硒对丝裂霉素C致淋巴细胞遗传损伤的影响

背景与目的:观察硒对丝裂霉素C(mitomycin-C,MMC)诱导的人外周血淋巴细胞遗传损伤是否具有保护作用.材料与方法:在体外培养的淋巴细胞中,24 h时分别加入不同剂量的硒0、1、6和10 μmol/L,MMC 0和0.1 mg/L,培养72 h后,分别采用染色体畸变分析(CA)、姐妹染色单体互换技术(SCE),以及彗星试验(SCGE),对硒能否抑制MMC诱导的外周血淋巴细胞遗传损伤进行检测.结果:(1 μmol/L和6 μmol/L硒+MMC)组的淋巴细胞平均尾长、SCE互换率和CA畸变率低于阳性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).(6 μmol/:硒+MMC)组的DNA损伤程度低于(1 μmol/L硒+MMC)组和(10 μmol/L硒+MMC)组.结论:硒对MMC造成的人外周血淋巴细胞遗传损伤具有一定的保护作用,在本实验条件下,以6 μmol/L硒组的保护作用最强.     

WTK1细胞在tk位点突变和DNA损伤与修复中的应用

背景与目的:为WTK1细胞在遗传毒理学可同时应用于基因突变和DNA损伤的研究提供实验依据.材料与方法:分别用标准诱变剂甲基磺酸甲酯(MMS)和过氧化氢(H2O2)处理WTKl细胞,采用tk基因突变试验和单细胞凝胶电泳技术(Single Cell GelElectrophoresis,SCGE)对细胞的tk位点突变和过氧化氢诱发的DNA损伤情况进行检测.结果:甲基磺酸甲酯可诱发WTKl细胞tk位点的突变,以诱发染色体畸变为主.过氧化氢诱发了WTKl细胞DNA的损伤,并有剂量反应关系.随着修复孵育时间的延长,彗星细胞尾长和彗星细胞出现率明显下降,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.01).结论:WTKl细胞可同时应用于tk基因突变和DNA损伤与修复的研究.采用该细胞株可对化合物进行基因突变和DNA损伤进行研究评价.     

亚硫酸氢钠（二氧化硫）对人血淋巴细胞染色体畸变、姊妹染色单体互换及微核的效应

本文研究结果表明：亚硫酸氢钠(二氧化硫)，0．1mol／L浓度加入体外培养液，能够引起人血淋巴细胞姊妹染色单体互换(SCE)和微核(MN)率的增加，可使淋巴细胞有丝分裂周期延迟及细胞分裂指数下降．且这些作用有显著的剂量效应关系．亚硫酸氢钠在低浓度仅引起细胞染色单体畸变，在高浓度既可引起染色单体畸变，又可引起染色体型畸变。     

镉金属硫蛋白对小鼠脾淋巴细胞DNA链损伤和修复的体外实验研究①

目的:为研究外源性镉金属硫蛋白(CdMT)对淋巴细胞DNA的损伤和修复作用.方法:采用单细胞电泳法(SCGE)检测DNA单链断裂(SSBs),观察在脱金属硫蛋白(Apo-MT)和不同终浓度CdMT(0.1μmolCd2+/I、1.0μmolCd2+/L、10.0umolCd2+/L、20 0μmol Cd2+/L)染毒作用30分钟和60分钟时DNA链损伤,和去除受试物后30分钟、60分钟、120分钟时DNA链损伤的修复.结果:DNA-SSBs尾长在Apo-MT作用未见增加;在中、高剂量CdMT染毒30和60分钟时都明显增长.损伤后链修复DNA迁移尾长,在中、高剂量CdMT组都显著低于细胞染毒时,但明显高于对照和Apo-MT组.结论:提示CdMT直接作用可致脾淋巴细胞DNA链的损伤,同时细胞存在对单链断裂的修复机制.     

2-TeCD对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞损伤影响的研究

目的:探讨谷胱甘肽过氧化物酶模拟物2-TeCD对H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤影响.方法:用不同浓度的H2O2作用人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,确定其半数致死浓度(IC50).检测2-TeCD对H2O2损伤细胞的细胞生存率、脂质过氧化物含量(MDA)和DNA裂解率.结果:H2O2对SH-SY5Y细胞的IC50为0.208 mmol/L;0.2 mmol/L的H2O2处理后SH-SY5Y细胞生存率为对照组的52.67％,TeCD保护H2O2损伤SH-SY5Y细胞的有效浓度为10 μmol/L; 10和20 μmol/L的2-TeCD可降低SH-SY5Y细胞中MDA含量,并降低DNA裂解率.结论:2-TeCD对H2O2损伤的SH-SY5Y细胞具有较好保护效果,可成为潜在的抗氧化药物.     

黄芪注射液治疗前后患者外周血淋巴细胞SCE的观察

本文以Budr-Giemsa 技术检测研究了接受黄芪注射液治疗的33 例病人的外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换(SCE) 频率,结果表明,治疗后比治疗前病人的SCE 率有显著的增加,有统计学差异( P < 0. 01) ,说明黄芪注射液能诱发DNA 损伤。     

彗星电泳法和K-SDS法检测甲醛和H2O2对人脐静脉内皮细胞DNA的损伤

背景与目的: 研究甲醛、H2O2以及两者共同作用对人脐静脉内皮细胞DNA的损伤.材料与方法: ①应用彗星电泳法于荧光显微镜下观察人脐静脉内皮细胞经甲醛、H2O2、甲醛和H2O2不同浓度(0、5、10、25、50、100 μmol/L)作用20 min或25 μmol/L浓度作用不同时间(0、10、20、30 min)后的DNA损伤情况;②用K-SDS法检测甲醛、甲醛和H2O2不同浓度(0、10、50、100、500、1 000、 2 000 μmol/L)或50 μmol/L、100 μmol/L浓度不同时间(0、0.5、1、1.5、2、4 h)引起的DNA-蛋白质的交联效应. 结果: ①彗星电泳结果:内皮细胞与不同浓度甲醛孵育20 min,5、10、25 μmol/L甲醛所致DNA损伤以断裂为主且与阴性对照有统计学意义(P<0.05);与等摩尔H2O2共同孵育时,5、10、25 μmol/L浓度组均可使单独H2O2作用时的彗星尾距增加,50、100 μmol/L使单独H2O2作用时的彗星尾距减小;25 μmol/L甲醛作用不同时间,尾距随时间增加而增大(P<0.05).②交联结果:内皮细胞与不同浓度甲醛孵育1.5 h后,引起DNA-蛋白质交联(DPC)形成明显增高(P<0.05);与等摩尔H2O2共同孵育时除1 h组(P<0.05),其余各组与阴性对照无统计学差异;50 μmol/l的甲醛作用不同时间,2 h组与阴性对照有统计意义(P<0.05);100 μmol/L的甲醛、甲醛与H2O2作用不同时间,各实验组与阴性对照无统计学意义. 结论: ①在体外条件下,低浓度甲醛(<25 μmol/L)对DNA的损伤以断裂为主,高浓度(>500 μmol/L)以交联为主,均呈剂量及时间依赖性;②H2O2引起内皮细胞DNA断裂损伤,呈剂量及时间依赖性.     

肝癌患者的细胞遗传学研究

对30例诊断为原发性肝癌(简称肝癌,下同)患者的细胞遗传学研究结果提示,染色体数。目畸变主要表现为四倍体和核内复制增多,分别为1.30％和3.07％;染色体结构畸变的各种类型均出现,畸变率为2.60％,其中尤以染色单体断裂和三射体、四射体的检出最为显著;G带核型分析未见异常;SCE(姐妹染色单体互换)率为10.12±2.44/细胞、0.22±0.05/染色体;MN(微核)率为2.80‰。以上各项异常检出率均高于对照组(P<0.01),有非常显著意义。     

单细胞微凝胶电泳技术的研究和应用

在研究辐射生物效应中, 检测DNA 损伤的方法很多。例如: 细胞遗传学方法染色体畸变、微核、姐妹染色单体互换等等。但上述方法费时费力, 并有一定的局限性。八十年代由O st ing 等首次提出的用微板电泳技术检测单细胞水平DNA 损伤。后经Singh 等进一步改进和完善了单细胞微凝胶电泳Single Cellm icrogel elect ropho resis 简称SCGE) 技术, 又称彗星检测法(Comet assay)。该方法突破了传统局限性, 即设备、操作简便, 所需细胞少、无需放射性示踪剂, 而且灵敏、快速, 整个实验过程从来样到结果分析可在一个工作日完成的新技术。因此, 该技术在国外有关研究领域已得到广泛应用。近年来, 国内一些研究领域也引进和建立此方法。主要用于环境诱突变剂或诱癌剂引起的DNA 损伤ö修复的研究; 癌症病人放、化疗方案的最佳选择及科学预后的研究; 作为生物标记进行生物监测及流行病学、毒理遗传学等诸多领域的研究。目前, 也有一些专家学者将此技术应用于植物细胞的研究。SCGE 技术在本实验室已建立, 其方法是使包埋于琼脂糖中的细胞经裂解去掉细胞浆, 在碱性环境下DNA 双链螺旋成为单链, 在电泳电场作用下DNA 断链离开细胞核向正极迁移出现“彗星”状拖尾现象, 再通过荧光染料溴化乙啶结合DNA 显色检测其损伤程度。为将此技术推广于辐射生物效应体内外研究中, 本实验选用在辐射生物效应中经常用的人血淋巴细胞(HBL ) , 中国仓鼠肺细胞(CHL ) 和兔血淋巴细胞这3 种细胞探索利用此技术检测DNA 损伤的可行性。实验结果表明: SCGE 技术能够对单个细胞DNA 损伤进行研究, 荧光测定核DNA 直径和迁移DNA (即彗星尾) 长度, 而尾长度和尾部荧光强度与DNA 链的断裂呈正相关。由于“彗星”成像是因损伤DNA 在电泳中从核内迁出, 因此它的尾长和密度等是评价与量化电泳结果的重要因素。我们选用上述3 种细胞接受60Co2·线照射后, 经SCGE 技术检测DNA 损伤, 照射组与未照射组DNA 迁移距离经统计学检验, 差异显著性水平A= 0. 5。细胞经照射处理后可引起DNA 电泳迁移, 而迁移长度随照射剂量的增加而延长。此项技术可从受照人员外周血淋巴细胞DNA 电泳迁移长度来估算受照剂量, 从而为评价急性照射和慢性小剂量长期照射的损伤程度提供科学依据。     

平阳霉素诱发人精子染色体结构畸变类型

人精子经平阳霉素处理后与去透明带地鼠卵受精，继而制备染色体进行核型分析．结果显示断裂是诱发畸变的主要类型，其后依次为互换、缺失、环和粉碎化；染色体型畸变的比例和均数远高于染色单体型；断裂型畸变的比例和均数远高于重接型．畸变中１７．３％为重接型，表明金黄地鼠卵母细胞中的ＤＮＡ损伤修复系统能够修复化学诱变所致人精子ＤＮＡ损伤．染色体型互换多于染色单体型互换提示：对这类损伤的修复，复制前修复系统可能比复制后修复系统作用更强．研究结果还证实染色体畸变精子和正常精子同样具有与卵受精的能力，提示人精子若反复或是期暴露于环境诱变因子，所产生的ＤＮＡ损伤有可能在精子中积累并在受精时不受选择性淘汰而传递给下一代．