人脑胶质瘤高表达Snail促进肿瘤细胞的侵袭

目的:观察Snail蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达情况,探讨Snail表达对人脑胶质瘤U251细胞侵袭的影响。方法:收集首都医科大学附属北京天坛医院及北京安贞医院神经外科手术切除的脑胶质瘤组织65例,应用免疫组织化学S-P法检测人脑胶质瘤组织中Snail的表达。体外化学合成Snail序列特异性小干扰RNA(Snail-siRNA),应用脂质体介导转染U251细胞;RT-PCR、Western blotting检测转染后U251细胞中Snail mRNA和蛋白、E-cadherin蛋白表达水平变化,并采用Transwell小室检测转染后U251细胞侵袭能力的变化。结果:与正常脑组织相比,人脑胶质瘤组织中Snail蛋白阳性表达率明显增强(66.2%vs0,P<0.01),并且Ⅰ～Ⅱ级的胶质瘤组织阳性Snail阳性率明显低于Ⅲ～Ⅳ级(44.8%vs83.3%,P<0.01)。Snail-siRNA转染抑制U251细胞中Snail mRNA和蛋白的表达。Snail-siRNA转染组U251细胞中E-cadherin蛋白的表达明显高于Ctrl-siRNA组与未转染组(0.64±0.21vs0.15±0.16,0.21±0.19,P<0.01)。Snail-siRNA转染显著抑制U251细胞的侵袭(87.0±2.4vs140.0±4.9,136.0±5.3;P<0.05)。结论:人脑胶质瘤组织高表达Snail蛋白,siRNA干扰Snail蛋白的表达可抑制胶质瘤U251细胞的侵袭。     

反义microRNA-221与反义microRNA-222抑制人脑胶质瘤细胞的体外与体内生长

目的 探讨敲低microRNA(miR)-221和miR-222表达以抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的作用及其机制.方法 脂质体介导转染反义寡聚核苷酸(AS-miR-221和AS-miR-222)于人脑胶质瘤细胞U251.采用Northern blot鉴定转染后U251细胞的miR-221和miR-222表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法评价AS-miR-221和AS-miR-222抑制U251细胞生长的作用;Transwell实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期的分布和凋亡;Western blot检测转染后U251细胞相关蛋白表达的变化,并用AS-miR-221和AS-miR-222治疗裸鼠皮下移植瘤,观察其在活体内对肿瘤生长的抑制作用.结果 Northern blot检测结果 显示,AS-miR-221和AS-miR-222共转染后,肿瘤细胞miR-221和miR-222表达明显下降,细胞生长速度降低,细胞穿过率为14.5%,细胞周期出现G0/G1期阻滞,凋亡率(13.7%)增高,并可见connexin43、p27、PUMA、caspase-3、PTEN、TIMP3和Bax等相关蛋白表达增高,而bcl-2表达降低,p53无明显变化.经AS-miR-221和AS-miR-222治疗后,裸鼠皮下移植瘤生长明显受抑.结论 AS-miR-221和AS-miR-222共转染可抑制U251细胞的增殖与侵袭,miR-221和miR-222可以作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点.     

新城疫病毒7793株抑制人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的生长及其机制

目的:观察新城疫病毒7793株(Newcastle disease virus 7793 strain,NDV 7793)对人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤生长的作用,并探讨其可能机制。方法:建立LoVo细胞裸鼠移植瘤模型,随机分成3组,分别静脉注射PBS、5-FU以及NDV 7793,观察各组裸鼠肿瘤的生长情况,流式细胞术检测移植瘤细胞的坏死率和凋亡率,免疫组织化学法检测移植瘤组织中Bax、Bcl-2蛋白的表达,细胞色素C试剂盒检测移植瘤组织中细胞色素C的含量,ELISA法检测移植瘤组织中TNF-α含量。结果:NDV 7793较5-FU更明显抑制LoVo细胞移植瘤的生长(抑制率50.14%vs 37.14%,P<0.05)。NDV 7793组移植瘤LoVo细胞凋亡率显著高于5-FU对照组[(28.7±1.5)%vs(1.46±0.3)%,P<0.01],且NDV 7793组诱导LoVo细胞的凋亡率和坏死率[(28.7±1.5)%vs(27.80±3.32)%]相当。NDV 7793能促进移植瘤组织中Bax蛋白的表达,对Bcl-2蛋白的表达无影响。NDV 7793可提高移植瘤组织中的细胞色素C含量[(2.28±0.68)vs(0.68±0.13)μg/μl]和TNF-α的水平[(489.6±5.2)vs(167.9±3.9)pg/ml]。结论:NDV 7793可抑制人结肠癌LoVo细胞移植瘤的生长,其机制可能与其上调Bax蛋白、细胞色素C和TNF-α的表达,以及促进肿瘤细胞凋亡有关。     

过表达程序性细胞死亡基因5 提高脑神经胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性

[摘要] 目的：探讨抑癌基因程序性细胞死亡基因5（programmed cell death 5 gene, PDCD5）对脑神经胶质瘤细胞增殖及替莫唑胺（temozolomide，TMZ）化疗敏感性的影响。方法：收集吉林大学第一临床医院神经外科2009 年1 月至2014 年12 月间收治的脑神经胶质瘤患者116 例。分别利用qPCR、WB及免疫组化方法检测神经胶质瘤细胞系U87、U251、稳定克隆U87-PDCD5 细胞、转染si-PDCD5 后的脑胶质瘤细胞以及原发性神经胶质瘤组织中PDCD5 mRNA及蛋白质的表达情况。MTT法检测过表达或敲降PDCD5 对胶质瘤细胞生长及TMZ化疗敏感性的影响。建立脑胶质瘤细胞系U87 裸鼠皮下荷瘤模型，随机分为对照组、TMZ组、PDCD5 组和TMZ+外源性PDCD5 重组表达载体联合组，治疗20 d 后断颈处死动物，切取瘤组织，测量瘤体积并称瘤质量。采用qPCR、WB 法检测移植瘤组织中PDCD5 的表达水平，分析PDCD5 联合TMZ 治疗对脑神经胶质瘤生长的影响。结果：PDCD5 mRNA和蛋白在U87 细胞中的相对表达量明显低于在U251 细胞中的相对表达量（均P<0.05）；在高级别脑神经胶质瘤组织中，PDCD5 mRNA和蛋白的表达明显低于低级别组织（均P<0.05）；U87-PDCD5 和U251 细胞对TMZ的敏感性均高于U87 细胞（均P<0.05），U87-PDCD5-siRNA、U251-siRNA 组细胞对TMZ的敏感性均明显低于对照组（均P<0.05）。比较裸鼠移植瘤的瘤体积和质量，对照组>TMZ组>PDCD5 组>联合组（均P<0.05）；各组移植瘤组织内PDCD5 mRNA及蛋白的表达水平趋势与之相反（均P<0.05）。结论：PDCD5 过表达可增强脑神经胶质瘤细胞对TMZ的化疗敏感性，而沉默PDCD5 表达作用则相反，PDCD5 与TMZ联合应用可更好地抑制脑神经胶质瘤裸鼠移植瘤的生长。     

PTEN抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖和VEGF的表达

目的:探讨与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology deleted on chromo-some ten gene,PTEN)对人脐静脉内皮细胞ECV304细胞增殖、凋亡,及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)的影响。方法:将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒Ad-PTEN-GFP及空载体腺病毒Ad-GFP感染ECV304细胞,MTT实验、Hoechst3342染色法及流式细胞术检测ECV304细胞的增殖和凋亡。实时荧光定量PCR法检测Ad-PTEN-GFP感染后ECV304细胞中PTEN、VEGF和VEG-FR1 mRNA表达水平,ELISA检测ECV304细胞培养上清中VEGF的水平。鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管生长实验检测PTEN对鸡胚血管生长的影响。结果:与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP感染能明显抑制ECV304细胞的增殖,诱导细胞凋亡,5 d时增殖抑制率可达(50.38±5.42)%、细胞凋亡率达(73.3±5.3)%。当感染复数为100时,Ad-PTEN-GFP组ECV304细胞的VEGF及VEGFR1 mRNA表达水平分别为未感染组的(13.40±1.32)%及(46.12±5.20)%。同时,Ad-PTEN-GFP感染能够明显抑制CAM体内血管生长[血管指数(57.6±3.37)%vs(92.2±4.37)%,P<0.05]。结论:PTEN能显著抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖、促进其凋亡,其机制可能与抑制VEGF和VEGFR1表达,抑制血管新生有关。     

靶向Survivin基因的短发卡RNA在体内对U251细胞移植瘤的影响

Surivin基因属于凋死蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis,IAP）家族，具有抗细胞凋亡、促细胞增殖和促血管形成等多种生物学活性，其在脑胶质瘤发生和发展过程中的作用尚不完全明确，本研究结盟在观察稳定转染靶向Survivin基因的特异性短发卡RNA（shRNA）真核表达载体对人脑胶质母细胞瘤U251细胞裸鼠体内肿瘤生长和血管形成的影响。方法：将U251细胞，稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWHI-SR的U251-SR细胞，以及稳定转染空载体pWHI的U251-P细胞，分别接种于裸鼠背部皮下，建立人脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型，定期观察肿瘤生长情况，测定肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线，观察45天后处死动物、称瘤重，采用免疫组化SABC法检测Survivin、增殖细胞核抗原（proliferating cell muclear antigen，PCNA）以及八因子相关抗原（factor Ⅷ related antigen,FⅧRAg）在各组肿瘤标本中的表达，采用TUNEL法检测凋亡细胞，分别计算各组肿瘤标本的增殖指数（proliferative index,PI），凋亡指数（apoptotie index,AI）以及微血管密度（microvessel density,MVD）。结果：与U251、U251-SR组肿瘤标本，U251-SR组裸鼠肿瘤形成时间延迟，肿瘤生长缓慢，肿瘤体积及瘤重均明显减小（P〈0.01）；U251-P组裸鼠相丝，U251-SR组肿瘤标本Survivin蛋白表达明显下调：PI和MVD明显减少，AI明显升高（P〈0.001）。结论：靶向Survivin基因的sbRNA能够在体内明显抑制U251细胞的肿瘤生长和血管形成，Survivn基因可作为脑胶质瘤基因治疗的一个良好靶点，而RNA干涉（RNA interference,RNAi）技术可为脑胶瘤基因治疗的一个良好靶点，而RNA干涉（RNA interference，RNAi）技术可为脑胶质瘤的基因治疗提供新的重点手段。     

过表达CDX2抑制裸鼠结肠癌移植瘤的生长

目的:探讨过表达CDX2对结肠癌LoVo细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,为结肠癌生物治疗提供实验依据。方法:脂质体法介导pEGFP-C1-CDX2真核表达载体转染入结肠癌LoVo细胞,G418筛选出稳定表达CDX2的LoVo细胞(LoVo-CDX2细胞);接种LoVo-CDX2细胞制备裸鼠皮下移植瘤模型,观察CDX2过表达对LoVo细胞移植瘤生长的影响。结果:West-ern blotting结果显示,转染pEGFP-C1-CDX2组LoVo细胞中CDX2蛋白表达量高于pEGFP-C1组及未转染组。LoVo-CDX2、LoVo-C1和LoVo细胞接种裸鼠的第20天,LoVo-CDX2组移植瘤质量较LoVo组和LoVo-C1组移植瘤质量显著减轻[(0.62±0.22)vs(2.10±0.78)、(2.56±0.76)g,分别P<0.05和P<0.01〗。结论:CDX2过表达可以抑制结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的生长。     

pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA对结直肠癌SW480细胞裸鼠移植瘤的抑制

目的:研究靶向hTERT基因的重组质粒pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA对人结直肠癌SW480细胞裸鼠移植瘤的治疗作用。方法:于裸鼠右侧腋下皮下注射人结直肠癌SW480细胞建立结直肠癌移植瘤动物模型,随机分为生理盐水组(NS组)、pGPU6/GFP/Neo-NC-shRNA组(NC-shRNA组)和pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA组(hTERT-shRNA组),各组连续进行相应治疗6次后,观察肿瘤的生长状况,测量肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线,H-E染色观察肿瘤组织形态学变化,免疫组织化学法检测移植瘤组织中hTERT蛋白的表达,TUNEL法检肿瘤组织中细胞凋亡情况,RT-PCR法检测瘤组织中hTERT mR-NA的表达。结果:与NC-shRNA组和NS组比较,hTERT-shRNA组移植瘤体积增长速度减慢;hTERT-shRNA组移植瘤组织中见肿瘤细胞形态明显改变,凋亡细胞数明显增多[(36.30±5.05)%vs(5.25±1.06)%、(6.95±1.07)%,P<0.01];hTERT-shRNA组hTERT的mRNA和蛋白表达均明显受到抑制(171.42±30.94 vs 146.89±21.43、137.35±25.49,P<0.01;0.39±0.09 vs 0.81±0.335、0.750±0.206,P<0.05)。结论:重组质粒pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA通过下调hTERT mRNA和蛋白水平的表达促进肿瘤细胞的凋亡,抑制结直肠癌移植瘤的生长。     

PTEN在人脑胶质瘤细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

背景与目的:PTEN基因的缺失及突变与多种肿瘤有关,而脑胶质瘤是与PTEN基因变异关系最为密切的恶性肿瘤之一.本研究旨在观察PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生物学特性的影响,为PTEN用于胶质瘤基因治疗提供科学的实验依据.方法:(1)应用RT-PCR方法扩增人脑胶质瘤细胞U251、SHG-44中PTEN基因,序列测定分析.(2)采用阳离子聚合物转染试剂,将携带野生型PTEN基因的重组真核表达载体质粒转染至胶质瘤细胞,G418筛选出稳定转染的细胞并扩增培养.通过细胞形态学、细胞生长曲线观察PTEN基因表达对细胞形态和增殖的影响,应用Western blot、免疫细胞化学法检测相关蛋白的表达.结果:(1)胶质瘤细胞U251和SHG-44的PTEN mRNA分别存在着突变型、缺失型两种表达方式.(2)稳定转染的U251和SHG-44细胞株的生长曲线显示细胞增殖明显受抑制,第7天细胞计数分别为未转染对照组细胞数的39.1%、27.8%;Westem blot显示稳定转染细胞株有外源性PTEN蛋白的表达;细胞免疫化学法显示胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达量增加,从而表现出对细胞形态影响的差异,稳定转染的U251细胞出现向星形细胞分化的特征,SHG-44细胞形态转染前后无明显改变.结论:恢复野生型PTEN基因表达对胶质瘤细胞存在差异性的诱导分化作用.     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

Clinico-Pathological Study of 50 Cases of Tumours of Larynx

Otoacoustic emissions have been advocated in the management of otitis media with effusion. However, otoacoustic emissions cannot differentiate different types of hearing loss. This study was conducted to find factor that can differentiate otitis media with effusion from other common causes of hearing loss in children. Children were enrolled in the study and divided in four groups consisting of 25 ears each after pure tone and impedance audiometry: (1) Otitis media with effusion group, (2) Normal ear group, (3) Sensory-neural hearing loss group, (4) Chronic suppurative otitis media group. Otoacoustic emissions were recorded and results were analyzed statistically. The normal hearing group had significant difference from other groups but total band reproducibility of transient evoked otoacoustic emissions did not show any statistical difference in the cases groups. In distortion product otoacoustic emissions, group 1 showed significant difference from group 3 and group 1 had significant difference from all other groups at 4 kHz. The study did not find any factor that differentiates otitis media with effusion from other diseases. Although, distortion product otoacoustic emissions can indicate otitis media with effusion but impedance audiometry should be the main tool in the management of otitis media with effusion.     

乳腺叶状囊肉瘤320例诊治分析

目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。