RNA干扰对系统性硬化病皮肤成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 研究RNA干扰对系统性硬化病(SS)皮肤成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达水平的影响.方法 设计4个针对CTGF的特异性小干扰RNA(siRNA)及一个非特异性siRNA.体外转录获得siRNA,将siRNA用6-羧基荧光素(FAM)标记后瞬时转染至原代培养的SS患者皮肤成纤维细胞;转染48h后,以RT-PCR及蛋白印迹法分别检测CTGF mRNA及蛋白量的变化.结果 转染了4个特异性siRNA的成纤维细胞中CTGF mRNA水平均有不同程度下调(P<0.001),抑制效果由强至弱为,siRNA742>siRNA828>siRNA578>siRNA948.蛋白印迹则显示有3个siRNA能使CTGF蛋白表达水平不同程度下调(P<0.001),其中siRNA742的抑制效应最强.结论 RNA干扰能显著抑制SS成纤维细胞CTGF的表达.     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的表达抑制对A431细胞增殖和细胞周期的影响

目的研究葡萄糖?6?磷酸脱氢酶（G6PD）表达下调对皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）细胞增殖和细胞周期的影响。方法正常培养人永生化上皮细胞HaCaT、皮肤鳞癌SCL?1和A431细胞,采用Western印迹法检测细胞中G6PD蛋白的表达。当A431细胞生长至85%~90%融合时,将siRNA对照（siRNA对照组）和G6PD siRNA（G6PD siRNA组）分别转染A431细胞,未转染的A431细胞则为未转染组。Western印迹法检测3组不同处理的A431细胞中G6PD蛋白及细胞周期蛋白D1、CDK4的表达,CCK?8法检测3组A431细胞的增殖情况,流式细胞仪分析3组A431细胞周期的变化。结果正常培养的2株皮肤鳞癌SCL?1和A431细胞中G6PD蛋白的表达水平（分别为0.308±0.023和0.643±0.046）均显著高于HaCaT细胞（0.100±0.019）,且A431细胞显著高于SCL?1细胞（均P<0.05）。A431细胞G6PD siRNA组G6PD、细胞周期蛋白D1和CDK4蛋白的表达（0.134±0.027、0.154±0.017、0.166±0.017）显著低于未转染组（0.425±0.029、0.344±0.024、0.330±0.020）和siRNA对照组（0.444±0.033、0.350±0.027、0.348±0.018）,差异均有统计学意义（P<0.05）。G6PD siRNA组在24~96 h各时间点的细胞增殖活性均明显低于siRNA对照组和未转染组（P<0.001）,而siRNA对照组与未转染组间细胞增殖差异无统计学意义（均P>0.05）。G6PD siRNA组G0/G1期A431细胞比例显著高于siRNA对照组及未转染组（P<0.001）,而G6PD siRNA组S期A431细胞比例又显著低于siRNA对照组及未转染组（P<0.001）。结论G6PD可能在调控皮肤鳞癌细胞增殖和细胞周期中发挥重要作用。     

组织蛋白酶D绿色荧光蛋白复合质粒转染慢性光损伤成纤维细胞的研究

目的 探讨组织蛋白酶D绿色荧光蛋白复合质粒（GFP-CatD）技术在成纤维细胞慢性光损伤研究中的作用。 方法 长波紫外线（UVA）25 J/cm2每天照射人皮肤成纤维细胞1次,共21 d,构建慢性光损伤成纤维细胞模型。构建GFP-CatD质粒,将其转染入慢性光损伤成纤维细胞,荧光显微镜观察绿色荧光标记的组织蛋白酶D表达,Western印迹检测组织蛋白酶D表达,流式细胞仪检测转染GFP-CatD后的慢性光损伤成纤维细胞凋亡率,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖率。 结果 慢性光损伤成纤维细胞转染GFP-CatD质粒96 h,可见绿色荧光蛋白组织蛋白酶D在慢性光损伤细胞胞质内表达。Western印迹结果显示,慢性光损伤成纤维细胞转染GFP-CatD质粒后,组织蛋白酶 D蛋白表达为未转染细胞的1.28倍。细胞凋亡检测结果发现,转染后的光老化成纤维细胞凋亡细胞率为4.29% ± 1.30%,与无转染的空白对照组凋亡细胞率3.03% ± 1.70%比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。MTT细胞增殖检测结果发现,转染后的光老化成纤维细胞的细胞增殖率为45.20% ± 4.70%,无转染质粒的光老化成纤维细胞为43.60% ± 3.90%（P > 0.05）。 结论 GFP-CatD复合质粒转染慢性光损伤成纤维细胞可示踪到组织蛋白酶 D荧光蛋白,且不影响慢性光损伤成纤维细胞原有的正常生物活性和周期。     

RNA干扰神经突起导向因子 Netrin-1表达下调对鳞状细胞癌SCL-1细胞的影响

目的 探讨神经突起导向因子 Netrin-1表达下调对皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）SCL-1细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 脂质体2000将Netrin-1 siRNA和对照siRNA转染皮肤鳞癌SCL-1细胞。将细胞分为对照1组（未处理组）、对照2组（siRNA对照组）、实验组（Netrin-1 siRNA组）。Western印迹检测转染Netrin-1 siRNA后SCL-1细胞Netrin-1蛋白的表达。人胆囊收缩素/缩胆囊素8肽（CCK-8）ELISA试剂盒分析细胞增殖的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Western 印迹检测caspase-3、caspase-9及MMP-2的表达。结果 Netrin-1 siRNA明显下调SCL-1细胞中Netrin-1蛋白的表达。Netrin-1表达下调明显抑制SCL-1细胞的增殖和诱导细胞凋亡,增加caspase-3和caspase-9的表达,同时可显著抑制MMP-2的表达。结论 Netrin-1表达下调可介导鳞癌细胞增殖抑制、增高细胞凋亡率和降低细胞迁移能力。     

下调垂体瘤转化基因对皮肤鳞状细胞癌细胞SCL-1细胞增殖及迁移能力的影响

目的 研究下调垂体瘤转化基因（PTTG）的表达对皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）细胞SCL-1细胞增殖及浸润转移能力的影响,探讨其相关的分子机制。方法 将SCL-1细胞分为三组（未处理组、转染对照siRNA组及转染PTTG siRNA组）,首先利用CCK-8试剂盒研究下调PTTG对SCL-1细胞增殖能力的影响,并利用Boyden chamber研究三组细胞的浸润转移能力,通过实时荧光定量PCR和Western印迹方法检测MMP-2和MMP-9在三组细胞中的表达。结果 与未处理组和转染对照siRNA组相比,转染PTTG siRNA后能明显抑制SCL-1细胞增殖（P < 0.05）。此外,实时荧光定量PCR结果显示,转染PTTG siRNA后,PTTG、MMP-2和MMP-9的表达均明显下降,表达水平分别是对照组的0.8%、23.2%和21.3%。Western印迹结果表明,转染PTTG siRNA后,PTTG、MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平也明显下降（P < 0.05）。转染PTTG siRNA组的细胞穿膜数（51.38 ± 4.71）明显低于未处理组（131.33 ± 6.12）及转染siRNA对照组（127.72 ± 5.20）（P < 0.05）。结论 抑制PTTG的表达能显著抑制SCL-1细胞增殖及迁移,且可下调MMP-2和MMP-9表达。     

小干扰RNA沉默KIAA0101的表达对皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨KIAA0101蛋白表达下调对皮肤鳞状细胞癌（SCC）SCL-1细胞增殖和细胞侵袭能力影响的分子机制。方法 将KIAA0101 siRNA和对照siRNA分别转染SCL-1细胞,将SCL-1细胞分为3组：未转染组、对照siRNA组和KIAA0101 siRNA组。Western印迹检测3组细胞中KIAA0101蛋白的表达,CCK-8试剂检测细胞增殖,用Boyden小室检测细胞侵袭能力, Western印迹检测细胞增殖和细胞侵袭相关蛋白的表达。结果 KIAA0101 siRNA组中KIAA0101蛋白的相对表达量为0.062 ± 0.095,显著低于未转染组（0.359 ± 0.044）和对照siRNA组（0.379 ± 0.025）,P < 0.05,SCL-1细胞的增殖和侵袭能力亦降低（P < 0.05）。此外,与未转染组和siRNA对照组相比,KIAA0101 siRNA组中p21蛋白表达显著上升,而基质金属蛋白酶2表达显著下调（P < 0.05）。结论 KIAA0101表达下调介导的SCL-1细胞增殖抑制和侵袭能力降低与p21和基质金属蛋白酶2表达变化相关。 【关键词】 癌,鳞状细胞; 基因,KIAA0101; RNA,小分子干扰     

核因子Ⅰ-C对血小板源性生长因子调节皮肤成纤维细胞转化生长因子β信号通路的抑制作用

目的:探讨核因子(NF)Ⅰ对血小板源性生长因子(PDGF)增强皮肤成纤维细胞转化生长因子β(TGF-β)信号通路的影响作用。方法:构建NFⅠ-C基因慢病毒载体并且确定慢病毒转染成纤维细胞最佳条件,采用Western印迹法测定PDGF对经NFⅠ-C基因病毒转染后成纤维细胞的TGF-β1及其受体Ⅱ(TβRⅡ)蛋白表达的影响作用。结果:(1)NFⅠ-C慢病毒载体转染皮肤成纤维细胞的最佳转染值为50;(2)皮肤成纤维细胞经NFⅠ-C慢病毒转染后NFⅠ-C蛋白的表达较非病毒转染细胞显著升高(P0.05);(3)正常皮肤成纤维细胞与PDGF共同培养48 h后TGF-β1和TβRⅡ蛋白表达较空白对照显著升高(P0.05);(4)皮肤成纤维细胞经NFⅠ-C慢病毒转染后与PDGF共同培养后48 h后TGF-β1和TβRⅡ蛋白表达均较正常对照皮肤成纤维细胞和空病毒转染皮肤成纤维细胞显著降低(P0.05)。结论:血小板源性生长因子可增强皮肤成纤维细胞TGF-β1和TGF-β受体Ⅱ的表达,而NFⅠ-C表达增加可抑制PDGF增强TβRⅡ表达的作用。     

成纤维细胞与纤连蛋白粘附及其诱导的酷氨酸磷酸化蛋白在硬皮 …

目的 研究硬皮病成纤维细胞与纤连蛋白粘附,以中附诱导的酷氨酸磷酸化蛋白在成纤维细胞表达原胶原ＭＲＮＡ中的作用。方法 将硬皮病成纤维细胞置于纤连蛋白包被的培养体系中粘附培养运用ＲＴ－ＰＣＲ、免疫印迹法分别检测原胶原ＭＲＮＡ表达的变化及粘附诱导的酷氨酸磷酸化蛋白：并观察阻断酷氨酸磷酸化后,原胶原ＭＲＮＡ和酷氨酸磷酸化蛋白生成。且原胶原ｐｒｏα１（１）ＭＲＮＡ的表达显著增加,经酷氨酸激酶抑制剂作用后,伴     

成纤维细胞与纤连蛋白粘附及其诱导的酪氨酸磷酸化蛋白在硬皮病原胶原基因表达中的作用

目的研究硬皮病成纤维细胞与纤连蛋白粘附 ,以及粘附诱导的酪氨酸磷酸化蛋白在成纤维细胞表达原胶原mRNA中的作用。方法将硬皮病成纤维细胞置于纤连蛋白包被的培养体系中粘附培养 ,运用RT PCR、免疫印迹法分别检测原胶原mRNA表达的变化及粘附诱导的酪氨酸磷酸化蛋白 ;并观察阻断酪氨酸磷酸化后 ,原胶原mRNA和酪氨酸磷酸化蛋白的变化。结果硬皮病成纤维细胞与纤连蛋白粘附 ,可诱导相对分子质量为98000、65000酪氨酸磷酸化蛋白生成 ,且原胶原 proα1(Ⅰ)mRNA的表达显著增加 ;经酪氨酸激酶抑制剂作用后 ,伴随着相对分子质量为98000、65000酪氨酸磷酸化蛋白的减少 ,原胶原proα1(Ⅰ)mRNA显著降低。结论成纤维细胞与纤连蛋白粘附 ,在硬皮病原胶原表达增加中具有重要作用 ,由粘附诱导的酪氨酸磷酸化是其中的一个重要环节。     

线粒体融合素基因 -2 对人骶韧带成纤维细胞增殖及功能的影响

目的：研究外源性线粒体融合素基因-2（Mfn2）表达对骶韧带成纤维细胞的增殖及其合成前胶原蛋白功能的影响。方法：取新鲜骶韧带组织,用组织块法在体外培养出成纤维细胞。将第2～4代细胞分组：转染LV-Mfn2-GFP组（Mfn2＋组）,转染LV-GFP组（Mfn2-组）和未转染组（对照组）。流式细胞仪检测细胞绿色荧光蛋白（GFP）表达,RT-PCR和Western blot检测Mfn2表达。细胞计数和cck-8法检测Mfn2对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期分布。RT-PCR和Western blot检测细胞前胶原1 A1/1A2/3A1的表达。结果：转染慢病毒的成纤维细胞GFP蛋白表达率73.2％～79.1％,转染Mfn2＋组成纤维细胞稳定高表达Mfn2蛋白,显著高于Mfn2-组和对照组（P＜0.05,both）。cck-8实验提示,转染表达Mfn2基因96h后,成纤维细胞增殖明显受到抑制,Mfn2＋组细胞数显著低于 Mfn2-组和未转染组（P＜0.05 both）;DNA直方图分析法测定显示转染Mfn2基因的细胞大部分停滞于G0/G1期,Mfn2＋组G0/G1期细胞比例（60.7％±3.26％）,显著高于 Mfn2-组（43.2％±3.32％）和对照组（40.8％±2.28％）,（P＜0.05, both）。半定量RT-PCR和Western blot示Mfn2＋组成纤维细胞合成表达前胶原1A1/1A2/3A1显著低于Mfn2-组和对照组（P＜0.05,all）。结论：Mfn2基因在体外转染成纤维细胞后,抑制细胞增殖并使成纤维细胞前胶原蛋白表达下降,可能是导致骶韧带细胞外基质减少,影响韧带纤维数量和质量的重要原因。     

环丙沙星对博来霉素诱导小鼠真皮纤维化的抑制作用

目的 观察环丙沙星对博来霉素诱导实验性硬皮病小鼠模型真皮胶原合成及致纤维化基因表达的影响。 方法 用博来霉素连续4周皮下注射BALB/c小鼠背部建立实验性硬皮病小鼠模型,随后分为3组,分别给予1%环丙沙星乳膏（环丙沙星组）、2.5%积雪草苷乳膏（积雪草苷组）以及乳膏基质（模型组）连续外擦5周,另外,于小鼠背部皮下注射磷酸盐缓冲液后外擦乳膏基质设立空白对照（对照组）。连续治疗5周后取各组皮肤标本行HE染色、Masson染色、Ⅰ型胶原蛋白以及基质金属蛋白酶1（MMP1）和金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP1）免疫组化分析;同时用半定量逆转录PCR技术测定结缔组织生长因子（CTGF）、转化生长因子 1（TGFβ1）和Smad3基因的表达水平,碱水解-分光光度法测定皮肤羟脯氨酸含量。各组间比较采用单因素方差分析,模型组和各处理组间两两比较采用LSD检验。 结果 博来霉素模型组小鼠注射区真皮厚度［（432.76 ± 93.74） μm］较对照组［（301.69 ± 79.47） μm］明显增厚（P < 0.01）,Masson染色可见真皮胶原纤维束粗大致密,排列错乱,符合硬皮病真皮纤维化表现。环丙沙星和积雪草苷组小鼠皮肤胶原总含量、Ⅰ型胶原、TIMP1、MMP1染色强度比模型组明显减少（F值分别为1628.54、33.29、84.82、224.81,均P < 0.01）,但真皮厚度改变不明显（均P > 0.05）。与模型组比较,积雪草苷不同程度下调CTGF、TGFβ1和Smad3基因表达水平（均P < 0.05）,而环丙沙星仅抑制TGFβ1（P < 0.05）和Smad3（P < 0.05）的表达,对CTGF基因表达作用不明显（P > 0.05）。 结论 环丙沙星可抑制TGFβ1/Smad3通路,改变失衡的MMP1和TIMP1表达,显示抗真皮纤维化作用。     

circIGF2BP3调控光老化皮肤成纤维细胞自噬水平的研究

【摘要】 目的 初步探究circIGF2BP3对光老化皮肤成纤维细胞自噬水平的影响。方法 取中山大学附属第三医院泌尿外科6例儿童包皮环切术后包皮组织,分离培养成纤维细胞,以每日10 J/cm2长波紫外线（UVA）连续照射14 d,建立UVA诱导的光老化成纤维细胞模型（UVA处理组）,未经处理的正常成纤维细胞作为对照组,β半乳糖苷酶染色、Western印迹法检测P21蛋白表达,CCK8法检测细胞活力验证建模是否成功。Western印迹法检测光老化成纤维细胞中自噬相关蛋白P62、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ表达,qRT-PCR验证光老化与正常成纤维细胞间circIGF2BP3表达差异,并对其进行生物学注释。将原代成纤维细胞分为4组：空载组、UVA + 空载组,circIGF2BP3过表达组、UVA + circIGF2BP3过表达组,Western印迹法检测各组细胞中自噬相关蛋白表达水平。两独立样本均数的比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 UVA处理组β半乳糖苷酶染色阳性率（61.33% ± 5.78%）、P21蛋白表达（1.25 ± 0.03）均显著高于对照组（6.37% ± 0.32%、1.00 ± 0.05,t = 9.49、4.26,P < 0.01、< 0.05）,而细胞活力（74.33% ± 3.48%）显著低于对照组（100%,t = 7.38,P < 0.01）。UVA处理组P62蛋白表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值均显著高于对照组（均P < 0.05）。光老化成纤维细胞中circIGF2BP3的相对表达量为0.72 ± 0.04,显著低于对照组（1.00 ± 0.03）,t = 5.46,P < 0.01。circIGF2BP3过表达组P62蛋白表达（0.60 ± 0.01）及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值（0.71 ± 0.01）均显著低于空载组（1.00 ± 0.02、1.00 ± 0.01;t = 16.25、2.75,P < 0.01、P < 0.05）;UVA + circIGF2BP3过表达组P62蛋白表达（1.05 ± 0.02）及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值（2.04 ± 0.05）亦均显著低于UVA + 空载组（1.31 ± 0.02、2.72 ± 0.14;t = 10.49、6.47,均P < 0.01）。结论 circIGF2BP3可调控UVA诱导的光老化皮肤成纤维细胞自噬水平,为防治光老化提供了新的潜在治疗靶点。     

白细胞介素22对HaCaT细胞他扎罗汀诱导基因3表达的影响

目的 探讨白细胞介素22（IL-22）对HaCaT细胞他扎罗汀诱导基因3（TIG3）表达的影响。 方法 用12.5 ~ 100 μg/L IL-22、IL-22 + PD98059（MAPK-ERK1/2通路抑制剂）及IL-22 + AG490（JAK2/STAT3通路抑制剂）干预处理HaCaT细胞24 h后,分别提取HaCaT细胞总蛋白及总RNA,用免疫荧光、Western印迹法、ELISA法检测TIG3的蛋白水平,用实时荧光定量RT-PCR检测TIG3 mRNA水平的改变。 结果 免疫荧光检测显示,HaCaT细胞内TIG3蛋白主要表达在细胞质。用Western印迹法检测,用12.5、25、50、100 μg/L的IL-22干预处理后,HaCaT细胞中TIG3蛋白表达分别为0.743 ± 0.035,0.678 ± 0.040,0.582 ± 0.041和0.328 ± 0.032,均低于对照组0.839 ± 0.045（P < 0.05）。酶联免疫法检测的结果示,上述浓度的IL-22干预处理后,TIG3蛋白水平变化的趋势与Western印迹法的结果一致。定量RT-PCR检测示TIG3 mRNA分别为对照组的0.838 ± 0.036,0.686 ± 0.061,0.565 ± 0.047,0.457 ± 0.033（P < 0.05）。加入信号通路抑制剂后,TIG3蛋白和mRNA水平降低程度较无抑制剂组减少,差异有统计学意义。 结论 IL-22可剂量依赖抑制HaCaT细胞TIG3的表达,其机制可能与MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3通路有关。     

MAPK信号通路调控长波紫外线诱导的皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K表达

【摘要】 目的 研究MAPK信号通路调控长波紫外线（UVA）诱导皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K（CatK）的表达。 方法 原代培养的皮肤成纤维细胞取自儿童包皮。Western印迹检测10 J/cm2 UVA照射前及照射后0.75、1.5、3和6 h皮肤成纤维细胞中磷酸化JNK（p-JNK）、JNK、磷酸化P38（p-P38）、P38蛋白的表达。800 nmol/L SP600125（SP）、10 μmol/L SB203580（SB）分别孵育皮肤成纤维细胞,实验分为无UVA照射的对照组、SP组、SB组及10 J/cm2 UVA照射的对照（UVA）组、UVA-SP组、UVA-SB组。先以Western印迹检测各组UVA照射后1.5 h磷酸化c-Jun（p-c-Jun） 和磷酸化MAPKAPK2（p-MAPKAPK2）表达,再以RT-PCR 和Western印迹检测各组照射后48 h CatK mRNA、蛋白的表达。 结果 皮肤成纤维细胞在UVA照射后0.75、1.5 h,p-JNK表达的灰度值分别为4.77 ± 0.19和4.68 ± 0.09,p-P38分别为2.44 ± 0.13、2.30 ± 0.04,均较照射前（p-JNK为3.2 ± 0.27,p-P38为1.61 ± 0.08）显著升高（均P ＜ 0.05）;而在照射后3、6 h的表达与照射前相比差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。p-c-Jun在UVA-SP组表达（2.55 ± 0.48）、p-MAPKAPK2在UVA-SB组表达（1.16 ± 0.12）均显著低于UVA组（分别为4.85 ± 0.96和2.46 ± 0.09）,均P ＜ 0.05。UVA-SP组、UVA-SB组CatK mRNA、蛋白的表达分别降为UVA组的38.9%、28.7%和55.7%、49.6%（P ＜ 0.05）,UVA-SP组CatK mRNA、蛋白的表达也均显著低于UVA-SB组（P ＜ 0.05）。 结论 JNK和P38信号通路在调控UVA上调的皮肤成纤维细胞CatK表达中起重要作用。     

血管生成素抑制雄激素性秃发区毛乳头细胞中Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白表达的研究

目的 探讨血管生成素抑制雄激素性秃发区毛乳头细胞中Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白表达的作用及可能机制。方法 分离培养雄激素性秃发区毛乳头细胞,实时定量荧光PCR检测雄激素受体mRNA在不同传代次数毛乳头细胞中的相对表达量,CCK8法检测0、10、20、40、80、160 μg/L血管生成素对含或不含0.1 nmol/L二氢睾酮培养基培养的毛乳头细胞增殖的影响。取生长融合的第1代毛乳头细胞传代后分为3组：对照组（不用二氢睾酮或血管生成素处理）、0.1 nmol/L二氢睾酮组、0.1 nmol/L二氢睾酮 + 80 μg/L血管生成素组。作用48 h后,用实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原基因、纤维连接蛋白和转化生长因子β1（TGF?β1）mRNA的表达,Western印迹检测Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、TGF?β1、p?Smad2和p?Smad3蛋白的表达。实验数据采用单因素方差分析、LSD检验和独立样本t检验进行分析。结果 体外培养的雄激素性秃发区毛乳头细胞随着传代次数增加,雄激素受体mRNA相对表达量明显降低（P < 0.05）。细胞增殖实验发现,20 ~ 160 μg/L血管生成素明显拮抗0.1 nmol/L二氢睾酮对毛乳头细胞增殖的抑制作用（均P < 0.05）。与对照组相比,二氢睾酮组Ⅰ型胶原基因、纤维连接蛋白和TGF?β1 mRNA显著升高,但二氢睾酮 + 血管生成素组较二氢睾酮组Ⅰ型胶原基因mRNA（1.563 ± 0.143比4.329 ± 0.165）、纤维连接蛋白mRNA（1.290 ± 0.063比2.156 ± 0.115）和TGF?β1 mRNA（1.136 ± 0.098比1.707 ± 0.100）显著降低（均P < 0.05）。而且,血管生成素还能明显抑制由二氢睾酮诱导的毛乳头细胞中Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、TGF?β1、p?Smad2和p?Smad3蛋白的表达（均P < 0.05）。结论 血管生成素在体外能够抑制雄激素性秃发区毛乳头细胞中细胞外基质成分Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白的表达,其机制可能与其下调TGF?β1表达及抑制TGF?β1/Smad信号通路的活化有关。     

RNA干扰p53基因表达对人皮肤成纤维细胞衰老的影响

目的 建立抑制p53基因表达的人皮肤成纤维细胞（HSF）,探讨抑制p53表达对HSF衰老的影响。方法 脂质体转染法将针对p53的shRNA的真核表达质粒pGCsi-p53导入HSF中,经G418筛选抗性克隆,扩大培养,建立稳定转染克隆细胞系。用RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分析目的基因及其蛋白表达。通过SA β-gal染色法检测细胞衰老,MTT法检测细胞增殖能力。 结果 成功建立RNA干扰抑制p53表达的HSF细胞系,转染细胞中p53基因及蛋白水平明显下调（P < 0.01）。SA β-gal染色结果显示,转染组衰老细胞百分比（13.47% ± 1.01%）与对照组（18.10% ± 0.66%）相比降低（P < 0.05）,MTT检测结果显示,转染组细胞增殖能力较对照组加快（P < 0.05）。结论 抑制p53表达能够延迟HSF的衰老,促进细胞增殖。