五株流行性出血热病毒单克隆抗体的建立及其特性的研究

<正> 流行性出血热(EHF)是世界分布较广的传染病之一。多年来,国内外学者已经从不同地区、不同宿主分离出流行性出血热病毒,并且发现它们都具有共同的和差异较大的抗原成份。EHFV的抗原比较复杂,对其不同抗原决定簇的性质还认识不够,尚不能用抗原性作EHFV的分型。单克隆抗体是研究病毒抗原的一种良好工具,我们用从人血清中分离的陈株病毒免疫Balb/c小鼠制备了5株McAb,现将建株及其特性研究的初步结果报告如下。材料与方法一、细胞和病毒:骨髓瘤细胞sp~2/0—Ag14,曾经8—氮杂鸟嘌呤(8—Azaguanine)处理过,用含20％胎牛血清(FCS)的RPMI     

潍坊市流行性出血热的宿主动物调查

为查明潍坊市流行性出血热（ＥＨＦ）传染源或宿主动物，确定流行类型。应用间接免疫荧光技术（ＩＦＡＴ）对潍坊市鼠类、家庭饲养的家兔和鸡进行了调查。共检测鼠肺标本２９３１份，流行性出生热病毒（ＥＨＦＶ）抗原阳性４５份，阳性率为１．５４％。带毒鼠种为褐家鼠、黑线姬鼠、小家鼠和大仓鼠，带毒率分别为２．５７％，１．０９％，０．２８％，０．５９％；检测某学院实验大白鼠肺１６４份，ＥＨＦＶ抗原阳性２４份，阳性率为１４．６３％；检测家兔血清８０份，ＥＨＦＶ抗体阳性１份，阳性率为１２．５％，初步证实潍坊市ＥＨＦ传染源为褐家鼠、黑线姬鼠、小家鼠和大仓鼠。其流行类型为家野鼠混合型。南部以野鼠型为主，中部、东部、西部和北部以家鼠型为主，并有实验动物型存在。     

从流行性出血热患者血清中分离病毒的研究

应用Vero—E_6细胞从流行性出血热(EHF)患者血清中分离出两株病毒,经初步鉴定表明:病毒不耐酸,对脂溶剂敏感,不被5—碘脱氧脲嘧啶核苷所抑制,属RNA病毒;所分离病毒与流行性出血热病毒(EHFV)抗血清和EHF患者血清做间接免疫荧光抗体法试验(IFA)均为阳性,其感染性可被EHF恢复期病人血清中和;将该病毒感染细胞做超薄切片在电镜下查到EHF病毒颗粒。     

首次从汉中地区褐家鼠分离出流行性出血热病毒及其抗原性鉴定

应用细胞培养技术和免疫荧光(IF)检查方法,从汉中地区褐家鼠分离出EHF 病毒R_6、R_(10)株。分离的病毒能在鼠体和细胞两个不同宿主系统连续稳定传代;检查10份确诊的EHF 病人双份血清,抗体滴度均有4倍以上增高;病毒抗原能与EHF病人阳性血清、兔抗KHFV76-118株免疫血清及多个单克隆抗体(M_cAb)反应,而不能与正常人和非出血热病人血清反应;兔抗KHFV76-118株免疫血清能阻断病毒株抗原同EHFM_cAb4E_7的阳性反应,抗呼肠弧病毒Ⅰ～Ⅲ免疫血清、抗类环状病毒免疫血清、抗CMV 免疫血清和抗HSV 免疫血清均无此阻断作用;用感染的VeroE_(-6)细胞作超薄切片,电镜下观察到大小约100nm 典型病毒颗粒;M_cAb 型别鉴定试验确定为EHFV野鼠型毒株。     

流行性出血热病毒单克隆抗体的研制

采用流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）免疫Ｂａｌｅ／Ｃ小鼠得到的脾细胞与ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，获得分泌抗ＥＨＦＶ的单克隆抗体的杂交瘤细胞，其ＭｃＡｂ亚型为ＩｇＧ２ｂ杂交瘤细胞产生腹水效价为１：６４００，经６个用连续传代培养及液氮冻存６个月后复苏，产生抗体均稳定。     

流行性出血热病毒特异性转移因子的研究

对流行性出血热病毒(EHFV)特异性转移因子(EHFV-TF)的制备、特性及在小鼠体内的活性作用进行了研究。其理化性状与普通 TF 非常相似,能激活淋巴细胞的 E 受体(激活率为65.54%),明显提高 Et-RFC 的形成率。E-HFV-TF 还具有特异性抗原依赖活性:①促进 BALB/C 小鼠和 NIH 裸鼠特异性抗体的产生;②促进 LACA 小鼠脾细胞对 EHFV 反应的特异性应答;③促进脾细胞在 EHVF 存在时对 PHA 诱导下的增殖反应(促时率为151.3%)。EHFV—TF可推迟动物感染 HEFV 后的发病期,延长病程和推迟死亡时间;减轻发病动物脑肺充血、出血、水肿现象和肝肾病理损害程度。结果表明 EHFV-TF 不仅具有提高细胞免疫的非特异活性,而且具有对 EHFV 抗原的依赖活性。本研究提示,E-HFV-TF 可用于 EHFV 感染病人的治疗。     

流行性出血热病毒单克隆抗体在临床早期诊断中应用的研究

用IFAT检测77例临床诊断为EHF病人的外周血白细胞中的病毒抗原。阳性率为50.6％。2—5病日的早期病人阳性率为64.3％(27/42)。并发现,病日越早,病情越重,阳性率越高。试验中应用了抗EHF病毒McAb4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者对3种McAb的反应表现为5种类型。不同McAb对抗原的检出率不同,混合使用McAb可提高阳性检出率。在EHF病毒抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。若联合检测EHF病毒抗原和急性期血清IgM抗体,可提高早期诊断的阳性率和准确性。     

流行性出血热病毒的形态学研究

应用电镜对流行性出血热病毒进行形态学研究。电镜观察结果表明,流行性出血热病毒具有布尼亚病毒样的形态,病毒颗粒呈圆球形,有包膜。其颗粒平均直径为113nm,较以往发现的布尼亚病毒稍大,并且其大小变化范围也比较大。流行性出血热病毒的形态发生过程比较复杂,可能有其本身特育的方式。     

流行性出血热病毒结构多肽的研究

用差速离心和蔗糖密度梯度离心技术从鲁宁—84刘株流行性出血热病毒(EHFV)的细胞培养液中浓缩和提纯出病毒颗粒。病毒经SDS裂解后,进行其结构多肽的SDS—Disc—PAGE。结果表明,EHFV鲁宁—84刘株具有六种结构多肽,分子量分别为VP_1128K、VP_2104K、VP_379K、VP_459K、VP_51K、VP_610K道尔顿,其中VP_1、VP_2和VP_4是三种主要结构多肽,VP_1和VP_4是糖多肽。     

人肺组织内流行性出血热病毒和肺超微结构的形态观察

用病毒分离和电镜超薄切片技术研究了ＥＨＦ尸肺和患ＥＨＦ孕妇流产的胎儿肺组织标本。发现在肺泡Ⅱ型上皮细胞和血管内皮细胞内有典型的ＥＨＦ病毒颗粒和病毒导致的超微结构病变。     

流行性出血热病毒的形态学研究

应用电镜对流行性出血热病毒进行形态学研究。电镜观察结果表明,流行性出血热病毒具有布尼亚病毒样的形态,病毒颗粒呈圆球形,有包膜。其颗粒平均直径为113nm,较以往发现的布尼亚病毒稍大,并且其大小变化范围也比较大。流行性出血热病毒的形态发生过程比较复杂,可能有其本身特育的方式。     

流行性出血热病毒在中枢神经系统的定位研究

流行性出血热(EHF)发病机理复杂,其病理生理变化几乎涉及全身各系统组织器官。部分EHF患者可出现不同程度的神经精神症状,包括躁动,谵语,抽搐,嗜睡,昏迷等,这除与脑水肿,脑出血及尿毒症等有关外,是否有EHF病毒     

流行性出血热32例临床分析

流行性出血热 (ＥＨＦ)是由汉坦病毒引起的自然疫源性疾病 ,在我地区流行已有 30多年历史 ,其发病率高 ,症状典型 ,病情较重 ,流行季节明显 ,已被广大群众及医务人员所认识。但近年来临床发现ＥＨＦ的流行季节、临床表现及病程经过较前有了很大变化。为提高对本病的认识 ,减少误诊 ,现将我院 1999- 0 5～ 2 0 0 1- 0 1收治的 32例ＥＨＦ分析 ,报告如下。1　临床资料本组 32例均为住院病人 ,其中男 2 1例 (6 6 % ) ,女 11例(34% )。发病年龄 2 3～ 5 6岁 ,均为青壮年。职业农民、工人2 4例 ,家属 8例。发病季节 :5～ 6月份 5例 ,10月～次年 1…