小肠黏膜下层移植修复海绵体神经损伤的实验研究

目的:研究小肠黏膜下层(SIS)移植替代损伤的双侧海绵体神经(CN)恢复大鼠的勃起功能。方法:制备SIS,建立动物模型,分为CN损伤组、假手术组、SIS移植组,分别给予切断双侧的CN、仅游离CN以及SIS移植修复损伤的CN。术后3个月进行阿朴吗啡试验,了解阴茎勃起情况。取中、后段阴茎海绵体组织,进行nNOS免疫组化染色,记录nNOS阳性神经纤维的数目。结果:阿朴吗啡试验:30 min内SIS移植组72.73%(8/11)的大鼠出现阴茎勃起,平均勃起(1.07±0.89)次;CN损伤组勃起率和勃起次数均为0;假手术组则为90.91%(10/11)和(2.19±1.17)次。无论是勃起率还是勃起次数,SIS移植组均显著高于CN损伤组(P<0.01),但仍然比假手术组低(P<0.05)。nNOS神经纤维数目:SIS移植组为(70.36±10.09)条,CN损伤组为(22.09±4.76)条,差异有统计学意义(P<0.01),但二者均低于假手术组[(90.81±5.69)条,P<0.01]。结论:SIS作为移植物修复损伤的大鼠CN损伤,有利于恢复CN损伤所致的勃起功能障碍。     

小肠粘膜下层与雪旺细胞生物相容性的研究

目的研究猪小肠粘膜下层(SIS)与体外培养的鼠雪旺细胞(SCs)的生物相容性。方法在体外将分离培养的SD乳鼠SCs接种于制备好的猪SIS上进行复合培养,通过相差显微镜和扫描电镜观察不同时间段SCs在SIS上的黏附、生长与增殖情况,用酶联免疫吸附测定和逆转录聚合酶链反应方法检测SCs分泌神经生长因子-β和脑源性神经生长因子的情况。对照组为接种于未平铺SIS的孔中正常培养的SCs。结果培养3～5 d后,相差显微镜下见SIS边缘SCs较为密集,黏附良好,多呈长梭形生长;扫描电镜观察见SIS表面SCs增殖黏附良好,胞体突起显著,呈端对端连接或成束排列,细胞表面可见蛋白颗粒分泌。酶联免疫吸附测定和逆转录聚合酶链反应方法检测发现,SCs与SIS复合培养后,神经生长因子-β和脑源性神经生长因子分泌良好,与对照组的SCs差异无统计学意义。结论猪SIS与鼠SCs有良好的生物相容性,有望用作支架,供SCs黏附生长,构建组织工程神经,用于修复周围神经缺损。     

海绵体神经损伤性勃起功能障碍治疗研究进展

随着前列腺手术的广泛开展和骨盆骨折尿道损伤患者的不断增多,海绵体神经损伤性阴茎勃起功能障碍越来越受到关注。海绵体神经损伤后,阴茎平滑肌和内皮细胞凋亡,NOS阳性神经密度降低,进而出现海绵体平滑肌纤维化。损伤后的神经再生策略一直是ED研究的热点之一。本综述将围绕促进海绵体神经再生的治疗策略,讨论海绵体神经损伤性ED治疗的基础及临床研究现状,既涉及神经营养因子、RhoA/ROCK抑制剂、亲免素配体、促红细胞生成素、干细胞治疗、基因治疗等传统策略,也包含富血小板血浆和低强度体外冲击波治疗等易于临床转化的新的治疗方式。本综述旨在为相关领域学者提供参考,以期开展更多具有较高临床转化意义的研究。     

小肠粘膜下层(SIS)桥接周围神经缺损的实验研究

目的 应用小肠粘膜下层(SIS)桥接周围神经缺损并观察结果。方法 选取健康的SD大鼠30只，随机分成三组，每组10只。先造成坐骨神经10mm缺损，然后分别用SIS桥接、自体神经移植和旷置不做处理，即SIS桥接神经组、自体神经移植对照组和空白对照组。分别于术后6周和10周取材，通过病理组织检查、神经电生理检查和计算机图像分析来评价神经再生。结果 SIS桥接神经组可见有再生神经组织长过缺损，呈条索状连续样，且神经纤维多集中在SIS形成的桥接管周缘区域，而中心区域可见胶原组织和孔隙较多。从电生理检查和计算机图像分析结果来看，SIS桥接神经组比自体神经移植组略差。结论 SIS具有促进周围神经轴突再生的作用，有望成为自体神经的替代材料应用于周围神经缺损的修复。     

腓肠神经移植重建海绵体神经保留勃起功能的实验研究

目的 :研究腓肠神经移植替代损伤的双侧海绵体神经恢复大鼠的勃起功能。　方法 :4 8只雄性SD大鼠 (3～ 4月龄和 30 0～ 4 0 0g)随机分为神经移植组、神经损伤组及假手术组 ,每组 16只。 2、4个月后 ,海绵体神经电刺激检测大鼠阴茎勃起功能 ,阴茎内注射神经逆行示踪剂荧光金 5d后检测盆神经节内被标记的神经元细胞。　结果 :2个月后神经移植组与神经损伤组大鼠对海绵体神经电刺激均无勃起反应 ,两组盆神经节内荧光金标记的神经元细胞数目差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;而 4个月后神经移植组大鼠勃起功能较神经损伤组差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,盆神经节内荧光金标记的神经元细胞数目也显著高于神经损伤组 (P <0 .0 5 ) ,与假手术组差异无显著性 (P >0 .0 5 )。　结论 :腓肠神经移植替代损伤的双侧海绵体神经可恢复大鼠的勃起功能。     

海绵体神经移植恢复大鼠勃起功能的研究

目的　应用腓肠神经移植替代损伤的双侧海绵体神经恢复大鼠的勃起功能。方法　将 48只雄性SD大鼠随机分为 3组 :神经移植组、神经损伤组及假手术组。 2、4个月后 ,海绵体神经电刺激检测大鼠勃起功能 ,免疫组织化学法检测海绵体内nNOS阳性神经纤维。结果　 2个月后神经移植组与神经损伤组大鼠对海绵体神经电刺激均无勃起反应 ,两组海绵体内nNOS阳性神经纤维数目差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;而 4个月后神经移植组大鼠勃起功能较神经损伤组差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,海绵体内nNOS阳性神经纤维数目也显著高于神经损伤组 (P <0 .0 5 ) ,与假手术组差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　腓肠神经移植替代损伤的双侧海绵体神经可恢复大鼠的勃起功能。     

枸杞多糖促进大鼠海绵体神经损伤修复的实验研究

<正>前列腺癌根治术及某些盆腔手术操作中损伤海绵体神经(cavernous nerves,CN)是术后产生勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)的主要原因~([1])。CN损伤后,早期的氧化应激反应在CN损伤导致ED的发病机理中起重要作用~([2])。枸杞多糖(Lyceum Barbarum Polysaccharides,LBP)是枸杞子的主要活性成分,具有明显的抗氧化及神经保护等作     

显微修复损伤的阴茎海绵体神经恢复大鼠勃起功能

目的　探讨利用显微外科技术修复外科损伤的阴茎海绵体神经 ,重建大鼠勃起通道的可行性。方法　 36只SD雄性大鼠随机平均分成 3组 ,即假手术对照组、双侧阴茎海绵体神经损伤组和显微修复组 ,术后 1、3个月后用阿朴吗啡 (APO)试验来评估所建动物模型 ,随后取阴茎干组织 ,利用NADPH d组化法证实nNOS阳性神经纤维的再生情况。结果　术后 1个月 ,神经部分切断组和显微修复组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;术后 3个月 ,APO所诱导的阴茎勃起试验中 ,显微修复组勃起率为 83 .3 % ;神经部分切断组勃起率一直为 0 % (P <0 .0 5 )。此外 ,神经套管组的nNOS阳性神经纤维数目在术后 3个月有显著增多 ,而神经部分切断组的nNOS阳性神经纤维数目同术后 1个月相比无增多 ,两两比较有差异有显著性 (P <0 .0 0 8)。结论　双侧阴茎海绵体损伤后 ,立即用显微外科技术吻合神经 ,是重建勃起通路 ,恢复勃起功能的一种有效方法。     

不同比例小肠粘膜下层复合双相磷酸钙修复骨缺损的组织学研究

目的 观察小肠粘膜下层（small intestinal submucosa，SIS）和双相磷酸钙（hydroxyapatite—tricalcium phosphate，HA—TCP）以不同比例制备的复合材料修复兔股骨髁缺损的效果，探讨复合仿生骨组分的合适比例。方法 分别以SIS和HA／TCP质量比1，0．5，0．25制备复合材料。取36只新西兰大白兔，制备双侧股骨髁直径6mm、深10mm的骨缺损模型，分别采用按三种比例制备的复合材料修复缺损[SIS／HA—TCP（1）、SIS／HA—TCP（0．5）及SIS／HA—TCP（0．25）组]。术后2、4、8和12周观察三种材料修复骨缺损的大体情况，并采用组织学和图像分析技术评价材料的修复效果。结果 组织学观察SIS／HA—TCP（1）组在12周有少量新生骨形成，骨缺损未修复。SIS／HA—TCP（0．5）组在2周即出现新生骨，4周新生编织骨增多并形成骨小梁融合，8周出现大量小髓腔，12周骨缺损基本修复，并出现大量板层骨。SIS／HA—TCP（0．25）组成骨过程基本与SIS／HA—TCP（0．5）组相似。组织学评分，术后各时间点SIS／HA—TCP（1）组均低于另两组（P〈0．05），4、8周SIS／HA—TCP（0．5）组和SIS／HA—TCP（0．25）组差异无统计学意义（P〉0．05），2、12周SIS／HA—TCP（0．5）组优于另两组（P〈0．05）。在新生骨形成及HA—TCP颗粒降解方面，术后8、12周各组之间差异均有统计学意义（P〈0．05），且SIS／HA—TCP（1）组明显差于另两组，但SIS／HA—TCP（0．5）组优于SIS／HA—TCP（O．25）组。结论 SIS与HA—TCP以质量比为0．5制备的复合材料对骨缺损具有良好的修复作用；0．5的成分比可作为构建复合仿生骨支架材料的参考指标。     

生殖股神经生殖支移位海绵体神经修复大鼠勃起功能的研究

目的：研究生殖股神经生殖支移位海绵体神经修复双侧海绵体神经损伤大鼠阴茎勃起功能的可行性。方法：将24只成年雄性SD大鼠随机分为3组：神经移位组（双侧生殖股神经生殖支近端与海绵体神经远端行端端吻合）、神经损伤组（双侧海绵体神经离断）和假手术组,每组8只。术后1、3个月行交配试验检测大鼠勃起功能恢复情况,术后3个月电刺激海绵体神经或生殖股神经生殖支,比较各组大鼠阴茎海绵体内压（ICP）的变化。结果：术后1个月交配试验观察到神经移位组与神经损伤组有插入行为的大鼠个数无明显差异,而3个月后神经移位组观察到75％（6／8）的大鼠有交配行为,明显高于神经损伤组（P〈0．05）。电刺激神经移位组大鼠生殖股神经生殖支时,可引起ICP明显升高,与神经损伤组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：生殖股神经生殖支移位海绵体神经可修复双侧海绵体神经损伤大鼠的勃起功能。     

许旺细胞与小肠黏膜下层体外复合培养的形态学研究

目的观察体外培养的许旺细胞在小肠黏膜下层（SIS）表面的黏附生长状况，探讨SIS与许旺细胞（SCs）的生物相容性。方法体外分离培养SD乳鼠的许旺细胞，接种于制备好的SIS进行复合培养，不同时间段通过相差显微镜、组织学、扫描电镜和透射电镜观察SCs在SIS上的黏附、生长和增殖情况。结果相差显微镜下见3—5d后SIS边缘SCs生长良好；组织学观察见5d时许旺细胞与SIS表面黏附紧密；扫描电镜观察见SIS表面SCs增殖黏附良好，胞体突起显著，呈端对端的相互连接或排列成束，细胞表面可见有蛋白颗粒分泌。透射电镜观察见SIS表面许旺细胞生长状态良好，细胞紧密贴附生长于SIS表面；许旺细胞与SIS交界部见细胞底部形成一些突起与SIS接触。结论SCs能够在SIS表面良好地黏附生长，SIS作为支架材料，与SCs具有良好的生物相容性。     

Schwann cell seeded guidance tubes restore erectile function after ablation of cavernous nerves in rats

PURPOSE: Dissection of the cavernous nerves eliminates spontaneous erections. We evaluated the ability of Schwann cell seeded nerve guidance tubes to restore erections after bilateral cavernous nerve resection in rats. MATERIALS AND METHODS: Sections (5 mm) of the cavernous nerve were excised bilaterally, followed by immediate bilateral microsurgical reconstruction. In 10 animals per group (20 study nerves) reconstruction was performed by genitofemoral nerve interposition, interposition of silicone tubes or interposition of silicone tubes seeded with homologous Schwann cells. As the control 10 animals (20 study nerves) underwent sham operation (positive control) and bilateral nerve ablation (without reconstruction) was performed in a further 10 (negative control). Erectile function was evaluated 3 months postoperatively by relaparotomy, electrical nerve stimulation and intracavernous pressure recording. RESULTS: After 3 months neurostimulation resulted in an intact erectile response in 90% (18 of 20) of Schwann cell grafts, while treatment with autologous nerves (30% or 6 of 20) or tubes only (50% or 10 of 20) was less successful (p <0.01). Whereas untreated ablated rats showed no inducible erections (0% or 0 of 20), all sham operated animals had an intact erectile response (100% or 20 of 20). Maximum intracavernous pressure upon electrostimulation was significantly elevated using Schwann cell grafts compared to results in the other treatment groups (p <0.001). Morphological evaluation revealed advanced regeneration within Schwann cell grafts. CONCLUSIONS: Schwann cell seeded guidance tubes restore erectile function after the ablation of cavernous nerves in rats and they are superior to autologous nerve grafts.     

电刺激阴茎海绵体神经测定大鼠勃起功能的方法探讨

目的:探讨电刺激阴茎海绵体神经(CN)测定大鼠勃起功能的方法。方法:选择4月龄雄性SD大鼠20只,体质量(425±25)g。左颈总动脉内插管,直接法持续监测大鼠平均动脉压(MAP);左侧海绵体内插管测定阴茎海绵体内压(ICP);前列腺右侧叶前外侧表面暴露右侧CN,通过电刺激CN诱发阴茎勃起。电刺激参数为:5V,2ms,25Hz,每次刺激持续1min,间隔5min重复电刺激,共刺激3次。电刺激CN前的(ICP/MAP)×100(rR)代表阴茎海绵体的静息状态;电刺激CN后的(ICP最大值/MAP)×100(bR)代表阴茎海绵体的勃起状态或大鼠的基础勃起功能;bR/rR代表阴茎勃起后ICP的增高程度。结果:电刺激CN使ICP明显升高,MAP变化不大,表明电刺激可有效诱发勃起。ICP、MAP、rR、bR、bR/rR等各项指标3次重复测定之间的差异均无统计学意义(均P>0.05),表明电刺激法结果稳定。rR、bR和bR/rR总的平均值分别为(12.00±2.62)%、(67.68±11.28)%和(5.85±1.80)。结论:电刺激阴茎CN测定大鼠勃起功能的方法稳定易重复,能够客观准确地评估阴茎的勃起程度,是研究阴茎勃起功能的重要技术,值得在国内推广。     

Enhanced effects of salidroside on erectile function and corpora cavernosa autophagy in a cavernous nerve injury rat model

We explored the efficacy and mechanisms of salidroside treatment for erectile dysfunction induced by bilateral cavernous nerve injury (BCNI). Forty male rats were divided into four groups as follows: sham (cavernous nerves exposed only) (S); BCNI (M); BCNI + rapamycin (M + rapamycin); and BCNI + salidroside (M + salidroside). Erectile function in the rats was measured by intracavernosal pressure. Penile tissue was harvested for transmission electron microscopy, immunohistochemistry, immunofluorescence, Masson's trichrome staining, haematoxylin–eosin staining, TdT-mediated dUTP Nick End Labeling and western blotting. The M group exhibited a decrease in erectile responses and increased apoptosis and fibrosis compared to these in the S group. Meanwhile, nerve content and the penile atrophy index were also decreased in the M group. Treatment with salidroside and rapamycin for 3 weeks partially restored erectile function and significantly attenuated corporal apoptosis, fibrosis, nerve content and penile atrophy in the M group. Moreover, the autophagy level was further enhanced in the M + salidroside group, which was the same as that in the positive observation group (M + rapamycin). Salidroside treatment not only improved erectile function in rats with BCNI, but also inhibited apoptosis and fibrosis and ameliorated the loss of nerve content and endothelial and corpus cavernosum smooth muscle cells by promoting protective autophagy.     

Comparative study of different transplantation methods of adipose tissue-derived stem cells in the treatment of erectile dysfunction caused by cavernous nerve injury

We aimed to compare intracavernosal injection (ICI), tail vein injection (IV), and periprostatic injection (PPI) of adipose-derived stem cells (ADSCs) for their ability to improve erectile function in cavernous nerve injury-induced erectile dysfunction (CNIED) rats and to explore the possible mechanism. Eighty-four male SD rats were divided into the sham group (n = 6), BCNI group (bilateral CN crush injury, n = 6), PBS-ICI group (n = 6), PBS-IV group (n = 6), PBS-PPI group (n = 6), ADSC-ICI group (n = 18), ADSC-IV group (n = 18) and ADSC-PPI group (n = 18). ADSCs were labelled with 5-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU), and six rats each in the ADSC-ICI group, ADSC-IV group, and ADSC-PPI group were sacrificed 2, 7, and 28 days after injection. EdU-labelled ADSCs were tracked by immunofluorescence staining. The intracavernosal pressure (ICP)/mean arterial pressure (MAP) ratio, neuronal nitric oxide synthase (nNOS)-positive nerve fibres in the dorsal penile nerve and the smooth muscle/collagen ratio in the cavernosum between groups were also evaluated. ADSCs can significantly improve erectile function through ICI or IV. The two are similar in efficacy and superior to PPI. The mechanism may be that after CN injury, ADSCs are recruited to around the MPG and secrete a variety of neurotrophic factors that promote the repair of the CN, thereby improving erectile function.     

小肠黏膜下层复合雪旺细胞构建组织工程化人工神经修复周围神经缺损的研究

目的小肠黏膜下层（small intestinal submucosa，SIS）复合雪旺细胞构建组织工程化人工神经并探讨其修复周围神经缺损的效果。方法SD大鼠60只随机分成三组，每组20只。构建右侧坐骨神经14mm缺损，A组：单纯SIS修复组；B组：复合雪旺细胞的SIS修复组；C组：自体神经移植对照组。术后不同时间段通过大体观察、电生理检测、组织学、透射电镜、图像分析、逆行示踪和小腿三头肌称重等方法分析评价修复效果。结果术后16周，B组移植段与近远段神经外观相似，未有神经瘤形成。组织学和透射电镜检查见B组再生神经组织可顺利通过缺损区，再生神经纤维排列整齐呈束状，含有大量的有髓神经纤维，与C组相似。电生理检测见第16周B组神经传导速度和复合动作电位的波幅均较第12周有所提高，与C组相比差异无统计学意义。真蓝逆行示踪证实B组和C组再生神经轴突轴浆运输功能恢复良好。图像分析证实B组再生神经组织面积百分比、有髓神经纤维密度和髓鞘厚度与C组相比差异无统计学意义，优于A组。B组和C组患侧小腿三头肌肌肉重量和恢复率均优于A组，C组优于B组，且差异有统计学意义。结论SIS复合雪旺细胞构建组织工程化人工神经能有效修复大鼠长距离坐骨神经缺损，有望成为自体神经的替代材料应用于周围神经缺损的修复。