热休克蛋白27在大鼠牙髓炎中的免疫组化研究

目的：研究内毒素（LPS）诱导大鼠牙髓炎模型中HSP27在不同时间的动态表达及定位情况，观察HSP27在牙髓炎中的表达特点，推测它在牙髓炎发生、发展中的意义。方法：通过对LPS诱导的大鼠磨牙实验性牙髓炎组织连续进行切片，同时超敏免疫组化分析。结果：1d组HSP27在成牙本质细胞呈中度阳性表达，成纤维细胞、血管壁及内皮细胞中均呈阳性表达，3、5、7d组中HSP27在成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞及内皮细胞表达减少，2周以后，成牙本质细胞、成牙本质细胞突、修复性牙本质和牙髓成纤维细胞可见HSP27阳性表达，3、4周以后，成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、修复性牙本质呈弱阳性表达，5周以后，牙髓组织变性、坏死，呈均质弱阳性染色。结论：HSP27在牙髓炎早期能够保护牙髓细胞，限制炎症发展，在损伤晚期则可能参与牙齿矿化修复过程。     

转录因子Oct-4的研究进展

Oct-4是维持干细胞多能性和自我更新的转录因子,它通过结合靶基因调控区,选择性地抑制分化基因表达或促进多能性基因表达。通常只在多能干细胞中表达,在分化细胞中不表达;它最终决定干细胞是保持多能性还是分化,以及向哪个方向分化。此外,Oct-4在生殖细胞肿瘤研究中也发挥重要作用。     

转录因子Oct-4基因的克隆和原核表达

目的克隆转录因子Oct-4基因、构建原核表达载体。方法从人胚胎标本中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增Oct-4基因的cDNA,再通过基因重组技术将该基因片段克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,经酶切、测序鉴定后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,纯化后SDS-PAGE分析表达产物。结果电泳证实RT-PCR扩增产物与预期长度一致,测序结果与GenBank公布的Oct-4基因序列一致较好,IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳分析表明,在相对分子质量47KD左右出现目的蛋白表达条带。结论成功构建了pET-Oct-4原核表达载体,表达并纯化出Oct-4蛋白,为进一步研究Oct-4蛋白打下了实验基础。     

转录因子Oct-4和SOX-2在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的：研究转录因子Oct-4和SOX-2在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达情况,
阐明二者作为宫颈癌干细胞标记物的可能性。方法：采用免疫组织化学SP法检测Oct-4和SOX-2在
52例宫颈癌组织和28例正常宫颈组织中的表达,分析二者在不同类型宫颈癌患者中的表达情况。
结果：Oct-4在宫颈癌组织中表达率(46.1%,24/52）显著高于其在正常组织中的表达率(7.1%,2/28）,二者比较差异有统计学意义（P<0.05）;SOX-2
在宫颈癌组织中的表达率(59.6%,31/52）显著高于其在正常组织中的表达率(10.7%,3/28）,
二者比较差异有统计学意义（P<0.05)。宫颈癌组织中Oct-4和SOX-2的表达与患者年龄、病
理类型和FIGO分期均无关联性（P>0.05）;与宫颈癌的分化程度有关联,随分化程度的降低,Oct-4和SO
X-2表达水平升高,不同分化程度宫颈癌患者表达频数比较差异均有统计学意义（P<0.05）;宫颈癌组织中Oct-4与SOX-2的表达频数呈正相关关系（r=0.753,P<0.05）。结论：Oct-4和SOX-2在宫颈癌组织中频数较高,且随宫颈癌分化程度降低表达频数升高,提示Oct-4和SOX-2可作为
宫颈癌干细胞的标记物。
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核转录因子-κB在动脉粥样硬化大鼠动脉平滑肌细胞中的表达

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)在动脉粥样硬化(AS)大鼠动脉平滑肌细胞(SMC)中的表达及AS的发生机制。方法SD雄性大鼠20只随机分为对照组和高脂饮食组,每组10只。对照组用普通饲料喂养,高脂饮食组用高脂饲料喂养。2个月后心脏采血处死大鼠,取胸主动脉,常规固定,包埋,切片。采用免疫组织化学检测各组平滑肌细胞NF-κB p65的表达情况。结果对照组胸主动脉内膜光滑,内皮细胞排列整齐。高脂饮食组动脉内膜脂质浸润,粗糙,隆起,有泡沫细胞形成,细胞排列紊乱。NF-κB p65在对照组动脉SMC呈弱阳性表达,在高脂饮食组SMC胞浆和胞核中有棕褐色颗粒,呈强阳性表达。NF-κB p65在高脂饮食组表达的平均灰度值(86.30±17.29)显著低于对照组(152.36±28.12)(P<0.01)。结论NF-κB参与了AS的发生、发展,高脂血症可能通过诱导血管壁SMC中NF-κB的表达引起AS的发生。     

上皮性卵巢癌中八聚体结合转录因子4、Notch1及DLL4的表达及其临床意义

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)中八聚体结合转录因子4(OCT4)、Notch1及DLL4蛋白表达之间的关系及其功能意义.方法 收集207例EOC术后标本和65例卵巢良性上皮性肿瘤标本,应用免疫组化学法检测EOC和卵巢良性上皮性肿瘤组织中OCT4、Notch1以及DLL4蛋白的表达情况.结果 EOC组织和卵巢良性上皮性肿瘤组织中,OCT4、Notch1和DLL4蛋白的阳性表达率分别为60.0%、61.8%、60.9%和9.2%、6.2%、0,差异均有统计学意义(P<0.05);OCT4、Notch1和DLL4的表达与EOC的组织学分化、FIGO分期、盆腔淋巴结转移有关(P<0.05);DLL4蛋白的表达分别与OCT4和Notch1的表达呈正相关关系(r值分别为0.758和0.704,P均<0.001),同时,OCT4与Notch1蛋白的表达亦呈正相关(r=0.645,P<0.001).Kaplan-Meier生存分析表明,OCT4、Notch1和DLL4蛋白的过表达均与患者的生存率有关,3种蛋白表达阳性组患者生存率均明显低于蛋白表达阴性组患者(P<0.05).多因素分析:OCT4、DLL4蛋白的表达和FIGO分期是影响EOC根治术后患者预后的独立因素(P<0.05).结论OCT4、Notch1及DLL4的过表达与EOC的组织学分化程度、转移和预后等因素密切相关,联合检测这些指标可能对于EOC患者的病情进展和预后判断给予重要提示.     

Cryopyrin在大鼠实验性牙髓炎中的表达

目的:建立大鼠实验性牙髓炎模型,了解Cryopyrin在大鼠牙髓组织的表达情况。方法:30只SpragueDawley大鼠随机分为0,1,3,5,7d5组。除0d组外,其余四组大鼠双侧下颌第一磨牙开髓后暴露于口腔环境中,分别于开髓后1,3,5和7d处死大鼠,分离双侧下颌骨。常规组织学处理后HE染色观察牙髓炎症状况,免疫组化检测Cryopyrin在牙髓炎中的表达及定位。结果:大鼠正常牙髓组织成牙本质细胞层Cryopyrin阳性表达,牙髓内部血管内皮细胞偶见表达,牙髓成纤维细胞未见表达。炎性牙髓组织血管内皮细胞表达增加,牙髓成纤维细胞及多种炎症细胞均有阳性表达,且表达的数量和牙髓的炎症浸润强度显著正相关(r=0.655,P<0.01)。结论:Cryopyrin在牙髓组织中表达并在牙髓炎的发生发展中起着重要作用。     

人膀胱移行细胞癌组织中八聚体转录因子4蛋白表达

目的:检测人膀胱移行细胞癌组织中核转录因子4(Oct4)蛋白的表达情况,并探讨其在膀胱移行细胞癌发生发展中的作用.方法:采用免疫组织化学SP法检测44例膀胱移行细胞癌(Ⅰ级7例,Ⅱ级27例,Ⅲ级10例)、2例非典型增生、19例癌旁组织和15例正常膀胱黏膜组织中Oct4蛋白的表达情况.结果:膀胱移行细胞癌和癌旁组织中Oct4蛋白的阳性表达率分别为63.6%(28/44)和36.8%(7/19),非典型增生和正常膀胱黏膜上皮组织中无Oct4表达,差异有统计学意义(P<0.05).且膀胱移行细胞癌组织中Oct4蛋白的表达与分化程度相关(P<0.05).结论:Oct4蛋白的表达可速膀胱移行细胞的恶性转化.     

大肠癌细胞中八聚体结合转录因子4与人类白细胞分化抗原133的表达及相关性

目的探讨大肠癌细胞中人类白细胞分化抗原133（CD133）与八聚体结合转录因子4（OCT4）的表达情况及其相关性。方法采用磁珠细胞分离技术分选出人结肠癌细胞系的CD133＋细胞和CD133-细胞,检测两种细胞中OCT4的表达。分别改变CD133＋和CD133-细胞中OCT4的表达,观察其对CD133的表达的影响。采用肿瘤球形成实验检验肿瘤细胞干性生物学行为的改变。结果 CD133＋细胞中OCT4呈现高表达,CD133-细胞中OCT4基本无表达。CD133＋细胞对5-氟尿嘧啶（5-FU）高度抵抗,并且更容易在无血清培养基中形成肿瘤球。干扰OCT4的表达可以降低CD133＋细胞中CD133的表达水平,增加对5-FU的敏感性,并且减少肿瘤球形成能力。过表达OCT4增加CD133-细胞CD133的表达水平,降低对5-FU的敏感性,并且减少肿瘤球形成能力。结论 OCT4与CD133在大肠癌细胞中均有表达,OCT4对CD133有直接调控作用。     

Oct-4在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的 分析Oct-4在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达特点及规律,探讨Oct-4的表达在NSCLC发生、发展中的意义及其与肿瘤干细胞的关系.方法 采用免疫组化SP法检测Oct-4蛋白在135例NSCLC组织和20例正常对照肺组织中的表达情况.结果 NSCLC组织中Oct-4表达的阳性率明显高于正常对照肺组织,二者之间的差异具有显著性（P＜0.05）.Oct-4表达的阳性率与NSCLC患者的临床分期、有无淋巴结转移及肿瘤分化程度有关（P〈0.01）,而与患者的性别、年龄及NSCLC的组织学类型无关（P＞0.05）.结论 Oct-4的表达与NSCLC的分化程度、临床分期和淋巴结转移有关,提示Oct-4的表达在NSCLC发生、发展中的可能具有一定的意义,表达Oct-4的肿瘤细胞很可能是肿瘤干细胞,推测Oct-4有可能成为分离和鉴定NSCLC肿瘤干细胞的标志物.     

转录因子Oct-4在皮肤鳞状细胞癌、脂溢性角化病的组织表达及其意义

目的检测干细胞转录因子Oct-4皮肤鳞状细胞癌(SCC)、脂溢性角化病(SK)的组织表达,分析其表达差异及与肿瘤干细胞的关系。方法采用免疫组织化学方法检测Oct-4在35例SCC、21例SK及15例正常对照皮肤组织中的表达。结果 Oct-4在正常皮肤组织表达为阴性,在SCC、SK之间表达有显著性差异(P<0.05),间接反映SCC、SK的恶性程度不同。结论 SCC、SK中表达Oct-4基因的细胞很可能是SCC、SK的干细胞,这将为其最终分离和鉴定人SCC、SK干细胞提供重要基础,将有助于揭示SCC、SK的肿瘤起始细胞,从而对预防和治疗SCC、SK有重大意义。     

Oct-4在精原干细胞定向诱导分化中的表达

目的：检测Oct-4在小鼠精原干细胞（mouse spermatogonial stem cells,mSSCs）体外诱导分化中的表达。方法：①体外培养mSSCs;②用干细胞因子（SCF,stem cell factor）对mSSCs进行精母细胞方向诱导分化;③通过形态学观察和c-kit,GCNF间接免疫荧光染色鉴定mSSCs是否发生分化;④通过间接免疫荧光染色和RT-PCR分别从蛋白水平和mRNA水平检测Oct-4在mSSCs诱导分化前后的表达情况。结果：①形态学观察mSSCs细胞核较大,细胞质少,SCF诱导培养后,随着培养时间的延长,细胞克隆逐渐增长缓慢,并出现衰退、凋亡的细胞;②c-kit,GCNF间接免疫荧光染色结果显示,mSSCs经SCF诱导后发生分化;③Oct-4间接免疫荧光染色和RT-PCR结果显示,Oct-4在mSSCs诱导前表达水平最高,诱导2天后下降,5天后几乎不表达。结论：Oct-4是mSSCs未发生分化的标志。     

Oct-4在胃癌组织中的表达及临床意义

目的研究干细胞相关标志物Oct-4在胃癌组织中的表达及临床意义。方法收集1996年6月-2006年3月胃癌手术石蜡标本63例,免疫组化法检测组织中Oct-4表达,分别以58例癌旁正常组织和10例正常胃黏膜组织标本作为对照。回顾63例患者的临床病理学指标,并分析各项指标与Oct-4表达的关系。对63例中的50例患者进行为期8年的生存随访,Kaplan—Meier法和Log-rank检验分析Oct-4表达与患者生存的关系;构建Cox回归模型,评估Oct-4作为胃癌患者预后的独立影响因素的可能性。结果Oct-4在胃癌组织中阳性表达率为80．95％（51／63）,显著高于癌旁正常组织的5．2％（3／58）和正常胃黏膜组织（0）（P〈0．01）。Oct-4表达的阳性程度与胃癌的临床分期呈正相关（P〈0．01）。Oct-4表达在不同分化程度胃癌组织及不同年龄和性别患者间比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。Oct-4表达阳性程度高的患者生存时间明显短于Oct-4表达阳性程度低的患者（P〈0．05）。Oct-4表达水平与胃癌患者预后无明显相关性（RR0．554,95％C10．209～1．466）。结论Oct-4在胃癌组织中表达的阳性程度与肿瘤临床分期及患者生存期有关,但不是胃癌患者预后的独立影响因素。     

大鼠磨牙实验性牙髓炎动物模型的建立

目的：探讨建立实验性牙髓炎动物模型的具体实验方法。方法：选用32只雄性Wistar大鼠，每只鼠均分为实验组及对照组,实验组牙髓暴露后用内毒素(LPS)处理，而对照组则用生理盐水(NS)处理,分别于术后1，3，5，7d和2，3，4，5周处死动物，获取下颌骨及牙齿标本，经固定、脱钙后作5μm厚的连续切片，HE染色后光镜观察。结果：LPS处理组牙髓组织发生典型的炎症变化。结论：LPS法诱导大鼠实验性牙髓炎简便可行。     

Molecular Cloning, Expression and Subcellular Localization of Human Oct-4 Protein

Molecular Cloning, Expression and Subcellular Localization of Human Oct-4 Protein     

Oct-4在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 研究干细胞相关标志物Oct-4在胃癌组织中的表达及临床意义.方法 收集1996年6月～2006年3月胃癌手术石蜡标本63例,免疫组化法检测组织中Oct-4表达,分别以58例癌旁正常组织和10例正常胃黏膜组织标本作为对照.回顾63例患者的临床病理学指标,并分析各项指标与Oct-4表达的关系.对63例中的50例患者进行为期8年的生存随访,Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析Oct-4表达与患者生存的关系;构建Cox回归模型,评估Oct-4作为胃癌患者预后的独立影响因素的可能性.结果 Oct-4在胃癌组织中阳性表达率为80.95%(51/63),显著高于癌旁正常组织的5.2%(3/58)和正常胃黏膜组织(0)(P<0.01).Oct-4表达的阳性程度与胃癌的临床分期呈正相关(P<0.01).Oct-4表达在不同分化程度胃癌组织及不同年龄和性别患者间比较,差异无统计学意义(P>0.05).Oct-4表达阳性程度高的患者生存时间明显短于Oct-4表达阳性程度低的患者(P<0.05).Oct-4表达水平与胃癌患者预后无明显相关性(RR 0.554,95% CI 0.209～1.466).结论 Oct-4在胃癌组织中表达的阳性程度与肿瘤临床分期及患者生存期有关,但不是胃癌患者预后的独立影响因素.     

RT-PCR技术检测石蜡包埋恶性生殖细胞肿瘤．组织中Oct4的表达

目的：用逆转录PCR技术（RT-PCR）技术从石蜡包埋的恶性生殖细胞肿瘤组织中检测Oct-4基因（目的片段）的表达。方法：用Trizol法从上述3种肿瘤组织抽提总RNA,取出1μl作为模板进行反转录合成cDNA第一链,然后进行PCR反应。PCR产物用1．2％的琼脂糖凝胶电泳检测。结论：RT—PCR技术可以检测石蜡包埋肿瘤组织Oct．4基因。     

肺癌干细胞基因Oct-4表达的临床意义

目的研究肺癌干细胞的基因表达与临床特征、病理特征、预后间的关系。方法应用流式细胞仪分选出肺癌干细胞,并应用RT^2 Profiler TMPCR仪检测肺癌干细胞与非肺癌干细胞问的差异性基因表达。应用免疫组化分析十细胞基凶Octamer-4（Oct-4）的表达与临床病理特征之间的关系。应用Western—blot检测肺癌干细胞中Oct-4蛋白的表达情况。结果肺癌干细胞与非肺癌干细胞间显著差异性表达的基因共7种,包括干细胞分化相关因子（CD44、Oct-4和nestin）、细胞周期调节因子（APC和CDC2）以及生长因子（HGF和TGF）。其中,Oct-4蛋白在癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P=0．001）。经过生存分析,Oct-4蛋白高表达病例的术后无病生存期明显短于Oct-4低表达或无表达的病例（P=0．001）。在Cox回归模型中,肿瘤大小、淋巴结转移和Oct-4的表达为独立预后网子（分别为P=0．031、0．002和0．003）。结论Oct-4在肺癌干细胞中高表达,并可作为肺癌发生、进展及分化的潜在生物标志。