聚维酮在阿霉素诱导膀胱癌EJ细胞凋亡模型中的作用机制

目的：探讨聚维酮(PVP)在体外加阿霉素(ADM)后诱导EJ细胞发生凋亡的情况以及一些相关机制。方法：应用流式细胞仪(FCM)检测ADM诱导EJ细胞的凋亡率、PVP EJ细胞的凋亡率以及PVP ADM对EJ细胞的诱导凋亡率的情况。结果：PVP对ADM诱导膀胱癌EJ细胞凋亡无影响。结论：PVP在整个诱导过程中并没有协同作用，只起到粘附作用，使得药物停留在EJ细胞表面的作用时间延长，从而达到大量杀伤EJ细胞的作用。     

化疗药物对体外培养同步化MCF-7细胞存活和凋亡的影响

目的探讨不同化疗药物在体外培养的经TAM同步化MCF-7细胞存活率和凋亡的影响。方法以体外培养雌激素受体阳性细胞MCF-7为研究对象，采用MTr法和流式细胞术法检测MCF-7细胞存活率和细胞凋亡。结果体外培养的MCF-7细胞的倍增时间是33h，TAM可使MCF-7同步化于G0／G1期，5．Fu、DDP、ADM在中低剂量时可使同步化的MCF-7细胞存活率降低，与不同步化组比较差异具有显著性（P〈0．05）。采用流式细胞术方法检测DDP、ADM中低剂量组可使经TAM同步化的MCF-7细胞PCD％增加，与不同步化组相比较差异具有显著性（P〈0．05）。结论不同化疗药物可诱导经TAM同步化的细胞发生凋亡。     

聚维酮在阿霉素诱导膀胱癌EJ细胞凋亡模型中的作用机制

目的:探讨聚维酮(PVP)在体外加阿霉素(ADM)后诱导EJ细胞发生凋亡的情况以及一些相关机制。方法:应用流式细胞仪(FCM)检测ADM诱导EJ细胞的凋亡率、PVP十EJ细胞的凋亡率以及PVP ADM对EJ细胞的诱导凋亡率的情况。结果:PVP对ADM诱导膀胱癌EJ细胞凋亡无影响。结论:PVP在整个诱导过程中并没有协同作用,只起到粘附作用,使得药物停留在EJ细胞表面的作用时间延长,从而达到大量杀伤EJ细胞的作用。     

三氧化二砷联合丁硫氨酸亚砜胺对K562/ADM细胞的作用及其机制研究

目的 研究三氧化二砷（As2O3）联合γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁硫氨酸亚砜胺（BSO）对肿瘤多药耐药细胞株K562／ADM细胞的诱导凋亡效应，及对P糖蛋白（P—gp）和mdr1mRNA表达的抑制作用，探讨谷胱甘肽（GSH）的含量变化与As2O3作用效果的关系。方法As2O3（0．5、2．0、5．0μmol／L）单独及联合100μmol／LBSO作用于K562／ADM细胞，应用MTT比色法检测K562／ADM细胞的增殖活性；膜联蛋白V／碘化丙锭（AnnexinV／PI）标记法观察K562／ADM细胞的凋亡效应；分光光度法检测K562／ADM细胞内GSH含量变化；流式细胞术（FCM）检测P—gp水平变化；RT—PCR方法检测mdr1mRNA的表达变化。结果 K562／ADM细胞内的GSH含量为（81．13±3．91）mg／g蛋白，在BSO降低GSH含量后，临床剂量（0．5、2．0μmol／L）As2O3联合BSO（100μmol／L）24h内即可抑制K562／ADM细胞的增殖活性，诱导K562／ADM细胞发生凋亡，处理48h凋亡率分别为（59．29±6．01）％，（65．06±8．29）％；72h凋亡率分别为（82．15±9．28）％，（92．72±9．41）％；其诱导凋亡效果均明显强于单用As2O3，临床剂量和高剂量（5．0μmol／L）组。K562／ADM细胞P—gp表达阳性率为98．1％，mdr1mRNA的相对表达水平为1．85±0．13，临床剂量As2O3联合BSO处理48h，其抑制mdr1mRNA表达的作用效果以及处理72h对P—gP的抑制作用均明显强于单用高剂量As2O3组。结论 GSH的含量变化与As2O3的作用效果密切相关，As2O3联合BSO可有效诱导K562／ADM细胞发生凋亡，有效抑制P—gP及mdr1mRNA的表达。     

细胞因子诱导的杀伤细胞对卵巢癌细胞株SKOV-3的杀伤效应

目的探讨多种细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对卵巢癌细胞株SKOV-3的杀伤效应。方法用健康人外周血单核细胞（PBMC）在体外用多种细胞因子诱导成CIK细胞,流式细胞术分析其表型特征,将培养14d的CIK细胞和对数生长期的SKOV-3细胞按不同效靶比共培养,MTT法检测CIK细胞对SKOV-3细胞的杀伤效应;将CIK细胞培养液上清作用于对数生长期的SKOV-3细胞,于培养24及48h用流式细胞仪检测卵巢癌细胞的凋亡情况。结果CIK细胞体外培养14d,CD3^＋CD56^＋双阳性细胞数量达（31．6±5．5）％。CIK对SKOV-3的杀伤效应在效靶比为5：1时,24h及48h抑制率分别为（16．52±2．52）％和（24．20±5．59）％,当效靶比为40：1时,其24h及48h抑制率分别为（53．98±5．02）％和（74．74±6．87）％。CIK细胞对SKOV-3细胞的抑制率随着效靶比的提高及作用时间的延长而提高。SKOV-3与CIK细胞培养液上清共培养24h及48h后凋亡率分别为（12．30±1．47）％和（27．13±2．03）％。结论CIK细胞可通过诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡发挥较强的杀伤作用。     

NM-3对体外胃癌细胞株SGC-7901的作用和机制探讨

目的：研究新小分子血管生成抑制剂NM-3对体外培养的胃癌SGC79n1细胞的作用，并探讨NM-3对胃癌抑制作用的机理。方法：将体外培养的人胃癌细胞株SGC7901用NM-3、卡铂及生理盐水处理，观察细胞的生长规律。并在不同时间段以流式细胞仪检测细胞的凋亡率，分析细胞周期分布。结果：将药物作用后1h，2h，3h，6h，12h，24h，48h，72h的胃癌SGC7901细胞通过流式细胞仪检测胃癌细胞早期凋亡率及凋亡峰。发现NM-3组（1mol／L）在72h内与对照组比较细胞早期调亡率无显著差异（P2〉0．05）；经0．1mol／L卡铂处理的细胞组早期即可诱导发生明显的凋亡，并随着时间的延长调亡率增高，呈时间依赖性，与对照组相比较，有显著差异（P〈0．05）。对细胞周期分布的分析中，NM-3组（1mg／L）Sub-G1峰与对照组比较无显著差异（P〉0．05）。而卡铂能使细胞周期发生相对变化，随着药物作用时间的增加，Go／G1期细胞增多，而S期覆G2／M期细胞则相应减少。结论：NM-3对胃癌组织的生长抑制主要是通过作用于血管内皮细胞，减少肿瘤新生血管生成。而对体外培养的人胃癌细胞无直接诱导其凋亡的作用。     

缺血缺氧再灌注不同损伤程度人脐静脉内皮细胞变化与清开灵的干预效应

背景：“毒损脑络”是急性脑血管病的主要病机，以脑微血管损伤为主要表现。目的：建立不同缺氧缺血再灌注时间的细胞模型及施加药物干预，观察清开灵注射液对不同损伤程度人脐静脉内皮细胞ECV304的保护作用。设计：以培养的细胞为观察对象的随机对照实验。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科。材料：实验于2002—02／04在北京中医药大学附属东直门医院中心实验室完成。实验用人脐静脉内皮细胞ECV304随机分为7组，即正常组、缺氧6h再灌注12h对照组、缺氧24h再灌注12h对照组、缺氧24h再灌注12h低浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h高浓度清开灵组、缺氧6h再灌注12h中浓度清开灵组。清开灵注射液主要成分为牛胆酸、猪去氧胆酸、黄芩苷、栀子总苷等。方法：缺血再灌注模型的制作：①从培养箱中取出培养的细胞，缺氧6h再灌注12h对照组、缺氧24h再灌注12h对照组分别吸除原培养液，换人无糖Earle’s液，细胞放人缺氧槽中37℃缺血缺氧培养。缺氧6h再灌注12h对照组培养6h，缺氧24h再灌注12h对照组培养24h后，分别吸去无糖Earle’s液，换人无血清1640液后置于37℃ CO2培养箱中再灌注培养12h。（2）缺氧24h再灌注12h低浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h高浓度清开灵组分别在缺氧24h再灌注12h对照组造模的基础上，向各自培养液中加人质量浓度为5，10，20mg／L的清开灵对细胞进行培养。⑧缺氧6h再灌注12h中浓度清开灵组在缺氧6h再灌注12h对照组造模的基础上，向培养液中加人质量浓度为10mg／L的清开灵。④细胞存活率以四唑盐比色试验测定，乳酸脱氢酶漏出率用乳酸脱氢酶试剂盒测定，细胞凋亡率行碘化吡啶染色后用流式细胞仪检测，Cellquest软件进行分析。主要观察指标：①细胞形态学观察结果。②各组细胞存活率、乳酸脱氢酶漏出率及细胞凋亡率。结果：①细胞形态学观察：正常组细胞密集，贴壁良好，伸展充分，细胞表面光滑，有较多的分裂期细胞，细胞长满底面，呈典型的“铺路石征”；缺氧6h再灌注12h对照组及缺氧24h再灌注12h低浓度清开灵组细胞形态改变不明显；缺氧24h再灌注12h对照组细胞较稀疏。脱壁较多，可见大量肿胀变圆的损伤细胞及破碎细胞的碎片，贴壁细胞皱缩明显，可见伪足，分裂期细胞少；缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组细胞贴壁良好，表面光滑，未发生皱缩，可见分裂期细胞。（④各组ECV304细胞存活率：与缺氧24h再灌注12h对照组比较，缺氧24h再灌注12h低浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组均显著升高[（42．5&;#177;2．8），（72．9&;#177;8．0），（80．3&;#177;12．7）％，P均（0．01]，而缺氧24h再灌注12h高浓度清开灵组则显著下降至（10．1&;#177;0．4）％，P（0．01。正常组为100％。⑧各组ECV304细胞乳酸脱氢酶漏出率：与缺氧24h再灌注12h对照组比较，缺氧24h再灌注12h低浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组均显著升高[（6．6&;#177;1．4），（2．4&;#177;1．4），（2．4&;#177;0．5）％，P均（0．01]，而缺氧24h再灌注12h高浓度清开灵组则显著升高至（16．1&;#177;2．2）％，P〈0．01。正常组为（2．2&;#177;1．0）％。④各组ECV304细胞凋亡率：与缺氧6h再灌注12h对照组比较，缺氧6h再灌注12h中浓度清开灵组明显升高[（2．2&;#177;0．5），（1．5&;#177;0．4）％，P〈0．05]；与正常组比较，缺氧24h再灌注12h对照组、缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组均显著升高[（0．9&;#177;0．2），（5．5&;#177;2．5），（9．9&;#177;4．3）％，P均（0．01]；并且缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组比与缺氧24h再灌注12h对照组升高更明显（P（0．01）。结论：①清开灵注射液对不同程度缺血再灌注损伤的ECV304细胞均有保护作用，但随着损伤程度的不同而表现为两种相反的保护形式。②对于缺血6h再灌注12h此类受损伤较轻的ECV304细胞，主要表现为降低细胞的凋亡率；而对于缺血24h再灌注12h此类缺血再灌注损伤较重的ECV304细胞，则增加细胞的凋亡率，使坏死的细胞减少。⑧与坏死细胞相比，凋亡细胞不发生溶酶体、线粒体及胞膜的破裂，没有内涵物的外泄，故不引起周围细胞的次级损伤，从而提高了细胞存活率，起到保护大多数细胞的作用。     

核因子κB在局部脑缺血及再灌注中的表达和N-乙酰半胱氨酸的影响

背景：核因子κB是一种重要的转录因子，激活后能促进许多靶基因转录。 目的：研究核因子κB在局部脑缺血及再灌注中的表达及N-乙酰半胱氨酸预处理的影响。 设计：随机分组设计、动物实验。 单位：哈尔滨医科大学第二临床学院神经内科。 材料：实验于2004-01／05在哈尔滨医科大学动物实验中心及病理实验室完成。选择健康雄性Wister大鼠99只，随机分3组，假手术组11只，生理盐水对照组44只，N-乙酰半胱氨酸组44只。 方法：3组大鼠采用Longa等改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型。将头端加热成0．26mm直径的光滑圆球的尼龙线经颈总动脉近分叉处切口插入，扎紧颈总动脉备线，打开颈内动脉上的微动脉夹，尼龙线进入颈内动脉，N-乙酰半胱氨酸组和生理盐水对照组插入长度由颈内动脉和颈外动脉分叉部计约（18．5&;#177;0．5）mm，阻断大脑中动脉血供，假手术组插入深度〈15mm，大脑中动脉血供正常。N-乙酰半胱氨酸组于缺血前30min腹腔注射N-乙酰半胱氨酸（150mg／kg），生理盐水对照组于缺血前30min注射等体积生理盐水。生理盐水对照组和N-乙酰半胱氨酸组于缺血6，24h，缺血6，24h再灌注1h时间点将大鼠断颈处死，每次11只。应用免疫组织化学法观察脑组织核因子KB的表达情况，红四氯氮唑染色测定各组大鼠脑梗死体积百分比，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测脑组织细胞凋亡。 主要观察指标：各组大鼠脑梗死体积百分比，核因子κB p65结合活性，凋亡细胞。 结果：纳入动物99只，均进入结果分析。①缺血6h及24h再灌注1h N-乙酰半胱氨酸组梗死体积百分比分别为（8．39&;#177;2．54）％．（24．54&;#177;6．02）％，相应生理盐水对照组为（15．50&;#177;4．18）％，（32．22&;#177;3．99）％。缺血24h各组较缺血6h各组梗死灶增大，使用N-乙酰半胱氨酸组较生理盐水对照组梗死体积明显缩小（P〈0.01）。②缺血及再灌注后核因子κB p65明显从胞质转移到胞核。缺血6h及24h再灌注N-乙酰半胱氨酸组p65阳性细胞率分别为（0．462&;#177;0．022）％，（0．452&;#177;0．015）％，与相应生理盐水对照组[（0．563&;#177;0．028）％，（0．554&;#177;0．013）％]比较表达减少（P〈0．01）。③N-乙酰半胱氨酸预处理较生理盐水预处理凋亡细胞减少。 结论：局灶脑缺血及再灌注能使核因子κB p65活化，参与脑缺血及再灌注损伤。N-乙酰半胱氨酸可抑制p65表达，减轻神经损伤，具有脑保护作用。     

米非司酮对人宫颈癌Hela细胞体外作用的研究

目的 观察米非司酮对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响。方法 选用生长良好的人宫颈癌Hels细胞株进行体外培养，不同浓度的米非司酮作用72h后，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定米非司酮对细胞生长的抑制作用；应用光学显微镜、透射电子显微镜观察药物作用后细胞的形态学改变。终末脱氧核苷酸末端转移酶介导缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况，计数凋亡细胞，计算凋亡率。结果 米非司酮浓度分别为5、10、20、40μmol／L时作用72h，细胞生长受到不同程度的抑制，抑制率分别为36．74％、49．62％、61．96％、71．34％，明显高于对照组（P〈0．01）；同时出现明显的凋亡现象，光学显微镜、透射电子显微镜下均可观察到细胞凋亡的形态学改变，TUNEL法证实了凋亡率分别为28．67％、39．00％、54．33％、64．33％，明显高于对照组（P〈0．01），各浓度间凋亡率比较差异亦有显著性（P〈0．01）。结论 米非司酮显著抑制人宫颈癌Hels细胞的生长，并具有诱导细胞凋亡的作用，随着药物浓度的增加，效应明显增强。     

siRNA抑制人膀胱癌T24细胞株VEGF 的表达及细胞增殖

目的探讨siRNA（small interfering RNA）对T24人膀胱癌细胞株VEGF基因表达的抑制及癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法体外构建两个针对VEGF基因的siVEGF的重组质粒，转染124细胞；应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定VEGF基因的表达，并用MTT法和流式细胞仪检测siVEGF对细胞的增殖抑制率和凋亡的影响。结果构建的两个siVEGF重组质粒分别使VEGF基因表达下调到空白组的21．02％和30．13％；control siRNA组的VEGF基因表达与空白组无明显差异。转染siVEGF后T24细胞生长受到抑制，并发生细胞凋亡，凋亡率分别为45．5％和35．9％。结论siVEGF可以有效抑制124细胞株中VEGF的表达，从而抑制细胞增殖，并诱导细胞凋亡。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

护士选择性应用静脉留置针现状分析

[目的]了解护士选择性应用留置针的现状以及主要影响因素,为指导临床留置针合理应用提供理论依据。[方法]采用自设问卷对138名护士留置针选择性使用情况及其影响因素进行调查。[结果]约1／4的护士并不知道应选择性使用留置针,近60％的护士在实际工作中选择留置针的意识较差;护士选择性应用留置针的决策受多因素影响;不同科室、职称及是否具有带教资格选择性应用留置针的影响因素不尽相同;绝大部分护士希望参加选择性应用留置针相关内容的培训。[结论]临床护士操作前考虑留置针选择的意识有待加强。建议实施有针对性的培训以提高护士选择性应用留置针的能力。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。     

星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察

失眠症又称不寐，指入睡困难，或维持睡眠障碍（易醒、早醒和再入睡困难）导致睡眠时间减少或睡眠质量下降，不能满足身体生理需要，明显影响日间社会功能和生活质量。现将星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察总结如下。