TIMP—1抗体抑制白介素—1β诱导系膜细胞合成和分泌纤维连接蛋白的实验研究

目的：观察基质金属蛋白酶组织抑制因子－1抗体（TIMP－1Ab)对白介素－1β（IL－1β）促人肾小球系膜细（HMC）产生纤维连接蛋白的影响。方法：在体外用IL－1β（5ng/ml)刺激人肾系膜细胞，诱导纤维连接蛋白的产生，然后，以不同浓度的TIMP－1Ab(0.2,0.5,1.0μg/ml)处理已被IL-1β刺激细胞，分别培养8h、16h、24h后收集细胞培养上清，使用ELISA法检测纤维连接蛋白（FN)的含量。结果：IL－1β对人肾小球系膜细胞产生FN具有一定的刺激作用，TIMP－1Ab对IL－1β促HMC合成和分泌FN具有一定的抑制效应，该效应与TIMP－1Ab的作用时间和浓度有一定关系。结论：基质金属蛋白酶组织抑制因子－1抗体（TIMP－1Ab)对肾小球硬化具有一定的逆转作用。     

醛固酮对人肾小管上皮细胞MMP-1/TIMP-1基因表达和合成分泌纤维连接蛋白的影响

目的 探讨醛固酮(ALD)对人肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶1(MMP-1)和金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)基因表达,以及合成分泌纤维连接蛋白(FN)的影响.方法 人肾小管上皮细胞(HK-2)培养于含5％ FCS的DMEM/F12培养液中,以不同浓度的ALD (10-11、10-10、10-9、10-8mol/L)刺激HK-2细胞48h后,应用半定量RT-PCR法检测细胞中MMP-1、TIMP-1和FN的基因表达,ELISA法测定培养上清液中纤维连接蛋白(FN)的含量.结果 ALD呈剂量依赖性地下调HK-2细胞中MMP-1的基因表达,上调TIMP-1和FN的基因表达,MMP-1/TIMP-1比值降低(P＜0.05).ALD呈剂量依赖性地增加培养上清液中FN的含量(P＜0.05).结论 ALD通过调控HK-2细胞中MMP-1和TIMP-1的基因表达,促进其合成分泌FN,导致肾间质纤维化的进展.     

基质金属蛋白酶-9和白介素-1β对绒毛膜羊膜炎的预测价值研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、白介素-1β(IL-1β)预测绒毛膜羊膜炎的临床价值.方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测未足月胎膜早破组56例、足月胎膜早破组38例孕妇血清MMP-9、IL-1β、C反应蛋白(CRP)、白细胞(WBC)的水平,并进行胎膜的病理检查.结果 未足月胎膜早破组的绒毛膜羊膜炎的发...     

二十二碳六烯酸对白介素1β诱导的动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响及机制探究

目的探讨二十二碳六烯酸（DHA）对白介素1β（IL-1β）诱导的动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响及机制。方法血管平滑肌细胞（VSMCs）培养及传代后,分为对照组、IL-1β组、DHA组、IL-1β和DHA处理组四组,其中对照组细胞加入50μL磷酸盐缓冲液（PBS）;IL-1β组细胞加入10 ng/mL IL-1β;DHA组细胞加入80μmol/L DHA;IL-1β和DHA处理组加入10 ng/mL IL-1β和80μmol/L DHA,培养48 h后,噻唑蓝（MTT）法和Transwell法检测VSMCs的增殖和迁移情况;qRT-PCR和Western blotting技术检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP）-1、TIMP-2和Notch3的表达情况。结果 VSMCs的增殖率和迁移能力经IL-1β处理后显著增高,而IL-1β和DHA处理组显著低于IL-1β处理组（F=25.537,P=0.003）;MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达量经IL-1β处理后显著增高,而经IL-1β和DHA共处理后显著低于IL-1β组（MMP-2：F=34.286,P=0.000;TIMP-2：F=21.034,P=0.009;MMP-9：F=31.732,P=0.000;TIMP-1：F=18.213,P=0.021）;IL-1β组细胞Notch3表达量显著降低,IL-1β和DHA处理组中Notch3的表达水平则显著高于IL-1β处理组（F=39.235,P=0.000）。结论 DHA可通过Notch信号通路抑制VSMCs的增殖和迁移。     

Oncol2012: 甲状腺癌和血液中MMP-2，MMP-9，TIMP-1和TIMP-2水平之间的相关性

目的：探讨外周血基质金属蛋白酶-2（MMP-2）,基质金属蛋白酶9（MMP-9）,基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）抑制剂,基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）抑制剂的表达水平和甲状腺癌的相关性。方法：使用RT-PCR与ELISA法检测30例甲状腺癌患者,27例甲状腺良性疾病患者,25例健康志愿者外周血中的MMP-2,MMP-9,TIMP-2,TIMP-1 的表达水平。结果：MMP-2,MMP-9,TIMP-2,TIMP-1在甲状腺癌患者外周血中的表达水平均显着高于良性甲状腺疾病患者和健康志愿者（P <0.05）。然而,良性甲状腺疾病患者和健康志愿者之间无显着差异（P> 0.05）。两种检测方法对于甲状腺癌的准确率为83.33%。结论：测定外周血中的MMP-2,MMP-9,TIMP-2和TIMP-1表达水平对甲状腺癌的确诊是有帮助的,尤其对于术前的评估更加重要。     

全反式维甲酸抑制TGF-β1诱导的大鼠肾系膜细胞纤维连接蛋白表达及Smad 2,3,4核转位

目的 采用转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）在体外刺激大鼠肾系膜细胞表达纤维连接蛋白（fibronectin）,观察全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,atRA）对它的作用及对TGF-β1的Smad通路的影响.方法 用Western blot方法检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达,Smad 2的磷酸化,磷酸化Smad 2、总Smad 2/3和Smad 4的核转位,以及atRA对TGF-β1的这些作用的影响.结果 atRA能抑制TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达.atRA对TGF-β1引起的Smad 2的磷酸化无明显作用,但atRA能部分阻断TGF-β1引起的磷酸化Smad 2、Smad 2/3和Smad 4核转位.结论 atRA体外拮抗TGF-β1的致纤维化效应可能是由其减少磷酸化Smad 2、Smad 2/3、Smad 4的核转位所致.     

脑膜瘤组织中MMP-9、TIMP-1的表达

目的:探讨脑膜瘤组织中基质金属蛋白酶- 9(MMP- 9)及其组织抑制因子 (TIMP)- 1的表达。方法:采用免疫组化S- P法检测 10例正常蛛网膜组织、28例良性脑膜瘤组织和 16例恶性脑膜瘤组织中MMP -9及TIMP- 1的表达水平。结果:正常蛛网膜组织、良性脑膜瘤组织和恶性脑膜瘤组织中MMP- 9的阳性表达率分别为 0%、25. 0%和 62. 5%,恶性脑膜瘤组织中MMP- 9阳性率高于良性脑膜瘤组织,差异有统计学意义(P<0. 01);正常蛛网膜组织中TIMP 1的表达率最高 (100. 0% ),良性脑膜瘤组织次之 (89. 3% ),恶性脑膜瘤组织最低 18. 8%,各组间比较差异有统计学意义(P<0. 01)。结论:MMP- 9的高表达和TIMP 1的低表达与脑膜瘤的发病过程有关。     

IL-1β对人分泌中期子宫内膜细胞分泌MMP-9及TIMP-3蛋白的影响

目的初步研究白介素-1β(IL-1β)对离体培养的分泌中期子宫内膜细胞分泌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其特异性组织抑制物-3(TIMP-3)的影响。方法原代培养人分泌中期子宫内膜细胞,利用粘附式细胞仪570型,采用间接免疫荧光法检测IL-1β对内膜细胞分泌MMP-9和TIMP-3的影响。结果(1)MMP-9:空白对照组为1491.38±68.95,50U/ml组为1592.40±47.57,100U/ml组为1702.63±75.31,500U/ml组为1994.49±52.98,1000U/ml组为2347.58±45.87。随着IL-1β的浓度增加,原代培养的分泌中期子宫内膜细胞分泌MMP-9表达量呈浓度依赖性显著升高(P<0.05);(2)TIMP-3:空白对照组为1643.31±61.29,50U/ml组为1597.27±49.07,100U/ml组为1443.93±81.23,500U/ml组为1343.28±54.80,1000U/ml组为1157.85±47.95。随着IL-1β的浓度增加,原代培养的分泌中期子宫内膜细胞分泌TIMP-3表达量呈浓度依赖性显著下降(P<0.05)。结论IL-1β通过促进MMP-9分泌,抑制TIMP-3分泌,使细胞外基质降解,有利于绒毛滋养层细胞侵入。     

辛伐他汀含药血清对U937单核巨噬细胞MMP-9及TIMP-1表达与分泌的影响

【目的】探讨辛伐他汀含药血清对U937单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达与分泌的影响。【方法】15只新西兰大白兔随机分为正常对照组（NL,n=5）、粥样硬化模型组（AS,n=5）和辛伐他汀含药血清组（SIM,n=5）。通过喂养高脂饲料,建立兔动脉粥样硬化模型后,予辛伐他汀药液灌胃,获得含药血清。分别予不同浓度含药血清（5%、10%、20%）培养U937单核细胞源巨噬细胞24 h,应用逆转录聚合酶链反应检测MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA的表达,以及应用酶联免疫吸附试验检测MMP-9及TIMP-1蛋白的分泌。【结果】与相同浓度AS组比较,5%、10%、20%SIM组U937单核细胞源巨噬细胞MMP-9 mRNA表达均显著性降低（P值为0.005、0.041和0.013）;5%、10%、20%SIM组TIMP-1 mRNA表达无显著性差异（P值均〉0.05）。而与相同浓度AS组比较,不仅10%、20%SIM组MMP-9分泌显著性减少（P值分别为0.009和0.001）,而且10%、20%SIM组TIMP-1分泌均显著性增加（P值分别为0.017和0.001）。【结论】辛伐他汀可抑制单核巨噬细胞MMP-9的表达和分泌,以及促进TIMP-1的分泌。     

脱氢表雄酮对兔骨关节炎软骨和滑膜中MMP-3、TIMP-1和IL-1βmRNA表达的影响

目的观察关节腔内注射脱氢表雄酮(DHEA)对兔骨关节炎软骨和滑膜中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达的影响。方法20只新西兰大白兔行单侧前交叉韧带切除术,术后4周后分为实验组和对照组。实验组关节腔内注射100μmolLDHEA(溶于二甲基亚砜),每周1次,连续5周,对照组注射同剂量的二甲基亚砜。术后9周处死兔子,取膝关节行大体观察,用逆转录聚合酶链反应方法检测关节软骨和滑膜中MMP-3、TIMP-1和IL-1βmRNA的表达。结果大体观察显示实验组软骨和滑膜病变程度轻于对照组。实验组软骨和滑膜中MMP-3mRNA的表达水平显著低于对照组(均P<0.05),而TIMP-1mRNA的表达显著高于对照组(均P<0.05)。实验组软骨中IL-1βmRNA的表达与对照组的差异无统计学意义(P>0.05),而滑膜中IL-1βmRNA的表达显著低于对照组(P<0.01)。结论DHEA能有效延缓兔骨关节炎的进展。下调软骨、滑膜中MMP-3和上调软骨、滑膜中TIMP-1的表达及下调滑膜中IL-1β的表达可能是DHEA对骨关节炎的作用机制。     

金荞麦Fr4对小鼠lewis肺癌细胞MMP-9、TIMP-1蛋白表达的影响

目的 探讨金荞麦提取物Fr4对小鼠lewis肺癌组织基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase，MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitors of metallproteinase，TIMP-1)蛋白表达的影响。方法 利用C57／BL6小鼠移植性肿瘤lewis肺癌模型，观察金荞麦Fr4对小鼠lewis肺癌生长的影响；利用免疫组织化学SP法研究金荞麦Fr4对lewis肺癌中MMP-9、TIMP-1表达的影响。结果 金荞麦Fr4在400mg／kg剂量时可明显抑制C57／BL，6小鼠lewis肺癌生长；金荞麦Fr4可下调MMP-9的表达，但不影响TIMP-1的活性。结论 金荞麦提取物Fr4具有明显的抗肿瘤作用，分子机制可能与下调MMP-9的表达有关。     

褐藻多糖硫酸酯对TGF-β1孵育的人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan FPS)对TGF-β1下刺激人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2分泌的影响,探讨其在慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure CRF)防治中的意义。方法用TGF-β1作为刺激因子,孵育体外培养的人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell HMC),并分别用不同浓度的FPS干预,具体分组如下:模型组(TGF-β14 ng/ml)、FPS高剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 100 ug/ml)、FPS中剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 50 ug/ml)、FPS低剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS25 ug/ml)、FPS对照组(FPS 100ug/ml)、正常对照组。ELISA技术检测HMC培养上清液中MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平,Re-altime PCR技术检测HMC的MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,TGF-β1能减少HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01),增加HMC的TIMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01);FPS能阻断TGF-β1刺激下HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达减少、TIMP-2蛋白及mRNA表达增加(P0.01,P0.05);FPS对照组与正常对照相比MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯能阻断TGF-β1刺激下人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的比例失衡,阻断了由MMP-2、TIMP-2比例失衡导致的ECM积聚,从而延缓了慢性肾衰竭的进展。     

基质金属蛋白酶组织抑制因子-1在大肠癌中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）在大肠癌中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化S-P法对54例大肠癌组织的TIMP-1进行检测,结合临床资料进行分析。结果 TIMP-1主要表达于大肠上皮细胞膜和细胞浆,正常大肠组织表达率为100％,在大肠癌组织的表达率为59．6％（31／52）,且淋巴结转移大肠癌组表达低于无淋巴结转移组（P〈0．05）。结论 TIMP-1的表达程度与大肠癌淋巴结转移呈负相关,TIMP-1的表达程度降低在大肠癌病程演进中可能发挥一定的作用。     

正畸力作用下基质金属蛋白酶-1及金属蛋白酶组织抑制因子-1在龈沟液中的表达

目的 观察人正畸牙受力后基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在龈沟液中的表达变化,探讨MMP-1、TIMP-1在正畸牙移动过程中可能发挥的作用及其与正畸力值的关系.方法 筛选口腔正畸科24例患者.随机分为4组:A组0g力组(对照组),B组75 g力组(轻力组),C组150 g力组(中度力组),D组300 g力组(重力组)远中拉尖牙.在加力0、1、2、3、4、5和6 h收集龈沟液,应用ELISA方法测定龈沟液中MMP-1和TIMP-1的浓度.对所得数据进行统计学分析.结果 ①B组和C组MMP-1的浓度变化规律一致:加力后1 h开始升高,3 h时达到高峰,4 h时开始下降(P<0.05,0.01),5 h和6 h时恢复至0h水平(P>0.05),D组MMP-1的浓度在加力后未出现明显变化,各期差异无显著性(P>0.05).②B组和C组TIMP-1的浓度变化规律一致:加力后1 h开始升高,4h时开始下降,但5 h和6 h时停止下降,维持较高水平(P<0.05,0.01);D组TIMP-1加力后1 h即明显升高,3 h达高峰,4、5和6 h时未明显下降维持在较高水平(P<0.01).结论 ①在轻、中度正畸力作用下龈沟液内MMP-1、TIMP-1表达水平发生改变,具有时间依赖性.②在重度正畸力作用下,龈沟液内TIMP-1的表达早期便明显升高,且随时间推移维持在较高水平.而MMP-1的表达无明显变化.③推测MMP-1和TIMP-1早期即参与正畸牙周组织改建,二者的动态平衡对正畸牙移动可能起重要作用.     

冠心病患者血清MMP-9与TIMP-1浓度变化的临床意义

目的评价血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其特异性抑制因子——基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）在不同类型冠心病患者中的血清水平及其临床应用价值。方法将经冠状动脉造影确诊的冠心病患者117例分为急性心肌梗死组（AM I）25例,不稳定型心绞痛组（UAP）57例,稳定型心绞痛组（SAP）35例,设正常健康对照组（对照组）30例。采用夹心酶联免疫吸附法（ELISA）分别测定各组血清中MMP-9、TIMP-1的浓度。结果血清MMP-9浓度在AM I组及UAP组升高（P〈0.01）,SAP组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;血清TIMP-1浓度各组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论血清MMP-9水平升高与冠心病患者病情进展有关。     

过氧化氢诱导胰岛β细胞凋亡及TIMP-1的保护作用

目的:研究过氧化氢诱导的胰岛β细胞凋亡及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的保护作用和可能机制.方法:过氧化氢诱导大鼠胰岛瘤细胞RINm5F细胞凋亡,实验组予以TIMP-1干预.应用MTT法和Caspase-3活性检测来比较各组间细胞活力和Caspase-3活性的差异,检测超氧化物歧化酶(SOD)活性来反映各组之间抗氧化能力的差异.结果:应用0.1 mmol/L过氧化氢干预1 h,能明显诱导RINm5F细胞凋亡,过氧化氢刺激前TIMP-1(50μg/L)预处理1 h较单独过氧化氢刺激组细胞活力上升约35%,Caspase-3活性下降约21%,SOD活性增加约46%,两组比较差异有显著性意义(P＜0.05).结论:TIMP-1对过氧化氢诱导的RINm5F细胞的凋亡有保护作用,其机制可能是通过诱导SOD酶的活性增加来实现的.     

基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达与Dukes A和B期大肠癌预后的关系

目的研究DukesA和B期大肠癌标本中基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）基因表达与预后的关系。方法62例DukesA和B期大肠癌手术切除标本,采用RT-PCR法测定肿瘤组织中TIMP-1 mRNA表达,所有患者接受5年以上随访。结果在随访期内出现局部复发或远处转移的患者与无复发或转移的患者相比,其TIMP-1基因表达存在显著性差异。结论通过测定肿瘤标本中TIMP-1基因表达可能预测DukesA和B期大肠癌局部复发或远处转移的危险性。     

MMP-1、TIMP-1及TGF-β1在风湿性心脏病瓣膜组织中的 表达及意义

目的 探讨基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）及转化生长因子-β1（TGF-β1）在风湿性心脏病（RHD）瓣膜组织中的表达及意义。方法 采用Western blot及RT-PCR法检测RHD瓣膜组织（实验组, n=30）及无RHD瓣膜组织（对照组, n=15）中MMP-1、TIMP-1及TGF-β1蛋白与mRNA的表达,碱水解法检测胶原代谢情况,Masson法进行胶原纤维染色并检测胶原容积分数（CVF）。分析MMP-1、TIMP-1及TGF-β1与CVF的相关性。结果 MMP-1及TGF-β1蛋白和mRNA在实验组中的表达高于对照组,而TIMP-1蛋白和mRNA在实验组中的表达低于对照组,差异有统计学意义( P<0.05)。实验组胶原含量及CVF均高于对照组( P<0.05)。相关性分析显示,MMP-1与TGF-β1呈正相关,TIMP-1与TGF-β1呈负相关,MMP-1及TGF-β1与CVF呈正相关,TIMP-1与CVF呈负相关。结论 MMP-1、TGF-β1和TIMP-1参与了RHD瓣膜病变的纤维化进展。     

溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜MMP-1、TIMP-1的表达

目的建立大鼠溃疡性结肠炎（UC）模型,检测UC大鼠结肠黏膜基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的表达。方法采用硫酸葡聚糖（DSS）诱导大鼠UC模型,采用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）测定大鼠结肠黏膜MMP-1、TIMP-1在转录水平的表达;免疫组织化学染色法测定MMP-1、TIMP-1蛋白水平的表达。结果在转录水平上,UC大鼠病变结肠黏膜的MMP-1、TIMP-1的表达明显高于正常对照组（P〈0．05）,两者具有显著差异,而以MMP-1的增高程度更为明显;蛋白水平的表达与此一致。结论DSS诱导的大鼠溃疡性结肠炎与MMP-1的过度表达及TIMP—1的相对不足有关,MMP-1／TIMP-1的比例失调在UC的损伤过程中有重要作用。     

GF-β1对诱导肾间质成纤维细胞活化并表达MMP-9及TIMP-1的影响

目的 研究转化生长因子-β 1 （transforming growth factor beta-1 ,TGF-β 1 ） 诱导的肾间质成纤维细胞（NRK-49F） 发生表型转化时基质金属降解酶MMP-9 及其抑制因子TIMP-1 表达的变化及对分泌纤维连接蛋白（fibronectin,FN） 的影响。 方法 以不同浓度hTGF-β 1 （0 ng/ml 、0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml） 刺激NRK-49F 细胞48 h,分别应用ELISA法检测细胞上清FN 的浓度,免疫荧光检测细胞表型标记物α-SMA、Vimentin 的表达,Western blot、Northern blotting 方法检测MMP-9、TIMP-1 的基因及蛋白质表达。 结果 0.5 ～ 10 ng/ml TGF- β 1 随刺激浓度增高NRK-49F 细胞表达α-SMA明显增多、Vimentin 明显减少,细胞上清中FN 的含量显著增加（P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01） ;同时,TGF-β 1 浓度＞ 2 ng/ml 时显著上调TIMP-1 mRNA 及蛋白表达水平（P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01） ;以上效应均呈浓度依赖性,但对细胞MMP-9 mRNA 及蛋白表达无明显影响（P ＞ 0.05）。 结论 TGF- β 1 能诱导肾间质成纤维细胞活化,使FN 的分泌增多,该作用可能与TGF-β 1 上调了TIMP-1 基因及蛋白质水平,进而减少细胞外基质（extracellular matrix,ECM） 的降解有关。