枸杞多糖联合趋化因子对肝癌小鼠T辅助淋巴细胞分化的影响

目的: 探讨枸杞多糖(LBP)及枸杞多糖联合趋化因子(CXCL10)对实验性肝癌荷瘤小鼠辅助性T细胞分化的影响。 方法: 建立H22肝癌小鼠皮下移植瘤模型,分为模型组、LBP高剂量组(ig 100 mg·kg^-1)、LBP低剂量组(ig 50 mg·kg^-1)、LBP+CXCL10组(ig 100 mg·kg^-1+15 μg·kg^-1)、CTX组(ip 20 mg·kg^-1),另设正常对照组。连续给药2周后小鼠眼球取血,颈椎脱臼处死。分离小鼠肿瘤、脾脏、胸腺,计算肿瘤抑制率、胸腺指数、脾指数,流式细胞术检测小鼠外周血T辅助细胞1/T辅助细胞2(Th1/Th2)分化情况。 结果: 与模型组相比,LBP低、高剂量组、LBP+CXCL10组对肿瘤抑制率分别为37.83%,12.50%,14.14%; Th1/Th2分别4.44±3.05,2.48±2.93,4.36±1.96,其中LBP低剂量组及LBP+CXCL10组P<0.05。 结论: 低剂量LBP及LBP+XCL10能显著提高H22肝癌荷瘤小鼠Th1/Th2比率。     

黄芪多糖干预缺血-再灌注损伤大鼠心肌黏附分子ICAM-1,VCAM-1及p38通路的研究

目的: 研究黄芪多糖(APS)对大鼠缺血再灌注损伤心脏微血管内皮细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecular-1, ICAM 1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1),p38 MAPK及p38 MAPK通路的影响。方法: 70只Wistar大鼠随机分为7组,假手术组、缺血再灌注组、APS低、高剂量组(20,40 mg·kg^-1)、p28 MAPK阻断剂SB203580组(5 mg·kg^-1)、APS低剂量+SB203580组(APS 20 mg·kg^-1, SB203580 5 mg·kg^-1)、APS高剂量+SB203580组(APS 40 mg·kg^-1, SB203580 5 mg·kg^-1),给药30 d后, 进行冠状动脉左前降支结扎1 h后除去丝线恢复血流,心肌再灌注2 h后处死,取心肌组织,Western blot法测定心肌中ICAM-1,VCAM-1,p38,p-p38蛋白表达。结果: 缺血再灌注模型组ICAM-1和VCAM-1蛋白表达(1.367 3±0.131 9,0.810 3±0.051 3) 及信号通路蛋白p-p38(1.110 7±0.046 1),与假手术组(0.535 0±0.076 5,0.345 3±0.035 6,0.576 7±0.015 0)比较均显著增加(P<0.01);与缺血再灌注模型组比较,黄芪多糖高剂量与SB203580联合应用时对ICAM-1,VCAM-1,p-p38蛋白表达(0.870 2±0.120 7,0.474 5±0.047 2,0.807 5±0.076 2)的抑制作用,要强于单独应用黄芪多糖高剂量(1.225 1±0.086 5,0.657 3±0.062 1,1.056 3±0.070 3)或SB203580(1.013 1±0.073 1,0.562 3±0.045 6,0.942 3±0.035 8)的作用 (P<0.01,P<0.05)。结论: 黄芪多糖与SB203580联合应用时,可以明显抑制p38通路,下调由其介导的ICAM-1,VCAM-1在内皮细胞质膜上的表达,对抑制再灌注损伤有协同作用。     

喘平方对哮喘豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β1及TNF-α的影响

目的: 探讨喘平方防治支气管哮喘的作用机制。 方法: 取白化豚鼠60只,随机分为正常组、模型组、麻黄组(0.20 g·kg^-1)、洋金花组(0.07 g·kg^-1)、喘平方组(0.32 g·kg^-1)、地塞米松组(7.5×10^-4 mg·kg^-1),通过对豚鼠ip卵蛋白致敏并雾化吸入激发,建立实验性哮喘豚鼠模型;治疗组自注射第14天起每天ig给药1次,连续7 d,正常组及模型组给予生理盐水。观察豚鼠的一般情况,豚鼠肺泡灌洗液中免疫球蛋白E(IgE),转化生长因子β₁(TGF-β₁),肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化,肺组织病理情况。 结果: 各组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α分别为:正常组IgE(68.25±5.92) mg·L^-1,TGF-β₁(78.72±10.92)ng·L^-1,TNF-α(388.02±55.61) ng·L^-1;模型组IgE(137.28±14.38) mg·L^-1,TGF-β₁(172.39±14.04)ng·L^-1,TNF-α(752.76±51.25)ng·L^-1;喘平方组IgE(76.35±6.22) mg·L^-1,TGF-β₁(115.76±9.17)ng·L^-1,TNF-α(569.32±39.7) ng·L^-1;哮喘组及喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均高于正常组(P<0.05);喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均低于哮喘组(P<0.05)。 结论: 喘平方能够通过下调豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量,可降低气道高反应性、减轻气道炎症症状、控制或延缓气道纤维化进程。     

清醒Beagle犬安全药理心血管遥测系统验证研究

 目的 选用临床上报道的对QT间期延长有影响的2种阳性药和无影响的1种阴性药在符合GLP条件下对心血管遥测系统进行验证。方法 验证研究中,清醒Beagle犬分别静脉注射给予生理盐水(1 mL·kg^-1, iv, n=2)、卡托普利 (3 mg·kg^-1, iv,n=2)、特非那丁(3 mg·kg^-1, iv, n=2) 和索他洛尔 (10 mg·kg^-1, iv,n=2)。DSI遥测系统连续获取给予上述4种供试品后至少24 h数据,数据包括血压、心电图、心率等指标。DSI Ponemah ECG分析程序使用Fridericia心率校正公式对QT间期进行校正。结果 生理盐水对心血管参数没有明显的影响。卡托普利除导致心率显著增加和平均压下降外,对ECG参数无明显影响。特非那丁和索他洛尔在实验设计剂量下导致Beagle犬经心率校正的QT间期(QTcf)显著增加,增加大于10%。结论 实验数据显示,遥测系统能够检测到清醒Beagle犬中心血管功能的相关变化。在符合ICH安全药理S7B指南的条件下,遥测系统可用作药物所致QT间期延长的模型。
     

β-细辛醚对慢性点燃癫痫大鼠脑组织c-fos表达的影响

目的:研究β-细辛醚对慢性点燃癫痫大鼠脑组织即早基因c-fos表达的影响。方法:大鼠随机分为β-细辛醚高、中、低(200,100,50mg·kg^-1.d^-1)剂量组,阳性药对照组(苯妥英钠36mg·kg^-1),模型对照组(基质),灌胃给药。以青霉素点燃大鼠慢性癫痫,采用westernblot法测定海马c-fos的表达,免疫组化法测定脑皮质c-fos的表达。结果:β-细辛醚能显著增强癫痫大鼠脑内c-fos的表达,且呈量效关系。海马c-fos的表达量:β-细辛醚高、中、低剂量组为(1139.45±155.56),(1109.56±134.03),(1103.73±235.82)CNT.mm²,基质对照组(920.54±203.20)CNT.mm^-2,苯妥英钠组(1106.26±186.24)CNT.mm²。皮质c-fos阳性细胞数:β-细辛醚高、中、低剂量组为(87.1±2.2),(76.3±1.3),(59.9±1.3)个,基质对照组(39.3±2.6)个,苯妥英钠组(95.2±1.1)个。结论:β-细辛醚能增强癫痫大鼠脑内c-fos的表达,是机体重要的抗癫痫反应。     

注射用盐酸尼非卡兰的健康人体药动学研究

 目的研究注射用盐酸尼非卡兰在健康人体的药动学。方法24名健康志愿者,男女各半,按体重配对,随机分为3组,以奥硝唑为内标,采用HPLC-UV测定尼非卡兰0.3,0.4mg·kg^-1单次静脉推注和0.4mg·kg^-1静脉推注后0.4mg·kg^-1·h^-1连续静脉输注6h给药尼非卡兰经时血浓度,采用DAS2.0程序计算其主要药动学参数。结果志愿者注射用盐酸尼非卡兰0.3,0.4mg·kg^-1静脉推注,0.4mg·kg^-1负荷剂量后0.4mg·kg^-1·h^-1连续6h静脉输注,尼非卡兰ρ_max分别为(230.95±54.02),(358.62±73.98)和(444.30±88.12)μg·L^-1;t_1/2分别为(1.55±0.38)、(1.344±0.19)和(1.35±0.23)h;AUC_0-t分别为(193.53±45.19),(285.61±46.57)和(2609.02±498.20)μg·h·L^-1。结论血浆内源性物质不干扰尼非卡兰测定,方法简单,操作方便;尼非卡兰静脉注射给药人体内呈线性药动学特征;整个试验过程顺利,静脉推注和静脉输注给药志愿者无不良反应发生。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响及其机制

目的: 探讨川芎嗪(TMP)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)所诱导心肌细胞肥大的抑制作用及其机制。方法: 利用Ang Ⅱ(0.1 μmol·L^-1)刺激新生大鼠心肌细胞建立肥大细胞模型。培养心肌细胞随机分为6组:对照组,Ang Ⅱ(0.1 μmol·L^-1)组,低剂量TMP(0.01 mmol·L^-1)组,中剂量TMP(0.1 mmol·L^-1)组,高剂量TMP(1 mmol·L^-1)组,吡咯烷二硫化氨基甲酸酯(PDTC,100 μmol·L^-1)组。在给药处理24 h后,收集各组心肌细胞,检测心肌细胞总蛋白含量、β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达量和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达量。结果: Ang Ⅱ刺激导致培养心肌细胞的总蛋白含量[Ang Ⅱ组(296.7±27.6)mg·L^-1,对照组(184.3±11.6)mg·L^-1,P<0.05]、β-MHC mRNA表达量(Ang Ⅱ组0.936±0.059,对照组0.496±0.030;P<0.05)明显增加,这证实心肌肥大的发生;TMP以剂量依赖的方式抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。同时TMP 1 mmol·L^-1降低Ang Ⅱ诱导的肥大心肌细胞中磷酸化NF-κB(Ang Ⅱ组0.861±0.065,TMP组0.655±0.052,P<0.05)和I-κB蛋白的表达量(Ang Ⅱ 组0.785±0.042,TMP组0.525±0.045,P<0.05)。在应用Ang Ⅱ刺激心肌细胞同时,给予NF-κB抑制剂PDTC也能抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。结论: 川芎嗪通过抑制心肌细胞内NF-κB途径,而抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。川芎嗪的这些作用构成了它对心脏疾病具有保护作用的机制之一。     

血三七水煎剂抗血栓作用及其机制研究

目的: 研究血三七水煎剂的抗血栓作用及其作用机制。 方法: 观察小鼠给予不同剂量的(剂量分别为生药0.4,0.2,0.1 g·kg^-1)血三七水煎剂,7 d后对其凝血时间的影响;采用胶原蛋白-肾上腺素混合溶液诱导小鼠形成血栓,分别ig给予0.5 g·kg^-1血栓心脉宁片(阳性对照组)、不同剂量的血三七水煎剂(剂量分别0.6, 0.4,0.2 g·kg^-1),模型组给予等体积生理盐水,每天1次,连续7 d,观察给药后对小鼠偏瘫和死亡率的影响;制备大鼠血瘀证模型,ig给予血三七水煎剂,连续15 d后取血,测定血浆中血栓素B₂(TXB₂)、6-酮前列腺素F_1α(6-keto-PGF_1α)含量、血浆纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活抑制物(PAI)含量及对二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)、胶原(COL)诱导的血小板聚集的影响。 结果: 血三七水煎剂高、中、低剂量组的小鼠凝血时间分别为(164±23),(143±20),(112±21)s,均能明显延长小鼠凝血时间;血三七水煎剂高、中、低剂量组血栓模型小鼠死亡数分别1,2,2只,偏瘫数分别为2,2,3只,与模型组比较存在显著性差异;血三七水煎剂可促使血瘀证模型大鼠血浆TXB₂,6-Keto-PGF_1α,t-PA含量均减少,PAI含量升高,抑制血小板聚集。 结论: 血三七水煎剂具有较强的抗血栓作用,具体作用机制可能与影响血小板功能和聚集相关。     

3种干预方法对焦虑大鼠高架十字迷宫行为的影响

目的: 比较研究不同干预方法对焦虑大鼠高架十字迷宫(EPM)实验相关行为指标的影响。方法: 对60只SD雄性大鼠随机分组,即A组(安静对照组10只)、模型组(M0组50只),对M0组进行21 d的随机不可预知的焦虑刺激造模,同期A组不加干预;造模结束后随机将M0组分为5组进行28 d恢复,即M1组(模型恢复组,色拉油4.0 g·kg^-1·d^-1 ig)、M2组(模型运动组,色拉油4.0 g·kg^-1·d^-1 ig)、M3组(模型卵油组,卵油4.0 g·kg^-1·d^-1 ig)、M4组(模型运动卵油组,卵油4.0 g·kg^-1·d^-1 ig)、M5组(模型安定组,安定2.0 mg·kg^-1·d^-1 ig),每组10只,恢复期末所有组进行EPM实验,测大鼠5 min开臂运动时间、开臂运动距离、进入开臂次数。结果: 开臂运动时间M2,M3,M4依次为(185.3±10.8),(176.8±10.6),(177.6±11.1)s明显高于M1(145.4±21.6)s;开臂运动距离依次为M2,M3,M4(975.5±27.1),(945.7±19.7),(947.1±18.9)cm明显高于M1(732.9±18.9)cm;进入开臂次数M2,M3,M4依次为(10.9±2.4),(11.3±1.5),(11.6±1.1)次,明显高于M1(7.7±1.5)次,(均P<0.05)。结论: 28 d恢复期后,运动、卵油、运动卵油复合法对焦虑行为有明显改善,运动组恢复最佳,但自然恢复手段在28 d内无明显效果。     

超微粉通心络对冠脉结扎致大鼠心肌梗死的保护作用及机制探讨

目的：观察超微粉通心络对大鼠实验性心肌梗死的影响，探讨其治疗缺血性心脏病的作用机制。方法：98只SD大鼠随机分为7组：假手术组、模型组、合心爽组(0.15 mg·kg^-1)、通心络原工艺组(1.2 g·kg^-1)、超微粉通心络组(1.2，0.6，0.3 g·kg^-1)。通过结扎冠状动脉制备大鼠心肌梗死模型，采用红四氮唑(TTC)染色法测定大鼠心肌梗死范围，同时测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)；将60只Wistar大鼠随机分为6组，即正常组、阿司匹林组(0.15 mg·kg^-1)、通心络原工艺组(1.2 g·kg^-1)、超微粉通心络组(1.2，0.6，0.3 g·kg^-1)，观察药物对二磷酸腺苷(ADP)和胶原诱导大鼠血小板聚集影响。结果：超微粉通心络明显减小梗死区面积，超微粉高、中、低剂量组缺血面积分别为(2.7±2.1)%,(3.4±1.2)%,(2.8±1.8)%，与模型组(8.9±5.9)%相比P<0.05；超微粉高、中、低剂量组缺血质量百分比分别为(8.4±3.5)%,(8.7±4.1)%,(9.7±4.1)%，与模型组(12.2±3.6)%相比P<0.05，P<0.01。对心肌梗死引起的MDA,CK,LDH升高亦有明显抑制作用(与模型组比P<0.05或P<0.01)，同时可升高血清SOD活性(与模型组相比P<0.05)；超微粉通心络高、中、低剂量组ADP诱导的血小板最大聚集率分别为(26.9±9.2)%,(24.4±13.4)%,(30.6±12.2)%，与正常组(44.3±15.7)%相比P<0.05或P<0.01；超微粉通心络高、中、低剂量组胶原诱导的血小板最大聚集率分别为(33.8±6.9)%,(32.1±8.3)%,(41.5±7.8)%，与正常组(49.2±15.9)%相比P<0.05或P<0.01。结论：超微粉通心络对冠脉结扎引起的大鼠心肌梗死有明显的保护作用，其机制可能与其抗氧化作用及抑制血小板聚集有关。     

基于PI3K/Akt/eNOS信号通路探讨补阳还五汤对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的影响

目的:探讨补阳还五汤改善蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的相关分子机制。方法:将雄性SD大鼠80只随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤低、高剂量组(13,26 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组20只。按照10 mL·kg~(-1)每天灌胃给药2次,连续7 d。采用二次枕大池注血法制作蛛网膜下腔出血模型,评估各组大鼠1,3,5,7 d的神经功能评分,利用苏木素-伊红(HE)染色对各组大鼠基底动脉直径进行测量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测基底动脉脑组织磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),内皮型一氧化氮合酶(eNOS),神经型一氧化氮合酶(n NOS)蛋白的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠脑脊液中一氧化氮(NO),内皮素-1(ET-1)的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显下降(P 0. 05),基底动脉直径明显缩小(P 0. 05),基底动脉脑组织p-PI3K,p-Akt,eNOS,n NOS蛋白的表达明显降低(P 0. 05),脑脊液中NO明显减少(P 0. 05),ET-1明显升高(P 0. 05);与模型组比较,不同剂量补阳还五汤组(26,13 g·kg~(-1)·d~(-1))在治疗后3～5 d后大鼠神经功能评分均有不同程度升高,基底动脉直径明显增宽(P 0. 05),p-PI3K,p-Akt,eNOS蛋白的表达明显升高(P 0. 05),NO明显升高(P 0. 05),ET-1明显下降(P 0. 05);与低剂量组比较,经过7 d的补阳还五汤治疗后高剂量组神经功能评分明显升高(P 0. 05),基底动脉直径增宽更明显(P 0. 05),p-PI3K,p-Akt,eNOS蛋白的表达更高(P 0. 05),NO升高更明显(P 0. 05),ET-1下降更明显(P 0. 05)。结论:补阳还五汤对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的保护作用可能与上调PI3K/Akt/eNOS信号通路中的p-PI3K,p-Akt,eNOS的表达,从而增加NO产生有关。     

The vasoprotective effect of JP05 through the activation of PI3K/Akt-dependent eNOS and MEK/ERK pathways in brain endothelial cells

Aim of the study

Endothelial dysfunction is involved in stroke. Recent therapeutic options for stroke have focused on the combination therapy with a polyherbal mixture. This study was designed to provide insight into the effects of JP05, a water extract of 12 herbs, on the levels of regulators in bEnd.3 mouse brain endothelial cells.

Materials and methods

Production of endothelial nitric oxide synthase (eNOS)-mediated nitric oxide (NO), the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and the phosphorylations of eNOS, phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt, extracellular signal-regulated protein kinase (ERK) and cAMP response element binding protein (CREB) in JP05 were assayed in bEnd.3 cells, a mouse brain endothelial line.

Results

JP05 led to increase the levels of eNOS-mediated NO generation and VEGF expression in bEnd.3 cells. JP05 induced the phosphorylation of eNOS, Akt and ERK in bEnd.3 cells. As well, JP05 blocked the inhibition of PI3K/Akt and ERK activities by LY294002 (PI3K/Akt inhibitor) and PD98059 (mitogen-activated protein kinase inhibitor), respectively. JP05 also induced the phosphorylation of CREB, which plays an important role in endothelial cell function and blood vessel development.

Conclusion

Taken together, these results indicate that JP05 can upregulate eNOS-mediated NO generation and VEGF expression through the ERK and/or PI3K/Akt activation, an upstream event of angiogenesis. JP05 with vasoprotective properties has a potential therapy for human brain diseases including stroke.     

人参皂苷Rg1 通过PI3K/Akt/eNOS信号通路调控异丙肾上腺素致急性心肌缺血大鼠心肌的抗氧化作用

目的:观察人参皂苷Rg_1预处理对异丙肾上腺素致急性心肌缺血大鼠心肌磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)通路的影响。方法:采用异丙肾上腺素建立SD大鼠急性心肌缺血模型,将50只大鼠随机分为正常组,模型组,葛根素组,人参皂苷Rg_1高、低剂量组(20,10 mg·kg~(-1));Moor激光血流成像系统观测各组大鼠心脏表面血流值;酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定各组大鼠血清中肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH),一氧化氮(NO)的水平以及心肌中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测各组大鼠心肌内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达变化;蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测各组大鼠心肌PI3K,Akt,p-Akt蛋白的表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠心脏表面平均血流量明显下降,血清NO降低,CK,LDH升高;心肌MDA含量升高,GSH-Px含量下降,eNOS mRNA含量显著降低,PI3K/Akt通路蛋白的表达有所降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,人参皂苷Rg_1高、低剂量组,心肌表面平均血流有显著提升,血清NO升高,CK,LDH降低,心肌MDA含量降低,GSH-Px含量升高,eNOS mRNA表达含量升高,PI3K/Akt通路蛋白的表达有所升高(P0.05,P0.01)。结论:人参皂苷Rg_1可以通过调控PI3K-Akt-eNOS信号通路改善急性心肌缺血大鼠心脏变化防治心血管病变。     

蒙花苷与木犀草素联用对离体血管的舒张作用及其机制研究

为研究蒙花苷与木犀草素联用对SD大鼠离体血管环的舒张作用及其作用机制。采用离体血管环张力实验观察蒙花苷单用(7.5×10~(-6)g·mL~(-1))、木犀草素单用(7.5×10~(-6)g·mL~(-1))、蒙花苷与木犀草素联用(1∶4)对去甲肾上腺素引起的SD大鼠完整、去内皮、L-NAME及吲哚美辛预处理胸主动脉收缩的影响;Western blot检测胸主动脉p-Akt,p-eNOS等蛋白水平。实验结果显示,蒙花苷与木犀草素联用对完整、去内皮及L-NAME预处理的血管环舒张率高于两者单用;且两者联用能显著促进血管中p-Akt,p-eNOS蛋白表达。实验结果说明蒙花苷与木犀草素联用能有效舒张血管,其机制可能是通过激活PI3K/Akt/NO信号通路,增强eNOS活性,从而增加NO的合成与释放,达到舒张血管的作用。     

新藤黄酸通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的研究

目的:探讨新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的机制。方法:MTT试验检测新藤黄酸对B16细胞增殖抑制的作用;采用Hochest 33258荧光染色观察新藤黄酸对B16细胞的影响;透射电镜观察新藤黄酸对B16细胞的超微结构的改变;Western blot法检测PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt,p-mTOR,PTEN蛋白的变化以探讨新藤黄酸诱导B16细胞凋亡的分子机制。结果:新藤黄酸对黑色素瘤细胞B16生长和增殖有明显地抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加和作用时间的延长细胞活力明显下降;Hochest 33258染色结果显示,新藤黄酸处理的细胞中呈现明显的凋亡特征;透射电镜观察发现新藤黄酸作用B16细胞后,细胞发生明显凋亡的形态学变化;Western blot检测表明p-PI3K蛋白表达呈时间依赖性下降;p-Akt蛋白表达呈时间依赖性下降,而PI3K,Akt蛋白表达量基本不变,p-mTOR蛋白的表达随着时间的延长有所下降,PTEN蛋白的表达呈时间依赖性增加。结论:新藤黄酸在一定的时间和浓度范围内能够抑制黑色素瘤B16细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

不同运动负荷对大鼠股外肌一氧化氮合酶体系的影响

目的:测定不同运动负荷时大鼠股外肌组织中一氧化氮-一氧化氮合酶(NO-NOS)体系的各成分含量或活性的变化,探讨运动训练对股外肌的影响。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为3组,即安静对照组、中等运动强度组、运动疲劳组,每组20只。对安静对照组大鼠进行常规饲养,不加任何干预,对中等运动强度组大鼠进行中等强度游泳训练,对运动疲劳组大鼠建立运动性疲劳模型。采用生化试剂盒测定各组大鼠末次训练后股外肌组织NO-NOS体系含量或活性。结果:与安静对照组比较,中等运动强度组大鼠股外肌组织中NO含量、总一氧化氮合酶(tNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);运动疲劳组大鼠的股外肌组织NO含量,tNOS,eNOS,nNOS活性水平均无显著变化,其中NO含量,tNOS,nNOS活性水平有升高趋势。与中等运动强度组比较,运动疲劳组大鼠iNOS活性水平显著降低(P<0.05)。结论:股外肌组织中NO-NOS体系各成分不同运动负荷作用下会产生不同程度的变化,中等强度运动可导致股外肌组织中的NO含量和tNOS,eNOS,nNOS,iNOS活性的升高,而疲劳运动则有引起iNOS,eNOS活性降低的趁势。     

木豆叶提取物对H_2O_2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的研究木豆叶提取物(ECCL)对H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型,于H2O2刺激前加入PI3K信号通路阻断剂LY294002(LY)预处理10 min,加入20、50μg/m L ECCL预处理24 h。MTT法检测细胞存活率,比色法测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,Western blotting检测细胞内p-Akt、p-e NOS蛋白表达。结果与模型组比较,ECCL可明显增加H9c2细胞H2O2损伤后细胞存活率(P0.01),增加SOD活力,降低MDA、LDH水平,增加p-Akt和p-e NOS蛋白表达(P0.05、0.01),LY可阻断ECCL对H9c2的上述作用。结论 ECCL能够减轻H2O2所致的H9c2细胞损伤,可能是通过激活PI3K通路促进其下游因子Akt和e NOS磷酸化发挥作用。     

老鼠簕生物碱A对肝纤维化大鼠PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路的影响

目的观察老鼠簕生物碱A(HBOA)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响,探讨HBOA抗肝纤维化的作用机制。方法大鼠随机分成对照组、模型组及HBOA高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组和秋水仙碱(0.4 mg/kg)组。除对照组外,其余各组ig给予50%CCl4橄榄油溶液,每周2次,连续12周,诱导肝纤维化大鼠模型。于造模第9周起,给药组分别ig相应的受试药物,每天1次,给药4周。实验结束后,计算各组大鼠体质量变化、肝脏指数;检测各组大鼠肝匀浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;蛋白免疫印迹法(Western blotting)法检测肝组织P-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达。结果与模型组比较,各给药组大鼠体质量增加量显著升高,均能降低肝脏指数及肝组织中ALT、AST活性;此外,HBOA高、中剂量组均能显著抑制p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、p-p70S6K蛋白的表达。结论 HBOA对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路有关。     

Promotion of direct angiogenesis in vitro and in vivo by Puerariae flos extract via activation of MEK/ERK‐, PI3K/Akt/eNOS‐, and Src/FAK‐dependent pathways

Puerariae flos has been used for oriental herbal medicine; however, its angiogenic effect has not been elucidated. We found that the extract from Puerariae flos (PFE) increased in vitro angiogenic events, such as endothelial cell proliferation, migration, and tube formation, as well as in vivo neovascularization. These events were followed by the activation of multiple signal modulators, such as extracellular signal‐regulated kinase (ERK), Akt, endothelial nitric oxide synthase (eNOS), nitric oxide production, p38, Src, and focal adhesion kinase (FAK), without increasing vascular endothelial growth factor (VEGF) expression. Inhibition of ERK, Akt, and eNOS suppressed PFE‐induced angiogenic events, and inhibition of p38 and Src activities blocked PFE‐induced endothelial cell migration. PFE did not affect the expression of intracellular adhesion molecule‐1 and vascular cell adhesion molecule‐1 and transendothelial permeability, which are involved in the adverse effects of the well‐known angiogenic inducer VEGF. These results suggest that PFE directly stimulates angiogenesis through the activation of MEK/ERK‐, phosphatidylinositol 3‐kinase/Akt/eNOS‐, and Src/FAK‐dependent pathways, without altering VEGF expression, vascular inflammation, and permeability in vitro and in vivo and may be used as a therapeutic agent for ischemic disease and tissue regeneration. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

银杏叶提取物对同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究银杏叶提取物(EGb)对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞损伤的保护作用。方法:用硝酸还原酶法和化学比色法测定细胞NO生成量及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性;并分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术检测同型半胱氨酸和EGb对内皮细胞eNOS mRNA和蛋白表达的影响。结果:同型半胱氨酸使内皮细胞eNOS mRNA和蛋白表达减少,eNOS活性降低,NO生成减少。与同型半胱氨酸组相比,EGb干预组可上调eNOS mRNA和蛋白的表达,增强eNOS活性,使NO生成增多。结论:同型半胱氨酸通过下调eNOS表达损伤内皮细胞功能,而EGb可预防这一影响从而对内皮细胞产生保护作用。