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目的 研究姜黄素对转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)诱导的肺腺癌A549细胞的上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的作用及可能的机制。方法 选取体外培养肺腺癌A549细胞采用MTT法检测姜黄素细胞抑制率。实验分为4组:对照(Control)组、TGF-β组(TGF-β5ng/mL)、TGF-β+姜黄素组(TGF-β5ng/mL+姜黄素10μmol/L)、姜黄素组(姜黄素10μmol/L)。采用Transwell细胞迁移及浸润实验检测各组的运动迁移和侵袭浸润的能力,采用免疫荧光和Western印迹法实验检测各组EMT相关标记物E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达水平与Wnt /β-catenin信号通路相关P-GSK3β, GSK3β, β-catenin, c-Myc蛋白以及Snail蛋白表达水平,同时检测Wnt /β-catenin抑制剂XAV939(1、2、4 μmol/L)作用后EMT表达情况。结果 MTT实验表明姜黄素对A549细胞的抑制作用呈时间和剂量浓度依赖性,10μmol/L姜黄素作用A549细胞24h和48h时,细胞增殖抑制率分别为12.21±2.60%和21.33±3.25%(P<0.05);细胞运动迁移及侵袭浸润实验表明TGF-β能显著促进细胞的运动迁移和侵袭浸润,而姜黄素对其表现出抑制作用(P<0.05)。免疫荧光实验及免疫蛋白印迹实验表明TGF-β能下调E--钙粘蛋白的表达,上调波形蛋白及N--钙粘蛋白的表达,伴有P-GSK3β,β-catenin和c-Myc的表达增加以及Snail蛋白表达增加,而GSK3β表达无明显变化,而姜黄素表现出对这种现象的一个抑制作用。同时,XAV939对TGF-β诱导的EMT表现出抑制作用。结论 姜黄素可能通过抑制Wnt /β-catenin信号通路来抑制TGF-β诱导的A549细胞EMT。 相似文献
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粒状头样2(GRHL2)作为果蝇GRH(grainyhead)基因在哺乳动物中的同源基因之一,不仅参与调控胚胎发育、表皮屏障形成、表皮损伤修复以及中枢神经系统的发育等诸多生命活动过程,而且在乳腺癌、肝癌、口腔鳞状细胞癌等多种肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。GRHL2在肝癌、乳腺癌、口腔鳞状细胞癌等肿瘤中表达升高,促进肿瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡;而在上皮-间质转化(EMT)相关的乳腺癌中则下调表达,促进EMT的发生。GRHL2在肿瘤细胞中作用机制复杂而多样,既包括死亡受体相关的凋亡作用,人端粒反转录酶(hTERT)的活化,也涉及到EMT的发生、失巢凋亡敏感性增加。随着对GRHL2研究的深入,将有望为恶性肿瘤的临床诊断和治疗开辟新的方向。 相似文献
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目的 探讨粒状头样蛋白2(GRHL2)在肿瘤靶向治疗药物表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用和可能机制。方法 利用吉非替尼浓度逐步递增的体外诱导方法培养人结直肠癌细胞DiFi和人肺腺癌细胞HCC4006,获得吉非替尼耐药细胞株。通过RNA测序方法筛选在耐药细胞株与其亲代细胞中差异表达的基因并进行实时荧光定量PCR验证。使用pcDNA3.1-GRHL2质粒转染耐药细胞株使GRHL2过表达,用CCK-8法检测细胞对吉非替尼的敏感性。采用蛋白质印迹法检测耐药细胞株中上皮标志物E-cadherin和间质标志物Vimentin的表达变化,并通过CellMinerTM数据库分析60株人肿瘤细胞系中GRHL2表达与E-cadherin和Vimentin表达的关系。结果 成功获得DiFi和HCC4006的耐药细胞株。通过RNA测序和实时荧光定量PCR验证发现GRHL2在耐药细胞株中表达下调,而在耐药细胞株中过表达GRHL2后细胞恢复了对吉非替尼的敏感性。蛋白质印迹分析表明耐药细胞株中上皮标志物E-cadherin表达下调,而间质标志物Vimentin表达上调;CellMinerTM数据库分析表明GRHL2的表达与E-cadherin/Vimentin比值高度一致。结论 GRHL2表达下调通过诱导上皮间质转化介导肿瘤细胞对吉非替尼的耐药。 相似文献
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目的:探讨脂多糖(LPS)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞中上皮间质转化(EMT)标志物及β-连环素(β-catenin)表达的影响,阐明其可能机制。方法:人乳腺癌MDA-MB-231细胞分为对照组和不同浓度(5、10、20和40 mg·L-1)LPS组,倒置显微镜观察各组MDA-MB-231细胞的形态表现,免疫荧光实验检测各组MDA-MB-231细胞中β-catenin表达及定位,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组MDA-MB-231细胞中EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和β-catenin mRNA及蛋白表达水平。结果:对照组MDA-MB-231细胞形态表现为上皮细胞表型,不同浓度LPS组MDA-MB-231细胞形态表现为间质细胞表型。免疫荧光实验,β-catenin表达定位主要在细胞核。与对照组比较,不同浓度LPS组细胞中Vimentin和β-catenin mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),以20 mg·L-1LPS组升高最为明显;与对照组比较,不同浓度LPS组细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),以20 mg·L-1 LPS组降低最为明显。结论:LPS通过下调E-cadherin表达、上调Vimentin表达促进乳腺癌MDA-MB-231细胞发生EMT、侵袭和转移,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。 相似文献
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特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种慢性致死性疾病,其发病机制尚未完全阐明。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是分化的肺泡上皮细胞失去上皮特征同时获得间充质细胞形态以及迁移性的生物学过程。阻断TGF-β-Smad、Wnt/β-catenin、Hippo等介导的信号转导,有利于抑制EMT,进而有助于抑制IPF进展。本文总结了EMT相关信号转导通路在IPF中的研究进展,为临床使用靶向EMT的药物诊疗肺纤维化患者提供一定的参考和依据。 相似文献
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汪靖杰 《复旦学报(医学版)》2013,40(6):744
小RNA是一类长度约22~28个核苷酸的非编码小分子RNA,近年来发现其在转录后水平和翻译水平的基因调控过程中发挥重要作用。上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程,它在生理和病理过程中发挥了重要作用。近年来发现小RNA在各种器官纤维化的EMT过程中也起了重要作用。本文就小RNA在器官纤维化EMT过程中的作用作一综述,以期为器官纤维化疾病的治疗提供新的思路。 相似文献
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肺纤维化是众多肺部疾病的最终表现形式,其形成过程十分复杂,发生机制也尚未完全阐明.目前研究发现,上皮-间质转化(EMT)是肺纤维化发病机制中的一个关键步骤.TGF-β和Wnt信号通路是普遍认可的介导调控EMT的信号通路.内质网应激和自噬等在EMT过程中发挥重要作用.充分认识EMT在肺纤维化发生发展中的作用,有助于寻找治... 相似文献
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目的观察HMGA2在博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化中的表达变化,探讨其在肺纤维化发生中与上皮-间充质细胞转化(EMT)的关系。方法 48只SD大鼠随机分成生理盐水对照组(CON组),BLM致肺纤维化模型组(BLM组),BLM组给予BLM(5mg/kg)一次性气管内灌注。各组分别于第7、14和28天处死,取肺组织,HE染色观察大鼠肺炎症和纤维化的程度。免疫组织化学检测肺组织HMGA2和Thy-1蛋白的表达,应用Real-time RT-PCR法测定间充质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和上皮细胞标记物钙粘蛋白(E-Cad)mRNA的表达。结果 HE染色结果显示BLM组肺组织按时间顺序呈现由肺泡炎至纤维化的动态变化;免疫组化结果显示HMGA2蛋白表达在第7天明显增加,第28天达高峰,thy-1蛋白表达逐步下降;Real-time RT-PCR结果显示BLM组α-SMA基因mRNA表达升高,E-Cad基因mRNA的表达下降。结论 HMGA2在上皮-间充质细胞转化中起到了重要的调节作用。 相似文献
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目的:观察神经菌毛蛋白1(NRP1)基因对放射性肺纤维化(RIPF)进程的影响,并探讨其在Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路和转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路介导的上皮间质转化(EMT)发生发展过程和细胞外基质(ECM)沉积中的作用。方法:利用Cre-LoxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)特异性敲除NRP1基因的转基因C57BL/6J小鼠并进行鼠尾鉴定,将160只小鼠按照射后不同时间点随机分为4周组、8周组、16周组和24周组,每组小鼠按随机数字表法分为野生型(Con)组、野生型单纯照射(IR)组、NRP1基因特异性敲除(KO-Con)组和NRP1基因特异性敲除+照射(KO+IR)组,每亚组10只。KO-Con和KO+IR组小鼠腹腔注射他莫昔芬特异性敲除AT-Ⅱ细胞NRP1基因,IR组和KO+IR组小鼠采用20 Gy全胸照射建立RIPF小鼠模型。模型构建完成后,利用HE染色法和Masson染色法验证模型是否构建成功;利用免疫组织化学(IHC)法检测小鼠肺组织中Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平;Western blotting法检测小鼠肺组织中NRP1、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白表达水平;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测小鼠肺组织中NRP1、Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1、Smad2、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA表达水平。结果:HE染色和Masson染色显示RIPF小鼠模型构建成功,IR组小鼠肺部主要为放射性肺炎病理形态表现。与Con组比较,随时间的延长,IR组小鼠肺组织中NRP1蛋白和mRNA表达水平逐渐升高(P<0.05),24周时达到最高(P<0.01)。与Con组比较,随时间的延长IR组和KO+IR组小鼠肺组织中Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白及mRNA表达水平逐渐升高(P<0.05或P<0.01);与IR组比较,随时间的延长,KO+IR组小鼠肺组织中Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白和mRNA表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),但仍高于Con组(P<0.05或P<0.01)。与Con组比较,随时间的延长,IR组和KO+IR组小鼠肺组织中上皮细胞标志物E-Cadherin mRNA表达水平逐渐降低(P<0.05),间质细胞标志物N-Cadherin和Vimentin蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),但KO+IR组小鼠肺组织中E-CadherinmRNA表达水平明显高于IR组(P<0.05或P<0.01),N-Cadherin和Vimentin mRNA表达水平均明显低于IR组(P<0.05或P<0.01)。结论:NRP1基因敲除可抑制RIPF的发生发展,其机制可能与调节小鼠肺组织中Wnt/β-catenin和TGF-β1/Smads信号通路的表达进而抑制EMT进程有关。 相似文献
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目的 探讨延龄草皂苷对肺间质纤维化大鼠的治疗作用及其可能机制。 方法 雄性SD大鼠50只,随机分为对照组,模型组,延龄草皂苷低、中、高剂量组[25 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)和100 mg/(kg·d)],每组10只。除对照组外,其余各组采用气管插管注入伯莱霉素法(5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型;次日开始连续给药28 d。处死大鼠后,取肺组织称重并计算肺系数;进行HE和Masson染色观察小鼠肺组织形态病理学变化;ELISA法检测大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的表达以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;Western blotting法检测大鼠肺组织中纤连蛋白(fibronectin)、胶原蛋白Ⅰ型(Collagen Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)、SMAD同源物3(Smad3)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的蛋白表达水平。 结果 与模型组比较,延龄草皂苷低、中、高剂量组的肺系数降低;大鼠肺组织炎性细胞浸润、胶原沉积和纤维化程度改善;大鼠IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA和ROS的表达水平降低, SOD的活性升高,发挥抗炎、抗氧化作用;肺纤维化标志蛋白fibronectin,Collagen Ⅰ和α-SMA表达被抑制;大鼠肺组织TGF-β1、Smad3、Wnt3a、β-catenin和GSK-3β蛋白的表达水平降低,且治疗效果呈现剂量依赖性。 结论 延龄草皂苷可通过抗炎、抗氧化,抑制TGF-β/Smad3与Wnt/β-catenin信号通路激活,从而对肺纤维化产生保护作用。 相似文献
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Background Previous discovery that long-term administration of pentoxifylline (PTX) to mice chronically exposed to smoke led to the development of pulmonary fibrosis rather than emphysema initiated our curiosity on whether the Wnt/β-catenin pathway, a set of signaling proteins essential to organ development and lung morphogenesis in particular were activated in the pathogenesis of pulmonary fibrosis. Methods Male BALB/c mice were randomized into four study groups: Group Sm, smoke exposure and taken regular forage; Group PTX, no smoke but taken PTX-rich forage; Group Sm+PTX, smoke exposure and taken PrX-rich forage; Group control: shamed smoke exposure and taken regular forage. Animals were sacrificed at day 120. Morphometry of the lung sections and the expressions of TGF-β1, hydroxyproline, β-catenin, cyclin D1, T cell factor 1 (Tcf-1) and lymphoid enhancer factor 1 (Lef-1) mRNA, etc, in the lung homogenate or in situ were qualitatively or quantitatively analyzed. Results As expected, smoke exposure along with PTX administration for 120 days, lungs of the mice progressed to be a fibrosis-like phenotype, with elevated fibrosis score (3.9±1.1 vs. 1.7±0.6 in Group Sm, P 〈0.05). TGF-β1(pg/g) (1452.4±465.7 VS. 818.9±2.02.8 in Group Sm, P 〈0.05) and hydroxyproline (mg/g) (5.6±0.6, vs. 2.4±0.1 in Group Sm, P 〈0.05) were also consistently increased. The upregulation of β-catenin measured either by counting the cell with positive staining in microscopic field (17.4±7.9 vs. 9.9±2.9 in Group Sm, P 〈0.05) or by estimation of the proportion of blue-stained area by Masson's trichrome (11.8±5.6 vs. 4.7±4 in Group Sm) in Group SM+PTX was much more noticeable as than those in Group Sm. The expression of β-catenin measured by positive cell counts was correlated to TGF-β1 concentration in lung tissue (r=0.758, P 〈0.001). PTX per se caused neither fibrosis nor emphysema though expression of β-catenin and downstream gene cyclin D1 may also be altered by this medication. Conclusions PTX mediated transformation of pulmonary emphysema into pulmonary fibrosis under chronic cigarette smoke exposure is associated with upregulation of β-catenin and elevation of TGF-β1, implying that activation of Wnt/β-catenin signaling may be involved in the pathogenesis of pulmonary fibrosis. 相似文献
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目的 观察Wnt/β-catenin信号通路在肾缺血再灌注(IRI)致慢性肾间质纤维化大鼠模型中的表达.方法 将SD大鼠分为3组,即假手术组(Sham组)及IRI 7 d组、IRI 14 d组.分离左侧肾动脉,IRI组用无创血管夹夹闭左侧肾动脉,35 min后去除血管夹;假手术组不夹闭左侧肾动脉.IRI 7 d组与IRI 14 d组分别于术后第6、13天切除右侧肾,分别于第7、14天处死大鼠.观察比较3组大鼠肾功能,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测3组肾组织β-catenin、纤维连接蛋白(Fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平,免疫组织化学观察β-catenin表达部位,生化染色检测胶原含量,Masson染色观察比较3组病理改变.结果 与Sham组相比,IRI 7 d组Fibronectin、α-SMA、胶原含量无明显增高,病理无明显肾小管间质纤维化;而IRI 14 d组Fibronectin、α-SMA的蛋白表达水平则明显增高,胶原含量增多,肾功能减退,病理显示肾小管间质纤维化.与Sham组相比,IRI 7 d组β-catenin表达增高,IRI 14 d组较IRI 7 d组增高更显著.结论 Wnt/β-catenin信号通路可能在肾IRI致慢性肾间质纤维化病程中发挥一定作用. 相似文献
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目的 研究人脐带间充质干细胞外泌体(hUCMSC-EXOs)的抗纤维化作用及其潜在机制。方法 采用随机数字表法将24只C57 BL/6小鼠平均分为4组,6只/组。空白组:气管内注射生理盐水(3 mg/kg);肺纤维化组:气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液(生理盐水配成,3 mg/kg);EXOs1组:气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液(3 mg/kg)和hUCMSC-EXOs(造模第2天尾静脉注射,100 μg/250 μL);EXOs2组:气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液(3 mg/kg)和hUCMSC-EXOs(造模第11天尾静脉注射,100 μg/250 μL)。造模后21 d处死小鼠,取小鼠双侧肺组织,计算肺系数,分别通过HE染色和Masson染色进行肺组织病理
学和胶原蛋白沉积检查,ELISA实验检测血清中TGF-β1的表达水平,免疫组化法检测vimentin、E-cadherin和p-Smad2/3的表达水平。在体外A549细胞模型上,CCK8实验观察hUCMSC-EXOs对细胞增殖的影响,Western blotting观察hUCMSC-EXOs 对p-Smad2/3、vimentin和E-cadherin的表达水平的影响。结果 hUCMSC-EXOs显著降低肺纤维化小鼠的肺系数(P<0.05)、改善肺组织切片胶原沉积和肺组织病理变化,减少小鼠TGF-β1的表达(P<0.05),抑制p-Smad2/3、vimentin的表达而增加E-cadherin的表达,且外泌体一组的治疗效果优于外泌体二组;hUCMSC-EXOs对细胞增殖无明显影响(P>0.05),且可抑制p-Smad2/3、
vimentin的表达而促进E-cadherin的表达。结论 hUCMSC-EXOs可以通过抑制TGF-β1/Smad2/3信号通路激活的上皮-间质转化而缓解小鼠肺纤维化程度,且在第2天给予缓解效果更加明显。 相似文献
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纤维化是各种器官慢性损伤的共同结果。研究发现上皮-间叶转化(EMT)可能是导致多种器官纤维化的潜在机制。目前认为转化生长因子-β1(TGF-β1)能诱导EMT,促进器官纤维化,而骨形态发生蛋白-7(BMP-7)可通过拮抗TGF-β的作用,诱导间叶-上皮转化,改善多种器官纤维化。然而,至今BMP-7的抗纤维化分子机制仍不清楚,对其进行深入研究具有重要意义,可能提供一种纤维化疾病的新治疗手段。 相似文献
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目的:肾间质纤维化( renal interstital fibrosia , RIF)的核心是肾小管上皮细胞转分化。探讨促红细胞生成素(Erythropoietin, EPO)对高糖诱导的正常人肾小管上皮细胞(human kidney cells, HK-2)转分化的影响及其可能机制。方法体外培养HK-2细胞,按随机数字表法分为空白对照组、高糖诱导组(高糖终浓度30 mmol/L)、甘露醇对照组(甘露醇浓度24.5 mmol/L)、EPO对照组( EPO终浓度为20 U/mL)、5 U/mL EPO干预组、10 U/mL EPO干预组、20 U/mL EPO干预组及ROCK抑制剂( Y27632)组( Y27632终浓度为30μmol/L,加入Y2763230 min后加高糖,高糖终浓度为30 mmol/L),各组均刺激24 h。应用RT-PCR法检测细胞 RhoA mRNA、ROCK1 mRNA 的水平;细胞免疫荧光法检测细胞 E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(αsmoothmuscleactin,α-SMA)的表达;ELISA法检测上清液纤维连接蛋白(fibronectin, FN)的表达。结果 RT-PCR结果显示高糖诱导组RhoA mRNA及ROCK1 mRNA表达较空白对照组显著升高(1.400±0.022 vs 0.945±0.132,1.913±0.011 vs 1.007±0.002,P<0.05);5、10、20 U/mL EPO干预组,RhoA mRNA的表达水平(0.278±0.006、0.770±0.005、0.334±0.009)均较空白对照组(0.945±0.131)减少(P<0.05),ROCK1 mRNA的表达水平(1.418±0.006、0.919±0.004、0.477±0.002)较空白对照组(51.007±0.002)减少(P<0.05);ELISA及细胞免疫荧光结果显示高糖诱导组FN、α-SMA蛋白的表达较空白对照组明显增加[(14545.53±317.27)ng/mL vs (2582.50±87.20)ng/mL,0.335±0.006 vs 0.224±0.006,P<0.05];直线相关性分析,高糖诱导组,5、10、20 U/mL EPO干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达均呈正相关(P<0.05)。高糖诱导组α-SMA较空白对照组上升,E-钙黏蛋白较空白对照组下降(P<0.05);EPO干预组及ROCK抑制剂组E-钙黏蛋白表达较高糖诱导组增加,而α-SMA表达下降(P<0.05);ELISA结果显示,EPO干预组ROCK抑制剂组FN表达较高糖诱导组下降(P<0.05),且下降程度与EPO浓度相关。结论 EPO可抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化,从而延缓肾间质纤维化,其机制可能与RhoA/ROCK信号通路有关。 相似文献