脓毒症患者外周血淋巴细胞自噬相关基因 Beclin-1和LC3的变化研究

目的 观察脓毒症患者外周血淋巴细胞自噬的变化,并探讨其临床意义。 方法 选取10例健康人、20例普通感染患者和20例脓毒症患者,分别设为H组、I组和S组,根据预后再将S组亚组分析分为存活组(14例)和死亡组(6例),收集年龄、性别、感染部位、原发病、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、谷丙转氨酶(ALT)、肌酐(Cr)、白蛋白、血糖和APACHEⅡ评分等资料,同时抽取外周血分离淋巴细胞,检测Beclin-1和LC3 mRNA相对表达量。 结果 3组年龄、性别、原发病和感染部位比较差异无统计学意义(均P>0.05),3组WBC、PLT、ALT、Cr、白蛋白和血糖比较差异有统计学意义(均P<0.01);I组和S组APACHEⅡ评分比较差异有统计学意义(P<0.01);3组外周血淋巴细胞中Beclin-1和LC3 mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义(均P<0.01),存活组和死亡组之间Beclin-1和LC3 mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义(均P<0.01);APACHEⅡ评分与Beclin-1具有线性负相关(r=-0.452,P<0.001),APACHEⅡ评分与Beclin-1之间的线性模型方程式:Y=-20.83+41.67X;APACHEⅡ评分与LC3具有线性负相关(r=-0.641,P<0.001),APACHEⅡ评分与LC3之间的线性模型方程式:Y=-6.25+62.5X。在诊断脓毒症方面,Beclin-1:ROC曲线下面积为0.791,标准误为0.070,P<0.001,LC3:ROC曲线下面积为0.851,标准误为0.066,P<0.001。 结论 脓毒症外周血淋巴细胞自噬水平明显降低,可以反映脓毒症的免疫状态,并且在临床上可以作为普通感染和脓毒症的判断指标,为脓毒症诊断提供新思路。      

大鼠急性肾损伤后自噬相关蛋白Beclin-1的表达

目的研究自噬相关蛋白Beclin-1在大鼠急性肾损伤伤后肾组织中的表达情况,并探讨其意义。方法选用24只雄性大鼠sD大鼠,体重250±30g,按随机数字表法分为两组,假手术组（Sham组）和缺血-再灌注组（I／R组）;各组于再灌注后12、24、48h3个相应时间点收获肾脏标本。HE染色观察肾脏病理变化,免疫组化法测定自噬相关蛋白Beclin-1的表达情况,透射电镜观察。肾脏组织自噬现象。结果与假手术组比较,大鼠急性肾损伤48h,肾小管细胞Beclin-1蛋白的表达最强（P〈0．05）,再灌注损伤后48h,自噬体数量显著增多,细胞内出现染色质块状边集,核形态不规则的明显凋亡现象。结论大鼠急性肾损伤后自噬相关蛋白Beclin-1的表达上调,说明大鼠肾急性。肾损伤后肾脏组组织自噬活性上调。     

Beclin-1、LC3-Ⅱ在宫颈病变组织中的表达及意义

目的 检测Beclin-1、LC3-Ⅱ在宫颈病变组织及HPV感染中的表达, 并探讨其临床意义。方法选取昆明医科大学第二附属医院妇科2014年10月至2016年6月的行宫颈癌筛查 (HPV、TCT) 的患者, 筛查结果任意一项异常患者均行宫颈活检, 最终选取病检结果为正常的宫颈组织40例 (其中HPV感染20例, 无HPV感染20例) ;CINⅠ30例;CINⅡ/Ⅲ30例;年龄范围为25～55岁;妊娠及已行宫颈治疗过的患者不纳入研究范围。用Western Blot法检测正常宫颈组织、CINⅠ及CINⅡ/Ⅲ组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ相对表达量。结果 (1) Beclin-1在正常的宫颈组织、CINⅠ及CINⅡ/Ⅲ组织中的相对表达量分别为 (0.561±0.041) 、 (0.421±0.018) 、 (0.351±0.016) ;LC3-Ⅱ在正常宫颈组织、CINⅠ及CINⅡ/Ⅲ组织中的相对表达量为 (0.683±0.027) 、 (0.435±0.029) 、 (0.325±0.017) ;Beclin-1、LC3-Ⅱ在3组间的相对表达量差异有统计学意义 (P <0.001) ;Beclin 1, LC3-Ⅱexist in the relative expression between the 3 group were statistically significant (P <0.001) (2) 病检结果为正常的宫颈组织中HPV感染组中Beclin-1和LC3-Ⅱ的相对表达量均显著低于无HPV感染组 (P <0.05) 。结论随着宫颈病变级别的增加, 自噬相关基因Beclin-1、LC3-Ⅱ的相对表达量呈下降趋势, 提示自噬基因活性下降或缺失可能参与宫颈癌的进展。     

自噬基因Beclin-1在前列腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨自噬基因Beclin-1在前列腺癌组织中的表达及其相关临床意义,并分析其与根治性前列腺切除术后生化复发的相关性.方法 采用免疫组化Super Vision两步法检测132例前列腺癌组织及癌旁组织中Beclin-1的表达,并分析其与相关临床因素的关系.结果 在前列腺癌组织及癌旁组织中Beclin-1的表达率分别为38.6％及54.5％,差异有统计学意义(P=0.01).Beclin-1在Gleason评分中表现为评分越高,阳性表达率越低(P=0.011).前列腺癌组织中Beclin-1的表达与不同年龄(P=0.138)、家族史(P=0.686)及是否患者前列腺炎病史(P=0.895)等临床因素比较,差异无统计学意义.但在有无淋巴结转移(P =0.017)、有无骨转移(P =0.002)及行根治性前列腺切除术后有无生化复发(P =0.024)间差异均有统计学意义.结论 自噬基因Beclin-1在前列腺癌组织中表达下调,并与淋巴结转移、骨转移及生化复发有关,其表达下调可能参与前列腺癌的发生、发展.     

自噬相关基因在慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型中的表达及意义

目的 检测慢性非细菌性前列腺炎(CNP)大鼠模型中自噬相关基因表达的水平及时序变化,探讨自噬在CNP病程中的可能作用.方法 取3月龄雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照组和2、4、6周CNP模型组,每组10只.HE染色观察各组前列腺组织炎性细胞浸润情况,采用Western blot、免疫组化SABC法检测各组前列腺组织中自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1的表达.结果 HE染色结果提示成功构建大鼠CNP模型,Western blot法、免疫组化法检测显示各实验组LC3、Beclin-1蛋白的表达均高于正常对照组,并随时间的推移表达量逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 自噬相关基因可能在CNP的发病过程中发挥重要作用.     

SCI大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1表达的变化

目的：：观察脊髓全横断损伤对脊髓前角细胞Beclin-1表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠随机分为模型组和假手术组,建立大鼠第2腰髓全横断损伤模型,分别于损伤后6h、1d、3d、7d、14d、21d取3-4腰髓,采用免疫荧光染色法观察大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1的表达情况。结果：与假手术组相比,模型组损伤后各时间点大鼠脊髓前角Beclin-1免疫阳性细胞数明显升高(P＜0.01,P＜0.05）。脊髓损伤后3d脊髓前角细胞Beclin-1免疫阳性细胞数达到高峰,21d最低。结论：Beclin-1可能参与了神经元自噬状态的改变。     

饥饿诱导胶质瘤细胞自噬发生及Beclin-1表达的变化

目的 探讨饥饿诱导大鼠胶质瘤细胞C6自噬的发生及自噬相关蛋白Beclin-1的变化。方法 在培养大鼠胶质瘤细胞C6至对数生长期后,以无氨基酸培养液EBSS(Earle’s balanced salt)代替DMEM培养液培养细胞,培养1、3、6、12、18 h后收集细胞,采用蛋白质印迹分析和免疫荧光检测特异性标记自噬的微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC-3)以及自噬相关蛋白Beclin-1,采用透射电镜观察自噬体。结果 饥饿处理1 h后胶质瘤细胞C6中LC-3表达开始增加,并随着饥饿时间延长而逐渐增加,12 h达到高峰后开始下降;免疫荧光下可见点状自噬体;透射电镜下观察到自噬体的形成。饥饿处理1 h后胶质瘤细胞C6中Beclin-1表达开始升高,3 h达到高峰后逐渐下降;免疫荧光下观察到Beclin-1表达增高。结论 饥饿可以诱导胶质瘤细胞C6发生自噬,Beclin-1与饥饿诱导的胶质瘤细胞C6的自噬相关,为进一步研究Beclin-1在胶质瘤细胞自噬中的作用机制打下基础。     

自噬相关蛋白Beclin1和LC3在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨自噬相关蛋白Beclin1和LC3在结肠癌组织中的表达及临床意义。方法收集2011年1月—2014年1月结肠癌患者80例,取结肠癌组织标本及相应的正常组织标本各80份。用免疫组化法检测结肠癌和正常结肠组织中自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达,分析二者和结肠癌临床病理学参数,包括年龄、分化程度、TNM分期和淋巴结转移等的关系。结果结肠癌和正常结肠组织中Beclin1的阳性表达率分别为33.8%(27/80)、73.8%(59/80),LC3阳性表达率分别为22.5%(18/80)、68.8%(55/80),Beclin1和LC3在结肠癌的阳性表达率显著低于正常结肠组织(P<0.01)。不同年龄、分化程度结肠癌组织中Beclin1和LC3的表达差异无统计学意义(P>0.05),而不同TNM分期(P<0.01)和淋巴结转移结肠癌组织中Beclin1和LC3表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论自噬相关蛋白Beclin1和LC3的低表达可能与结肠癌的发生发展和预后不良有关。     

自噬相关基因微管相关蛋白轻链3在脑膜瘤中的表达

目的:探讨LC3在脑膜瘤中的表达及其与脑膜瘤侵袭性的关系.方法:我们应用脑膜瘤和正常脑组织标本共50例.分为:①正常对照组(n=5);②良性脑膜瘤组(WHO Ⅰ级,n=40);③恶性脑膜瘤组(WHO Ⅲ级,n=5).无菌取脑膜瘤及正常脑组织,应用Western-blot和RT-PCR方法检测LC3基因和蛋白的表达.结果:①与正常对照组及良性肿瘤组相比,恶性脑膜瘤组中LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ的比值显著降低(P＜0.05),但是正常对照组与良性脑膜瘤组之间比较差异无统计学意义.②恶性脑膜瘤组与良性脑膜瘤组和正常对照组比较LC3 mRNA表达显著降低(P＜0.05),同样,正常对照组与良性脑膜瘤组之间比较差异无统计学意义.结论:LC3低表达可能与脑膜瘤的发生和侵袭性密切相关.     

Beclin-1、LC3和mTOR在肺癌中的表达及意义

目的:探究自噬蛋白在良性胸腔积液和肺癌引起的恶性胸腔积液中的表达有无差异.方法:采用实时荧光定量PCR技术和Western-blot技术检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和mTOR在良性胸腔积液标本和恶性胸腔积液标本中的表达及意义.结果:自噬相关蛋白Bec-lin-1和LC3在恶性积液组中的表达量均低于良性积液组,差异具有统计学意义(P<0.05);mTOR在恶性积液组中表达量高于良性积液组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:联合检测Beclin-1、LC3和mTOR三种蛋白有助于临床化验室对胸腔积液进行性质鉴别,也有利于肺癌的早期筛查,可为临床诊断和治疗提供新思路.     

细胞间黏附分子异常表达与喉癌生物学特性的关系

目的：研究喉癌组织中细胞间黏附分子 (intercellular adhesion molecule-1 ,ICAM-1)的表达与喉癌侵袭力的关系。 方法：采用免疫组化技术对52例喉癌组织ICAM-1的表达进行检测,并进行统计学分析。 结果：ICAM-1的异常表达随着喉癌的临床分期及癌组织病理分级递增呈下降趋势(P<0.05) 。 结论：ICAM-1的缺乏易使癌细胞侵润及转移,故喉癌组织中的ICAM-1在肿瘤浸润过程中起关键作用,可作为病理诊断及判断预后的指标。     

丙炔苯丙胺对帕金森病模型大鼠结肠自噬相关蛋白Beclin1及LC3表达的影响

目的观察丙炔苯丙胺对帕金森病(PD)模型大鼠肠功能障碍、自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达的影响,探讨丙炔苯丙胺对PD肠功能障碍的治疗作用及可能机制。方法 2013年1月—2017年10月唐山市开平医院与华北理工大学附属医院合作实验。选取健康SD大鼠72只按随机数字表法分为假手术组(n=24)、帕金森病模型组(模型组,n=24)、丙炔苯丙胺干预组(干预组,n=24),后2组采用颈背部皮下注射鱼藤酮制备PD模型,而后模型组大鼠每日生理盐水灌胃,干预组予丙炔苯丙胺0.5 mg/kg灌胃。分别于4 d、8 d各取大鼠12只采用免疫组化法和蛋白印迹法检测结肠Beclin1和LC3的表达水平,并测定1 h粪便排出量及含水率。结果与假手术组比较,模型组4 d、8 d结肠Beclin1、LC3阳性细胞及蛋白表达均增加,1 h粪便排出量及含水率均减少(4 d:t/P=-28.614/0.000、-28.472/0.000、-21.561/0.000、-92.225/0.000、86.986/0.000、26.175/0.000。8 d:t/P=-24.523/0.000、-15.922/0.000、-26.262/0.000、-72.051/0.000、16.288/0.000、23.270/0.000);与模型组比较,干预组4 d、8 d结肠Beclin1、LC3阳性细胞及蛋白表达均减少,1 h粪便排出量及含水率均增加(4 d:t/P=8.254/0.000、7.572/0.000、11.846/0.000、43.157/0.000、-12.137/0.000、-7.727/0.000。8 d:t/P=18.981/0.000、8.480/0.000、21.154/0.000、63.285/0.000、-21.597/0.000、-17.980/0.000);与干预4 d组比较,干预8 d组大鼠结肠Beclin1、LC3阳性细胞及蛋白表达均明显减少,1 h粪便排出量及含水率显著增加(t/P=47.432/0.000、46.778/0.000、18.048/0.000、5.801/0.002、-7.045/0.001、-4.183/0.009)。结论丙炔苯丙胺可改善PD大鼠肠功能障碍,其作用机制可能与其抑制结肠过度自噬有关。     

胃癌组织Rac1表达与临床病理特征的相关性

【目的】研究胃癌组织中Rac1蛋白表达与临床病理特征和生存期并讨论其临床意义。【方法】运用免疫组化和组织芯片技术联合检测胃癌组织95例,对应淋巴结30例（其中有转移灶20例）,无癌癌旁≥6cm组织27例进行Rac1蛋白的表达。另取30例胃正常组织作对照。【结果】正常胃粘膜Rac1蛋白表达阳性率（13.3%）明显低于胃癌组织（72.0%）和癌旁组织（55.6%,P〈0.01）。Rac1蛋白表达与淋巴结转移、分化程度、浸润深度及Lauren分型密切相关（P〈0.05）。胃癌原发灶Rac1蛋白表达阳性率（85.0%）高于相应淋巴结转移灶（60.0%,P〈0.05）。COX多因素回归分析表明,Rac1蛋白表达阳性患者生存时间明显缩短（P〈0.05）,是生存期预测因子。【结论】胃癌组织Rac1蛋白与胃癌临床病理特征和生存期密切相关。     

人自噬相关基因LC3B真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建人自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B,MAP1LC3B)真核表达栽体,并鉴定其生物学功能。方法:通过RT-PCR方法扩增得到人MAP1LC3B cDNA;应用基因重组技术构建pEGFP-N1-LC3B真核表达载体,通过酶切和测序进行鉴定;倒置荧光显微镜下观察EBBS诱导4 h后pEGFP-N1-LC3B表达载体转染的HepG2.2.15细胞质中GFP-LC3B分布的变化。结果:通过测序鉴定,pEGFP-N1-LC3B真核表达载体序列正确,编码框正确;转染后的HepG2.2.15细胞经EBBS诱导4 h后,倒置荧光显微镜检测发现GFP-LC3B由散在分布向点状分布改变。结论:成功构建了人自噬相关基因LC3B真核表达载体,为进一步研究自噬在乙型肝炎病毒中的作用机制奠定了基础。     

舌癌与自噬相关基因的研究进展

自噬是细胞通过溶酶体降解细胞内废物,维持细胞稳态的一种进化上保守的行为。自噬与癌症的关系具有两面性,一方面可以自食,另一方面在癌细胞形成后,又可通过自噬为癌细胞提供存活的能量。舌癌作为一个高发、预后差的癌症,为近年来研究的热点。迄今为止,已有30多种自噬相关基因及其蛋白质被发现并研究,其与癌症有着不可分割的关系。通过研究自噬基因与舌癌的关系,可以为舌癌的治疗及预后评估提供依据。     

微管相关蛋白1A在前列腺癌中的表达与其临床特征的关系

目的 探讨微管相关蛋白1A（microtubule associated protein 1A,MAP1A）在前列腺癌中的表达与其临床特征的关系。方法 通过免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）染色检测人前列腺癌组织和非癌前列腺组织中MAP1A蛋白质的表达水平,应用实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测MAP1A基因在前列腺癌与正常前列腺组织中mRNA的表达差异,进一步使用癌症基因信息数据库（the Cancer Genome Atlas,TCGA）统计分析MAP1A基因表达水平与前列腺癌患者的临床病理学特征之间的关联。结果 免疫组化染色结果分析显示,与癌旁正常组织相比,前列腺癌组织中MAP1A的蛋白表达显著降低[免疫组化染色评分（immunoreactive score,IRS）：前列腺癌组织为4.08±1.58,癌旁正常组织为4.91±1.46（P<0.001）]。MAP1A在前列腺癌及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为58.6%和82.7%,两者差异具有统计学意义（χ²=12.225,P=0.001）。使用RT-qPCR检测MAP1A mRNA表达,发现其在前列腺癌中表达显著低于正常前列腺组织（P=0.019）。通过对TCGA数据库进行分析,笔者发现MAP1A在不同临床特征的肿瘤组织中的表达差异具有统计学意义,如患者Gleason评分（P<0.001）,临床病理分期（P=0.009）,是否转移（P=0.008）,总体生存率（P=0.049）。结论 MAP1A在前列腺癌中表达下调且与肿瘤组织的分期有关,分期越晚,MAP1A的表达越低,这提示其可能参与了前列腺癌的发生、发展。     

Tiam -1蛋白表达与鼻咽癌生物学行为的关系

目的 探讨Tiam-1蛋白与鼻咽癌生物学行为的关系.方法 用免疫组化方法检测60例不同临床分期人鼻咽癌组织、20例鼻咽粘膜慢性炎症组织以及6例裸鼠人鼻咽癌转移细胞株模型标本中Tiam-1蛋白的表达.结果 Tiam-1蛋白在鼻咽癌组织中的阳性表达率63.33%高于慢性炎症组36.67%(X2=-20.429,P=-0.001);Tiam-1蛋白在鼻咽癌组的平均表达得分(2.9167±1.3057)高于鼻咽粘膜慢性炎组(0.7000±0.9234)(t=7.0162,P=0.0000).Tiam-1蛋白表达在临床T分期之间没有统计学差异(F=2.36,P=0.0811),在有无淋巴结和器官转移的肿瘤组织中均有统计学意义(P=0.0001).在具有转移特性的人源性鼻咽癌细胞株裸鼠模型肿瘤组织中Tiam-1蛋白均呈高表达.结论 Tiam-1与鼻咽癌浸润转移密切相关,提示Tiam-1蛋白可能是鼻咽癌的重要促侵袭转移因子.     

鼻咽癌中MAP3K5和Epstein-Barr病毒编码的miR-BART22表达的关系及意义

目的研究鼻咽癌中MAP3K5和Epstein-Barr病毒编码的miR-BART22的表达及其相关性。方法收集53例鼻咽癌石蜡档案标本和30例鼻咽黏膜慢性炎标本,分别行EBER和miR-BART22原位杂交及MAP3K5免疫组化检测;另分别选取10例鼻咽癌和鼻咽黏膜新鲜标本提取蛋白行MAP3K5的Western blot检测。结果 53例鼻咽癌EBER均阳性,49例miR-BART22阳性;30例鼻咽黏膜慢性炎EBER和miR-BART22均阴性。MAP3K5在53例鼻咽癌组织中50例为阴性,癌巢周围粘膜组织呈阳性表达,3例弱阳性(+)表达。30例鼻咽粘膜慢性炎中,25例强阳性表达(++～+++),3例弱阳性(+)表达,2例阴性;鼻咽癌和鼻咽黏膜慢性炎MAP3K5差异具有统计学意义(P<0.001);Westernblot检测结果黏膜慢性炎MAP3K5蛋白表达值高于鼻咽癌(P=0.029)。MAP3K5和miR-BART22表达呈负相关(P<0.001)。结论 MAP3K5在鼻咽癌组织中表达水平低于黏膜上皮组织。MiR-BART22与之相反,在鼻咽癌中高表达,而黏膜慢性炎中缺乏。MAP3K5和miR-BART22在鼻咽癌中表达呈负相关。根据以上实验和相关文献,我们推测MAP3K5可能是EB病毒miR-BART22靶标基因,EB病毒miR-BART22通过抑制MAP3K5的表达,使相应磷酸化MAP3K5蛋白减少,进而下调MAPK通路下游基因蛋白的磷酸化,并行使对NPC细胞抑制凋亡、阻止分化并促进免疫逃逸等作用。     

新辅助化疗对相关肺癌基因Bcl-2和Beclin-1表达影响

目的：探讨Ⅱ-Ⅲ期肺腺癌（lung adenocarcinoma）患者体内Bcl-2和Beclin-1基因、蛋白表达与新辅助化疗间关系。方法：经免疫组织化学法检测Ⅱ-Ⅲ期肺腺癌80例患者组织中Bcl-2和Beclin-1蛋白表达水平,利用实时定量聚合酶链反应法检测治疗后Ⅱ~Ⅲ期肺腺癌患者组织中Bcl-2和Beclin-1基因表达水平,并研究2种基因表达与新辅助化疗疗效间关系。结果：治疗前两组之间Bcl-2和Beclin-1的蛋白表达水平差异无统计学意义,且Beclin1与Bcl-2在肺腺癌中表达呈负相关,其相关性具有统计学意义（r=-0.43,P〈0.01）。实时定量聚合酶链反应法检测结果显示经新辅助化疗后,化疗组Beclin-1 m RNA水平明显高于对照组,而Bcl-2水平明显低于对照组,治疗前恰恰相反,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：利用新辅助顺铂和多西他赛方案术前化疗,可影响肺腺癌组织中Bcl-2和Beclin-1的表达水平,为研究抑制Bcl-2的表达提高临床参考。