荞麦花叶总黄酮对心律失常大鼠心肌细胞凋亡及Wnt/β-catenin/PPARγ通路的影响

探讨荞麦花叶总黄酮对心律失常大鼠心肌细胞凋亡及Wnt/β-连锁蛋白(β-catenin)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)通路的影响。将SD大鼠随机分为对照组、模型组、荞麦花叶总黄酮低剂量(20 mg·kg^-1)组、荞麦花叶总黄酮中剂量(40 mg·kg^-1)组、荞麦花叶总黄酮高剂量(80 mg·kg^-1)组、盐酸普萘洛尔(2 mg·kg^-1)组,每组12只大鼠,通过舌下静脉注射1 mL·kg^-1的0.002%乌头碱,将除对照组外的其余各组大鼠制备为心律失常模型,以药物分组干预处理后,检测各组大鼠心律失常情况、心肌细胞凋亡、心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)及血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、前列腺素E2(...     

白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠Wnt/β-catenin和TGF-β1-Smad2/3信号通路的影响

目的探究白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠Wnt/β-catenin和TGF-β1-Smad2/3信号通路的影响。方法利用链脲佐菌素一次性注射制作糖尿病肾病模型,40只SD大鼠随机分成白藜芦醇组(5 mg/kg)、氯沙坦组(30 mg/kg)、白藜芦醇联合氯沙坦组(5 mg/kg藜芦醇联合30 mg/kg氯沙坦)和模型组,每组小鼠10只,1次/d,均持续作用8周。检测尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、24 h尿蛋白及空腹血糖水平,计算肾脏指数,实时荧光定量PCR、Western blot法及免疫组化法检测Wnt4、β-catenin及TGF-β1、Smad2/3表达。结果与模型组比较,白藜芦醇组、氯沙坦组、白藜芦醇联合氯沙坦组的BUN、Scr、24 h尿蛋白和空腹血糖水平显著降低(P0.05),肾脏指数降低(P0.05),Wnt4、β-catenin、TGF-β1、Smad2/3 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.05);与白藜芦醇联合氯沙坦组比较,白藜芦醇组以上指标差异无统计学意义(P0.05),而氯沙坦组以上指标明显增加(P0.05)。结论白藜芦醇能够降低Wnt/β-catenin和TGFβ1-Smad2/3信号通路的表达水平,改善DN肾脏病理进程,减少肾脏受到的损害。     

姜黄素抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的研究姜黄素对人乳腺癌细胞株BT549细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法取对数生长期BT549细胞,制成单细胞悬液,计数并接种于96孔培养板,每孔约5 000个细胞,24 h后加浓度分别为0,10,20,40,80μmol/L的姜黄素,培养12,24,48 h后采用MTT实验检测BT549细胞增殖抑制率;分别用0,10,20,40,80μmol/L姜黄素处理细胞,48h后采用TUNEL染色法检测细胞凋亡指数;分别用0,10,20,40,80μmol/L姜黄素处理细胞,48 h后采用Western blot实验检测细胞增殖、凋亡相关蛋白的表达量。结果 MTT结果显示,随培养时间延长,姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组BT549细胞增殖抑制率逐渐增高(P均0.05),且同时间点内姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组细胞增殖抑制率随剂量增加逐渐增高(P均0.05)。TUNEL染色结果显示,姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组BT549细胞凋亡指数随剂量增加逐渐增加(P均0.05)。Western blot实验结果显示,随着姜黄素浓度的增加,总蛋白中β-catenin的表达不受影响(P0.05),而细胞核中β-catenin的表达逐渐减少(P0.05)。结论姜黄素通过Wnt/β-catenin信号传导通路抑制乳腺癌细胞株BT549细胞的增殖和诱导其凋亡,并呈现时间、剂量依赖性。     

基于Wnt/β-catenin大鼠心肌损伤的修复作用通路探讨益气活血方对急性心肌梗死

【目的】 探讨益气活血方对急性心肌梗死（AMI）大鼠心肌损伤的修复作用及机制。【方法】 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、Wnt-C59（Wnt/β-catenin信号通路抑制剂）组,每组15只。模型组、中药组、Wnt-C59组大鼠采用冠状动脉前降支结扎法建立 AMI 模型,假手术组大鼠仅打开胸腔后缝合。成功造模后,中药组大鼠灌胃益气活血方药液6.48 g·kg-1·d-1,Wnt-C59组大鼠灌胃Wnt-C59 30 mg·kg-1·d-1,假手术组和模型组大鼠灌胃0.9% 氯化钠（NaCl）溶液20 mL·kg-1 ,共4周。给药结束后,评价大鼠心功能变化,采用苏木素-伊红（HE）法和Masson染色法观察大鼠心肌组织病理学改变,脱氧核苷酸末端转移酶（TdT）介导的核苷酸（dUTP）缺口末端标记法（TUNEL）染色检测心肌细胞凋亡情况,实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（RT-qPCR）法检测心肌组织半胱氨酸蛋白酶 3（Caspase-3）、B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）mRNA表达,酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测血清心肌损伤指标乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CK）、CK同工酶（CK-MB）的含量,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测心肌组织 Wnt3a、β-catenin 及 β-catenin 靶基因细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）、C-myc蛋白表达水平。【结果】 与正常组比较,模型组大鼠心功能显著降低,出现明显心室扩张和重构,心肌组织排列紊乱、纤维化明显、细胞凋亡增加,Caspase-3、Bax mRNA表达水平上调,Bcl-2 mRNA表达水平下调,血清心肌损伤因子含量显著升高,心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,中药组和Wnt-C59组大鼠心功能指标得到显著改善,心肌组织排列较为整齐,胶原纤维沉积减少,细胞凋亡减少,Caspase-3、Bax mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达水平增加,血清心肌损伤因子含量降低,心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平降低（P＜0.05）。【结论】 益气活血方可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路改善AMI大鼠心肌损伤。     

白藜芦醇通过激活PI3K/AKT通路抑制内皮细胞凋亡的研究

目的观察白藜芦醇对脂多糖作用下人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞,实验分为5组:空白组给予单纯培养基培养;模型组培养基中加入1000 ng/mL脂多糖孵育24 h;5μmol/L白藜芦醇组和10μmol/L白藜芦醇组培养基中分别先加入5μmol/L、10μmol/L白藜芦醇孵育12 h,再加入1000 ng/mL脂多糖孵育24 h;PI3K抑制剂组培养基中先加入10μmol/L白藜芦醇和10μmol/L PI3K抑制剂LY294002共处理12 h,再加入1000 ng/mL脂多糖孵育24 h。使用CCK-8试剂盒检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;DHE荧光探针检测各组细胞中活性氧(ROS)含量;ELISA检测各组细胞培养液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Western blot法检测各组AKT的磷酸化情况。结果与空白组相比,模型组细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率和细胞中ROS含量及TNF-α、IL-6水平均明显升高,NO水平及P-AKT/AKT表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与模型组和PI3K抑制剂组相比,10μmol/L白藜芦醇组细胞增殖能力明显升高,细胞凋亡率和细胞中ROS含量及TNF-α、IL-6水平明显下降,NO水平及P-AKT/AKT表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论白藜芦醇能够提升脂多糖作用下人脐静脉血管内皮细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡,减轻细胞的氧化应激和炎性反应,恢复细胞的分泌功能,可能与其激活PI3K/AKT通路而发挥保护作用有关。     

黄芪多糖通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞凋亡研究

目的探讨黄芪多糖通过Wnt/β-catenin信号通路对人肝癌Hep G2细胞增殖及凋亡的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Hep G2细胞增殖能力和存活率;Annexin V-FITC/PI双染和Caspase-3活性检测细胞凋亡;荧光素酶实验检测黄芪多糖(100、200 mg/L)处理后Hep G2细胞Wnt/β-catenin通路活性改变;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting法检测细胞内的β-catenin、c-myc和CyclinD1表达水平。结果与对照组比较,随着黄芪多糖质量浓度的增加和作用时间的延长,Hep G2细胞存活率显著降低(P0.05)。与对照组比较,黄芪多糖100、200mg/L组Hep G2细胞凋亡率显著升高(P0.05);凋亡关键因子Caspase-3的相对活性显著升高(P0.05),cleaved Caspase-3蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低;荧光素酶活性显著降低(P0.05);β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01)。结论黄芪多糖通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制凋亡相关基因Bcl-2的表达,促进Hep G2细胞凋亡。     

启宫丸对多囊卵巢综合征大鼠WNT/β-catenin信号通路的影响

目的 本实验通过检测启宫丸对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平变化,观察卵巢病理组织形态改变、凋亡状况及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路蛋白表达的影响,探究启宫丸对多囊卵巢综合征模型大鼠的治疗作用及机制。方法 40只SD雌性大鼠,随机选取10只作为正常组,其余30只采用来曲唑联合高脂饲料法制备多囊卵巢综合征大鼠模型。造模成功后,将造模组随机分为中药启宫丸组、阳性药达英-35组、模型组,每组各10只。启宫丸组给予14.7 g/(kg·d)灌胃,达英-35组给予0.21 mg/(kg·d)口服灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水,干预持续21天。ELISA法检测血清中促卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone, FSH)、促黄体生成素(luteinizing hormone, LH)、睾酮(testosterone、T)、雌二醇(estradiol, E₂)及孕酮(progesterone, P)等激素水平;HE染色观察卵巢组织病理形态变化;TUNEL染色观察卵巢组织颗粒细胞凋亡情况;免疫组化法检测大鼠卵巢组织Wnt、β-cate...     

白藜芦醇通过调控SIRT1抑制卵巢癌细胞生长及Wnt信号通路的研究

目的研究白藜芦醇对卵巢癌A2780细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法运用MTT法检测白藜芦醇(50、100、200、400μmol/L)对A2780细胞的抑制率;白藜芦醇+pc DNA3.1组(转染pc DNA3.1)、白藜芦醇+pc DNA3.1-SIRT1组(转染pc DNA3.1-SIRT1)均用脂质体法转染,加入白藜芦醇(200μmol/L)处理;采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测细胞中信息调节因子1(SIRT1)、β-catenin、c-Myc的m RNA水平;Western blotting法检测细胞中SIRT1、β-catenin、c-Myc蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,白藜芦醇(50、100、200、400μmol/L)处理组细胞增殖抑制率、凋亡率均显著升高(P0.05),且白藜芦醇(200μmol/L)组细胞中SIRT1的m RNA和蛋白水平均显著降低(P0.05),可失活Wnt信号通路;过表达SIRT1可逆转白藜芦醇对A2780细胞增殖及Wnt信号通路的失活作用。结论白藜芦醇可调控SIRT1抑制卵巢癌细胞增殖,促进凋亡,其促凋亡机制可能与失活Wnt信号通路有关。     

芍药苷通过抑制TGF-β1/Smad3通路对急性心肌梗死后心室重塑的作用研究

目的 基于抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3通路探讨芍药苷对急性心肌梗死后心室重塑的影响.方法 将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组和芍药苷高、低剂量组,每组8只.除假手术组外,其余各组通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死大鼠模型.曲美他嗪组大鼠灌胃10 mg/(kg·d)曲美他...     

健脾补肾方对辐射损伤小鼠β-catenin、TCF及PPARγ蛋白表达的影响

目的研究健脾补肾方对辐射损伤模型小鼠β-链蛋白(β-catenin)、T细胞因子(TCF)及过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白表达的影响,探讨其对造血功能的调控机制。方法采用6.0 Gy X射线照射建立辐射损伤模型小鼠,然后将造模成功小鼠随机分为模型组、健脾补肾方小剂量组(100%浓度)、健脾补肾方大剂量组(200%浓度)、阿胶浆组,每组12只。另随机选取12只正常小鼠作为正常组。正常组、模型组给予生理盐水0.2m L/10 g灌胃,2次/d,其余3组分别用健脾补肾方小剂量、大剂量和阿胶浆混悬液0.2 m L/10g灌胃,2次/d。9 d后处死小鼠,取血检测外周血白细胞计数,收集骨髓检测β-catenin、TCF及PPARγ蛋白表达情况,制作骨髓病理切片观察骨髓病理改变情况,测定脂肪空泡面积。结果模型组外周血白细胞计数及β-catenin、TCF蛋白表达量明显低于正常组(P均0.05),PPARγ蛋白表达量及骨髓脂肪空泡面积均明显高于正常组(P均0.05);健脾补肾方小剂量组、健脾补肾方大剂量组、阿胶浆组外周血白细胞计数及β-catenin、TCF蛋白表达量均明显高于模型组(P均0.05),PPARγ蛋白表达量及骨髓脂肪空泡面积均明显低于模型组(P均0.05),尤以小剂量组明显。结论健脾补肾方可通过增强β-catenin/TCF通路的转导,抑制下游靶基因PPARγ的表达,从而抑制骨髓脂肪化,促进骨髓造血功能的重建。     

萝卜硫素介导Wnt/β-catenin信号通路诱导胃癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨萝卜硫素对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响及其对Wnt/β-连锁蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路活化的影响。[方法]采用CCK8实验检测10、20、40 μmol/L萝卜硫素对SGC-7901细胞增殖的影响,流式细胞仪分析萝卜硫素对SGC-7901细胞凋亡的影响,荧光素酶报告基因实验检测萝卜硫素对Wnt/β-catenin通路中淋巴增强因子/淋巴腺黏连因子（TCF4/LEF）转录活性的影响,Western Blot方法检测萝卜硫素对SGC-7901细胞中β-catenin、糖原合成激酶3β（GSK-3β）、c-Myc及半光天冬酶3（Caspase3）蛋白表达水平的影响。[结果]与对照组相比,萝卜硫素组SGC-7901细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,呈现出时间、剂量依赖性;萝卜硫素组SGC-7901细胞凋亡率相比对照组显著增高（P<0.05）,并且萝卜硫素还能明显抑制TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性（P<0.05）;萝卜硫素组SGC-7901细胞内β-catenin及c-Myc蛋白表达呈浓度依赖性降低,而GSK-3β及Caspase3蛋白表达呈浓度依赖性增高（P<0.05）。[结论]萝卜硫素能明显抑制SGC-7901细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制晶状体上皮细胞增殖的实验研究

[目的]探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞(LECs)增殖的影响及其可能的作用机制,为晶状体后囊膜混浊(PCO)的临床治疗提供新的靶点。[方法]人LECs系SRA 01/04细胞为研究对象,实验分为3组:Wnt3a组,姜黄素组和对照组。Wnt3a组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a c DNA表达载体瞬时转染入人SRA 01/04细胞中,构建PCO的细胞模型。姜黄素组在转染Wnt3a c DNA表达载体48 h后加入20μmol/L姜黄素,对照组转染pc DNA3-HA表达载体。采用Western blot技术验证载体在转染细胞中的表达,CKK-8实验检测姜黄素对SRA 01/04细胞增殖能力的影响,采用免疫细胞化学法检测Wnt3a过表达后增生细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的变化;Western blot法检测Wnt3a过表达对Wnt/β-catenin下游信号分子cyclin D1和c-Myc蛋白表达的影响;应用免疫荧光法检测Wnt3a过表达后β-catenin表达的定位变化。[结果]Western blot检测证实,转染pc DNA3-HA表达载体后,SRA 01/04细胞内Wnt3a蛋白表达明显升高。CKK-8检测表明,姜黄素组SRA 01/04细胞的增殖率明显低于Wnt3a组(t=2.782,P=0.049)。姜黄组SRA 01/04细胞PCNA蛋白表达阳性率为23.6%±4.0%,明显低于Wnt3a组的43.4%±5.4%,差异有统计学意义(t=2.951,P=0.018)。转染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a组细胞核和细胞质中,而在对照组仅出现于细胞之中,姜黄素组β-catenin蛋白主要分布于细胞核中,少量分布于细胞质中。Western blot检测姜黄素组Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和c-Myc蛋白表达明显低于Wnt3a组。[结论]在SRA01/04细胞中,姜黄素抑制Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc表达下调,抑制人LECs的增生。     

健脾复方通过Exo-Wnt3a/5a调控Wnt/β-catenin信号通路抑制大肠癌侵袭转移机制研究

目的:探究大肠癌侵袭转移中健脾复方对Wnt3a/5a调控Wnt/β-catenin信号通路的作用机制.方法:建立裸鼠人肠癌转移瘤模型,使用低、中、高剂量的健脾复方进行治疗干预,同时设阳性对照组及空白对照组,收集裸鼠血清,并保留瘤体,使用WB检测Exo-Wnt3a/5a、β-catenin、MMP-7、C-MYC、Cyc...     

桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠Wnt4/β-catenin信号通路中p-GSK-3β的影响

目的 探讨慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾纤维化(RIF)过程中,桃核承气汤对Wnt4/β-catenin信号通路p-GSK-3β的影响。方法 100只清洁级Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、治疗组,各25只,模型组和治疗组行5/6肾切除术,假手术组仅做双肾被膜剥离术,正常组不做处理。造模成功后,治疗组予桃核承气汤灌胃,其余3组予等量生理盐水灌胃,给药时间共为8周。Western Blot法检测肾组织中Wnt4/β-catenin信号通路的相关蛋白含量,光镜观察肾组织。结果 Wnt4、p-GSK-3β、β-catenin蛋白含量,治疗组比模型组显著降低(P<0.05);光镜观察,模型组的肾小球结构固缩,肾间质纤维增生严重,治疗组明显减轻。结论 桃核承气汤对CRF的作用机制,可能与降低Wnt4、p-GSK-3β、β-catenin蛋白含量从而调节Wnt4/β-catenin信号通路有关。     

白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的抑制作用与PI3K-Akt信号通路的关系

目的:探讨白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及与PI3K-Akt信号通路的关系。方法:50只成年雄性SD大鼠,随机分为5组,即对照组(SH组)、缺血再灌注组(I/R组)、白藜芦醇预处理组(Res组)、白藜芦醇预处理+渥曼青霉素组(Res+Wom组)、缺血再灌注+渥曼青霉素组(I/R+Wom组)。结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型,缺血45 min,再灌注120 min,测定再灌注心肌组织中NOS,NO的含量,并用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带生物素的dUTP缺口末端标记(TUNEL)的方法测定细胞凋亡,免疫组化测定心肌组织中Bcl-2,Bax蛋白的表达,利用Western blot测定Akt(又称PKB,即蛋白激酶B)及p-Akt(即磷酸化蛋白激酶B)含量。结果:与I/R组及Res+Wom组比较,Res组NOS及NO表达增加,显著减轻心肌细胞凋亡,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax/Bcl-2降低,Akt的磷酸化水平增高,上述各项指标差异具有统计学意义(P<0.05),而上述变化能够被PI3K-Akt信号通路的特异性阻断剂渥曼青霉素所阻断,且其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:白藜芦醇能够抑制缺血再灌注所致的心肌细胞凋亡,此过程有PI3K-Akt信号通路的参与。     

灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法灵芝三萜(10、50、100μg/mL)作用HepG2人肝癌细胞24、48、72 h,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。100μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,Western blot检测c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达。分别以20μmol/L XAV-939、20 mmol/L LiCl及100μg/mL灵芝三萜联合20 mmol/L LiCl干预HepG2细胞,MTT和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡。结果灵芝三萜(10、50、100μg/mL)抑制HepG2细胞增殖(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05)。100μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,细胞caspase-3、caspase-8蛋白表达上调(P<0.05),而c-myc、cyclinD1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达下调(P<0.05)。20μmol/L XAV-...     

白藜芦醇通过激活PI3K/Akt通路抑制高糖致肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的:白藜芦醇对高糖作用下肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激介导的凋亡影响及作用机制。方法:体外培养肾小管上皮细胞,高糖作用于肾小管上皮细胞诱导其凋亡,设置空白对照组、模型组(30 mmol·L~(-1)高糖处理)、不同浓度(5、10μmol·L~(-1))白藜芦醇组,LY294002(PI3K抑制剂)组(10μmol·L~(-1))。使用MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;JC-1检测线粒体膜电位(MMP);DHE荧光探针检测ROS的变化;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH-PX)含量;Western-blot法检测各组细胞色素C(CYT-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平以及Akt的磷酸化情况。结果:与空白对照组相比高糖损伤组能够显著降低肾小管上皮细胞的活力,增加细胞中ROS的含量和凋亡率,LDH(细胞外)、MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX活性显著下降,同时降低线粒体膜电位,增加了CYT-C、Caspase-3的表达,而p-Akt/Akt表达降低(P0.01)。不同浓度白藜芦醇(起效剂量5μmol·L~(-1),高剂量10μmol·L~(-1))和高糖同时作用肾小管上皮细胞时,细胞存活率逐渐上升,ROS含量及凋亡率逐渐下降,LDH、MDA含量逐渐下降,SOD、GSH-PX活性随之上升,线粒体膜电位提升,CYT-C、Caspase-3表达显著下降,p-Akt/Akt表达增加(P0.01)。LY294002(PI3K抑制剂)组上述指标的检测结果与白藜芦醇组相反。结论:白藜芦醇可能部分通过激活PI3K/Akt通路抑制氧化应激及其诱导的凋亡,从而对肾小管上皮细胞发挥保护作用。     

麦粒灸对骨髓抑制小鼠骨髓细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的：观察麦粒灸“大椎”“足三里”“三阴交”对骨髓抑制小鼠骨髓细胞Wnt/β-连环蛋白（β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响,探讨麦粒灸治疗骨髓抑制的可能机制。方法：将45只SPF级雄性CD1(ICR)小鼠随机分为空白组、模型组和麦粒灸组,每组15只。采用腹腔注射环磷酰胺（CTX,80 mg/kg）制备骨髓抑制模型。麦粒灸组于“大椎”“足三里”“三阴交”行麦粒灸治疗,每穴3壮,每壮约30 s,每日1次,连续7 d。检测小鼠造模前、干预前及干预3、5、7 d后白细胞计数（WBC）。干预后,观察小鼠一般情况;检测小鼠骨髓有核细胞计数;采用ELISA法检测小鼠血清白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-6(IL-6)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的含量;采用Western blot法和实时荧光定量PCR法检测小鼠骨髓细胞β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖调控蛋白（C-Myc）蛋白及mRNA表达。结果：与空白组比较,模型组小鼠反应迟钝、步态不稳、体重减轻,WBC、骨髓有核细胞计数及血清IL-3、IL-6、GM-CSF含量减少（P<0....     

基于Wnt/β-catenin通路研究三物白散对胃癌AGS细胞凋亡的影响

目的 研究三物白散对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响并基于Wnt/β-catenin通路探讨其机制。方法 SPF级雄性SD大鼠28只,随机分为对照组及三物白散高、中、低剂量组,每组7只。三物白散高、中、低剂量组分别按0.125、0.0625、0.03125g·kg^-1·d^-1剂量灌胃,对照组以等剂量生理盐水灌胃。每日灌胃1次,连续7d。末次给药后45min经腹主动脉取含药血清。CCK-8法检测三物白散含药血清对胃癌AGS细胞活性的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测细胞Wnt1、β-catenin、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞Wnt1、β-catenin、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 与对照组相比,5%、10%、15%、20%高浓度组含药血清可呈浓度—时间依赖性抑制AGS细胞活性。细胞凋亡检测结果显示高浓度组AGS细胞凋亡率显著高于对照组(P<0....     

探讨化纤汤对肺纤维化模型大鼠Wnt/β-catenin信号通路影响研究

目的β观察化纤汤对肺纤维化(IPF)模型大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响研究。方法β将72只3月龄SPF级雄性SD大鼠采用随机数字表法分为空白对照组、模型组、中药组(高、中、低剂量组)、阳性对照组(吡非尼酮组)6组,每组各12只。通过气管内滴注博来霉素(5mg/kg)制备IPF模型,使用呼吸记录仪采集呼吸功能相关指标数据,HE染色观察肺组织病理结构,免疫印迹检测肺组织中β-连环蛋白(β-catenin)和Wnt3a蛋白的相对表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠呼吸功能明显减弱,HE染色结果显示肺组织结构破坏,纤维化程度严重,肺组织中β-catenin、Wnt3a表达量明显升高(β<0.01);与模型组比较,阳性对照组与高剂量组均能显著改善大鼠呼吸功能,改善肺组织破坏及纤维化样变,降低IPF大鼠肺组织中β-catenin、Wnt3a蛋白表达水平(β<0.05),与阳性对照组相比,高剂量组改善更为明显,差异具有统计学意义(β<0.05)。结论β相对于吡非尼酮治疗,高剂量的化纤汤更能有效改善IPF的症状,降低IPF大鼠的肺组织中β-catenin、Wnt3a的...