荧光定量PCR方法在沙门菌鉴定中的应用

[目的 ]　用taqman技术建立沙门菌荧光定量聚合酶链反应 (PCR)检测方法 ,尝试快速、准确地鉴定沙门菌。　 [方法 ]　根据沙门菌GenBankAccessionNOU2 5 3 5 2基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的沙门菌基因片段克隆导入载体 ,构建的重组质粒经筛选、鉴定后 ,作为阳性模板 ,用于标准曲线的制定。利用荧光定量聚合酶链反应 (PCR)技术进行各类菌株的定性鉴定。　 [结果 ]　应用重组质粒制作的定量曲线 ,其循环阈值与模板浓度的对数值具有良好的线性关系 ,相关系数为 0 .999。检测各类菌株 ,其中沙门菌 41株、H抗原丢失的沙门菌 16株均阳性 ;非沙门菌 10 9株均阴性。　 [结论 ]　建立了鉴定沙门菌的荧光定量PCR方法 ,该方法简便、快速、准确 ,有很好的应用前景和研究价值     

肿瘤病人服什么人参好?

人参按产地可分为我国东北的“吉林人参” ;产自朝鲜的“高丽参”(又名别直参 ) ;出自日本的“东洋参” ;以及来自加拿大和美国的“西洋参”。按照来源 ,它又有野山参和移山参之分。野山参顾名思义便可明了它是深山老林之中天然野生的 ,得天地之灵气 ,年深月久者功效益佳 ;但物稀而贵 ,价格高昂 ,一般并不需要用它。移山参是人参的人工栽培物 ,与野山参相比 ,功效相仿 ,作用较弱。肿瘤病人通常服用的就是这类人参。移山参经过不同方法进行加工 ,又产生了一系列新的人参种类。新鲜移山参直接晒干或烘干而成淡棕黄色的生晒参 ,性质偏凉。小支…     

用随机扩增多态DNA(RAPD)区分青海血蜱与日本血蜱

目的用随机扩增多态DNA(RAPD)技术确定青海血蜱与日本血蜱的分类地位。方法分别提取青海血蜱与日本血蜱的DNA，确定聚合酶链反应(PCR)总体积、反应条件。选取8条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物，进行RAPD—PCR扩增反应。将扩增产物制备成DNA图谱，比较青海血蜱与日本血蜱基因组DNA多态性，从DNA水平鉴定这2种蜱。结果2种蜱仅有少部分DNA条带相同，大部分条带不同。结论RAPD技术可准确地鉴别青海血蜱与日本血蜱这2种形态特征十分相似的蜱种。     

枝孢状枝孢霉与常见致病性暗色真菌基因多态性研究

目的研究枝孢状枝孢霉及常见致病性暗色真菌基因多态性,初步了解它们在同属内与同种内、属间与种间的基因遗传相似性及遗传变异性。方法随机扩增DNA多态性(RAPD)分析:应用GenTLETM DNA提取试剂盒提取菌丝体DNA,以RAPD法对18株暗色真菌的DNA指纹图谱进行分析。结果共选用10个随机引物进行扩增,筛选出3个具有稳定、清晰DNA扩增带型的引物(引物1、4、5);18株真菌DNA带型不完全相同,有一定的种间和种内的遗传变异性和遗传相似性,腐生菌枝孢状枝孢霉与其他部分暗色真菌位于同一树组中;同种真菌并不都具有遗传相似性。结论RAPD分析表明,包括枝孢状枝孢霉在内的暗色真菌在属内各种间不一定有遗传相似性;但腐生菌与致病菌的DNA带型未见明显特征性差异,似乎还有一定遗传相似性。     

用随机扩增多态DNA(RAPD)技术研究不同地理株埃及伊蚊的分化

目的 用RAPD技术对实验室饲养的广东、海南、台湾和印尼Baro等4个不同地理株的8只雌蚊进行随机扩增多态DNA分析。方法 随机扩增多态性DNA(RAPD)技术。结果 选用20个随机引物进行扩增，有8个引物表现清晰的RAPD谱带并呈显著多态性。UPGMA法构建的分子系统树表明埃及伊蚊4个地理株之间存在着一定程度的遗传分化。结论 用RAPD方法可以区分不同地理株埃及伊蚊。     

随机扩增多态性DNA反应体系优化设计方案的研究

目的 筛选出反应体系的最佳优化方案用于金黄色葡萄球菌的随机扩增多态性DNA分析(RAPD). 方法 应用反应曲面设计(RSD)进行RAPD反应体系的优化. 结果 RSD得出稳定性良好的优化反应体系(关键成分浓度)为镁离子为2.0 mmol/L,引物为2.0μmol/ml,模板为6μl. 结论 优化RAPD反应体系,RSD方案比单因素设计更简易、科学、合理.     

野山参、林下参与园参中无机元素的测定

采用电感偶合等离子体原子发射光谱法测定了不同产地的野山参、林下参和园参中15种无机元素含量，并作了详细的比较。     

国家质检总局将人参列入药食产品目录

国家标准委日前发布了包括野山参鉴定及分等质量，以及红参、生晒参、鲜人参、活性参分等质量国家标准和野山参繁衍护育操作规程国家标准，自2009年5月1日起实施。标准明确、人参不是药物而是药食产品，野山参也没有纳入濒危保护植物目录中。     

军团菌D-RAPD基因分型研究

〔目的〕建立军团菌的基因分型方法。〔方法〕采用D—RAPD技术 ,应用 6条简并随机引物对 5株军团菌 (包括 3株嗜肺军团菌 )进行基因分型研究。〔结果〕除引物 4 ,其余 5个随机引物均能对军团菌菌株扩增出特异性的DNA条带 ,其中引物 2的分型效果较好。用引物 2、引物 3两引物 ,引物 2、引物 5两引物 ,引物 3、引物 5两引物 ,分别对 5株军团菌DNA进行扩增 ,结果 3对引物在扩增条带的数量和长度上均能有效区分 5株军团菌。〔结论〕D—RAPD技术快速、简便 ,是在分子水平对致病微生物进行检测、发病机理分析、流行病学研究的理想方法。     

野山参、林下参与园参中无机元素的测定

采用电感偶合等离子体原子发射光谱法测定了不同产地的野山参、林下参和园参中15种无机元素含量,并作了详细的比较。     

排酸护肾汤防治尿酸性肾病MAPK通路与尿酸相关靶点的研究

目的探讨排酸护肾汤对尿酸性肾病(uric acid nephropathy,UAN)大鼠治疗效果及其可能作用机制。方法随机且平均将80只雄性SD大鼠分成5组:正常组,模型组,排酸护肾组,别嘌呤醇组以及联合用药组。采用高酵母颗粒性饲料联合腺嘌呤灌胃,制造UAN模型。造模后第21天分别对肾匀浆中尿酸(uric acid,UA)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)、肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平进行检测;q-PCR法测定URAT1 mRNA表达;Western blot检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)蛋白表达水平。结果中药排酸护肾汤可降低肌酐、尿素氮及黄嘌呤氧化酶水平,抑制尿酸转运体1(URAT1)的mRNA的表达,并下调p-p38MAPK蛋白的表达,抑制p38 MAPK信号通路的表达。结论排酸护肾汤主要通过降低Cr、BUN及XOD水平,抑制URAT1的mRNA的表达来促进尿酸的排泄,保护肾功能,并且通过作用于MAPK信号通路改善肾脏纤维化。     

2007-2010年岳阳市淋病流行病学分析及溯源研究

目的了解岳阳市淋病流行趋势,并追踪岳阳市淋病的传染源和优势菌株,为有效控制淋病提供科学依据。方法对全市2007-2010年疫情资料进行统计学分析,通过随机扩增多态性DNA技术（RAPD）对收集的83株淋球菌进行分子分型。结果 2007-2010年岳阳市共报告淋病492例,年平均发病率为2.44/10万,男性淋病发病率均高于女性。淋病病例主要集中在20~50岁的青壮年;职业构成以农民为主。83株淋球菌均产生了较多条带,经聚类分析,可分为8型,以A、B型为主;有3株淋球菌与其他菌株同源性低,各自单独组成RAPD型。结论岳阳市淋病的传染源主要有2个,同时,可能存在淋病的外源输入。应进一步加强对淋病的监测,并采取有针对性的措施,以有效控制淋病。     

上海市浦东地区淋病奈瑟菌分型与耐药性的相关分析

目的了解上海市浦东地区淋病病原体奈瑟双球菌的不同基因分型及各基因型与耐药性之间的对应关系。方法运用随机扩增多态性DNA(RAPD)指纹图谱对78株分离自不同患者淋球菌菌株进行区分，从分子水平对淋球菌进行基因分型，并在此基础上探讨不同的基因分型与耐药性之间的关系。结果78株淋球菌分离株RAPD图谱上相似，但各菌株基因图谱之间有明显不同DNA多态性，可将菌株区分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种基因分型，对此三种基因分型与A、B、C、D四种不同的耐药类型进行对应分析，发现耐药类型与基因型别之间存在对应关系。结论通过研究发现浦东地区淋球菌流行株有着不同的耐药特点及基因型别，耐药性与不同的基因分型之间存在着一定相关性。     

金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的建立金黄色葡萄球菌随机扩增ＤＮＡ多态性（ＲＡＰＤ）分型技术，以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法对临床分离的１５株金黄色葡萄球菌，酚氯仿法提取其ＤＮＡ后行ＲＡＰＤ分型，同时进行噬菌体分型。结果１５株临床分离株大多数产生独特而稳定的ＲＡＰＤ带型，可分成５个噬菌体型和１４个ＲＡＰＤ谱型。采用同一反应体系，产肠毒素金黄色葡萄球未出现ＲＡＰＤ谱型。结论ＲＡＰＤ基因分型技术不需已知核酸序列，分型率高，分辨力强，简便快捷，可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志，是分子流行病学研究的有效方法     

随机扩增多态性DNA在淋球菌基因分型中的应用

目的 建立随机扩增多态性DNA(RAPD)对淋球菌进行基因分型的方法。方法 用4种不同的预处理方法提取淋球菌基因组DNA,对其优劣进行比较;并运用RAPD对淋球菌菌株进行区分及对经性伴传播的淋病病例进行RAPD指纹图谱比较。结果 运用经典的十六烷基三乙基溴化铵法可以抽提较完整的基因组DNA,获得良好的RAPD指纹图谱;各菌株的RAPD指纹图谱间有明显不同DNA多态性;性伴传播的病例中获得了非常相似的RAPD指纹。结论 选择最佳的DNA抽提技术,运用RAPD可以对淋球菌进行有效基因分型,并可用于分子流行病学对传染源的追踪。     

金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的建立金黄色葡萄球菌随机扩增ＤＮＡ多态性（ＲＡＰＤ）分型技术，以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法对临床分离的１５株金黄色葡萄球菌，酚氯仿法提取其ＤＮＡ后行ＲＡＰＤ分型，同时进行噬菌体分型。结果１５株临床分离株大多数产生独特而稳定的ＲＡＰＤ带型，可分成５个噬菌体型和１４个ＲＡＰＤ谱型。采用同一反应体系，产肠毒素金黄色葡萄球菌未出现ＲＡＰＤ谱型。结论ＲＡＰＤ基因分型技术不需已知核酸序列，分型率高，分辨力强，简便快捷，可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志，是分子流行病学研究的有效方法。     

中药注射剂用于胃癌患者的合理性评价研究

目的 了解胃癌住院患者中药注射剂的使用情况,评价其使用的合理性,以促进临床合理用药。方法 选取中国人民解放军成都军区总医院HIS系统中2014年1 - 12月使用中药注射剂的胃癌住院患者病历资料127份。从中药注射剂适应症、单次剂量、溶媒、疗程及联合用药等方面进行合理性分析。结果 中药注射剂使用品种为6种,使用最多的分别为复方苦参注射液（28.74%）、康艾注射液（25.00%）、参附注射液（20.98%）,不合理用药现象药物与使用频次现象相同,其中复方苦参注射液占8.04%,康艾注射液占7.76%,参附注射液占2.30%。中药注射剂不合理使用主要为疗程不适宜（8.90%）、溶媒用量不适宜（7.76%）。结论 中药注射剂不规范使用须引起临床重视,正确认识中药注射剂的安全问题,做到辩证施治、合理用药。     

肺炎克雷伯菌随机DNA多态性分型研究

目的 建立肺炎克雷伯菌随机扩增DNA多态性分型技术,以应用于临床菌株流行病学调查。方法 对临床分离的29株肺炎克雷柏菌进行Etest检测,并用酚氯仿法提取其DNA后行RAPD分型。结果 29株临床分离菌有7株ESBL阳性,24株有稳定的RAPD带型,其中ICU分离的5株ESBL阳性株的4株RAPD指纹图谱相同。结论 RAPD基因分型技术不需已知核酸序列,分型率高,分辨力强,简便快捷可为肺炎克雷伯菌株提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法。     

Randomly amplified polymorphic DNA typing: a useful tool for rapid epidemiological typing of Klebsiella pneumoniae.

Discriminatory typing methods are invaluable in the investigation of outbreaks of infectious diseases. Single primers were used to generate randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) profiles from Klebsiella pneumoniae isolates of various serotype and K. pneumoniae isolates from cases of sepsis at a Malaysian hospital and two English hospitals. RAPD profiles of acceptable reproducibility, a maximum of three minor band variations, were produced using a rapid DNA extraction method. RAPD typing of K. pneumoniae was shown to be as discriminatory as restriction fragment length polymorphism analysis using pulsed field gel electrophoresis yet quicker and less costly. The findings suggest that RAPD typing may be a useful tool for the epidemiological typing of K. pneumoniae.