target to combat drug resistance in patients with active systemic autoimmune diseases.     

脂多糖作用下腹膜间皮细胞骨桥蛋白表达及乌司他丁的影响

目的：观察脂多糖对大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）中骨桥蛋白（OPN）表达的影响;观察乌司他丁（ulinastatin）作用下RPMC的OPN细胞分布及mRNA表达的影响。方法：胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代细胞融合至80%时分组。正常对照组：不同浓度LPS（50,100μg/ml）组;50μg/mlLPS作用不同时间（8,12,24,34,48h）组;乌司他丁组：（160,320,640U/ml）与LPS50mg/L作用24h,RealTime-RT-PCR技术检测骨桥蛋白（OPN）、TGF-β1mRNA的表达。结果：LPS可刺激RPMC的骨桥蛋白表达显著增加,呈剂量、时间依赖性（P〈0.05）;乌司他丁可降低LPS引起的RPMC中的骨桥蛋白表达,呈剂量依赖性（P〈0.05）。结论：脂多糖通过上调骨桥蛋白的表达,引起腹膜损伤导致腹膜纤维化,乌司他丁可以一定程度抑制骨桥蛋白引起的腹膜纤维化过程。     

沙利霉素逆转P-gp介导的肾癌ACHN细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨沙利霉素对肾癌ACHN细胞多药耐药的逆转及其机制.方法 实验分为对照组、阿霉素组、沙利霉素组及阿霉素和沙利霉素联合用药组,药物作用24 h后,CCK-8方法 检测肾癌细胞的生长活性,免疫细胞化学法检测肾癌细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达情况.结果 10 μg/ml 阿霉素对肾癌ACHN细胞的生长抑制率仅为4.758%.沙利霉素组对肾癌ACHN细胞生长抑制率呈剂量依赖性,并高于阿霉素组(P<0.05),其中以10 μmol/L组抑制率最高(达17.555%).联合用药组的生长抑制率高于沙利霉素组及阿霉素组(P<0.05),以10 μmol/L 沙利霉素 +10 μg/ml 阿霉素组的抑制率最高(达45.447%).与阿霉素组比较,经沙利霉素处理过的肾癌ACHN细胞中的P-gp蛋白表达下降(P<0.05).结论 沙利霉素增强了肾癌ACHN细胞对阿霉素的敏感性,耐药性逆转的机制之一可能与沙利霉素下调癌细胞中P-gp的表达有关.     

衣霉素诱导内质网应激对树突状细胞成熟分化的影响

目的:内质网应激(ERS)是真核细胞中普遍存在的适应性应激反应,本研究应用ERS特异性诱导剂衣霉素(TM)体外刺激小鼠脾脏树突状细胞(DC),观察DC功能状态的改变情况.方法:分离正常BALB/c小鼠脾脏DC进行体外培养,给予ERS特异性诱导剂TM刺激,观察不同剂量、不同作用时间TM刺激与DC表面共刺激分子表达及分泌功...     

红景天对AOPPs诱导小鼠足细胞转分化的影响

目的:探讨红景天(salidroside)对晚期氧化蛋白产物(AOPPs)诱导小鼠足细胞转分化的影响。方法:以小鼠永生性足细胞系为研究对象。给予200μg/ml的AOPP刺激小鼠足细胞24h,同时加入红景天(浓度分别为0.1μmol、1μmol、10μmol、100μmol、200μmol)进行干预,采用Westernblot检测内质网应激标志性蛋白Grp78、CHOP以及平滑肌激动蛋白(α-SMA)、nephrin、podocin的表达水平。结果:200μg/mlAOPP条件下小鼠足细胞表达高水平的Grp78、CHOP及α-SMA,表达低水平的nephrin和podocin;予不同浓度红景天作用后,足细胞中Grp78、CHOP及α-SMA的表达水平降低,neph-rin和podocin的表达水平升高。结果表明红景天可部分逆转AOPPs的作用,且存在一定的剂量依赖性。结论:红景天对AOPPs诱导的足细胞Grp78、CHOP过度表达有很好的抑制作用,这可能是它减轻肾脏纤维化的机制之一。     

大黄酸对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞血小板反应蛋白1表达的影响

目的探讨大黄酸对转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）血小板反应蛋白1（thrombospondin-1,TSP1）表达的影响。方法体外培养细胞,观察TGF-β1（4ng／ml）诱导下低、中、高浓度的大黄酸（10μg／ml、20μg／ml和40μg／ml）对HK-2细胞TSP1 mRNA和蛋白表达的影响。Real Time PCR检测TSP1 mRNA表达,Western Blot检测TSPI蛋白表达。结果与空白对照组比较,TGF-β1（4ng／ml）明显上调HK-2细胞TSP1 mRNA和蛋白表达。与TGF-β1（4ng／ml）阳性对照组比较,中浓度和高浓度大黄酸明显抑制了TSP1 mRNA和蛋白表达。结论大黄酸能抑制TGF-β1诱导的HK-2TSP1 mRNA和蛋白表达。     

促红细胞生成素对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损伤保护作用的初步观察

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对马兜铃酸（AA）刺激后肾小管上皮细胞再生的影响。方法：以5、10、20雠倒AA刺激LLC—PK1细胞株，同时培养体系中加入不同浓度的EPO（5、10、20U/ml），另设对照组。各组细胞培养24h后．TUNEL法原位检测细胞凋亡情况，免疫组化检测细胞PCNA的表达。结果：TUNEL结果表明，经AA5μg／ml刺激后．核染色阳性的细胞百分比与对照组比较无明显差异，而AA10μg／ml、20μg／ml刺激后，核染色阳性的细胞百分比与对照组比较明显增加（P〈0.05）；经EPO干预后，EPO 10U/ml和EPO 20U/ml可明显降低AA10μg／ml组阳性细胞的百分比（P〈0．05）。免疫组化显示：经AA5μg／ml刺激后，细胞核PCNA阳性表达增加，而经AA10μg／ml、20μg／ml刺激后，细胞核PCNA阳性表达逐渐减弱；加入不同剂量的EPO后，AA10μg／ml组PCNA阳性细胞均增多（P〈0.05）。结论：EPO可抑制AA诱导的肾小管上皮细胞凋亡、并促进细胞的再生，这可能是EPO对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损伤的保护机制之一，其作用机制有待进一步深入研究。     

丹参酮ⅡA对兔纤维环细胞能量代谢的保护作用

[目的]考察丹参酮ⅡA(TSⅡA)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的兔纤维环细胞能量代谢障碍的保护作用.[方法]藻酸盐串珠立体培养兔纤维环细胞,将细胞分为7组,在培养过程中加入不同浓度的药物:A组为空白对照不加入药物,B组加入4 μg/ml TSⅡA,C组加入10ng/ml IL-1β,D～G组在给予10 ng/mlIL-1β同时分别加入0.5、1、2和4 μg/ml TSⅡA.于培养3 d后行Na+-K+-ATP酶活性检测、,琥珀酸脱氢酶活性检测、MTT法细胞增殖情况检测以及细胞凋亡的流式细胞仪检测.[结果]G组Na+-K+-ATP酶活性(3.23±0.28U/mgprot)较C组(1.118±0.15U/mgprot)明显增高(P<0.01),与A组接近(3.57±0.15 U/mgprot)(P>0.05).G组琥珀酸脱氢酶活性(12.48±0.97U/mgprot)较c组(3.03±0.60 U/mgprot)明显增高(P<0.01),与A组接近(14.24±1.56 U/mgprot)(P>0.05).G组MTT试验吸光度(0.77±0.06)较C组(0.31±0.07)明显增高(P＜0.01),随着TSⅡA浓度的升高,D～G组吸光度随着TsIIA上升而上升.G组细胞死亡细胞比例和凋亡细胞比例分别为21.08±1.46%和8.99±0.33%,均显著低c组(43.11±2.7,P<0.01和11.71±0.32,P<0.01).[结论]TSIIA能够减轻IL-1β对纤维环细胞能量代谢的抑制作用,从而改善纤维环细胞的增殖、死亡及凋亡.