HLA-B27聚合酶链反应体系的建立和初步临床应用

目的:建立一种快速、廉价、特异性高、准确检测强直性脊柱炎(AS)患者人类白细胞抗原B27(HLA-B27)的方法.方法:选择人类门细胞抗原B27蛋白基因组保守区域设计上游引物,下游引物,优化PCR反应体系.对450例AS疑似标本和50例健康体检标本同时采用流式细胞技术(FCM)检测对照其结果进行方法学评价.结果:(1)成功的构建rPCR反应体系.(2)450例AS疑似标本聚合酶链反应(PCR)法检出HLA-B27 阳性247例,阳性率54.89%,流式细胞技术检出HLA-B27阳性250例,阳性率55.56%,50例健康体检标本HLA-B27两种检测方法均为阴性.两者复合率达98%以上,对20例阳性标本进行多次PCR实验,重复性一致,未见批问和批内差异.(3)初步临床应用证实该方法结果准确、灵敏度高.结论:采用聚合酶链反应检测HLA-B27的方法灵敏度高、特异性强、操作简便、廉价、快速,更适合临床检验诊断的要求.     

PCR-SSP法检测29种HLA-B27基因亚型

目的采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)高分辨技术检测29种HLA-B27基因亚型。方法设计并合成HLA-B27亚型特异性引物35条(配对组成上下游引物组合29对)以及一对内对照引物,建立PCR-SSP方法,用于B27亚型分型。检测标本为117例HLA-B27阳性研究对象(男79名,女38名)外周血DNA。结果 117例标本的PCR-SSP扩增均获得成功,成功构建了PCR-SSP检测反应体系。共检测出6种亚型:B*2702、B*2703、B*2704、B*2705、B*2706及B*2713,六种亚型的构成比分别为:0.85%、6.84%、64.10%、25.64%、1.71%和0.85%,其中B*2704和B*2705为中国汉族人群中主要亚型。结论应用该新型PCR-SSP高分辨技术进行HLA-B27基因亚型检测,能检测出较多HLA-B27亚型,且该法进行B27亚型分型分辨度高,特异性强,成本较低,适合于临床应用。     

闽南地区强直性脊柱炎与HLA-B27关联性的观察

目的：探讨闽南地区HLA-B27对强直性脊柱炎的诊断意义。方法：用特异性HLA-B27抗血清对临床疑似强直性脊柱炎的患者1500例和1500名健康者进行HLA-B27检测。结果：疑似强直性脊柱炎患者1500例，其中男性1212例，女性288例，男女比例约为4：1。B27阳性率为67．07％，其中男性70．05％(849／1212)，女性54．51％。发病年龄主要集中在青少年时期。1500名健康者中HLA-B27阳性39例，阳性率为2．6％。结论：AS与HLA-B27相关性强，HLA-B27血清学检测对强直性脊柱炎的诊断和鉴别诊断具有重要意义。     

人类白细胞抗原-B27基因检测在门诊疑似强直性脊柱炎患者诊断中的应用价值

目的 探讨人类白细胞抗原（HLA）-B27基因检测在门诊疑似强直性脊柱炎（AS）患者诊断中的应用价值.方法 选取300例疑似AS患者作为疑似组,选取260例健康体检者及确诊的80例AS患者分别作为对照组和AS组.采用聚合酶链反应-序列特异性引物技术进行HLA-B27基因检测,比较三组HLA-B27基因阳性率情况.结果 疑似组HLA-B27基因阳性率为45.00％（135/300）,对照组为3.46％（9/260）,AS组为95.00％（76/80）,AS组HLA-B27基因阳性率均明显高于对照组和疑似组,疑似组明显高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.疑似组患者HLA-B27基因阳性率在11 ～20、21～30、31 ～40岁年龄段的发病率较为相近,差异无统计学意义（P＞ 0.05）,40岁及以下患者较40岁以上患者HLA-B27基因阳性率明显增高;男性AS疑似患者各个年龄段中以11 ～20岁HLA-B27基因阳性率最高,女性HLA-B27基因阳性率以31 ～40岁最高,与其他年龄段比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 HLA-B27基因检测对于疑似AS患者具有十分重要的意义,有助于提高初诊AS患者早期诊断率,值得在临床中广泛应用.     

强直性脊柱炎及HLA-B27的遗传倾向研究

[目的]通过检测海南籍强直性脊柱炎(AS)及亲属的HLA-B27的表型、基因型及亚型的分布情况,了解海南籍HLA-B27和AS的遗传倾向及发病情况,指导临床治疗,预防AS的发病.[方法]HLA-B27表型检测采用血清学技术,HLA-B27基因型和基因分型检测均采用序列特异性引物聚合酶链式反应(PCR-SSR)技术.[结果]6例海南籍的AS患者及家族成员共86例中B27阳性者患AS的概率为36.7%,其中男女比例约为7.6:1;有AS相关症状者的概率为36.7%,男女比例为1:5.9.43个HLA-B27阳性家庭中一级亲属AS患病率为30.26%,HLA-B27阳性患AS的比率为47.92%,其中男性为68.97%,女性为15.79%,男女比例为1:4.4.无论是父亲还是母亲HLA-B27阳性,其子女HLA-B27的阳性率基本相近.AS患者中HLA-B27阳性者占100%,HLA-B27表型和基因型基本相符,HLA-B27基因分型结果均为HLA-B2704型.[结论]海南地区AS发病率和HLA-B27阳性率都较其他地区高,具有很强的家族遗传倾向,AS发病率男性较女性高发,有AS相关症状者女性高于男性.HLA-B27基因亚型为HLA-B2704.     

应用下一代测序技术进行HLA-A、HLA-B基因分型的模棱两可结果情况分析

目的统计分析NGS法进行HLA-A、HLA-B基因分型检测的模棱两可结果的种类、比例。方法对369例浙江省脐带血库标本采用NGS法检测HLA-A、HLA-B位点,并同步对其中94例标本采用PCR-SBT测序法测定HLA-A、HLA-B位点,余下275例标本采用PCR-SSO流式磁珠法检测。使用专业软件指定NGS法的HLA-A、HLA-B分型结果,直接计算法分析模棱两可组合比例。结果所有标本NGS法检测结果与PCR-SBT法或PCR-SSO法相符合,未发现NGS法遗漏等位基因情况。NGS法以HLA-A、HLA-B命名*后第四区域的数字作为高分辨水平统计,369例有34例标本出现模棱两可结果,占9.21%(34/369),其中只有2例标本HLA-A、HLA-B位点同时存在模棱两可结果。HLA-A位点有9例标本存在模棱两可结果,表现出8种类型;HLA-B位点有27例,25种类型,分别占标本总数的2.44%(9/369)、7.32%(27/369)。结论应用NGS技术仍有少量HLA-A、HLA-B基因分型的模棱两可组合结果。     

探讨人类白细胞抗原B27对强直性脊柱炎的诊断价值

目的探讨人类白细胞抗原B 27(HLA-B 27)检测对诊断强直性脊柱炎(AS)的临床意义。方法用流式细胞仪检测651例AS患者、1 085例非AS患者(包括腰腿背痛患者、风湿性关节炎患者、类风湿性关节炎患者)及200例健康体检者3组人群的HLA-B 27抗原。结果 AS患者组HLA-B 27阳性率为92.6%,非AS患者组HLA-B 27阳性率为9.6%,健康体检组HLA-B 27阳性率为4.5%,AS患者组HLA-B 27阳性率明显高于非AS患者组和健康体检组,AS患者组与非AS患者组、健康体检组差异有统计学意义(χ2=1 303.01,P0.01)。男性HLA-B 27阳性率为47.4%,女性HLA-B 27阳性率为14.6%,男性HLA-B 27阳性率明显高于女性(χ2=193.17,P0.01)。不同年龄组HLA-B 27阳性率差异有统计学意义,30岁年龄组的阳性率明显高于其他年龄组。结论 HLA-B 27抗原在AS发病过程中起了重要作用,具有很强的相关性,故检测HLA-B 27可为AS的诊断和鉴别诊断提供重要依据。     

流式细胞术检测HLA-B27抗原在AS诊断中的价值

目的 探讨人类白细胞抗原-B27(HLA-B27)检测对强直性脊柱炎(AS)在临床诊断中的价值.方法 应用流式细胞术对567例门诊及住院疑似AS患者外周血进行HLA-B27表达的检测.结果 567例中,HLA-B27阳性检出率为43.39%(246/567).按照纽约标准诊断为AS的252例患者中,HLA-B27阳性率为91.67%(231/252).HLA-B27检测对诊断AS的敏感度为91.67%(221/252),特异度为95.24%(300/315),诊断正确率为93.65%(531/567).结论 HLA-B27和AS有很强的相关性,使用流式细胞术进行检测是较好的方法.     

人类白细胞抗原B27的实验室诊断

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是临床常见的一种自身免疫性疾病。90%~95%的AS患者有人类白细胞抗原B27(human leucocyte antigen B27,HLA-B27)基因的表达,说明HLA-B27与AS有高度关联性。因此,HLA-27的检测在AS的诊断中有很重要的诊断价值和临床意义。目前用于检测HLA-B27的实验室方法主要有微量细胞毒法(microlymphocytotoxic test,MLCT)、酶联免疫吸咐法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、流式细胞仪法(flow cytometry instrument method,FCM)、PCR等。本文将对AS的这些实验室诊断方法及其优缺点予以概述,为实验室根据自身条件选择合适的方法检测AS提供一个参考依据。     

NAT检测及化学发光免疫技术在乙型肝炎病毒检测中的应用

目的分析核酸检测(nucleic acid testing,NAT)及化学发光免疫技术检测在乙型肝炎病毒检测中应用价值。方法对邵阳学院附属第二医院2019—2021年采集的20000份血检标本,首先采用常规ELISA检测,HBsAg双试剂阴性进行NAT检测。对HBsAg-/HBV DNA+标本再采用化学发光免疫法分析其乙肝血清学特征。结果20000份血标本中检出HBsAg(+)HBV DNA(+)6400份,占32.00%;HBsAg(+)HBV DNA(-)780份,占3.90%;HBsAg(-)HBV DNA(+)755份,占3.78%;HBsAg(-)HBV DNA(-)12065份,占60.33%。对755份HBsAg(-)HBV DNA(+)进行乙肝血清学检测,其中乙肝二对半检出模式中HBsAb、抗-HBe、抗-HBc均(+)占41.99%(317份),HBsAb、抗-HBc均(+)占30.99%(234份),抗-HBc(+)占10.99%(83份),乙肝五项全阴性占16.02%(121份)。结论NAT检测可有效检出HBsAg-/HBV DNA+标本,保证血检标本中乙肝病毒阳性被检出。借助化学发光免疫技术能有效分析隐匿性乙型肝炎病毒感染血清学特征,可为血液安全的管理策略提供科学的依据。     

A2亚型的血清学和分子生物学的对比分析

目的探讨红细胞A2亚型在血型血清学和分子生物学的异同点。方法用单克隆抗-A、抗-B、抗-A1血型试剂进行血清学检测,对血清学检测为A2亚型的标本再进行ABO基因第6内含子和第7外显子测序分析。结果血清学检测共筛得40例A2亚型标本,基因检测得10例A2亚型,27例A1型,3例B(A)亚型;A2亚型以A205居多,非A2型以A102/B101居多。结论中国人群红细胞A2亚型的血清学与基因型表现比较复杂,血清学表现为A2亚型,但基因型具有多样性,而且红细胞上A抗原的凝集强度与基因型之间不存在相关性。     

应用Taq Man探针法与高分辨熔解曲线法检测HLA-B27基因诊断强直性脊柱炎的价值

目的运用Taq Man探针法与高分辨熔解曲线法检测疑似强直性脊柱炎患者的人类白细胞抗原HLA-B27,并探讨其方法的有效性和应用价值。方法分别将疑似强直性脊柱炎患者的血样DNA进行HLA-B27的Taq Man探针法和高分辨熔解曲线法检测,并以DNA直接测序法所得阳性结果作为金标准,来确定Taq Man探针法和高分辨熔解曲线法的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果 55例样本中,Taq Man探针法和高分辨熔解曲线法与DNA测序法的符合率分别为98.2%和92.7%。Taq Man探针法检测HLA-B27的敏感度为0.970,特异度为1.000,阳性预测值为1.000,阴性预测值为0.956;高分辨熔解曲线法检测HLA-B27的敏感度为0.879,特异度为1.000,阳性预测值为1.000,阴性预测值为0.846。结论 Taq Man探针法与高分辨熔解曲线法均具有准确性好、灵敏度高、检测快速等优点,适合于临床HLA-B27的检测。     

TNF-α联合hs-CRP、HLA-B27检测诊断强直性脊柱炎的价值

目的探讨TNF-α联合hs-CRP、HLA-B27检测诊断强直性脊柱炎的价值。方法从2017年8月至2019年1月收治的强直性脊柱炎患者中选取41例为观察组,另选同期体检健康者41例为对照组,均接受TNF-α联合hs-CRP、HLA-B27检测,对两组检测结果进行比较。结果观察组TNF-α、hs-CRP、HLA-B27水平与对照组比较有明显差异(P0.05);TNF-α联合hs-CRP、HLA-B27诊断强直性脊柱炎的准确率为92.68%。结论 TNF-α联合hs-CRP、HLA-B27检测诊断强直性脊柱炎具有较高准确率,值得推广。     

岳阳地区血小板志愿捐献者HLA、HPA基因库的建立及临床意义

目的：建立岳阳地区人类白细胞抗原（HLA）、血小板特异性抗原（HPA）已知基因型血小板供者资料库,为临床血小板输注无效的患者提供有效的输血治疗。方法：对岳阳地区303例无血缘关系的血小板捐献者血样分别采用PCR-NGS、PCR-SSP方法对HLA-A、B、C位点及HPA-1～6、15、21系统进行基因分型,计算其基因频率和基因型频率。结果：HLA-A抗原共检出15个,基因频率最高的是A*11(0.3069),A*02(0.2871),A*24(0.2145);HLA-B抗原共检出27个,基因频率最高的是B*40(0.2393),B*46(0.1666),B*15(0.1419),B*13(0.0809),HLA-C抗原共检出15个,基因频率最高的是C*07(0.2261),C*01(0.2244),C*03(0.2096),C*08(0.1320)。HPA-1-6,15,21系统抗原具有多态性,杂合度最高的是HPA-15,其aa、ab、bb基因频率分别为0.1947、0.4951、0.3102;其次是HPA-3,基因频率分别是0.3927、0.4389、0.1683。不配合率最高的基因...     

实时荧光定量核酸扩增技术在结核筛查诊断中的临床应用研究

目的评价实时荧光定量核酸扩增(GeneXpert MTB/RIF)技术对呼吸道标本、组织标本、无菌体液标本等临床常见标本中结核菌和利福平耐药结核菌的筛查诊断效果。方法收集2016年1月-2017年12月解放军总医院的1 015份(来自961例患者)呼吸道标本、组织标本或无菌体液标本等,采用GeneXpert MTB/RIF技术进行结核菌鉴定和耐利福平基因的检测。结果在1 015份标本中,结核菌阳性82份,阳性率为8.08%,痰、肺泡灌洗液、脑脊液、胸腹水、尿、组织等标本中结核菌均有检出;82份结核菌阳性标本中利福平耐药7份,耐药率为8.54%,其中6份探针E未检出,1份探针B未检出。共有515份标本同时送检GeneXpert MTB/RIF和抗酸涂片染色两种方法,其中GeneXpert MTB/RIF阳性率9.51%,抗酸涂片检测阳性率2.72%(P<0.05)。结论 GeneXpert MTB/RIF技术可用于临床常见标本中结核菌和利福平耐药结核菌的筛查诊断,且该方法快速、简便、自动化程度高,有较好的临床应用和推广价值。     

HLA-B27检测在强直性脊柱炎鉴别诊断中的价值

目的 通过人类白细胞抗原B-27(HLA-B 27)的检测,探讨其在强直性脊柱炎 (AS)鉴别诊断中的应用价值.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测分析580例可疑AS和210例类风湿性关节炎(RA)患者,以及90例健康人群的HLA-B 27阳性情况.结果 AS病人的HLA-B 27检测阳性率为92.41%,明显高于RA组的8.09%和健康人群对照组的3.3%.且AS发病与年龄有关,而与性别无关.结论 HLAB-27 ELISA法检测是对AS和各种关节性疾病的早期诊断和鉴别诊断的一种实用而可靠的检测方法,是当前AS诊断的最佳实验室指标,对AS的鉴别诊断具有重要价值.     

HLA-B27在门诊疑似AS诊断中的意义

目的讨论门诊疑似强制性脊柱炎(AS)诊断中HLA-B27基因检测的意义。方法对门诊疑似诊断为AS的889例患者的HLA-B27阳性率、患者性别和初诊年龄进行统计分析,并与同期随机采集的506例健康人的HLA-B27阳性率进行比较。结果 889例门诊疑似AS患者中HLA-B27阳性率为44.77%(398/889),其中男性患者的HLA-B27阳性率47.55%(339/713)与女性患者的35.52%(59/176)相比,差异具有显著统计学意义(χ2=11.23,P<0.01);对照组中HLA-B27阳性率为4.15%(21/506),与疑似AS患者的阳性率相比,呈显著统计学差异(χ2=253.18,P<0.001);男性患者发病高峰为11-20岁,而女性患者则为31-40岁。结论疑似AS患者就诊时检测HLA-B27有助于提高初诊患者诊断率,可作为鉴别诊断的重要指标。     

PCR-CTPP简单快速检测乙醇脱氢酶-1B基因多态性

目的建立两对交叉引物-聚合酶链反应(PCR-CTPP)检测体系鉴别乙醇脱氢酶-1B基因多态性。方法针对ADH1B rs1229984位点设计两对内外引物,经过聚合酶链反应、电泳鉴别基因型,将该方法与DNA测序法比较,验证其检测准确性,并通过该方法检测58例健康人ADH1B基因多态性分布情况。结果 PCR-CTPP方法可用于准确检测ADH1B基因多态性,与DNA测序结果相符;在58例健康人中,ADH1B A等位基因频率71.6%,为优势等位基因。结论PCR-CTPP技术检测ADH1B基因多态性简单快速、经济省力,可用于疾病易感基因的快速筛查和分子流行病学研究,适合在一般实验室推广应用。     

不同组合形成乙型肝炎被动免疫性抗体中HBVDNA的检测分析

目的：应用聚合酶链反应（PCR）方法检测乙型肝炎抗原阴性标本中HBVDNA的数量,以指导临床。方法：应用酶联反应免疫吸附法（ELISA）检测出乙型肝炎抗原阴性、免疫性抗体阳性的标本,然后分组检测HBVDNA的数量。结果：496例7种组合形式的被动免疫性抗体中检出HBVDNA86例,阳性率为17．3％。结论：存在着免疫学表现形式为抗原阴性的乙型肝炎,抗原阴性乙型肝炎患者在检测血清学标志物的同时应检测HBVDNA。     

HLA-B27检验对强直性脊柱炎患者的诊断价值

目的探讨人类白细胞抗原-B27(HLA-B27)检验对强直性脊柱炎患者的诊断价值。方法选取2018年4月-2019年3月在吉林市中心医院就诊的强直性脊柱炎患者61例作为研究对象,将其纳入强直性脊柱炎组。选择同期在该院体检中心体检的健康人员80例纳入本次研究,将其定义为健康组。比较两组的HLA-B27阳性率。并以强直性脊柱炎组患者为对象,分析HLA-B27阳性率与其性别和年龄的关系。结果强直性脊柱炎组患者HLA-B27阳性率高于健康组,差异有统计学意义(P0.05)。以强直性脊柱炎组患者为观察对象,在性别方面,不同性别强直性脊柱炎患者HLA-B27阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。在年龄方面,30岁患者HLA-B27阳性率高于20～25岁年龄段患者,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HLA-B27检测可作为强直性脊柱炎患者早期诊断的参考依据。