疏肝活血方对体外培养主动脉平滑肌细胞影响的实验研究

疏肝活血方对体外培养主动脉平滑肌细胞影响的实验研究范英昌，胡利民，陆融（天津中医学院）动脉粥样梗化（Ａｓ）是当今社会发病率最高、危害最大的疾病之一。多年来，人们对Ａｓ的病因病理从多方面进行了深入研究，以期揭示其病因病理，从而寻找出有效的防治手段。平滑...     

疏肝活血方对家兔实验性动脉粥样硬化发病影响的实验研究

采用胆固醇饲喂日本大耳白家兔３个月，以造成主动脉粥样硬化病变模型，同时给予疏肝活血复方中药，观察该中药对血脂的影响以及病理形态学的改变。结果显示：该中药可明显调整血脂或脂蛋白，减小动脉壁厚度及动脉粥样斑块面积。组织形态学观察，证实本方对机体其他器官无任何毒副作用。以上提示，疏肝活血方对动脉粥样硬化（ＡＳ）的防治有可靠疗效。     

疏肝活血药方对家兔主动脉平滑肌细胞脂过氧化物含量和超氧化物歧化酶活性的影响

动脉平滑肌细胞内脂过氧化物含量增加，超氧化物歧化酶活性减弱，与动脉粥样硬化的发生有着重要的关系．本实验通过对家兔主动脉平滑肌细胞进行体外培养，观察到中药疏肝活血方可以显著降低平滑肌细胞内脂过氧化物含量，明显提高超氧化物歧化酶活性。实验结果提示中药疏肝活血方可能有使动脉粥样硬化病变减轻和趋向静止的作用。     

疏肝活血药方对家兔主动脉平滑肌细胞脂过氧化物含量和超氧化物歧化酶活性的影响

动脉平滑肌细胞内脂过氧化物含量增加，超氧化物歧化酶活性减弱，与动脉弱样硬化的发生有着重要的关系。本文实验通过对家兔主动脉平滑肌细胞进行体外培养，观察到中药疏肝活血可以显著降低平滑肌细胞内脂过氧化物含量，明显提高超氧化物歧化酶活性。     

双环铂对人主动脉平滑肌细胞和内皮细胞增殖影响的初步体外实验研究

目的:通过体外实验,研究双环铂对人主动脉平滑肌细胞(HASMC)和人主动脉内皮细胞(HAEC)增殖的影响,探讨其成为支架携带药物的可能性。方法:3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基胺)-2-(4-苯磺基)-2氢-四唑盐(MTS)法评价双环铂对HASMC和HAEC增殖的影响。探索不同浓度和不同作用时间条件下双环铂对HASMC和HAEC增殖抑制率的影响;双环铂对HASMC和HAEC半数抑制浓度的差异;以西罗莫斯作为阳性对照组,探索双环铂对HASMC和HAEC抗增殖作用的最低有效浓度。结果:双环铂对HASMC和HAEC的增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性。双环铂对HASMC和HAEC的半数增殖抑制浓度分别为3.47μg/ml和72.44μg/ml。双环铂浓度为10 ng/ml～10μg/ml时,对HASMC有显著抑制作用(P<0.05)。双环铂浓度为10μg/ml时,对HAEC有显著抑制作用(P<0.01)。阳性对照药物西罗莫斯在纳克(ng)水平对HASMC和HAEC的增殖也有明显的抑制作用。结论:双环铂对HASMC和HAEC的增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性。双环铂对HAEC的最低抑制浓度比对HASMC的最低抑制浓度高1000倍。尽管双环铂对细胞增殖的作用弱于西罗莫斯,但是其明显抑制血管平滑肌细胞增生而较少抑制血管内皮细胞增生的特性,使其有可能成为药物洗脱支架所携带的药物。     

β-磷酸甘油诱导体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞的钙化

目的:研究β磷酸甘油对体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞的钙化作用。方法:采用组织块培养法体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞。细胞分为钙化组和正常组。钙化组加入10mmol/Lβ磷酸甘油,0.1μmol/L胰岛素及50μg/L维生素C（钙化培养基）诱导细胞钙化,继续培养14d。茜素红S染色观察钙结节计数并测定细胞钙沉积含量。采用四唑盐比色法（MTT）测量细胞增殖。结果:钙化组钙结节计数为（7.4±3.8）%,较正常组（4.3±1.9）%显著增加（P<0.05）;细胞钙沉积含量为（5.4±0.4）mmol/g蛋白,较正常组（1.2±0.5）mmol/g蛋白显著增加（P<0.05）。MTT检测细胞增殖,钙化组细胞增殖为0.071±0.011,较正常组0.040±0.009明显增加（P<0.01）。结论:β磷酸甘油能诱导体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞的钙化,钙化能促进平滑肌细胞的增殖。     

疏肝健脾化痰活血方对体外非酒精性脂肪性肝病模型肝细胞凋亡的影响

[目的]研究疏肝健脾、化痰活血方对体外非酒精性脂肪件肝病(NAFLD)模型肝细胞凋亡率及其相关基因的影响.[方法]软脂酸诱导幼鼠原代培养肝细胞复制NAFLD细胞模型,并用疏肝健脾、化痰活血方药含药血清干预,流式细胞仪检测肝细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡相关基因be1-2、bax和caspase-3的表达.[结果]疏肝健脾、化痰活血方能明显降低NAFLD模型体外肝细胞凋亡率,并升高Bc1-2蛋白表达水平,降低Pax和Caspase-3表达.[结论]疏肝健脾、化痰活血方能有效降低体外NAFLD模型肝细胞凋亡率,其机制可能与调节Bc1-2、Bax和Caspase-3蛋白表达有关.     

牛主动脉蛋白聚糖对培养的人主动脉平滑肌细胞生长的影响

为探讨蛋白聚糖在动脉粥样硬化发生发展中的作用,观察牛主动脉硫酸肝素蛋白聚糖、硫酸软骨素蛋白聚糖、硫酸皮肤－硫酸软骨素蛋白聚糖和三种蛋白聚糖的混合物对培养的人主动脉平滑肌细胞增殖的影响。用细胞计数计算硫酸肝素蛋白聚糖（１．５￣７．０ｍｇ／Ｌ）对培养的人主动脉平滑肌细胞增殖的抑制率分别为０．５５％和７６％;硫酸软骨素蛋白聚糖（１５．０￣６０．０ｍｇ／Ｌ）的抑制率分别为２３％、３４％和６５％;硫酸皮肤素     

低密度脂蛋白对培养兔主动脉平滑肌细胞代谢的影响

本文目的为观察低密度脂蛋白(LDL)对培养兔主动脉平滑肌细胞(ASMC)代谢的影响。结果表明,LDL能加快ASMC DNA的合成速率,增加ASMC游离、酯化和总胆固醇含量及培养液中酸性磷酸酶的活性。     

促炎因子介导的体外培养人主动脉血管平滑肌细胞凋亡

目的 :探讨促炎因子对体外培养的人主动脉平滑肌细胞有无致凋亡作用。　　方法 :体外原代培养人主动脉平滑肌细胞 ,用免疫组化方法鉴定 ;肿瘤坏死因子 α (TNF α)和白细胞介素 1β (IL 1β)分别以浓度 2 0 μg/ml单独或二者共同与平滑肌细胞培养 3 6h ,实验分 4组 :TNF α组 (T组 )、IL 1β组 (I组 )、TNF α+IL 1β组 (TI组 )及对照组 ,采用流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期。　　结果 :①细胞凋亡分析显示 :TI组两种因子的联合作用诱导人平滑肌细胞凋亡与对照组比明显增加 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,而二者单独作用未能诱导人平滑肌细胞凋亡。②细胞周期分析发现TI组在TNF α +IL 1β刺激下 ,细胞增殖能力与其他组比有明显下降 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,生长逐渐停滞 ,而二者单独作用对细胞增殖有轻微刺激作用 ,但与对照组无显著性差异。　　结论 :促炎因子TNF α和IL 1β的相互作用 ,可以诱导人平滑肌细胞凋亡。     

体外培养高糖、高脂喂养大鼠主动脉平滑肌细胞钙化的研究

目的 检测高糖、高脂喂养Goto-Kakizaki（GK）糖尿病大鼠主动脉平滑肌细胞（SMCs）的血管钙化指标,探讨糖尿病血管钙化的相关机制.方法 高糖、高脂喂养GK及Wistar大鼠2周,同时分离培养两组大鼠的主动脉SMCs,Wistar大鼠SMCs作为对照.通过细胞计数法观察细胞生长状况,以甲基百里香酚蓝比色法测定两组大鼠细胞层及培养上清中钙的含量,实时定量PCR检测两组细胞碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）、核心结合因子α-1（Cbfα-1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的基因表达.结果 与Wistar大鼠SMCs相比,GK大鼠SMCs生长速度明显缓慢（F =363.392,P＜0.05）;细胞层钙含量[（0.56±0.22） vs.（0.39±0.09）,t=2.47,P＜0.05]明显增加,培养上清中钙含量[（0.82±0.22）vs.（1.20±0.17）,t=-22.573,P＜0.05]明显减少.GK大鼠SMCs中ALP （t=12.963,P＜0.05）、OPN（t=8.305,P＜0.05）及Cbfα-1（t=10.109,P＜0.05）的基因表达增加,同时α-SMA（t=-8.219,P＜ 0.05）的基因表达减少.结论 高糖、高脂喂养的GK糖尿病大鼠的主动脉平滑肌细胞易发生钙化.     

大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的探讨平滑肌细胞培养方法,了解生长特性。方法用组织贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,用相差显微镜观察其生长情况,用免疫荧光染色分析其抗原的表达。结果培养3日可见组织块周边有细胞长出,2周达亚融合,传代后细胞“谷峰”生长明显。SM-α-肌动蛋白和Calponin抗体免疫荧光染色呈阳性。结论组织贴块法是简单、经济、高效的平滑肌细胞培养方法,为心血管疾病发病机制的研究提供了理想的细胞模型。     

大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的 改进大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)的培养方法.方法 采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定.结果 镜下培养细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内αactin阳性表达.结论 本法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs.     

大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的探讨以简便、高效的方法获取血管平滑肌细胞,为相关研究提供实验材料。方法采用组织贴块法进行原代培养,胰酶消化法传代,并应用相差显微镜和平滑肌肌动蛋白对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果90%的组织块接种存活,培养5代的平滑肌细胞纯度达98%以上。镜下可见培养细胞呈典型的“峰-谷状”样生长,免疫组化染色显示胞浆内平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论本法简便、可靠,短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞,可作为研究心血管疾病良好的体外模型。     

日本血吸虫细胞体外培养实验研究

收集血吸虫毛蚴、尾蚴和成虫,无菌条件下进行组织处理,接种于含有胎牛血清、双抗、促细胞生长物的RPMI-1640培养基中进行细胞原代及传代培养。结果日本血吸虫细胞体外培养及传代获得成功,组织原代培养可见在组织碎块周围有发亮、饱满,呈单个分布或索状排列的细胞;随时间的延长,显示细胞增殖。原代培养细胞长满单层后,进行传代接种,传代后细胞形成密集、大小相近、分布均匀。     

重组Psilencer1.0-U6-siRNA-stat3质粒对体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞的影响

目的 观察重组Psilencer1.0-U6-siRNA-stat3质粒对大鼠主动脉平滑肌细胞(RSMCs)的抗增殖作用机制.方法 应用组织块方法培养RSMCs,应用脂质体转染方法将重组Psilencer1.0-U6-siRNA-stat3质粒转染体外培养的RSMCs,利用相差显微镜、MTT比色法观察体外培养的RSMCs增殖情况.结果 培养72 h后,相差显微镜下观察可见重组质粒组细胞增殖明显减少,MTT检测可见重组质粒组RSMCs的抑制率明显高于对照组.结论 重组Psilencer1.0-U6-siRNA-stat3质粒能够抑制RSMCs增殖.     

脐动脉平滑肌细胞体外培养方法的改进

目的:建立并优化的人脐动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)的体外培养方法。方法:人脐动脉VSMCs的体外原代培养应用优化的组织块贴壁法进行。在分别应用传统细胞培养法和优化后细胞培养法贴壁培养提取的原代细胞10 d后,计数6孔板每孔细胞数目,并做统计比较分析相同时间内原代细胞的数量。以抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体和抗CD31抗体进行免疫荧光染色和倒置相差显微镜观察鉴定培养的细胞。结果:与传统细胞培养法相比,在相同的时间周期内优化实验方法后培养的原代细胞数量较传统多,我们可以在较短时间内得到实验所需的细胞量,因此优化后可缩短细胞的培养周期。原代和传代培养的脐动脉VSMCs生长良好,细胞经冻存、复苏后状态依然良好。光镜下细胞呈典型的峰-谷样生长,细胞多为长梭形,具有VSMCs的特征,且传代培养至第7代,细胞生长特性不变。经抗α-SMA、CD31抗体进行免疫荧光染色鉴定证实为VSMCs。结论:优化的组织块贴壁法可缩短原代人脐动脉VSMCs的培养周期,且细胞的生物学特性较稳定,为与平滑肌相关的疾病进展及心血管生长发育的研究奠定了实验基础。     

胰酶消化法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞

建立胰酶消化法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,并和其他大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养方法相比较.在无菌条件下分离雄性Wistar大鼠胸主动脉血管中膜,剪碎中膜,在37℃用10mL0.25%胰酶消化大约3.5h.中止消化后,在100g条件下离心5min,收集细胞种入25cm2细胞培养瓶.结果发现,胸主动脉平滑肌细胞至少可以传20代以上,并且细胞形态、生长特点、平滑肌a-肌动蛋白表达不发生明显的改变.结果提示,与目前的平滑肌细胞培养方法相比,胰酶消化法培养平滑肌细胞的方法重复性好,原代培养的平滑肌细胞具有数量多、生长迅速的特点.     

大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的原代培养和鉴定

目的探讨大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的原代培养方法,了解生长特性,为血管增生性疾病的治疗研究提供试验材料。方法采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用倒置相差显微镜观察其生长情况,用免疫组化染色做鉴定,台盼蓝染色进行活力检测。结果85%的组织块接种存活,原代培养后2周左右即可传代,至少可以传8代以上,并且细胞形态、生长特点不发生明显的改变,6代的血管平滑肌细胞纯度达97%以上。台盼蓝染色约有94%以上的细胞为活细胞。镜下培养的血管平滑肌细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论正确地利用组织贴块法可以简单、经济、高效地培养出血管平滑肌细胞,为血管增生性疾病的治疗研究提供了理想的细胞模型。