内皮抑素基因转移抑制血管内皮细胞增殖的实验研究

目的　探讨脂质体介导的内皮抑素 (ES)基因转移抑制血管内皮细胞增殖的可行性及ES基因转移对血管内皮细胞增殖的影响。方法　利用阳离子脂质体介导的分泌型真核细胞表达载体PCDNA3 ES转染COS 7细胞 ,并采用免疫斑点杂交法检测转染细胞及其上清液中ES蛋白的表达 ;以脂质体介导的PCDNA3 ES转染培养的人脐静脉血管内皮细胞 (ECV 30 4细胞 ) ,免疫组化染色观察ES蛋白的表达 ;应用噻唑蓝染色法 (MTT)观察脂质体介导的ES基因转移并抑制ECV 30 4细胞增殖的作用 ;以流式细胞仪检测ES基因转染后对细胞增殖周期的影响。结果　重组质粒转染的COS 7细胞及其上清液中均有明显的斑点出现 ,而以载体质粒转染的细胞则无斑点出现 ;脂质体介导的ES基因成功转染ECV 30 4细胞 ,转染后 2d ,ES蛋白表达量达到高峰 ;ES基因转移可以明显抑制血管内皮细胞增殖 ,同一观察时间转染与非转染组比较 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;ES基因转染组G0 /G1细胞比例增加 ,S期细胞比例减少。结论　脂质体介导ES基因可成功转染血管内皮细胞并有ES蛋白的分泌表达 ,从而特异性抑制血管内皮细胞的增殖。     

携带人内皮抑素基因的重组腺相关病毒感染对人脐静脉内皮细胞增生的影响

目的 评价携带人内皮抑素(endostatin,ES)基因的重组腺相关病毒(rAAV)感染对人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)增生的影响.方法 以不同感染复数的rAAV-ES感染ECV304细胞,Western blotting检测细胞裂解液中ES蛋白的表达,ELISA法检测ES蛋白的分泌情况,流式细胞仪分析感染后ECV304的细胞周期,MTT法检测ECV304增殖情况.结果 感染了rAAV-ES的ECV304细胞可表达并分泌ES蛋白,表达高峰在感染后96h,表达量为96.93μg·L-1;感染后的ECV304细胞增殖受到抑制,流式细胞仪分析其周期中G0与G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例显著减少;MTT检测显示以感染复数为5 ×105vg·cell-1感染96h时时ECV304细胞增殖的抑制率最高(54.54±1.37)%.结论 rAAV-ES感染ECV304细胞后有高水平的ES蛋白表达并能显著抑制ECV304细胞的增殖.     

人参皂甙Rg3对高糖条件下人视网膜血管内皮细胞的作用研究

目的:观察正常和高糖条件下人参皂甙Rg3对人视网膜血管内皮细胞血管新生作用的影响。方法:在正常和高糖条件的培养基中,分别加入0.1mmol/L和0.5mmol/L的人参皂甙Rg3,在24h,48h和72h用MTT检测细胞的增殖情况,用Transwell小室检测细胞迁徙情况,用Matrigel检测细胞管腔形成的情况,用实时定量RT-PCR和Western-Blot检测细胞中血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达情况。结果:在正常和高糖条件下,人参皂甙Rg3对于人视网膜血管内皮细胞增殖、细胞迁徙和细胞内皮管腔形成均具有抑制作用,且呈浓度与时间依赖性;且人参皂甙Rg3具有抑制人视网膜血管内皮细胞VEGF蛋白和mRNA表达的作用。结论:通过抑制VEGF的表达,人参皂甙Rg3可抑制人视网膜血管内皮细胞增殖、迁徙和管腔形成,进而抑制新生血管的形成。     

应用基因表达谱芯片研究内皮抑素作用后人脐静脉内皮细胞株基因表达的变化

目的 观察人脐静脉内皮细胞株(ECV304细胞)在内皮抑素(ES)作用前后基因表达谱的变化,并探讨其作用的分子机制.方法 ES处理培养的ECV304细胞36 h,抽提ES作用前后细胞mRNA,用Cy3和Cy5不同的荧光标记脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(dUTP)逆转录制备cDNA探针,与载有4096条基因的基因芯片进行杂交,通过对Cy3、Cy5荧光信号扫描后,分析经ES处理前后基因水平表达差异.结果 ES处理后细胞增生减慢,抽提RNA电泳18S、28S条带清晰,吸光度[A,旧称光密度(OD)]值为2.0～2.2.芯片扫描显示5.96%的检测基因出现明显表达差异,其中下调基因225条,上调基因19条.结论 ECV304细胞经ES作用后部分基因表达呈下凋趋势,可能与ES抑制新生血管生成机制有关.     

腺病毒介导的PEDF基因转移对脐静脉血管内皮细胞的作用

目的 研究腺病毒介导的色素上皮衍生因子(adenovirus pigment epithelium-derived factor,Ad-PEDF)对体外培养的血管内皮细胞增生及凋亡的作用.方法 采用MTT法观察PEDF基因对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外细胞增生的影响.TUNEL染色、流式细胞仪AnnexinV/碘化丙啶双染法,检测腺病毒介导的PEDF基因作用后人脐静脉血管内皮细胞的凋亡.结果 Ad-PEDF(感染复数分别为25和50)作用72 h后,ECV304细胞数显著少于PBS组和Ad-LacZ组(P＜0.05);TUNEL染色,ECV304细胞出现典型的凋亡形态学改变.以感染复数为50的Ad-PEDF处理ECV304细胞72 h后,细胞凋亡率为(26.51±1.54)%,PBS组为(2.90±0.79)%,Ad-LacZ组为(3.28±0.73)%,Ad-PEDF组与Ad-LacZ组、PBS组相比差异均有显著统计学意义(P＜0.01).结论 腺病毒介导的PEDF基因可显著抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外细胞增生,同时对人脐静脉血管内皮细胞的凋亡具有诱导作用.     

人玻璃体液对培养的人视网膜色素上皮细胞和血管内皮细胞增生的影响

目的 探讨人玻璃体液对培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE）细胞和血管内皮细胞增生的影响。 方法 将人RPE细胞和血管内皮细胞株（vascular endothelial cell lines 304, VEC304）分别培养在1∶8、1∶ 4、1∶2（玻璃体液在总培养液中的体积比）的人玻璃体条件培养液（vitreous-conditioned medium, VCM）中，其中VCM分为有无血清2组，在不同作用时间（2～6 d），采用四唑盐(tetrazolium, MTT)比色法检测VCM对人RPE细胞和VEC304增生的影响。 结果 在有血清时，1∶4、1∶2的VCM在培养的各时间段对RPE细胞的促增生作用与对照组比较，差异有非常显著性意义（P＜0.01），对VEC304的抑增生作用与对照组比较，差异有显著性意义（P＜0.05）；在无血清时，1∶2的VCM在培养2 d时对RPE细胞的促增生作用与对照组比较，差异有显著性意义（P＜0.05），在培养4、6 d时的差异有非常显著性意义(P＜0.01）。 结论 一定体积分数的人VCM促进人RPE细胞的增生，抑制VEC304的增生，提示玻璃体液在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR) 和眼内血管增生性疾病中可能发挥不同的调控作用。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 140-142)     

薏苡仁油对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞增殖和VEGF表达的影响

目的:研究不同浓度的薏苡仁油对体外高糖条件下培养的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:将新鲜人眼球提取的HRCECs进行体外培养,最终用于实验的为生长良好的第3~4代细胞,实验分为空白对照组、低糖对照组、高糖对照组,高糖+不同浓度(50μL/mL,100μL/mL,200μL/mL)薏苡仁油组。不同浓度的薏苡仁油对体外培养的HRCECs增殖的抑制作用是通过用噻唑蓝比色法(MTT)检测。各分组HRCECs中VEGF的表达由免疫细胞化学法检测。结果:MTT比色法结果显示:不同浓度的薏苡仁油作用于体外培养的HRCECs 48h,其细胞增殖抑制与高糖对照组相比有显著性差异(P<0.05)。48h内呈浓度依赖性。而低糖对照组与高糖对照组差异无统计学差异(P>0.05)。免疫细胞化学检测法表明:用50,100,200μL/mL的薏苡仁油作用于高糖下HRCECs 48h,高糖+不同浓度薏苡仁油组与高糖对照组相比VEGF表达下降明显(P<0.05),将高糖+不同浓度薏苡仁油组之间进行两两比较亦具有统计学意义(P<0.05)。且呈浓度依赖性。高糖对照组与低糖对照组相比,VEGF表达明显(P<0.05)。结论:薏苡仁油可抑制高糖环境下HRCECs的增殖和VEGF的表达。     

奥曲肽体外对黑色素瘤细胞株A375分泌VEGF的影响

目的:了解奥曲肽对体外培养黑色素瘤细胞株A375的影响。方法:体外培养扩增A375细胞,分别与浓度为5,1,0.2,0mg/L的奥曲肽共培养24,48,72h,利用MTT法测定各组奥曲酞对A375细胞增殖作用的影响,通过ELISA法测定奥曲酞对A375细胞分泌VEGF作用的影响。结果:共培养24h后,奥曲酞对A375细胞增殖有显著促进作用(F=14.180,P=0.00),48h及72h增殖作用不明显;奥曲酞浓度及作用时间对体外培养的A375细胞分泌的VEGF含量有显著性影响(浓度因素:F=24.441,P=0.00;时间因素:F=127.233,P=0.00),各浓度的奥曲酞与A375细胞共培养后24h均呈现明显的增加细胞分泌VEGF的作用,浓度越高增加的越少(单向方差分析F=19.489,P=0.00);随着作用时间的延长,细胞分泌VEGF减少,72h各浓度的奥曲酞均明显抑制A375细胞分泌VEGF,浓度越高抑制作用越明显(单向方差分析F=16.116,P=0.002)。结论:奥曲肽对黑色素瘤细胞A375分泌VEGF长期的趋势上是抑制作用,与时间和剂量呈依赖关系。     

人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜新生血管的实验研究

背景 角膜新生血管(CNV)是一种常见的眼部病变,研究其发病机制及其抑制剂是眼科研究的热点和难点. 目的 研究人羊膜上皮细胞(AECs)培养液对CNV的抑制作用及机制. 方法 消化法培养及鉴定人AECs,并收集培养液,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测色素上皮衍生因子(PEDF)和白细胞介素1受体拮抗剂( IL-1Ra)在培养液中的质量浓度.兔角膜上皮细胞分离后分别用无血清DMEM培养基、人AECs培养液、混合培养液(DMEM+人AECs培养液)培养48 h,采用实时定量聚合酶链反应(QRT-PCR)法检测不同培养液培养的角膜上皮细胞中血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达.用含质量分数10％胎牛血清的DMEM培养基培养人脐静脉血管内皮细胞(UVECs),并分别加入无血清DMEM、混合培养液和人AECs培养液,划痕法和细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测各组培养液对人UVECs迁移的影响.分别在上述3种培养基中加入终质量浓度为50 μg/L的bFGF,CCK8法检测各培养液中人UVECs的增牛情况.在原子力显微镜(AFM)下观察人AECs培养液对人UVECs超微结构的影响. 结果 人羊膜培养和传代细胞角蛋白免疫组织化学染色阳性证实为人AECs.与无血清DMEM组相比,人AECs培养液组的兔角膜上皮细胞VEGF mRNA(1.00±0.22 vs.2.98±0.46)及bFGF mRNA( 1.00±0.36vs.2.55±0.48)的表达均明显下降,差异均有统计学意义(P=0.001、0.002);培养后不同时间人AECs培养液组人UVECs的增生吸光度(A)值明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05),人UVECs的迁移率下降,差异有统计学意义(P＜0.05).AFM观察见人AECs培养液组的血管内皮细胞膜粗糙、表面颗粒紊乱,细胞间连接及伪足减少.ELISA法检测人AECs培养液中PEDF的质量浓度为(70.41 ±0.68) μg/L,IL-1Ra的质量浓度为(153.56±0.36) ng/L,无血清DMEM组中未检出.结论 人AECs培养液可抑制角膜上皮VEGF及bFGF的表达,抑制血管内皮细胞的增生和迁移,细胞结构和功能改变,这可能是其抑制CNV的机制之一.     

青蒿琥酯对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞增殖及VEGF表达的影响

目的:研究青蒿琥酯(artesunate)对体外高糖环境下培养的人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelialcells,HRCECs)的增殖及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:从新鲜人眼球提取HRCECs,进行体外培养。取第3～4代生长良好的细胞用于实验,实验分为低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度青蒿琥酯组(15,30,60,120μg/mL),用噻唑蓝(MTT)比色法检测HRCECs的增殖,通过免疫细胞化学法观察各分组HRCECs中VEGF的表达。结果:MTT比色法检测细胞增殖结果显示:与低糖组比较,高糖显著促进HRCECs增殖(P>0.05);15,30,60,120μg/mL青蒿琥酯处理24h或48h,可时间和浓度依赖性地抑制高糖环境下HRCECs的增殖(P<0.05)。免疫细胞化学法检测VEGF表达结果显示:与低糖对照组相比,高糖对照组VEGF表达明显增加(P<0.05);高糖+不同浓度青蒿琥酯(15,30,60μg/mL)组与高糖对照组相比VEGF表达明显下降(P<0.05),高糖+不同浓度青蒿琥酯组之间两两比较均具有统计学差异(P<0.05),且随着药物浓度的提高,VEGF的表达量逐渐减少。结论:青蒿琥酯呈浓度依赖性地抑制高糖环境下HRCECs的增殖以及VEGF的表达,表明青蒿琥酯抑制高糖环境诱导HRCECs增殖可能与其抑制VEGF表达有关。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-6对RPE细胞增殖和迁移的影响

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-6(insulin-like growth factor binding protein-6,IGFBP-6)对视网膜色素上皮(retinal pigmented epithelium,RPE)细胞增殖和迁移的影响。方法用IGF-Ⅱ(50mg·L-1)、PDGF(20mg·L-1)、VEGF(40mg·L-1)和TGF-β(4mg·L-1)干预ARPE-19细胞6h,以诱导细胞增殖,再加入不同浓度IGFBP-6(1mg·L-1、10mg·L-1、100mg·L-1、500mg·L-1、1000mg·L-1)作用24h、48h后,通过MTS实验观察OD值的变化,研究IGFBP-6对细胞增殖的影响。细胞划痕实验分为IGF-Ⅱ组(50mg·L-1)、IGF-Ⅱ+IGFBP-6组(含IGF-Ⅱ50mg·L-1和IGFBP-6500mg·L-1)、无血清培养液组的实验,细胞划痕24h、48h后,计算各组细胞移行愈合率的变化,从而研究IGFBP-6对细胞迁移的影响。结果 MTS比色法显示一定浓度的IGFBP-6(100mg·L-1、500mg·L-1、1000mg·L-1)可以抑制IGF-Ⅱ诱导的ARPE-19细胞增殖(P<0.05),各浓度IGFBP-6对PDGF、VEGF、TGF-β诱导的细胞增殖均无明显影响(均为P>0.05);细胞划痕实验显示,IGF-Ⅱ组、IGF-Ⅱ+IGFBP-6组、无血清培养液组的细胞移行愈合率[分别为(24h:43.91%±3.85%、29.76%±2.49%、26.12%±2.33%;48h:66.09%±1.67%、59.88%±3.43%、57.05%±2.49%)]差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 IGFBP-6能够抑制IGF-Ⅱ诱导的RPE细胞增殖和迁移。     

补肾活血中药方血清对离体状态下血-视网膜内屏障模型的保护作用

目的　探讨补肾活血中药方血清对离体状态下血-视网膜内屏障（iBRB）模型的保护作用。方法　取新生7 d SD大鼠用于取材及细胞原代培养。将大鼠视网膜微血管内皮细胞（RMEC）和视网膜Müller胶质细胞（RMGC）分离及传代培养,利用Transwell小室将RMEC与RMGC共培养以构建正常条件下的体外iBRB模型,制备补肾活血中药方血清,并分别标记为中药含药血清和空白血清。本实验分8组。选取构建成功的体外iBRB细胞共培养模型,按不同培养条件进行分组。其中正常对照组用含体积分数20%空白血清的DMEM液培养;中药干预正常组用含体积分数20%中药含药血清的DMEM液培养;低糖基化终末产物（AGEs)组用含体积分数20%空白血清的DMEM液及终浓度50 mg·L^-1AGEs培养;中药干预低AGEs组用含体积分数20%中药含药血清的DMEM液及终浓度50 mg·L^-1AGEs培养;高AGEs组用含体积分数20%空白血清的DMEM液及终浓度100 mg·L^-1AGEs培养;中药干预高AGEs组用含体积分数20%中药含药血清的DMEM液及终浓度100 mg·L^-1AGEs培养;缺氧组用含体积分数20%空白血清的DMEM液及终浓度1.0 mmol·L^-1连二亚硫酸钠培养;中药干预缺氧组用含体积分数20%中药含药血清的DMEM液及终浓度1.0 mmol·L^-1连二亚硫酸钠培养。利用细胞电阻仪检测各组RMEC层的跨内皮细胞电阻（TEER）,采用免疫荧光双标法检测各组Occludin、ZO-1蛋白在RMEC层的表达。结果　在AGEs或缺氧条件下,低AGEs组、高AGEs组及缺氧组RMEC层TEER在细胞培养24 h、48 h和72 h后均低于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。在细胞培养24 h后,中药干预正常组与正常对照组RMEC层TEER相比,差异无统计学意义（P>0.05）,在细胞培养48 h后中药干预正常组RMEC层TEER高于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,在细胞培养72 h后中药干预正常组RMEC层TEER低于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;中药干预低AGEs组、中药干预高AGEs组、中药干预缺氧组RMEC层TEER在细胞培养24 h、48 h和72 h后均高于同一时段相对应的非中药干预组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。低AGEs组、高AGEs组及缺氧组Occludin、ZO-1蛋白在RMEC层的阳性表达在细胞培养24 h、48 h和72 h后均弱于正常对照组。在细胞培养24 h、48 h和72 h后,中药干预正常组、中药干预低AGEs组、中药干预高AGEs组、中药干预缺氧组Occludin、ZO-1蛋白在RMEC层的阳性表达均强于同一时段相对应的非中药干预组。结论　AGEs及缺氧均可导致体外iBRB模型RMEC层TEER降低及Occludin、ZO-1蛋白表达减弱,补肾活血中药方血清能有效提高Occludin 和ZO-1蛋白的表达,抑制iBRB模型通透性增加,从而起到对体外iBRB模型的保护作用。     

葛根素对体外培养的视网膜血管内皮细胞增殖的影响

目的观察不同浓度葛根素对体外培养的视网膜血管内皮细胞增殖的影响。方法取第7代牛视网膜血管内皮细胞用于实验。葛根素组中加入含不同浓度葛根素的培养液,对照组加入等量空白培养液。24h及48h后采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测视网膜血管内皮细胞的增殖情况。结果与空白对照组比较,0.05mg·L-1、0.50mg·L-1、5.00mg·L-1、50.00mg·L-1和500.00mg·L-1葛根素组作用24h及48h后视网膜血管内皮细胞增殖明显。24h葛根素组OD值(按照葛根素浓度由低到高分别为:0.283±0.060、0.337±0.030、0.349±0.030、0.405±0.030、0.352±0.020)明显高于对照组(0.161±0.060),差异均有统计学意义(均为P<0.01);48h葛根素组OD值(按照葛根素浓度由低到高分别为:0.371±0.030、0.377±0.040、0.410±0.040、0.400±0.020、0.310±0.040)也明显高于对照组(0.279±0.050),差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论葛根素对体外培养的视网膜血管内皮细胞有明显的促增殖作用,其作用与葛根素的剂量有关。     

人参皂苷Rg3对高糖下视网膜血管内皮细胞增殖及ICAM-1表达的影响

目的:研究人参皂苷Rg3对体外培养的高糖条件下人视网膜血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cell,HRCEC)增殖与细胞间黏附分子-1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)表达的影响。方法:体外培养从角膜移植术后新鲜人眼球提取的HRCECs。取生长良好的第3~4代细胞用于实验,实验分为低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度Rg3组,用噻唑蓝(MTT)比色法检测HRCEC的增殖。通过免疫细胞化学法观察各分组HRCEC ICAM-1的表达情况。结果:MTT比色法结果显示,高糖对照组与低糖对照组没有显著差异(P>0.05),用10,20,40,80,160mg/L的人参皂苷Rg3处理高糖下HRCEC24,48,72h与高糖对照组相比具有显著性差异(P<0.05),高糖+不同浓度Rg3组之间呈时间和浓度的显著性差异(P<0.05)。免疫细胞化学检测显示,与低糖对照组相比,高糖对照组ICAM-1表达明显(P<0.05),用40,80,160mg/L的人参皂苷Rg3处理高糖下HRCEC48h与高糖对照组相比ICAM-1表达有显著性差异(P<0.05),高糖+不同浓度Rg3组之间两两比较均具有显著性差异(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg3可抑制高糖下视网膜血管内皮细胞增殖和ICAM-1表达。     

无血清器官培养法保存大鼠角膜内皮细胞的活性

目的:研究两种新型培养基-内皮细胞培养基(endothelial cell medium,ECM)和无动物成分培养基(animal compoundfree medium,ACF)在无血清器官培养法保存角膜内皮细胞活性方面的应用效果。方法:将大鼠角膜密闭保存于ECM和ACF培养基中4wk,再经葡聚糖T500脱水2d。以含低浓度牛血清的MEM基础培养基作为对照。计数保存前后角膜内皮细胞密度,检测保存结束大鼠角膜内皮层中胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)的表达水平,评估内皮细胞层的屏障功能。结果:保存结束后,MEM+20mL/L FBS对照组大鼠的角膜内皮细胞密度值最低,ECM+20mL/L FBS组则高达2250±202个/mm2,ECM和ACF组结果与ECM+20mL/LFBS组接近,细胞死亡率也较低,组间差异有统计学意义(F=28.965,P=0.000)。冰冻切片显示ZO-1在保存后大鼠角膜内皮层成功表达。RT-PCR检测表明ZO-1mRNA在各组的表达趋势与内皮细胞密度结果一致(F=592.751,P=0.000)。结论:无血清ECM和ACF培养基可以很好地保持器官培养法保存角膜内皮细胞的活性和紧密连接的屏障功能。     

中药复方血栓通可抑制血管生成

目的:探讨复方血栓通对血管生成的作用。方法:鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)法检测复方血栓通对血管生成的影响;采用MTS比色法观察不同浓度的复方血栓通对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导的ECV-304细胞增殖的影响;Transwell小室检测不同浓度的复方血栓通对ECV-304细胞移行的影响;Matrigel实验检测不同浓度的复方血栓通对ECV-304细胞内皮管腔形成的影响。结果:复方血栓通中、低浓度组能够抑制鸡胚CAM血管生成;MTS比色法显示,1.5625～100g/L复方血栓通对VEGF诱导的ECV-304细胞增殖具有抑制作用,而更低和更高浓度的复方血栓通则无抑制作用;Transwell小室实验显示,复方血栓通为0,3.125,6.25和12.5g/L时ECV-304细胞移行数分别为219±17,183±14,135±13和19±9;Matrigel实验显示,复方血栓通为0,0.390625,0.78125和1.5625g/L时ECV-304细胞内皮管腔形成数分别为26.3±1.2,18.7±1.5,14.7±0.6和2.7±0.6。结论:复方血栓通具有明显抑制血管生成的作用。     

TGF-β2体外抑制牛角膜内皮细胞增殖的研究

目的:观察体外不同浓度的转化生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)对牛角膜内皮细胞(bovine corneal endothelial cells,bCECs)的抑制作用,探讨其可能的分子机制。方法:培养新生小牛的角膜内皮细胞,将第3代内皮细胞转移至96孔培养板,实验分6组,每组设定4个复孔。1,2组分别为只含有培养液不含细胞和TGF-β2的空白对照组,和只含细胞和培养液不含TGF-β2的阴性对照组,3～6组分别加入含0.1,1,10,100ng/LTGF-β2的培养液。作用24,48,72h后用MTT检测法测定各孔吸光度A值。作用48h后,用流式细胞检测仪对各组细胞周期进行检测。RT-PCR法测定不同浓度的TGF-β2组p27Kip1基因的表达情况。结果:TGF-β2浓度为0.1～1ng/L,作用24～72h,能明显的使bCECs的吸光度发生改变,作用48h抑制效果最明显。0.1和1ng/L浓度组吸光度与阴性对照组相比有显著差异性,作用48h可使bCECs的G0/G1周期细胞所占比例与阴性组对比有显著差异,其p27Kip1表达较其他组明显增强。结论:0.1～1ng/L TGF-β2作用48h对bCECs具有显著增殖抑制作用,其抑制作用可能是通过上调细胞周期蛋白p27来实现的。     

槲皮素对转化生长因子β1介导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化过程的影响

目的 探讨槲皮素对转化生长因子β1(TGF-β1)介导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、迁移、I型胶原蛋白含量、上皮-间质转化相关标志物表达以及Smad信号通路的影响.方法 取人RPE细胞系(ARPE-19细胞)进行培养,依据干预药物浓度筛选结果设置4个组:对照组、10.0 mg·L-1 TGF-β1组、10.0 m...     

Effect of recombinant human platelet-derived growth factor B on cat corneal endothelial cell viability mediated by adeno-associated virus

AIM: To transduce recombinant human platelet-derived growth factor B(PDGF-B) gene adeno-associated virus(AAV) to in vitro cultured cat corneal endothelial cell (CEC) and observe the effect of the expressed PDGF-BB protein on the viability of cat CEC. METHODS: Cat cornea endothelium was torn under microscope and rapidly cultivated in DMEM to form single layer CEC and the passage 2 endothelial cells were used in this study. The recombinant human PDGF-B gene AAV was constructed and transduced into cat CEC directly. Three groups were as following: blank control group, AAV control group and recombinant AAV group. At 24 hours, 48 hours, and 5 days after transduction, total RNA was extracted from the CEC by Trizol and the expression of PDGF-B gene was detected by fluorescence quantitative polymerase chain reaction. Viability of the transduced CEC was detected at 48 hours after transduction by MTT assay. Cell morphology was observed under inverted phase contrast microscope. RESULTS: With the torn endothelium culture technique, we rapidly got single layer cat CEC. At 24 hours, 48 hours and 5 days after transduction, fluorescence quantitative polymerase chain reaction showed there was no significant difference of the expressed PDGF-B gene mRNA between blank control group and AAV control group (P>0.05). In contrast, there were significant differences between two control groups and recombinant AAV group (P<0.05). MTT assay showed that in recombinant AAV group, the expressed PDGF-BB protein could promote the viability of cat CEC. Morphology observation showed at 48 hours after transduction, cells in CEC-AAV-PDGF-B group proliferated into bigger scales in regular triangle to hexagon shape with distinct boundary, while the number of cells was significantly less in the two control groups. CONCLUSION: The recombinant AAV-PDGF-B expresses biological active PDGF-BB protein in cat CECs, which promotes the viability and proliferation of cells.