多黏菌素与美罗培南联合应用对碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌多黏菌素异质性耐药的体外抗菌活性分析

目的 评价多黏菌素与美罗培南的联合使用对碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌多黏菌素异质性耐药的体外抗菌活性。方法 收集2021年1月至12月首都医科大学附属北京友谊医院临床分离碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)381株。采用微量肉汤稀释法检测多黏菌素及美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)。采用群体谱分析方法(PAPs)分析敏感菌株对多黏菌素的异质性，通过PCR扩增筛选耐药基因，根据结果分析部分菌株的时间-杀菌曲线，评价联合用药抑菌效果。结果 381株肺炎克雷伯菌经过微量肉汤稀释法检测，未见多黏菌素耐药菌株，全部菌株对美罗培南均耐药。PAPs分析显示对多黏菌素异质性耐药的菌株比例为95%(38/40)。根据CRKP耐药基因的检测筛选3株携带不同耐药基因菌株进行的时间-杀菌曲线分析结果显示，与单独用药相比，低浓度联合用药即可在短时间内起到杀菌作用。结论 碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌对多黏菌素的异质性耐药率较高。多黏菌素与美罗培南的联合应用在体外可以对异质性耐药CRKP表现出很好的杀菌活性。     

对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌耐药机制及耐药性的研究

目的了解目前儿科临床分离对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2缺失和金属β内酰胺酶（MBI．）产生的情况，及具有不同耐药机制菌株的耐药特点。方法收集2004年1月--2006年12月从我院住院患儿中分离出的75株对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌。用PCR方法进行oprD2基因、金属酶IMP、VIM、SPMT和GIM基因检测。用琼脂稀释法进行药敏试验，按照2006年CLSI推荐标准判断结果。使用WHONET5．3和SPSS13．0软件进行数据分析。结果检测75株对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌中外膜孔蛋白OprD2缺失者50株，占66．7％；产金属酶的46株．占61、3％，其中IMP阳性38株（82．6％），VIM阳性8株（17．4％）。外膜孔蛋白OprD2缺失同时产金属酶的34株，占45．3％，其对口内酰胺类抗生素的耐药率、MIC50和MIC90均高于其他菌株。结论目前从儿科临床分离对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2缺失和产生金属酶都十分严重，菌株的耐药性也很高，并且产MBI．菌株存在IMP和VIM2种基因型。     

临床分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌株的血清荚膜分型及耐药机制

目的分析碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的荚膜血清型和携带毒力基因的情况,以探究其耐药机制。方法采用Vitek-2Compact全自动微生物鉴定仪对分离菌株进行体外药物敏感试验;利用黏液丝试验筛选高黏液阳性菌株;使用改良Hodge试验及碳青霉烯酶抑制试验(CIM)对碳青霉烯酶表型进行检测;利用PCR法检测常见荚膜基因型、碳青霉烯酶耐药基因、β-内酰胺酶基因、膜孔蛋白基因、毒力基因。结果本研究共分离出CRKP 126株[39.87%(126/316)],CRKP菌株中对头孢菌素类、酶抑制剂类、碳青霉烯类、单环类药物耐药率最高,且耐药率显著高于non-CRKP菌株(P<0.05),替加环素类耐药率最低,与non-CRKP菌株差异无统计学意义(P>0.05);改良Hodge试验阳性106株,CIM试验阳性117株;检测出A类碳青霉烯酶KPC基因最多,共117株;β-内酰胺酶基因TEM基因53株,SHV基因100株,CTX-M基因112株,膜孔蛋白Ompk35基因缺失50株,Ompk36基因缺失94株;126株CRKP中携带4种不同耐药基因的菌株数目最多。结论本研究分离获得的CRKP大部分荚膜血清分型尚不清楚,其主要耐药机制为产生碳青霉烯酶,部分菌株合并有膜孔蛋白基因缺失。     

摩根摩根菌对碳青霉烯类药物耐药机制的研究

目的分析从外科重症监护病房(SICU)分离的对碳青霉烯类药物耐药的3株摩根摩根菌(M1、M2和M3)的耐药机制和传播方式。方法采用琼脂稀释法进行药物敏感性试验;肠杆菌科基因间重复性一致序列(ERIC)-聚合酶链反应(PCR)用于分析菌株的分子流行病学特征;特异性PCR扩增检测细菌编码β-内酰胺酶的基因;接合试验和提取质粒进行酶切分析耐药基因可传递性和耐药质粒的同源性;耐药基因两边序列测序分析耐药基因的遗传背景;提取外膜蛋白电泳分析菌株外膜蛋白的改变。结果 3株分离菌和对应的接合子均扩增出介导碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)-2型基因,其中M1和M2为相同克隆株;质粒接合试验成功传递了对碳青霉烯类药物的耐药性,KPC-2基因被携带在酶切后片段完全不同的3个质粒上,耐药基因的遗传背景却相同;3株菌均缺失了相对分子质量约为38 000的外膜蛋白而出现36 000的外膜蛋白。结论 3株菌来自2种克隆株,均携带KPC-2基因。该基因由3个不同的质粒携带,同一可移动序列可能介导了KPC-2基因在3株细菌的不同质粒上转移。产KPC-2型碳青霉烯酶及外膜蛋白缺失可能共同导致了所分离的摩根摩根菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药。     

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药机制

目的探讨该院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药机制。方法采用ATB Expression进行细菌鉴定和药物敏感试验。应用PCR法对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药基因IMP、VIM和外膜孔蛋白基因OprD2进行检测。结果 70株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对多黏菌素、阿米卡星、庆大霉素耐药率分别为1.4%、47.1%、65.7%,对头孢他啶、头孢吡肟、环丙沙星的耐药率分别为64.3%、60.3%、71.4%;70株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中,IMP阳性30株(42.9%)、VIM阳性13株(17.6%),膜微孔蛋白OprD2缺失70株(100.0%)。结论耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌多重耐药情况严重。外膜孔蛋白基因OprD2的缺失是该院铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗菌药物的主要机制。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药机制研究

目的探讨2014年该院收集的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制。方法采用纸片扩散法或者Vitek 2Compact全自动药敏分析系统初筛亚胺培南非敏感菌株,琼脂稀释法确证亚胺培南非敏感肺炎克雷伯菌;通过Carba NP确证试验检测碳青霉烯酶表型;通过PCR扩增及测序检测碳青霉烯酶基因、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因、质粒携带的AmpC基因在菌株中携带情况;外膜蛋白SDS-PAGE分析菌株外膜蛋白的改变;外排泵抑制剂羰酰氰氯苯腙(CCCP)抑制试验检测不产碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌中是否存在针对碳青霉烯类抗菌药物的外排泵。结果琼脂稀释法验证30株为碳青霉烯非敏感菌株,其中19株为Carba NP表型试验阳性,其中18株产KPC-2,1株产NDM-1。11株Carba NP表型试验阴性的不产碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌的ESBLs、AmpC酶的携带率为blaCTX-M 72.7%,blaSHV 27.3%,blaTEM 72.7%,blaDHA 27.3%。SDS-PAGE结果显示编号2368、2875、3050的菌株OmpK36缺失,其余菌株未发现外膜蛋白缺失。CCCP存在时,11株不产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的最小抑菌浓度值均明显降低。结论碳青霉烯酶产生,尤其是产KPC-2是该院CRKP的主要耐药机制,外排泵的高表达,外膜蛋白的缺失合并产AmpC酶也发挥了重要作用。     

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌外膜蛋白表达的分析

目的筛选碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌并了解其耐药情况,分析碳青霉烯类耐药菌及碳青霉烯类敏感菌的外膜蛋白表达情况。方法采用琼脂二倍稀释法筛选碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌,运用聚合酶链反应(PCR)技术检测外膜蛋白基因carO;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜蛋白的表达情况。结果 110株临床分离鲍曼不动杆菌中的32株细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药,此32株碳青霉烯类耐药菌除对多黏菌素B敏感性为100%,对其他所试药物均呈不同程度耐药;碳青霉烯类鲍曼不动杆菌均携带carO基因,SDS-PAGE分析显示碳青霉烯类耐药菌株与敏感菌株相比,在相对分子质量约22×103和50×103等处的蛋白条带存在差异。结论鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药情况严重,且碳青霉烯类耐药菌与敏感菌的外膜蛋白在表达上存在明显差异。     

碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的敏感性及分子特点分析

目的分析碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae without producing carbapenemase,CRKPPC)的抗菌药物敏感性、β-内酰胺酶基因和外排泵基因的分布及外排泵抑制剂的抑制作用。方法收集2012—2014年我院碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌108株,用Mastdiscs combi Carba plus纸片系统检测碳青霉烯酶表型。用微量肉汤稀释法测定CRKPPC菌株对抗菌药物的敏感性;用PCR和DNA测序技术检测β-内酰胺酶耐药基因,包括超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamase,ESBL)和质粒介导的头孢菌素酶(Amp C)编码基因及外排泵基因acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH;外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)和利血平抑制试验分析外排泵在碳青霉烯耐药中的作用;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36的表达。结果碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌菌株中有26株细菌为CRKPPC;这26株细菌对β-内酰胺类药物高度耐药,对阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率均较高,但对替加环素、多黏菌素、头孢他啶/阿维巴坦和氨曲南/阿维巴坦等有很好的敏感性; blaCTX-M和blaSHV检出率依次为76.9%和57.7%;外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36均有不同程度的缺失,缺失率分别为57.7%和19.2%;80%以上的细菌中存在acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH基因; CCCP对碳青霉烯类药物具有显著的抑制作用,而利血平没有明显的抑制作用。结论替加环素、多黏菌素可以作为CRKPPC联合用药的基础药物。CRKPPC菌株中存在Amp C、ESBLs及不同程度的外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36缺失,但外排泵对碳青霉烯类药物的外排作用是CRKPPC对碳青霉烯耐药的主要机制,外排泵抑制剂可能在这种细菌引起的感染治疗中有重要价值。     

碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的药物敏感性及分子特征分析

目的分析碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae without producing carbapenemase,CRKPPC)的抗菌药物敏感性、β-内酰胺酶基因和外排泵基因的分布及外排泵抑制剂的抑制作用。方法收集2012—2014年我院碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌108株,用Mastdiscs combi Carba plus纸片系统检测碳青霉烯酶表型。用微量肉汤稀释法测定CRKPPC菌株对抗菌药物的敏感性;用PCR和DNA测序技术检测β-内酰胺酶耐药基因,包括超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamase,ESBL)和质粒介导的头孢菌素酶(Amp C)编码基因及外排泵基因acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH;外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)和利血平抑制试验分析外排泵在碳青霉烯耐药中的作用;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36的表达。结果碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌菌株中有26株细菌为CRKPPC;这26株细菌对β-内酰胺类药物高度耐药,对阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率均较高,但对替加环素、多黏菌素、头孢他啶/阿维巴坦和氨曲南/阿维巴坦等有很好的敏感性; blaCTX-M和blaSHV检出率依次为76.9%和57.7%;外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36均有不同程度的缺失,缺失率分别为57.7%和19.2%;80%以上的细菌中存在acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH基因; CCCP对碳青霉烯类药物具有显著的抑制作用,而利血平没有明显的抑制作用。结论替加环素、多黏菌素可以作为CRKPPC联合用药的基础药物。CRKPPC菌株中存在Amp C、ESBLs及不同程度的外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36缺失,但外排泵对碳青霉烯类药物的外排作用是CRKPPC对碳青霉烯耐药的主要机制,外排泵抑制剂可能在这种细菌引起的感染治疗中有重要价值。     

改良Hodge试验检测肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶的研究

目的 用改良Hodge试验(MHT)检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的产生,了解碳青霉烯酶基因分布.方法 从浙江大学医学院附属第二医院、浙江省东阳市人民医院、北京医院和四川大学附属华西医院4家医院收集3 718株肠杆菌科细菌,用纸片法检测细菌对厄他培南的敏感性,用MHT检测碳青霉烯酶的产生情况,并用PCR扩增常见的碳青霉烯酶基因.结果 4家医院的肠杆菌科细菌对厄他培南的不敏感率为3.04％ (113/3718),上述4家医院的不敏感率依次为5.09％、2.15％、2.59％和1.72％.MHT的总阳性率为2.29％ (85/3718),4家医院的阳性率依次为4.73％、1.21％、1.06％和1.58％.113株厄他培南不敏感菌株中,MHT阳性82株,阴性31株.85株MHT阳性菌株中,82株对厄他培南耐药或中介耐药,仅有3株敏感.82株MHT阳性、厄他培南不敏感的菌株中,肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因阳性65株,亚胺培南水解酶(IMP)基因阳性15株,其中2株KPC和IMP同时阳性,其他4株未扩增到常见碳青霉烯酶基因.31株MHT阴性、厄他培南不敏感的菌株和3株MHT阳性、厄他培南敏感的菌株均未扩增到常见碳青霉烯酶基因.结论 MHT可有效地检测肠杆菌科细菌中的碳青霉烯酶,具有敏感性高、假阳性率低的特点.肠杆菌科细菌所产碳青霉烯酶主要为KPC,其次为IMP.     

肺炎链球菌的耐药性及对红霉素耐药表型的分析

目的了解本院临床分离肺炎链球菌与幼儿园儿童携带株的耐药性差异,并分析其中红霉素耐药菌的耐药表现。方法用K-B法测定102株肺炎链球菌对9种抗菌药物的耐药情况,用双纸片法测定耐红霉素的耐药表型,通过x2检验对肺炎链球菌的临床分离株和儿童携带株的耐药率在统计学上的差异进行分析。结果本院临床分离肺炎链球菌与儿童携带肺炎链球菌对苯唑西林、氧氟沙星、氯霉素的耐药率在统计学上有显著性差异(P<0.05),而对红霉素、左旋氧氟沙星、克林霉素、复方新诺明、四环素、万古霉素的耐药率在统计学上无显著性差异(P>0.05)。102株肺炎链球菌中只在一株中发现M耐药表型,其余cMLs耐药表型。结论本院临床分离肺炎链球菌与/L童携带菌株对大多数抗菌药物的耐药情况是一致的,对红霉素、克林霉素,复方新诺明、四环素的耐药率较高,有的甚至达到100%。这些实验菌株中对红霉素的耐药表型以cMLs为主。     

Multidrug Resistance

Resistance of malignant cells to cytotoxic agents is often a limiting factor to successful chemotherapy. The classical multidrug resistance is characterised by overexpression of a membrane protein, P-glycoprotein, which acts like a drug extruding pump reducing accumulation of cytotoxic agents inside malignant cells, thereby preventing their function. Resistance is expressed simultaneously towards several structurally unrelated drugs. P-glycoprotein is also expressed in many normal human tissues, e.g., in the gastrointestinal tract, and this may be the reason for intrinsic resistance observed clinically in cancers derived from certain tissues. More often multidrug resistance is acquired during chemotherapy. The physiological function of P-glycoprotein is still unknown but it may have a role in cellular detoxification and secreting mechanisms. Interest in the phenomenon of multidrug resistance centres on the correlation of P-glycoprotein expression to clinical drug resistance. Another goal is to find mechanisms by which the function of P-glycoprotein as a multidrug transporter is prevented and drug resistance reversed.     

Macrolide Resistance in Staphylococcus aureus: Inducers of Macrolide Resistance

Several macrolide-, lincosamide-, and streptogramin B-type (MLS) antibiotics were tested as inducers of erythromycin A (EM)-resistant [¹⁴C]leucine incorporation. Only 14-membered-ring macrolides having a glycosidically linked 6-deoxy sugar at the C-3 position of the lactone ring and the structurally dissimilar lincosamide, celesticetin, showed inducer activity. Modifications of EM at the C-4″ position of cladinose can apparently destroy the inducer property but do not affect the inhibitory properties of the antibiotic. The findings clearly show that inducer and inhibitor activities can be dissociated and are consistent with the concept that distinct binding/receptor sites are utilized for inhibition of ribosome function and induction of resistance.     

红霉素耐药葡萄球菌对克林霉素诱导性耐药的研究

目的：了解临床分离的红霉素耐药葡萄球菌对克林霉素诱导性耐药的发生率，比较双纸片扩散法（D试验）中纸片之间距离对试验结果的影响。方法VITEK-2微生物分析系统检测为红霉素耐药、克林霉素敏感或中介的葡萄球菌135株，其中金黄色葡萄球菌（SA）为55株，凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）为80株。比较红霉素纸片与克林霉素纸片边距15 mm与26 mm对结果的影响。结果 D试验阳性率为57.0%，其中SA阳性率70.9%， CNS为47.5%（P＜0.01）。纸片边距15 mm组D试验阳性77株，26 mm组仅69株，漏检率10.4%（P＜0.05）。结论实验室应常规开展D试验，D试验中双纸片间距以15 mm为佳。     

大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性及耐药基因检测

目的：了解大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药情况与耐药基因携带情况。方法：使用K-B法检测大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性,同时用PCR技术扩增氨基糖苷类抗生素的耐药基因以明确其基因型。结果：40株大肠埃希菌中耐氨基糖苷类抗生素菌株32株,耐药率为80.0%（32/40）,其中aac（3）-Ⅰ 2株,占6.3%（2/32）,aac（3）-Ⅱ 28株,占87.5%（28/32）,aac（6′）-Ⅰ 12株,占37.5%（12/32）,aac（6′）-Ⅱ 8株,占25%（8/32）,ant（2″）-Ⅰ 4株,占18.8%（6/32）,ant（3″）-Ⅰ 9株,占28.1%（9/32）。结论：耐氨基糖苷类抗生素的大肠埃希菌比较普遍,氨基糖苷类耐药基因以aac（3）-Ⅱ和aac（6′）-Ⅰ为主。