硼替佐米上调fas、bcl2112、caspase-9和caspase-3基因表达

目的：探讨硼替佐米诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡及新基因bcl2H2在其中的作用。方法：MTT比色法观察硼替佐米对K562细胞的生长抑制作用;Annexin—V标记和线粒体跨膜电位（△ψm）分析细胞凋亡;RT—PCR方法检测0、6、12和24h fas、bcl2112、bcl-2、bim、bax、caspase-3和caspase-9基因表达变化。结果：硼替佐米抑制K562细胞生长呈时间和剂量依赖性,24h和48h半数抑制浓度分别为161．41nmol／L和96．33nmol／L;硼替佐米诱导K562细胞凋亡,12hAnnexin—V阳性细胞就开始增高,并呈时间依赖性,AtOm减低;RT—PCR显示fas、bcl2112、caspase-3和caspase-9表达增高,但bcl-2、bim和bax表达无明显改变。结论：硼替佐米可以抑制K562生长并诱导凋亡,上调如、bcl2112,使线粒体膜电位下降,激活caspase-9和caspase-3基因,促使DNA发生断裂可能是其诱导凋亡的机制之一。     

重组人可溶性TRAIL的制备及其联合硼替佐米诱导肿瘤细胞的凋亡作用

目的:构建重组人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)原核表达质粒p ET-28a(+)-TRAIL114-281,优化蛋白表达和纯化条件,制备重组人可溶性TRAIL并鉴定其活性。方法:使用CCK-8初步验证TRAIL是否具有抑制肿瘤细胞生长的生物活性;将制备的TRAIL单独或联合50 nmol/L硼替佐米应用于H460细胞(对TRAIL敏感)和K562细胞(对TRAIL抵抗)24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法检测caspase-8、-9、-3的活化程度,Western blot分析细胞中Bax、Bcl-2和c FLIP蛋白的表达。流式细胞术检测硼替佐米处理H460细胞和K562细胞24 h后DR4和DR5的表达量变化。结果:制备了具有生物学活性且性质稳定的重组人可溶性TRAIL,且成功诱导H460和K562细胞凋亡。不同浓度TRAIL处理H460细胞后其凋亡率随着TRAIL浓度升高而显著升高(P0.05),但K562细胞凋亡率并未随着TRAIL浓度明显升高。联合用药组的H460和K562细胞凋亡率均显著高于单独用药组(P0.05),凋亡过程中caspase-8、-9、-3均被活化,药物处理组的Bcl-2和c FLIP表达量均比对照组下降,尤其联合用药组表达量下降最为显著(P0.05),而Bax表达量无明显变化。硼替佐米处理H460和K562细胞后DR4和DR5表达量均上调(P0.05)。结论:硼替佐米能协同TRAIL启动内源性凋亡途径诱导H460和K562细胞凋亡,其可能机制是通过上调死亡受体DR4和DR5的表达量、下调抗凋亡蛋白Bcl-2和c FLIP的表达量来实现的。     

芹菜素诱导人胃癌细胞凋亡作用及机制研究

目的：研究芹菜素（apigenin, API）致人胃癌细胞凋亡作用及其机制。方法：培养人胃癌BGC823细胞株，加入不同浓度的API，孵育48 h。PI染色流式细胞术（FCM）分析测定凋亡率；罗丹明染色FCM分析测定细胞线粒体跨膜电位(Δψm)；Caspase-9分光光度法检测试剂盒测定caspase-9活性；Western印迹检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白的表达，包括bax，bcl-2，caspase-9和caspase-3。结果： API（20，40和80 μg/mL）作用48 h能呈浓度依赖性地诱导BGC823细胞凋亡。而且，API也能降低BGC823细胞的Δψm，增加caspase-9活性，促进细胞色素c（Cyt c）释放，上调bax，caspase-9和caspase-3蛋白的表达，同时下调bcl-2蛋白表达，且呈剂量依赖性。结论：API通过活化线粒体信号转导途径诱导人胃癌细胞凋亡。     

硼替佐米促进霍奇金淋巴瘤细胞系L428的凋亡

目的探究硼替佐米对霍奇金淋巴瘤细胞系L428凋亡的影响及可能的机制。方法不同浓度的硼替佐米(0、10、30与50 nmol/L)培养L428细胞后,用倒置显微镜观察L428细胞形态;Hoechst33258染核观察细胞核;MTT法检测细胞活力;TUNEL染色试剂盒和Annexin V-FITC双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2的表达。结果与对照组相比,硼替佐米促使L428细胞出现拉丝、稀疏现象;细胞核出现核固缩和凋亡小体;硼替佐米浓度依赖性抑制L428细胞活力(P0.05),诱导细胞凋亡(P0.05);浓度依赖性下调Bcl-2蛋白水平(P0.05);浓度依赖性上调cleaved caspase-3和Bax蛋白水平(P0.05)。结论硼替佐米可能通过影响凋亡蛋白的表达促进霍奇金淋巴瘤细胞系L428凋亡。     

硼替佐米对神经母细胞瘤细胞Bax/Bcl-2蛋白表达的影响

目的:了解应用硼替佐米对人神经母细胞瘤的治疗效果及其可能机制。方法:取对数生长期人神经母细胞瘤SHSY5Y细胞株,采用四甲基偶氮唑盐比色法测定其药物对细胞增殖的影响并计算对细胞作用的IC_(50)值,Hoechst-33258染色观察细胞凋亡形态,免疫印迹检测Bax、Bcl-2表达。结果:20nmol/L硼替佐米可引起细胞发生肿胀、变圆等细胞凋亡等形态学变化;作用24 h后引起SH-SY5Y细胞中Bax蛋白表达水平增高,Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax/Bcl-2比率较空白组增高;硼替佐米抑制神经母细胞瘤的增殖作用随着其浓度的升高而更加明显。结论:硼替佐米通过线粒体途径诱导细胞凋亡从而发挥抑制人神经母细胞瘤增殖的作用。     

三氧化二砷经内质网应激反应诱导K562/ADM耐药细胞凋亡

目的　探讨三氧化二砷（As2O3）能否通过内质网应激反应性凋亡途径诱发耐药白血病细胞凋亡。方法　采用细胞形态学和AnnexinV/PI 双染色法检测细胞凋亡,电镜观察凋亡细胞内质网和线粒体形态结构变化;流式细胞术（FCM）测定线粒体跨膜电位（Δψm）、细胞内Ca2+和细胞色素c（Cyt c）含量及caspase-3活性;Western blot法检测GRP78/Bip蛋白表达。结果　2、5 mol/L As2O3诱导K562/ADM细胞发生凋亡过程中,内质网明显扩张和脱颗粒,线粒体内外膜融合,嵴紊乱,肿胀,内膜扩张呈空泡样变。线粒体Δψm降低,细胞质Ca2+和Cyt c水平明显升高, caspase-3活性显著增强,GRP78蛋白表达增高。结论　As2O3可诱导K562/ADM细胞发生内质网应激反应,通过内质网-线粒体途径诱导耐药白血病K562/ADM细胞凋亡。     

二苯乙烯苷对同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞凋亡及bcl-2、bax、caspase-3表达的影响

 目的：研究何首乌二苯乙烯苷（TSG）对同型半胱氨酸（Hcy）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡及bcl-2、bax和caspase-3 mRNA表达的影响。方法：建立Hcy （3 mmol/L）所致培养HUVECs核损伤模型,TSG（1和10 μmol/L）提前2 h预孵育,然后再以Hcy处理,作为TSG保护组。用Hoechst 33342核染色法观察HUVECs细胞核损伤状态,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,用实时荧光定量RT-PCR法检bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的表达。结果：经3 mmol/L Hcy处理后,与正常培养的细胞相比,HUVECs核损伤加重,凋亡细胞比例升高,bcl-2表达降低（P＜0.01）,bax和caspase-3表达增加（P＜0.01）。TSG 1 μmol/L和10 μmol/L预孵育后再经3 mmol/L Hcy处理,与单经3 mmol/L Hcy损伤模型组相比,HUVECs细胞核损伤降低,凋亡率下降,bcl-2的表达增加（P＜0.05）,bax和caspase-3表达降低（P＜0.05）。结论：TSG具有降低Hcy所致HUVECs的细胞损伤和抑制凋亡的作用,其机制可能与影响bcl-2、bax和caspase-3的表达有关。     

休克淋巴液对大鼠肺微血管内皮细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：观察休克淋巴液对大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）凋亡相关基因表达的影响，探讨休克淋巴液诱导PMVECs细胞凋亡的分子机制。方法：无菌条件下复制大鼠重症失血性休克模型，引流休克时肠系膜淋巴液或收集门静脉血，同时引流正常的淋巴液或正常门静脉血作为对照。以不同处理因素与第3代原代培养的PMVECs共同孵育，应用流式细胞仪检测细胞凋亡率，RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax及fas、fas L的表达。结果：4%终浓度的休克淋巴液作用4 h后，PMVECs凋亡率为9.86%±3.24%，显著高于其它组（P<0.01）；4%终浓度的休克淋巴液作用6 h后，PMVEC的fas、fas L、bax mRNA表达高于其它组、bcl-2 mRNA表达低于其它组（P<0.01）。结论：休克淋巴液可诱导大鼠PMVECs凋亡，其机制与凋亡促进基因fas、fas L、bax表达增强、凋亡抑制基因〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗表达降低有关。     

颞叶癫痫病灶内bax、fas、caspase-3蛋白的表达

目的探讨细胞凋亡调控基因bax、fas、caspase-3在颢叶癫痫患者病灶内的表达及意义。方法应用免疫组化S-P法检测24例颞叶癫痫患者手术切除病灶内凋亡相关基因bax、fas、caspase-3的表达,同时采用光镜、电镜及原位末端标记（TUNEL）方法检测神经细胞凋亡的情况。结果bax蛋白在癫痫组与对照组中均轻微表达,两者间差异无显著性（P〉0.05）;fas蛋白在对照组中无表达,在癫痫组表达明显增强（P〈0．001）;caspase-3在对照组中有轻微表达,在癫痫组表达明显增强（P〈0．01）。光镜检查及TUNEL染色均未发现凋亡的神经细胞,但电镜检查的8例标本中有3例发现少量早期凋亡征象的神经元。结论癫痫患者脑内存在神经元凋亡现象。fas、caspase-3基因在这一过程中可能发挥了重要作用。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤对脾bcl-2/bax/fas/fasL mRNA的影响

目的 通过检测脾淋巴细胞凋亡基因bcl-2/bax/fas/fasL mRNA表达水平,探讨缺氧缺血性肭损伤(hypoxicischemic brain damage,HIBD)脾细胞凋亡基因的变化与缺氧时间的关系,以此提供HIBD对于免疫功能影响的理论基础.方法 建立新生大鼠HIBD模型测定脾bcl-2/bax/fas/fasL mRNA 的相对表达量.结果 bcl-2处理组相对表达量低于对照组(P＜0.01).bax处理组相对表达量高于对照组(P＜0.01).bcl-2/bax处理组比值低于相应对照组(P＜0.05).fas处理纽相对表达量高于对照组(P＜0.01).fasL 1 h和6 h处理组相对表达量高于对照组,12 h之后则对照组远高于处理组.fas/fasL对照组较分散,除6 h组外其余组均小于1,处理组较集中,除24 h外均大于1.结论 HIBD可促进脾细胞促凋亡基因的表达,减少抑凋亡基因表达;HIBD发生6～12 h是促凋亡基因和抑凋亡基因高峰表达期;HIBD加强了fas/fasL的作用.     

乐尔脉对脑缺血再灌注损伤后期大鼠海马神经细胞凋亡的作用

 目的： 探讨乐尔脉胶囊（LEM）对脑缺血再灌注损伤后期大鼠海马神经细胞凋亡的作用与机制。方法: 采用大鼠左侧大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型。缺血2 h再灌注30 d后,应用原位末端标记法（TUNEL）检测海马神经细胞凋亡,免疫组化、RT-PCR 法检测海马神经细胞Fas、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白及 mRNA的表达,并进行阳性细胞计数及Mias图像程序分析结果。结果: 大鼠缺血再灌注30 d后,模型组缺血侧海马CA1、CA2区凋亡细胞显著高于假手术组(P<0.05), Fas、Bax、 caspase-3、caspase-9蛋白表达明显增加,fas、bax、caspase-3、caspase-9 mRNA的表达上调(P<0.05)。LEM2.00 g/kg、0.87 g/kg和氟桂利嗪可显著减少海马神经细胞凋亡数,降低Fas、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白表达,fas、bax、caspase-3、caspase-9 mRNA的表达下调,LEM 0.87 g/kg作用次于2.00 g/kg。LEM对bax mRNA有显著抑制作用。结论: LEM抑制海马神经细胞的凋亡,明显地减轻缺血再灌注后期大鼠海马神经细胞的损伤,其作用机制与调节细胞凋亡信号转导通路及相关蛋白有关。     

心肌再灌注对抑郁大鼠心肌细胞凋亡以及bcl-2、bax和caspase-3表达的影响

目的: 探讨心肌缺血再灌注(I/R)对抑郁大鼠心肌细胞凋亡及凋亡基因bcl-2、bax和 caspase-3 的影响。方法: Wistar大鼠32只,随机分为4组,每组各8只。A组:非抑郁大鼠假手术组;B组:抑郁大鼠假手术组;C组:非抑郁大鼠心肌I/R组;D组:抑郁大鼠心肌I/R组。采用慢性轻度不可预知性应激结合孤养制备抑郁模型,用敞箱实验和液体消耗实验观察大鼠行为改变;运用结扎左冠状动脉前降支的方法复制心肌I/R模型。运用 TUNEL法检测心肌凋亡细胞;运用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测bcl-2、bax和 caspase-3 的表达。结果: (1)与A、B组比较,C、D组心肌细胞凋亡数量显著增加(P<0.01),A、B两组间比较无显著差异;与C组比较,D组心肌细胞凋亡数量显著增加(P<0.05)。(2)与A、B组比较,C、D组Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白和mRNA表达显著增加(P<0.01),A、B两组间比较无显著差异; 与C组比较,D组Bcl-2蛋白和mRNA表达显著减少(P<0.05),而Bax和caspase-3蛋白和mRNA表达显著增加(P<0.05)。结论: 心肌缺血再灌注可加重抑郁大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调bax和 caspase-3 基因表达、下调 bcl-2 基因表达有关。     

肿瘤抑制因子RUNX3对人胃癌细胞中凋亡相关基因表达的影响

 目的：研究肿瘤抑制因子人类Runt相关转录因子3(RUNX3)对人胃癌细胞BGC823中凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病基因-2（bcl-2）、bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8（caspase-8）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（caspase-9）表达的影响,以揭示RUNX3促进胃癌细胞凋亡的作用机制。方法：首先构建人Runx3的真核生物表达载体pcDNA3.1- Runx3,将pcDNA3.1-Runx3及空载体pcDNA3.1分别转染BGC823细胞48 h后,提取细胞的总RNA和蛋白质,应用逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)和蛋白免疫印迹（Western blotting）分别检测转染不同载体的细胞内RUNX3的表达情况,然后用RT-PCR和Western blotting检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达及蛋白的表达,β-actin作为内对照。结果：我们成功构建了人Runx3的真核生物表达载体pcDNA3.1-Runx3,将其转染BGC823细胞后,RT-PCR和Western blotting结果均显示：转染pcDNA3.1-Runx3的细胞中RUNX3的表达水平明显高于转染空载体pcDNA3.1的细胞(P<0.05);转染pcDNA3.1-Runx3的细胞中bcl-2基因的表达水平明显降低,caspase-3、caspase-9基因的表达水平明显增加(P<0.05)。结论：在BGC823细胞中,RUNX3通过下调bcl-2,上调caspase-3、caspase-9的表达促进细胞的凋亡。     

神经肽Y对bcl-2、bax、fas基因表达和血管平滑肌细胞增殖的作用

目的:研究神经肽Y(NPY)对细胞凋亡相关基因表达和细胞增殖的作用。方法:应用生物化学比色法和荧光免疫组化定量技术观察NPY对血管平滑肌细胞(VSMC)中细胞凋亡相关基因bcl-2、bax及fas表达和细胞核增殖抗原(PCNA)的平均荧光值。结果:NPY作用下,细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和fas表达及VSMC的增殖活度和PCNA明显高于对照组。结论:NPY可影响VSMC细胞凋亡的相关基因表达及增殖活动。     

Expression of bcl2 family proteins and active caspase 3 in classical Hodgkin's lymphomas

The expression of various bcl2 family proteins has been reported in Hodgkin and Reed-Sternberg cells, but the proteins bad, bid, and bim have not been analyzed in classical Hodgkin's lymphomas (HLs). This study aimed to investigate the expression of the proteins bcl2, bcl-xl, mcl1, bax, bak, bad, bid, bim, and active caspase 3, and the TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated in situ labeling) index to gain further insight into the apoptosis profile of classical HLs. A high expression of the proteins bcl2, bcl-xl, mcl1, bax, bak, bad, bid, and bim in HRS cells was found in 27 of 101 (27%), 95 of 101 (94%), 27 of 97 (29%), 73 of 95 (77%), 37 of 102 (36%), 85 of 94 (90%), 19 of 109 (17%), and 43 of 91 (47%) cases, respectively. The high expression of bcl-xl, bax, and bad in HRS cells in most classical HLs indicates that these proteins may play predominant roles in the regulation of apoptosis in classical HLs. Active caspase 3-positive and TUNEL-positive Reed-Sternberg cells were detected in 47 of 70 (67%; range, 0%-12%) and 60 of 71 (85%; range, 0%-19%) cases, respectively. Significant positive correlations were found between bax/bcl2 (P = .002), bad/bcl2 (P = .020), bad/bcl-xl (P = .003), and bim/mcl1 (P = .036). Based on these findings, it could be hypothesized that the antiapoptotic proteins bcl2, bcl-xl, and mcl1 may counteract the expression of the proapoptotic proteins bax, bad, and bim, thereby contributing to the survival of Reed-Sternberg cells.     

Effect of cobalt and chromium ions on bcl-2, bax, caspase-3, and caspase-8 expression in human U937 macrophages

The bcl-2 and caspase families of proteins play a central role in the modulation of apoptosis. The purpose of this study was to analyze the effect of Co(2+) and Cr(3+) ions on the expression of bcl-2, bax, caspase-3 and caspase-8 to better understand the mechanisms leading to ion-induced apoptosis in macrophages. U937 human macrophages were exposed to Co(2+) and Cr(3+) ions. The expression of proteins was measured by Western blot while caspase activities were measured by colorimetric assay. Results show that Co(2+) ions inhibited bcl-2 expression with significant effect (p<0.05) after 16 h and a maximal 52% inhibitory effect after 24 h. Co(2+) stimulated bax expression with a significant stimulation (p<0.05) after 8 h and a maximal 1.75-fold increase after 16 h. Co(2+) also stimulated the expression of the active fragment of caspase-3 as well as caspase-3 activity maximal increase after 24 h. Co(2+) ions had no effect on caspase-8 expression or activity.Cr(3+) ions inhibited bcl-2 expression with significant effect (p<0.05) after 16 h and a maximal 43% inhibitory effect after 24 h. Cr(3+) stimulated bax expression with significant stimulation (p<0.01) after 8h and a maximal 2.25-fold increase after 24 h. Cr(3+) ions also stimulated the expression of the active fragments of caspase-3 and -8, as well as the activities of both proteases. The effect of Cr(3+) ions on the expression of both caspase active fragments was maximal after 16 h incubation. In conclusion, our results suggest that the modulation of the expression of proteins from the bcl-2 and the caspase families of proteins are implicated in the induction of macrophage apoptosis by Co(2+) and Cr(3+) ions.