丙戊酸钠对博莱霉素致肺纤维化大鼠TNF-α表达的影响

目的 探讨组蛋白脱乙酰基转移酶抑制剂丙戊酸钠在博莱霉素诱导肺纤维化大鼠的TNF-α表达的调节.方法 54只雄性SD大鼠随机分为控制对照组(CG)、肺纤维化模型组(MG)、丙戊酸钠干预组(VG).MG组、VG组予以博莱霉素溶液按5mg/kg气管内注入建立大鼠肺纤维化模型,CG组予以等体积0.9% 氯化钠溶液注射.各组于造模后第7、14、28天分3批处死,观察肺组织大体及HE和Masson染色,Szapiel评分,进行大鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)免疫组化检测.结果 与CG组相比,MG组14d和28d肺组织TNF-α及HYP含量明显增高(均P＜0.01),VG组Szapiel评分、HYP受到明显抑制,TNF-α表达下降.结论 丙戊酸钠能抑制TNF-α表达,抑制BLM诱导的大鼠肺纤维化.     

TGF-β/Smad与Wnt/β-catenin在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达及相互作用

目的观察TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在肺纤维化大鼠模型肺组织中的表达,探讨两条通路对肺纤维化的影响及其相互作用。方法取Wistar大鼠36只,随机分为正常对照组和肺纤维化模型组,每组18只。采用气管内注入博来霉素(BLM)建立Wistar大鼠肺纤维化模型,每组分别于第14、21和28天处死大鼠各6只;取肺组织称重,测定肺组织中HYP、IL-1β水平,观察肺组织Col-I、IL-1β、TGF-β1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-catenin、LEF-1 mRNA的表达,并进行HE染色和Masson胶原染色。结果 (1)与正常对照组比,造模后14~28 d大鼠肺指数均明显升高(P0.01);肺组织HE染色呈现明显的肺纤维化病理改变,Masson染色结果可见造模后14~28 d肺间质蓝色胶原呈渐进性增加。(2)造模后第14天,肺组织IL-1β含量、IL-1βmRNA相对含量均显著升高(P0.01),随后逐渐降低,至造模后第28天IL-1β表达量接近正常水平(P0.05)。(3)造模后14~28d大鼠肺组织HYP含量、Col-I mRNA相对表达量均明显升高(P0.01)。(4)与正常组相比,模型组中TGFβ1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-Catenin、LEF-1 mRNA表达显著增加(P0.01),且TGFβ1、Smad3 mRNA分别与Wnt1、LEF-1、β-catenin mRNA的表达呈显著正相关。结论 TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在博来霉素致大鼠肺纤维化中表达上调,两条通路对肺纤维化可能有促进作用且它们间可能存在一定联系。     

Effects of tacrolimus on the transdifferentiation of renaltubulointerstitium of diabetic rats

目的 探讨他克莫司(FK506)对糖尿病大鼠肾小管间质转分化的影响.方法 应用链脲佐菌素(65 mg/kg)腹腔注射建立大鼠糖尿病模型.分别给予 FK506 0.5、1.0 mg/kg·d灌胃,共4周.随机分对照组、模型组、FK506(0.5,1.0 mg/kg)组.4周后观察大鼠肾重/体重(RKW)与尿白蛋白排泄率(AER),并行肾小管-间质病理形态学分析.应用免疫组化法检测肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与波形蛋白(Vimentin)的表达.结果 FK506 1.0 mg/kg 给药组大鼠相对肾重、肾小管-间质损伤指数明显低于模型组(P<0.05,P<0.01),FK506 0.5 、1.0 mg/kg给药组大鼠AER水平明显低于模型组(P<0.05,P<0.01).免疫组化显示模型组肾小管间质E-cadherin表达阳性面积明显低于对照组(P<0.01),FK506 0.5、1.0 mg/kg给药组表达阳性面积明显高于模型组(P<0.01),模型组肾小管α-SMA与Vimentin表达明显高于对照组(P<0.01),FK506 0.5 、1.0 mg/kg给药组表达明显低于模型组(P<0.01).结论 FK506可部分上调E-cadherin及下调α-SMA 与Vimentin在肾小管间质中的表达,抑制糖尿病大鼠肾小管-间质转分化,从而起到肾脏保护作用.     

发现于炎症区域分子1在实验性大鼠肺纤维化组织中的表达及意义

目的研究发现于炎症区域分子1(FIZZ1)在大鼠肺纤维化组织中的表达及意义。方法 10只SpragueDawley大鼠随机分为模型组和对照组,每组5只。大鼠采用气管内注入博来霉素(5 mg·kg-1)的方法复制大鼠肺纤维化模型(模型组);采用气管内注入生理盐水(1.25 mL·kg-1)的方法制造阴性对照(对照组)。第28天处死大鼠,肺组织病理切片行苏木精-伊红染色,Ashcroft评分评定大鼠肺组织纤维化的严重程度;免疫组织化学方法检测大鼠FIZZ1和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果模型组大鼠肺纤维化程度较对照组严重,Ashcroft评分比较差异有统计学意义(P<0.01);模型组大鼠FIZZ1和TGF-β1表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 FIZZ1在肺纤维化发病机制中起重要作用,可能与TGF-β1的高表达有关。     

他克莫司对糖尿病大鼠肾小管间质转分化的影响

目的探讨他克莫司(FK506)对糖尿病大鼠肾小管间质转分化的影响。方法应用链脲佐菌素(65 mg/kg)腹腔注射建立大鼠糖尿病模型。分别给予FK506 0.5、1.0 mg/kg.d灌胃,共4周。随机分对照组、模型组、FK506(0.5,1.0 mg/kg)组。4周后观察大鼠肾重/体重(RKW)与尿白蛋白排泄率(AER),并行肾小管-间质病理形态学分析。应用免疫组化法检测肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与波形蛋白(Vimentin)的表达。结果FK506 1.0 mg/kg给药组大鼠相对肾重、肾小管-间质损伤指数明显低于模型组(P<0.05,P<0.01),FK506 0.5、1.0 mg/kg给药组大鼠AER水平明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。免疫组化显示模型组肾小管间质E-cadherin表达阳性面积明显低于对照组(P<0.01),FK506 0.5、1.0 mg/kg给药组表达阳性面积明显高于模型组(P<0.01),模型组肾小管α-SMA与Vimentin表达明显高于对照组(P<0.01),FK506 0.5、1.0 mg/kg给药组表达明显低于模型组(P<0.01)。结论 FK506可部分上调E-cadherin及下调α-SMA与Vimentin在肾小管间质中的表达,抑制糖尿病大鼠肾小管-间质转分化,从而起到肾脏保护作用。     

TGF-β/Smad与Wnt/β-catenin在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达及相互作用

【摘要】目的 观察TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在肺纤维化大鼠模型肺组织中的表达,探讨两条通路对肺纤维化的影响及其相互作用。方法 取Wistar大鼠36只,随机分为正常对照组和肺纤维化模型组,每组18只。采用气管内注入BLM建立Wistar大鼠肺纤维化模型,每组分别于第14天、21天和28天处死大鼠各6只;取肺组织称重,测定肺组织中HYP、IL-1β水平,观察肺组织Col-Ⅰ、IL-1β、TGF-β1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-catenin、LEF-1mRNA的表达,并进行HE染色和Masson胶原染色。结果 （1）与正常对照组比,造模后14~28天大鼠肺指数均明显升高（P<0.01）;肺组织HE染色呈现明显的肺纤维化病理改变,Masson染色结果可见造模后14~28天肺间质蓝色胶原呈渐进性增加。（2）造模后第14天,肺组织IL-1β含量、IL-1β mRNA相对含量均显著升高（P<0.01）,随后逐渐降低,至造模后第28天IL-1β表达量接近正常水平（P>0.05）。（3）造模后14~28天大鼠肺组织HYP含量、Col-ⅠmRNA相对表达量均明显升高（P<0.01）。（4）与正常组相比,模型组中TGFβ1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-Catenin、LEF-1 mRNA表达显著增加（P<0.01）,且TGFβ1、Smad3 mRNA分别与Wnt1、LEF-1、β-catenin mRNA的表达呈显著正相关。结论 TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在博来霉素致大鼠肺纤维化中表达上调,两条通路对肺纤维化均有促进作用且它们间可能存在一定联系。     

养阴益气合剂对肺纤维化大鼠肺泡上皮间质转化的干预机制研究

目的研究养阴益气合剂对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠肺泡上皮间质转化的干预作用。方法将120只SPF级Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,泼尼松组,养阴益气合剂低、中、高剂量组,采用气管滴注博来霉素的方法复制肺纤维化大鼠模型,造模后1 d各组给予相应药物灌胃,连续给药28 d。于给药第14天和28天分批处死大鼠,左肺行HE染色和Masson染色观察病理变化,右肺用RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、I型胶原(ColI)、层黏连蛋白(LN)mRNA的表达。结果与正常组相比,模型组α-SMA、Col I及LN mRNA表达均升高,E-cadherin表达下降(P0.05)。各治疗组α-SMA、Col I及LN mRNA出现不同程度下降,E-cadherin mRNA表达上调(P0.05)。第28天,与泼尼松组比较,养阴益气合剂高剂量组E-cadherin mRNA表达上调(P0.05),养阴益气高、中、低剂量组LN mRNA表达下调(P0.05)。结论养阴益气合剂能抑制博来霉素诱导的肺纤维化大鼠肺泡上皮间质转化,其机制可能与下调α-SMA、Col I、LN mRNA表达、上调E-cadherin mRNA表达有关。     

针刺治疗对躁狂模型大鼠行为学及睡眠潜伏期的影响

目的研究针刺治疗对躁狂模型大鼠行为学及睡眠潜伏期的影响及其作用机制。方法 100只SD大鼠按照随机数字表法随机分为空白对照组、模型组、丙戊酸钠组、针刺穴位组和针刺非穴组,每组20只。采用改良多平台睡眠剥夺法(MMPM)建立躁狂模型。各组进行相应干预7 d。实验结束后观察各组大鼠的精神、行为,记录脱离水环境到第一次进入睡眠的时间(即睡眠潜伏期),并进行旷场实验。结果与空白对照组比较,模型组、丙戊酸钠组和针刺非穴组的水平活动得分均显著降低,睡眠潜伏期显著延长,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,丙戊酸钠组和针刺非穴组的水平活动得分差异无统计学意义(P>0.05),而针刺穴位组的水平活动得分显著增高(P<0.05)。与模型组比较,3个治疗组的睡眠潜伏期均显著缩短,差异均有统计学意义(P<0.01);3个治疗组间两两比较,针刺穴位组与丙戊酸钠组睡眠潜伏期均较针刺非穴组显著缩短(P<0.01或P<0.05),而针刺穴位组与丙戊酸钠组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论针刺穴位能有效改善睡眠剥夺躁狂大鼠模型的睡眠潜伏期,其效果与丙戊酸钠相当,并能减轻部分行为抑制,其效果优于丙戊酸钠。     

参七虫草胶囊对博莱霉素致肺纤维化大鼠肺泡上皮细胞间质转化的影响

目的 从肺泡上皮细胞间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）角度探讨参七虫草胶囊治疗肺纤维化的作用机制。方法 将128只SD大鼠随机分为正常组、模型组、参七虫草组和泼尼松组。采用气管内滴入博莱霉素的方法复制肺纤维化模型。采用苏木精-伊红染色检测大鼠肺组织形态学改变,采用Masson染色观察肺组织胶原沉积情况,采用免疫组织化学法检测肺组织中上皮细胞钙粘素（E-cadherin,E-cad）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）的表达水平。结果 参七虫草组大鼠肺组织炎性反应及胶原沉积较模型组明显减轻。第7、14、21、28天,模型组E-cad表达水平显著低于正常组（P<0.05）,α-SMA和Vimentin表达水平显著高于正常组（P<0.05）;参七虫草组和泼尼松组E-cad表达水平显著高于模型组（P<0.05）,α-SMA和Vimentin表达水平显著低于模型组（P<0.05）;参七虫草组和泼尼松组E-cad和Vimentin表达水平相近（P＞0.05）。第28天,参七虫草组α-SMA表达水平显著低于泼尼松组（P<0.05）。正常组4个时点肺组织中E-cad、α-SMA和Vimentin表达水平无明显变化（P＞0.05）,模型组、参七虫草组和泼尼松组第14、21和28天肺组织E-cad表达水平逐渐降低,α-SMA和Vimentin表达水平逐渐升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 参七虫草胶囊通过调节肺组织E-cad、α-SMA和Vimentin表达水平而抑制EMT的发生。     

miRNA-29b、MMP-2在大鼠颅内动脉瘤中的相关性及药物干预

目的 观察miRNA-29b与MMP-2在颅内动脉瘤壁组织中的变化,探讨其在动脉瘤中的相关性及不同药物干预的影响.方法 将40只雄性SD大鼠(6周龄)采用随机数字表法分为模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组,每组各10只.模型组、多西环素组、丙戊酸钠组大鼠均采用颈外动脉结扎制造颅内动脉瘤模型,对照组大鼠不做造模处理.前三组于造模成功后分别注射生理盐水0.1 mL/(kg·d)、多西环素15 mg/(kg·d)、丙戊酸钠15 mg/(kg·d),对照组大鼠注射生理盐水0.1 mL/(kg·d).2个月后取各组动脉组织,采用实时荧光定量PCR检测miRNA-29b的表达,采用免疫组化检测MMP-2的表达.结果 模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中miRNA-29b的相对表达量分别为(0.27±0.04),(0.68±0.03),(0.47±0.15),(0.95±0.12),差异均有显著统计学意义(F=10.235,P<0.01);miRNA-29b表达量经两两比较,模型组明显低于对照组,丙戊酸钠组明显高于模型组,而多西环素组明显高于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中MMP-2阳性细胞数分别为(21.10±3.36),(10.27±1.20),(15.24±2.13),(4.50±0.44),差异均有显著统计学意义(F=6.013,P<0.01);MMP-2阳性细胞数经两两比较,模型组明显高于对照组,丙戊酸钠组明显低于模型组,而多西环素组则明显低于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miRNA-29b、MMP-2的表达水平与颅内动脉瘤的发生相关,多西环素对MMP-2的抑制作用明显强于丙戊酸钠.     

miR-205通过下调ZEB1和ZEB2表达抑制肾小管上皮细胞转分化

目的探讨miR-205在肾小管上皮细胞转分化的作用机制。方法将miR-205 mimics和scrambled control分别转染HK-2 转分化细胞株,采用real-time qPCR检测miR-205 和ZEB1、E-cadherin、α-SMA mRNA的表达水平;运用Western blotting 检测 ZEB1、ZEB2、E-cadherin、α-SMA的表达水平。通过细胞免疫组化检测β-catenin的异位表达情况和E-cadherin的表达情况。结 果miR-205 mimics 转染HK-2转分化细胞株后,ZEB1和ZEB2的表达水平较高糖组得到大幅下调（P<0.01）,而E-cadherin的 表达水平较高糖组显著提高（P<0.01）,同时间质细胞特征分子α-SMA的表达水平显著降低（P<0.01）。miR-205 mimics 也显著 抑制了HK-2 转分化过程中β-catenin 异位表达,在维持上皮细胞的形态方面也起着重要的作用。结论miR-205 可通过下调 ZEB1和ZEB2的表达,抑制了肾小管上皮间质转分化进程。     

腺相关病毒介导的肝细胞核因子1α过表达改善四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化

目的 探讨特异性上调肝细胞中肝细胞核因子1α(HNF1α)表达对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化的影响.方法 取18只C57/B6小鼠随机分为正常组、AAV8-TBG-Ctrl组和AAV8-TtBG-HNF1α组,每组6只.应用CCl4诱导制备小鼠肝纤维化模型,造模后AAV8-TBG-HNF1α组小鼠通过尾静脉注射带有甲状腺素结合球蛋白(TBG)启动子驱动表达HNF1α的腺相关病毒AAV8-TtBG-HNF1α特异性上调肝细胞中HNF1α的表达,AAV8-TBG-Ctrl组小鼠注射对照病毒AAV8-TBG.采用免疫组织化学法及qPCR检测各组小鼠HNF1α的表达,苏木素-伊红(H-E)染色、天狼猩红染色检测肝组织的病理改变及胶原沉积,免疫组化法检测旷平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并对Ⅰ型胶原(COL1A1)及α-SMA的表达进行软件定量分析;qPCR法检测小鼠肝组织中纤维化相关基因(α-SMA和COL1A1)、上皮指标(E-cadherin和Plakoglobin)及间质指标(Vimentin,Slug和Twist1)的mRNA水平;免疫组化法及TUNEL法检测上调HNF1α对纤维化肝脏中细胞增殖、凋亡的影响.结果 与正常组小鼠相比,CCl4造模可促进小鼠肝脏胶原沉积及α-SMA的表达,且在肝纤维化发生过程中HNF1α的表达下降(P＜0.01);与AAV8-TBG-Ctrl组相比,应用AAV8-TBG-HNF1α特异性上调肝细胞HNF1α的表达可抑制纤维化肝脏中的COL1A1及α-SMA的水平(P＜0.01).上调肝细胞HNF1α表达对纤维化肝脏中E-cadherin、Vimentin等上皮间质转换指标的表达无明显影响(P＞0.05),也不影响肝细胞的增殖与凋亡(P＞0.05).结论 特异性上调肝细胞HNF1α表达可显著改善CCl4诱导的小鼠肝纤维化.     

醛固酮及其拮抗剂安体舒通对高糖刺激下 肾小管上皮细胞转分化的影响

目的：通过观察高糖环境下,醛固酮（aldosterone, Aldo）及其拮抗剂安体舒通(spironolactone,SP)对大鼠肾小管上皮细胞（normal rat kidney epithelial cell,NRK-52E）转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,探讨Aldo及SP在糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）肾保护作用中的机制。方法：用无血清DMEM(Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco)同步化培养NRK-52E细胞系12 h后分为6组。LG组：采用低糖（1 000 mg/L） DMEM;HG组：采用高糖（4 500 mg/L）DMEM培养;10 nmol/L Aldo组、50 nmol/L Aldo组、100 nmol/L Aldo组：分别采用高糖DMEM加10,50,100 nmol/L Aldo培养;SP组采用高糖（4 500 mg/L）DMEM加10-7 mol/L SP培养。采用细胞免疫化学、RT-PCR和Western免疫印迹方法检测各组细胞E-cadherin和α-SMA mRNA的表达情况。结果：RT-PCR结果表明,与LG组比较,HG组E-cadherin mRNA表达明显降低(P＜0.01),α-SMA mRNA表达明显升高(P＜0.05);50 nmol/L Aldo组、100 nmol/L Aldo组E-cadherin mRNA表达明显低于高糖组,而α-SMA mRNA表达明显高于高糖组(P＜0.05),两者与Aldo呈浓度依赖关系（r=-0.70,P＜0.05;r=0.67, P＜0.05）;SP组E-cadherin mRNA明显高于HG组,而α-SMA mRNA表达低于HG组(P＜0.01)。细胞免疫化学和Western免疫印迹检测表明,与低糖组比较,HG组E-cadherin蛋白表达明显减低,而α-SMA表达明显升高(P＜0.01);10 nmol/L Aldo组、50 nmol/L Aldo组、100 nmol/L Aldo组E-cadherin蛋白表达明显低于HG组,而α-SMA蛋白表达明显高于HG组(P＜0.05),与Aldo呈浓度依赖关系（r=-0.83,P＜0.05;r=0.81, P＜0.05）;而SP组E-cadherin蛋白表达明显高于高糖组,α-SMA蛋白则明显低于HG组(P＜0.05)。结论：Aldo能促进高糖环境下肾小管上皮细胞EMT的发生,致DN肾间质纤维化,而使用SP可抑制高糖诱导肾小管上皮细胞的EMT,这可能是其阻遏肾间质纤维化的重要机制。     

归经组方对肾纤维化大鼠肾组织中Wnt信号表达的影响

目的:观察归肾经药物组方对肾纤维化大鼠疗效及肾组织Wnt信号表达的影响。方法:用5/6肾切除方法建立大鼠肾纤维化模型。经验方肾衰Ⅰ号为肾衰Ⅰ号组,以治则相同不归肾经药物组方为不归经组,以治则相同且归肾经的组方为归经组,同时设模型组,假手术组。连续治疗2月后,采血检测肾功能及血色素、取肾组织Masson染色、Western blot法检测肾组织Wnt2、GSK-3β、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA、β-actin蛋白表达,免疫组化法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在肾组织表达。结果:成功造模并治疗2个月后,与假手术组比较,模型组体质量、血浆总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(Albumin,Alb)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)含量显著降低(P0.01),血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(creatinine,Cr)含量显著增高(P0.01),Wnt2、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA及TGF-β1蛋白表达显著增高(P=0.000),GSK-3β活性显著降低(P=0.000),胶原含量显著增高(Masson染色)(P0.05);与模型组比较,各治疗组体质量显著增高(P0.01),BUN、Cr显著降低(P0.01),Wnt2、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA、TGF-β1表达及胶原含量显著降低(P0.05)。3个治疗组间相比较,归经组Hb、Tp含量及GSK-3β表达较肾衰Ⅰ号组及不归经组显著升高P0.01),P-GSK-3β表达显著降低(P0.01);不归经组α-SMA、β-catenin表达明显高于其他两组(P0.05)。3个治疗组间体质量、ALB、BUN、Cr含量及Wnt2表达之间没有明显差异,归经组与肾衰Ⅰ号之间α-SMA、β-catenin表达亦没有明显差异。结论:三组方均能通过Wnt信号通路减轻模型动物肾纤维化程度,且经验方与归肾经处方优于不归肾经方。     

特发性肺间质纤维化中TGF-β1诱导上皮-间充质细胞转化的研究

目的探讨转化生长因子-β1(tansforming growth factor-β1,TGF-β1)在特发性肺间质纤维化(idiopathicpulmonary fibrosis,IPF)中上皮-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EM T)的作用和机制。方法选择临床-影像-病理诊断的IPF患者25例肺石蜡组织制作组织芯片,应用免疫组化方法检测病灶组织中TGF-β1和β连环蛋白(β-catenin),间质标记物α-SMA、Desmin、Vim和上皮标记物E-cadherin及CK7的分布及表达情况。结果 TGF-β1主要分布于肌纤维母细胞、Ⅱ型肺泡上皮细胞和巨噬细胞,且其在成纤维细胞灶(fibroblast foci,FF)区域内各种细胞中的表达明显高于无FF区域(P<0.01);与无FF区域相比,β-catenin和E-cadherin在有FF区域增生的Ⅱ型肺泡上皮细胞膜表达明显减弱(P<0.01),而胞浆的表达明显增加(P<0.01);同时发现有FF区域Ⅱ型肺泡上皮细胞表达间质标记物Vim,但未发现α-SMA的表达,而无FF区域两者均无表达。结论 TGF-β1和β-catenin有可能通过相互交叉作用诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT,从而参与肺间质纤维化的发生。     

脐带间充质干细胞外泌体对大鼠肾间质纤维化的抑制作用

目的: 探讨人脐带间充质干细胞来源的外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cell derived exosomes,hucMSC-Ex）对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction, UUO）所致大鼠肾小管间质纤维化的修复作用。方法: 分离培养hucMSC并从培养上清液中提取hucMSC-Ex。采用单侧输尿管结扎法构建肾间质纤维化模型,将大鼠随机分为假手术组、UUO组和hucMSC-Ex组,每组6只,hucMSC-Ex组大鼠在术后24 h 尾静脉注射250 μg hucMSC-Ex。7 d后收集肾脏组织,观察各组肾脏大体观。蛋白质印迹检测肾组织纤维化相关蛋白TGF-β1、E-钙黏蛋白和波形蛋白,并对肾脏组织切片进行HE染色、Masson染色和免疫组织化学染色,观察大鼠梗阻侧肾脏病理结构变化、炎症细胞浸润情况及肾纤维化程度,综合评价hucMSC-Ex对大鼠肾脏纤维化的抑制效果。结果： 与假手术组相比,UUO组大鼠肾脏炎性细胞浸润显著增加,组织结构严重破坏,广泛胶原沉积;hucMSC-Ex干预后组织形态结构部分恢复,胶原沉积减少,炎性细胞浸润减少。同时,UUO组大鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、TGF-β1和波形蛋白表达升高,E-钙黏蛋白表达降低;但hucMSC-Ex输注后能够抑制α-SMA和TGF-β1的表达,逆转上皮间质转化。结论： hucMSC-Ex可以减轻大鼠肾组织病理损伤,延缓大鼠肾间质纤维化的进程。     

胆管结扎诱导的肝纤维化大鼠肝脏上皮间质表型的变化

目的观察胆管结扎诱导肝纤维化大鼠肝细胞是否发生上皮间质表型变化。方法 24只Wistar大鼠分为假手术组和胆管结扎组,运用HE及Massion染色检测肝纤维化变化;免疫印迹方法检测大鼠肝脏中上皮标志E-钙蛋白、白蛋白和I型胶原、波形蛋白的表达;采用免疫荧光双染的方法检测成纤维细胞特异性蛋白(FSP-1)+波形蛋白;FSP-1+I型胶原;FSP-1+白蛋白;白蛋白+I型胶原等蛋白在细胞中的定位。结果胆管结扎组大鼠的ISHAK纤维化评分(4.42±1.16 vs 0.00±0.00,P=-0.000),METAVIR纤维化评分(3.42±0.67 vs 0.00±0.00,P=-0.000)及Massion染色中胶原含量(0.30±0.06 vs 0.11±0.07,P=-0.000)较假手术组明显增高。与假手术组相比,胆管结扎组中上皮标志白蛋白(0.53±0.63 vs 1.12±0.01,P=0.000)、E-钙蛋白(0.21±0.01 vs 0.44±0.01,P=0.000)明显减少,而I型胶原(8.21±0.12 vs 0.24±0.01,P=-0.000)、波形蛋白(3.14±0.01 vs 0.37±0.01,P=0.000)显著增高。胆管结扎组中共表达FSP-1+波形蛋白、FSP-1+I型胶原、FSP-1+白蛋白、白蛋白+I型胶原的细胞较假手术组明显增多。结论在胆管结扎组诱导的肝纤维化大鼠肝脏中上皮标记减少,间质标志增加,提示有部分上皮细胞可能发生了上皮间质表型转化。     

三七改善慢性肾脏病大鼠肾脏纤维化的研究

目的 探讨三七及引经药介导的三七通过调控转化生长因子-β(TGF-β)的表达改善慢性肾脏病(CKD)大鼠肾脏纤维化的作用.方法 将雄性SD大鼠100只随机分为5组:正常组(NOR,n=20)、模型组(CKD,n=20)、三七组(RN,n=20)、三七肉桂组(RNC,n=20)、三七桔梗组(RNP,n=20).除NOR组外均采用腺嘌呤灌胃方法建立CKD大鼠模型,建模后NOR组和CKD组予以同等体积生理盐水灌胃,RN、RNC、RNP组予以相应药物灌胃,连续4周.4周后处死各组大鼠取血清检测肾功能[肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)],取肾脏组织做HE、Masson染色观察各组大鼠肾脏组织病理损伤程度,应用免疫组化法检测肾脏组织纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)表达,用Westetn blot法检测肾脏组织转化生长因子-β(TGF-β)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.结果 与NOR组相比,模型组肾功能能减退,Scr、BUN显著升高(P＜o.01),肾间质出现严重纤维化表现,胶原的沉积增多(P＜0.05),肾脏组织TGF-β、α-SMA、FN、LN表达显著升高.与模型组相比,各治疗组肾功改善,Scr、BUN明显降低(P＜0.01),肾间质纤维化程度降低,胶原的沉积减少(P＜0.05),肾组织α-SMA、TGF-β、FN、LN表达有所回降.其中RNC组作用强于RN组和RNP组.结论 三七及引经药介导的三七均能不同程度延缓腺嘌呤所致CKD大鼠肾间质纤维化的进程,其可能机制是降低TGF-β蛋白表达.     

直接肾素抑制剂阿利吉仑对肾纤维化小鼠上皮-间质转化的调节作用

目的：探讨直接肾素抑制剂阿利吉仑对单侧输尿管结扎引起的小鼠肾纤维化中上皮-间质转化（EMT）的调节作用,阐明阿利吉仑抗肾纤维化的作用机制。方法：24只雄性ICR小鼠分为假手术组、模型组和阿利吉仑干预组,采用单侧输尿管结扎方法制作小鼠肾纤维化模型。HE染色观察小鼠肾间质纤维化的病理组织形态,Masson染色观察小鼠肾间质纤维化中胶原蛋白的表达情况,免疫组织化学染色法观察胞浆中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,免疫印迹法检测小鼠肾组织中E钙黏蛋白（E-cad）、α-SMA和Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）的表达水平。结果：通过单侧输尿管结扎方法成功制备小鼠肾纤维化模型。HE染色和Masson染色,与模型组比较,阿利吉仑干预组小鼠肾纤维化程度明显降低,胶原蛋白表达明显减少。免疫组织化学染色,阿利吉仑干预组小鼠肾小管间质纤维化区域胞浆内α-SMA阳性显色较模型组明显减少。免疫印迹法,模型组小鼠肾组织中α-SMA和Col Ⅰ蛋白表达水平升高,分别是假手术组的1.79倍和1.95倍;E-cad蛋白表达水平降低,为假手术组的37.23%,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;阿利吉仑干预组小鼠肾组织中α-SMA和Col Ⅰ蛋白表达水平降低,E-cad蛋白表达水平升高,分别是模型组的63.72%、65.54%和2.1倍,组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：阿利吉仑能够通过上调E-cad的表达同时下调α-SMA、Col Ⅰ的表达抑制小鼠肾纤维化中EMT,进而发挥抗纤维化的作用。     

microRNA-7对人肝癌细胞MHCC-97H上皮间质转化的影响及作用机制

目的 探讨microRNA-7(miR-7)对肝癌细胞株MH-CC-97H上皮-间质转化(EMT)的影响及作用机制.方法 将构建的miR-7真核载体单独及分别联合野生型或突变型 EGFR 3'-UTR真核载体共转染MHCC-97H细胞,采用Real-time PCR、Western blot 检测 EMT 标识蛋白 E-cadherin、β-catenin、N-cadherin 和 Vimentin 的表达;细胞划痕、Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化;双荧光素酶实验分析 miR-7对EGFR的调控作用.结果 与正常组相比,转染 miR-7真核载体组细胞E-cadherin、β-catenin表达均显著升高(P＜0. 01),N-cadherin、Vimentin 表达则明显降低(P＜0. 01);同时,细胞的侵袭、迁移能力均明显减弱(P＜0.01);分别与转染GV272 + EGFR 3'-UTR野生型和转染GV272/ miR-7 + EGFR 3'-UTR 突变型相比,转染 GV272/miR-7 + EGFR 3'-UTR野生型组萤火虫荧光素酶活性显著降低(P＜0.01).结论 miR-7可通过与EGFR 3'-UTR结合而抑制 EGFR信号通路,降低MHCC-97H细胞侵袭、迁移能力,进而抑制MHCC-97H细胞EMT.