人参多糖对小鼠造血干/祖细胞的动员作用

目的:探讨人参多糖(GPS)对小鼠造血干/祖细胞(HSPC)的动员作用,为从植物多糖中寻找造血干细胞动员剂提供实验依据.方法:采用WBC、MNC计数、免疫细胞化学、流式细胞术和造血祖细胞体外培养检测经GPS动员后外周血WBC、MNC、CD34 细胞和CFU-Mix产率的变化.结果:给小鼠尾静脉注射GPS 2mg/kg后4h外周血WBC、MNC升高达到峰值,为NS组的3倍和3.5倍;外周血中CD34 细胞百分率和CFU-Mix产率分别为0.0079±0.0010和(25.0±9.1)cfu/2×105MNC,显著高于NS组;GPS和G-CSF联合动员时外周血WBC、MNC数量,CD34 细胞百分率和CFU-Mix产率都明显优于单用GPS的效果.结论:人参多糖对小鼠HSPC有一定动员作用,与G-CSF联合应用有协同作用.     

氨磷汀对化疗中外周血造血干/祖细胞的保护作用

目的　评估氨磷汀 (amifostine ,AMF)在保护造血干 /祖细胞免受化疗药物依托泊甙 (etoposide ,VP 16)损伤方面的作用。方法　提取新鲜和冻存的外周血造血干细胞 (PBSC)和HL 60细胞 ,分为AMF VP 16组、VP 16组和空白对照组 ,用台盼蓝拒染法检测细胞活性 ,CFU GM集落培养计数 ,流式细胞仪测定细胞的凋亡率。结果　新鲜和冻存的PB SC样本中 ,AMF VP 16组的细胞存活率和集落形成能力较VP 16组显著提高 (均P <0 .0 5 ) ;HL 60细胞样本中 ,AMF VP 16组与VP 16组凋亡率的差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论　AMF能保护造血干 /祖细胞免受化疗药物VP 16的损伤 ,并且不影响VP 16对HL 60细胞的杀伤效果。     

人参多糖动员的造血干/祖细胞移植重建造血衰竭小鼠造血功能的研究

目的:探讨经人参多糖动员的外周血造血干/祖细胞移植对造血衰竭小鼠造血重建的作用。方法:建立小鼠造血衰竭模型,移植经人参多糖动员的外周血单个核细胞,检测受体小鼠生存时间,外周血WBC,脾湿重及脾集落数,进行染色体嵌合实验。结果:经人参多糖动员的雄性小鼠外周血MNC1×105个输注给致死剂量照射的雌性小鼠,可明显延长小鼠存活时间;提高受体小鼠外周血WBC数;亦能增加脾湿重,提高脾集落(CFU-S)数;经Y染色体检测(PCR法)受体小鼠外周血单个核细胞可检出581bpY染色体序列。结论:经人参多糖动员小鼠的外周血中存在数量较多的造血干/祖细胞,回输给造血衰竭小鼠能重建小鼠造血功能。     

用胚胎干细胞诱导的造血干/祖细胞重建小鼠造血功能研究

目的 胚胎干细胞体外诱导分化出现CD34^ 造血干/祖细胞，然后将其注射入致死量照射小鼠体内，以研究其重建造血功能。方法 胚胎干细胞自由分化形成胚胎体后，加入造血刺激因子混合液以诱导产生CD34^ 造血干／祖细胞，将这些造血干／祖细胞注射入经致死剂量照射的小鼠，观察小鼠存活率的改变，并取存活2个月的小鼠骨髓和脾脏，PCR检测嵌合体形成。结果 体外分化第13日CD34^ 造血干／祖细胞比例可高达17．36％，将这些细胞注射入致死量照射小鼠后，可提高存活率达86．67％，存活小鼠的骨髓和脾脏均检测到供体来源的细胞。结论 胚胎干细胞体外分化获得CD34^ 造血干/祖细胞，且后者具有其相应的正常生物学功能。     

促进脐血造血干/祖细胞植入策略的研究进展

脐血移植(cord blood transplantation,CBT)已广泛地应用于儿童及成人恶性及非恶性血液病的治疗.与其他来源的造血干/祖细胞移植相比,行CBT后造血系统及免疫系统重建较缓慢且存在一定的植入失败率,从而增加了患者感染等导致的移植相关死亡率.因此,如何促进脐血造血干/祖细胞的植入是CBT多年来研究的...     

脐血造血干/祖细胞体外扩增的实验研究

目的探讨因子组合FL+TPO+SCF+IL-6对脐血CD34 +细胞的体外扩增效应.方法采用Mini-MACS分离纯化出CD34+细胞, 在无基质接触的液体悬浮培养体系培养,通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪技术、集落形成试验等动态测定细胞扩增情况.结果培养4周后,FL+TPO+SCF+IL-6组细胞总数、集落形成数均比扩增前显著增加(P＜0.05),并且能维持一定比例的CD34+、Th y-1+细胞;SCF+IL-3+IL-6+GM-CSF+EPO组在第2周时集落形成数已降低,第4周时集落形成数、CD34+细胞基本检测不到.结论与经典因子组合SCF+IL-3+IL-6+G M-CSF+EPO相比,因子组合FL+TPO +SCF+IL-6能在较长时间内有效扩增脐血造血干/祖细胞, 是一个优化组合方案.     

当归多糖动员的造血干/祖细胞移植重建小鼠造血功能的研究

目的 探讨当归多糖（Angelica polysaccharides,APS）动员的造血干／祖细胞（hematopoietic stem／progenitor cell．HSPC）对造血衰竭小鼠造血功能重建的作用。方法 将APS动员的雄性BALB／c小鼠的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）静脉输注给受到8．5Gy^60Coγ射线照射的雌性同系受体小鼠;观察受体小鼠外周血白细胞（WBC）、血红蛋白（HGB）、血小板（PLT）的变化及30d存活情况;采用PCR方法鉴定其造血重建的来源。结果 APS组受体小鼠WBC、PLT、HGB、30d存活数均明显高于对照组和NS组（P〈0．05）;对APS组存活小鼠进行Y染色体PCR分析,证实雌性受体小鼠重建的造血细胞来自雄性供体。结论 APS动员的小鼠外周血HSPC移植后能够重建造血衰竭小鼠长期造血。     

氧化应激对铁过载造血干祖细胞造血功能的影响

目的 体外诱导脐血来源的造血干祖细胞铁过载,检测参与氧化应激的活性氧物质(ROS)的水平以及对造血干祖细胞造血功能的影响.方法 通过体外培养脐血单个核细胞(MNC)的过程中添加枸橼酸铁铵(FAC),建立铁过载造血干祖细胞模型.实验分组:对照组、FAC组、FAC+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、FAC+谷胱甘肽(GSH)组.检测各组细胞内ROS水平,并用抗氧化剂处理,检验这一过程中ROS、细胞内可变铁池(LIP)、凋亡水平、造血集落形成和脐血各系造血细胞数目的变化.结果(1)在培养液中加入不同浓度FAC(50、100、200、400μmol/L)培养不同时间(6、12、24 h),发现ROS水平随着FAC的浓度和培养时间变化,且在200μmol/L FAC的培养液中培养24h时ROS水平达到最高.(2)用抗氧化剂(NAC、GSH)联合FAC处理细胞发现,抗氧化剂处理组细胞内总的ROS以及髓系细胞和红系细胞内的ROS明显低于FAC组(均P＜0.05).(3)在200 μmol/LFAC的浓度下,培养脐血MNC 24 h后细胞内总的LIP、髓系细胞和红系细胞内LIP水平均显著高于对照组(均P＜0.05),但抗氧化剂NAC和GSH对铁过载细胞内LIP没有明显影响.(4)对脐血造血干祖细胞造血功能的检测发现:FAC组细胞凋亡比例[(20.90±3.45)％]明显高于对照组[(9.20±1.29)％](P＜0.05);造血集落形成单位(CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-mix)计数明显低于对照组(前3项两组间差异具有统计学意义,P ＜0.05);CD34+、CD33+、GlyA+细胞比例及细胞计数均显著低于对照组(均P＜0.05);这些损伤都可以通过NAC或GSH处理部分恢复.结论 氧化应激在铁过载造血干祖细胞的损伤中扮演着重要角色,可以通过升高细胞内ROS水平抑制其造血功能,清除细胞内多余的ROS能减轻这些损伤.研究结果可为治疗铁过载患者因氧化应激诱导的造血功能低下提供新的靶点和研究思路.     

中晚孕期与足月胎儿脐血干/祖细胞功能特性研究

目的　对比研究中、晚孕期和足月胎儿脐血造血干 /祖细胞的表型及功能特性 ,为造血干细胞宫内移植和基因治疗先天性疾病提供新的思路。方法　采用免疫磁珠分离法、流式细胞术、液体培养、半固体甲基纤维素培养等对中、晚妊期及足月胎儿脐血造血干 /祖细胞比例、对细胞因子的反应性、体外增殖及自我更新能力进行了测定。结果　未足月脐血中CD34+ 、CD34+ CD38- 细胞及CD34+ 细胞中CD34+ HLL DR+ 、CD34+ CD38- 细胞比例较足月脐血高 (平均 3 1 4 %、0 76 %比 0 78%、0 1 8%及 9 8%、2 0 4%比 3 9%、1 4 6 % ) ,产生的集落形成单位量 (CFU)较足月脐血高 ,且与CD34+ 细胞比例成正相关 (r =0 83) ,长期培养启动细胞 (LTC IC)约是足月脐血的 3倍 (5 7± 1 2 / 1 0 5细胞比1 7± 0 8/ 1 0 5细胞 ,P <0 0 5)。在短期液体培养体系中 ,不同胎龄脐血干 /祖细胞具有相似的扩增潜能 ,体外细胞因子支持下培养 7天 ,CFU C、细胞总数、CD34+ 细胞数、CD34+ CD38- 细胞数达高峰 ,之后逐渐下降 ,其中以SCF +FL +TPO +IL 3 +IL 6组合条件下效果最显著。结论　未足月胎儿 (尤其是中妊期 )脐血与足月胎儿脐血相比 ,含有较高的造血干 /祖细胞 ,有较强的集落形成能力 ,对细胞生长因子刺激敏感 ,在体外能有效地扩增和     

增殖细胞核抗原在脐血CD34+造血干/祖细胞中的表达及意义

目的　探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)在脐血造血干 /祖细胞中的表达及意义。方法　采用流式细胞仪技术对不同培养时间和不同培养条件下脐血CD34 细胞中PCNA的表达水平和细胞周期进行了测定。结果　新鲜分离的脐血中CD34 细胞低表达PCNA ,阳性率为 (11 6± 5 2 ) % ,在体外短期培养 ,无细胞因子的组合PCNA表达逐渐下降 ,而在含有各细胞因子组合的培养体系中 ,PCNA表达水平明显增高 ,其中以SCF ,IL - 3,IL - 6 ,FL ,Tpo组合作用最显著 ,在培养第 7天时 ,PCNA蛋白表达率为 (78 2± 8 7) % ,且S/G2 /M期的细胞占 (5 9 8± 6 7) % ,明显高于培养前。结论　脐血CD34 细胞低水平表达PCNA ,造血生长因子对CD34 细胞的促增殖作用与上调PCNA蛋白的表达有关。     

用CS-3000血细胞分离机进行自体外周血造血干/祖细胞采集的回顾性研究

目的 评价Baxter CS-3000 Plus血细胞分离机在外周血造血干/祖细胞采集中的效能及影响因素.方法 应用Baxter CS-3000 Plus血细胞分离机对50例患者采集104次,对采集数据进行回顾性分析.结果 采集过程中未发现严重不良反应.单次采集可获得单核细胞(MNC)2.13×108/kg(0.17～7.47×108/kg)、CD34 细胞2.27×106/kg(0.02～10.78×106/kg),平均采集2次即可达到采集目标.CD34 细胞与MNC细胞数呈明显正相关(r=0.598,P＜0.001).采集物CD34 细胞每千克体重计数与外周血CD34 细胞计数也呈正相关(r=0.688,P＜0.001),而与外周血白细胞总数、MNC、红细胞压积和患者年龄无相关性.性别和诊断不是CD34 细胞采集量的影响因素.结论 Baxtrr CS-3000Plus血细胞分离机可以安全高效地从外周血中分离出CD34 细胞;应用采集前外周血CD34 细胞计数可进行采集效能和采集时机的预测.     

造血干细胞移植后合并疱疹病毒感染的临床分析

目的：探讨造血干细胞移植（HSCT）合并疱疹病毒感染的预防和治疗方法。方法：对21例HSCT的临床资料进行回顾性分析。疱疹病毒感染的预防：给予无环鸟苷500mg/d，从0天－＋28天静脉滴注预防病毒感染，疱疹病毒感染的治疗：采用无环鸟苷，α－干扰素和丙种球蛋白联合方案治疗。结果：21例患移植后合并疱疹病毒感染5例（发生率23．8％），经过上述治疗后，5例疱疹病毒感染患全部治愈，无一例因疱疹病毒感染死亡。结论：应用无环鸟苷可推迟疱疹病毒感染的发生但不能阻断共发病，无环鸟苷，α－干扰素和丙种球蛋白联合方案是治疗的有效方法。     

Current status and prospects of hematopoietic stem cell transplantation in China

Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) is a highly effective and unique medical procedure for the treatment of most hematological malignancies. The first allogeneic transplantation was performed by E. Donnall Thomas in 1957. Since then, the field has evolved and expanded worldwide. The first successful allogenic HSCT (allo-HSCT) in China was conducted in 1981. Although the development of allo-HSCT in China lagged, China has since made considerable contributions to the process of HSCT worldwide, with more than 10,000 HSCTs performed annually. In particular, haploid HSCT (haplo-HSCT) technology represented in the Beijing Protocol has demonstrated similar efficacy to human leukocyte antigen-matched HSCT and has gradually become the pre-dominant choice for allo-HSCT in China. Currently, the number of haplo-HSCT procedures exceeds 5000 per year, and the Beijing Protocol has been greatly improved by implementing updated individualized strategies for controlling complications, relapse, and infection management. In addition, innovative haplo-HSCT technologies developed by different medical transplantation centers, such as Soochow, Zhejiang, Fujian, Chongqing, and Anhui, have emerged, providing inspiration for the refinement of global practice. This review will focus on the current activity in this field and highlight important trends that are vital in China''s allo-HSCT process, examining the current viewpoint and future directions.     

当归多糖对小鼠外周血造血干细胞动员作用的研究

目的探讨当归多糖(APS)对小鼠外周血造血干细胞的动员作用。方法采用外周血白细胞(WBC)计数、淋巴细胞(LC)计数、免疫细胞化学、流式细胞术、造血祖细胞体外培养等实验技术观察APS的动员作用。结果APS动员后小鼠外周血的WBC、LC数明显高于生理盐水(NS)组(P<0.05);APS动员后外周血中CD34 细胞百分率明显高于NS组(P<0.05);APS组CFU-Mix产率显著高于NS组(P<0.01);并且APS和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)联合动员后的各项指标均高于单用APS或单用rhG-CSF组。结论APS对小鼠外周血造血干细胞有一定的动员作用,并且APS和rhG-CSF联合动员的效果好于单用APS或单用rhG-CSF的动员效果。     

亲缘半相合造血干细胞移植中第三方脐血辅助输注的作用分析

目的 探讨第三方脐血辅助输注在亲缘半相合造血干细胞移植中的作用.方法 回顾性分析2010年1月至2013年5月收治的确诊为恶性血液病,并已完成亲缘半相合造血干细胞移植的66例患者的临床资料,以是否回输第三方脐血细胞将患者分为两组：25例辅助性回输脐血者为试验组,41例未回输脐血者为对照组.对患者移植后造血恢复情况、移植物抗宿主病（GVHD）发生情况、其他并发症及预后等情况进行比较.结果 两组患者的年龄、性别、供者来源、疾病种类以及移植前疾病状况比较差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）.两组采用预处理方案比较有差异（P=0.00）,但此差异无临床意义.试验组回输单个核细胞数（MNC）为（9.94±2.88）×10^8/kg、CD34＋（5.46±3.54）×10^6/kg,对照组回输MNC （7.80±0.82）×10^8/kg、CD34＋ （3.54±1.60）×10^6/kg,试验组回输的MNC数多于对照组（P=0.00）,而两组回输的CD34＋细胞比较差异无统计学意义（P=0.16）.试验组较对照组WBC计数恢复快（P=0.023）,试验组与对照组WBC植活时间分别为（13.7±2.9）、（16.6±2.9）d;试验组Ⅲ～Ⅳ度GVHD发生率低（P =0.036）、早期细菌感染率（P=0.001）、真菌感染率（P =0.009）及出血性膀胱炎发生率低（P=0.00）均低于对照组,而两组PLT恢复情况（P=0.43）、Ⅰ～Ⅱ度GVHD发生率（P=0.27）以及植入综合征发生率（P=0.24）、肝窦阻塞综合征发生率（P=0.57）、病毒血症（P=0.31）发生率均差异无统计学意义.结论 使用脐血作为第三方辅助输注后可促进供者细胞植入,减轻GVHD的发生,但长期预后有待观察.     

小鼠颌下腺组织培养上清液对造血干细胞和骨髓细胞增殖影响的实验研究

本实验采用脾集落形成法和流式细胞术等技术,研究了小鼠颌下腺组织培养上清液（ＳＧＣＭ）对造血干细胞和骨髓细胞增殖的影响。结果表明：正常雄性和雌性ＳＧＣＭ对小鼠造血干细胞增殖和分化有明显促进作用：ＳＧＣＭ能能效促进小鼠骨髓细胞（ＢＭＣ）由相对静止期（Ｇ０／Ｇ１）进行增殖活跃期（Ｓ＋Ｇ２／Ｍ）,并能提高骨髓有核细胞数。研究提示,正常小鼠颌下腺可能通过分泌造血生长因子样物质促进小鼠造血干细胞增殖和全化并加     

白细胞群落参数用于骨髓移植后造血重建的预测评估

目的 评价DxH800血细胞分析仪中白细胞群落(CPD)参数用于预测骨髓移植后造血重建的可行性.方法 选取2013年7月至2014年9月于北京大学第一医院进行骨髓移植的患者109例,调取从移植当天到粒系植活(中性粒细胞绝对计数＞ 500个/μl)期间每天的血细胞计数(CBC)结果,分析其CPD参数,找到与植活相关的参数并确定临界值.结果 具有预测意义的参数是中性粒细胞平均体积(MNV)和单核细胞平均体积(MMV),其临界值分别为≥180 fl和≥190 fl,分别比中性粒细胞绝对计数提前预测(2.2±1.3)d和(2.3±1.7)d.结论 通过分析DxH800血细胞分析仪的CPD参数,大约可以比中性粒细胞绝对计数提前2d预测粒系植活.     

脐带血造血干细胞的采集、浓缩与低温冷冻保存

目的 :探讨脐带血造血干细胞库建立中的脐带血采集、分离、低温冻存的方法。方法 :自 1997年 7月至2 0 0 0年 7月已冻存经过HLA配型的脐带血 (cordblood ,CB) 3 74 4份。CB采自经检查符合要求的足月顺产或剖宫产新生儿 ,经 (citratephosphateadeninedextnse ,CPD A)抗凝 ,用密闭式血袋采集法采集。采集后置于室温保存 ,18h内处理。用羟乙基淀粉 (hydroxythylstarch ,HES)沉降后一次分离方法去除绝大多数红细胞及大部分血浆。采用以二甲亚砜 (dimethylsulfoxide ,DMSO)为主的冷冻保剂 ,冷冻保存CB。DMSO的终质量分数为 10 %。经序控降温后 ,置于 - 196℃液氮中保存。结果 :分析了 3 74 4份冻存CB ,平均采集量为 (93± 2 2 )ml(45～ 198ml)。浓缩后平均体积为 (3 8± 8)ml(3 0～ 60ml) ;浓缩前后有核细胞数 .浓缩前平均有核细胞数为 11.2× 10 8± 5 .3× 10 8(4.5× 10 8～ 4 5 .1× 10 8) ;采用HES沉降一次离心浓缩去除红细胞后的平均有核细胞数为 9.7× 10 8± 4 .6× 10 8(3 .1× 10 8～ 3 0 .5× 10 8) ;平均有核细胞回收率为 79%。质控检测 4 0份标本细胞活率为 88.2 % ,CFU GM回收率和CD3 4 +细胞计数分别为 97.6%和 86.4 %。结论 :本研究采用的CB采集、冻存及造血干细胞和病原生物检测的方法是安