小鼠β-防御素研究进展

β-防御素已从起初的几个防御素家族类别细化为以物种、特性、作用等为主的防御素多肽.近年来,对小鼠β-防御素的研究日益增多,已发现了十余种不同亚型的β-防御素.它除了具有良好的抗菌、抗病毒、抗真菌、抗肿瘤等生物学活性外,还具备诱导机体免疫应答的能力,其医学作用不容忽视.β-防御素不仅分布广泛,在物种中也存在高度的同源性,...     

β-防御素2研究进展

防御素是一类分子量约为4．0～5．0kMr、含有6个半胱氨酸残基、三对二硫键的阳离子多肽。防御素不仅通过直接杀菌作用抵御入侵机体的病原微生物，还在介导获得性免疫反应、调节机体的免疫炎症反应和创伤修复过程中起着重要作用。β-防御素2是人体中第一个被发现的可诱导性防御素，因此，β-防御素2的基因表达调控、生物学活性、与皮肤／肺部疾病发生发展相关性等方面的研究较为深入。采用重组DNA技术从原核表达体系、真核表达体系中获取具有生物学活性的β-防御素2多肽，并研究其在呼吸道细菌感染、脓毒症所致肺损伤／肺功能障碍发生发展中的保护作用，将有助于阐明β-防御素2在免疫相关疾病中的作用，有助于阐述肺损伤／呼吸功能障碍发生发展的机制与防治。     

鸡β-防御素的研究进展

鸡β-防御素在动物机体组织中分布较为广泛,在多种组织上皮细胞中均可合成,是机体抵御外界微生物侵袭的重要化学屏障,在机体内源性免疫防御中具有重要作用.它作用于微生物细胞膜的防御机理以及不易引起耐药性的特点,已引起各国研究者的日益重视.本文着重描述了鸡β-防御素的起源与分子结构、抗菌作用机理、抗菌活性、获取方法、基因工程及...     

人β防御素-2研究进展

内源性抗生素肽(endogenous antibiotic peptides)是动、植物天然免疫的重要介质,在哺乳动物(包括人)中,由于对革兰氏阳性菌、阴性菌、真菌、螺旋体、分枝杆菌及某些包膜病毒等均有很强杀伤活性,故将其命名为防御素(defensin).迄今为止,在人体中已发现的防御素共有两类(α、β)10种.其中β防御素家族共发现3种,分子量为4～5kD,含38～47个氨基酸残基阳离子,分别为人β防御素-1,2,3(human β-defensin-1,2,3. hBD-1,2,3).德国Harder J等[1]于1997年首先发现hBD-2,他们用大肠杆菌亲和柱结合高压液相层析法在牛皮癣病人皮肤中分离并纯化到约4.3kD的多肽,经氨基酸序列分析表明与牛的TAP(气管抗菌肽)、LAP(舌抗菌肽)及hBD-1同源,属于人β抗菌肽成员之一,命名hBD-2.已证实hBD-2是黏膜和上皮细胞抵抗微生物入侵的重要介质,在持续暴露在病原微生物的器官表面发挥重要的抗菌作用.     

人类β-防御素-2的研究进展

防御素(defensins)是已知发现的内源性抗生素肽家族中最大的亚家族,是一类重要的抗菌肽分子[1],它普遍存在于动物、植物、昆虫及人类体内,分子结构相对稳定,且又具有较为强力广谱抗菌、抗病毒、抗螺旋体及肿瘤等生物学活性。目前研究已经发现的人类β-防御素(HBD-1~6)中,β-防御素-2(HBD-2)广泛表达于皮肤和黏膜上皮细胞中,其诱导表达高、     

人β-防御素3的研究新进展及其与疾病的关系

防御素是近年来发现的一类内源性小分子多肽,人β-防御素-3(HBD-3)是在银屑病患者皮损组织中首先发现,HBD-3在人体上皮细胞和黏膜组织中广泛表达,分子结构稳定,具有广谱的抗微生物活性,能促进伤口愈合,发挥免疫调节及抗肿瘤等多种作用。HBD-3在呼吸系统疾病、消化系统疾病、囊性纤维化、肿瘤等疾病中发挥重要作用,应用前景广阔。     

β-防御素-2在机械通气相关性肺炎发病机制中的作用

目的观察铜绿假单胞菌（PA）机械通气相关性肺炎（VAP）前后肺组织β-防御素-2（BD-2）基因和蛋白质表达的变化，探讨肺组织的BD-2在机械通气相关性肺炎发病机制中的作用。方法90只健康清洁级雄性成年SD大鼠随机分成对照组、机械通气组（MV）和高盐抑制组（HS）。MV组中大鼠机械通气24h后气管内注入PA复制肺部感染模型。分别于接种细菌后8个时间点取3只大鼠处死，取肺组织进行病理学检测和测定大鼠肺组织中BD-2基因和蛋白质表达的变化。结果MV组中BD-2基因和蛋白质的表达水平的上调在3h后各时段均显著低于对照组（均P〈0．05）。MV组支气管肺泡灌洗液（BALF）、血细菌培养阳性率和重度肺部感染率均高于对照组（均P〈0．05）。HS组PA血细菌培养阳性率为76．2％，明显高于对照组和MV组（均P〈0．05）。对照组5d存活率为100％．MV组为50％．HS组为0。结论BD-2在机体呼吸系统中发挥重要抗感染作用．机械通气引起BD-2基因表达上调水平的下降可能与VAP的发生和发展有关。     

人β防御素-2抗唾液支原体活性研究

目的探讨人β防御素-2（hBD-2）在抗唾液支原体中的作用。方法用唾液支原体感染牙龈上皮细胞HQEC,ET—PCE检测hBD-2的表达情况;将培养的唾液支原体中加入不同浓度的hBD-2,检测其生长情况。结果唾液支原体能诱导HGEC表达hBD2,且hBD-2能明显抑制唾液支原体的生长。结论hBD-2可能在抗唾液支原体感染过程中起关键作用。     

人β防御素3研究进展

人β防御素3是近年研究发现的一种内源性抗生素。它是一种存在于人皮肤和黏膜组织的小分子阳离子抗菌肽,具有广谱的抗微生物活性,可连接先天和获得性免疫应答,在各种疾病中起抗感染作用。Toll样受体在人β防御素3表达调控中起重要作用。本文就人β防御素3的分布、表达调控、生物学功能及其在疾病中的作用予以综述。     

急性肺损伤小鼠肺组织β防御素-4和β防御素-6的基因表达

目的观察小鼠肺组织中β防御素-4（mBD-4）和mBD-6的基因表达水平，以及急性肺损伤（AH）对其表达的影响。方法将60只成年昆明小鼠随机分为Au组和对照组（每组30只），用脂多糖腹腔注射复制Au模型，于不同时间点处死小鼠获取肺组织，实时荧光定量PCR检测肺组织mBD-4、mBD-6的基因表达水平，测序鉴定PCR产物的特异性。结果对照组肺组织中各时间点及Au组6h点均无mBD-4、mBD-6基因表达，而Au组12h，1d和3d时间点表达显著升高（依次为mBD-4：0．0326±0．0104，0．0487±0．0126，0．04684±0．0092；mBD-6：0．03974±0．0083，0．04444±0．0072,0．04254±0．0113）。Au组小鼠mBD-4表达在12h时间点显著低于1d和3d时间点（P均〈0．05），在1d与3d时无显著差异（P〉0．05）；Au组mBD-6表达在12h，1d和3d时间点无显著差异（P〉0．05）。结论mBD-4和mBD-6基因在昆明小鼠肺组织中没有组成型表达，而Au可以诱导其表达。     

β-防御素2在溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的 研究β-防御素2在溃疡性结肠炎中的表达及其与病情严重程度的相关性,探讨β-防御素2在溃疡性结肠炎的诊断及严重程度判断中的临床意义.方法 应用免疫组织化学的方法检测60例溃疡性结肠炎粘膜组织标本,并根据病情严重程度分为3组,轻度26例、中度20例、重度14例,以及15例正常结肠粘膜组织标本中β-防御素2的表达.结果 正常结肠粘膜组织标本中β-防御素2表达较弱;β-防御素2在轻、中、重度溃疡性结肠炎粘膜组织中的阳性表达率分别为38.46%(10/26)、75.00%(15/20)及92.85%(13/14),并随病情严重程度增高而增高(P<0.05).结论 β-防御素2在溃疡性结肠炎中具有重要的意义.     

β-防御素2在溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的 研究β-防御素2在溃疡性结肠炎中的表达及其与病情严重程度的相关性,探讨β-防御素2在溃疡性结肠炎的诊断及严重程度判断中的临床意义.方法 应用免疫组织化学的方法检测60例溃疡性结肠炎粘膜组织标本,并根据病情严重程度分为3组,轻度26例、中度20例、重度14例,以及15例正常结肠粘膜组织标本中β-防御素2的表达.结果 正常结肠粘膜组织标本中β-防御素2表达较弱;β-防御素2在轻、中、重度溃疡性结肠炎粘膜组织中的阳性表达率分别为38.46% (10/26)、75.00% (15/20)及92.85% (13/14),并随病情严重程度增高而增高(P<0.05).结论 β-防御素2在溃疡性结肠炎中具有重要的意义.     

大鼠β-防御素rBD-1cDNA克隆

为开展β－防御素基因表达调控分子机制及其转基因防治粘膜感染的研究,作者克隆了大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。从大鼠肾脏组织提取ＲＮＡ,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ,并重组到ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ 载体,经限制性内切酶谱分析和ＤＮＡ序列测定,证实所克隆的ｃＤＮＡ片段为大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。     

可诱导性人β防御素-2抗肺炎球菌的活性研究

目的探讨人β防御素-2（hBD-2）在抗肺炎球菌感染中的作用。方法用肺炎球菌和白介素（IL）-1β刺激肺鳞状上皮细胞株EBC-1,RT-PCR检测hBD-2的表达情况;肺炎球菌感染预先加有hBD-2的EBC-1,检测hBD-2的抗菌情况。结果IL-1β和肺炎球菌能诱导EBC-1表达hBD-2,且hBD-2能明显抑制肺炎球菌的生长。结论hBD-2可能在保护肺炎球菌的生长过程中起关键作用。     

白细胞介素-10对人外周血白细胞β-防御素2基因诱导性表达的影响

目的:探讨炎症抑制因子白细胞介素-10(白介素-10)在β-防御素2(hBD-2)基因诱导性表达中的作用。方法:22例健康人被纳入本研究中,以终浓度0 ng/m l的LPS、100 ng/m l的LPS、10ng/m l的IL-10、100 ng/m l的LPS+10 ng/m l的IL-10加入900μl人外周血中,于37℃刺激培养6 h后,提取外周血白细胞总RNA,用实时定量RT-PCR的方法测定外周血白细胞hBD-2mRNA的表达水平。结果:0 ng/m l的LPS或10 ng/m l的IL-10刺激6 h的白细胞中未检测到hBD-2 mRNA,100 ng/m l的LPS刺激6 h后hBD-2mRNA的表达水平为166.9±35.14,而IL-10与LPS共同刺激6 h后hBD-2 mRNA的表达水平为30.40±9.18。IL-10使hBD-2mRNA的诱导性表达水平明显降低(P<0.05)。结论:人外周血白细胞中hBD-2基因呈现诱导性表达,IL-10能下调hBD-2的诱导性表达。     

β-防御素及其在耳鼻咽喉科中的研究

β-防御素是一种具有广谱抗菌活性的内源性抗生素肽,目前已发现其在许多器官组织的黏膜防御中有重要作用。β-防御素在黏膜上皮广泛表达,在黏膜抗感染防御机制中扮演重要角色,其功能失活或其基因表达障碍可能与黏膜感染或其他感染性疾病的发病机制密切相关,也可能参与黏膜正常防御功能。本文综述了防御素的分子结构、抗菌活性、基因表达及其在耳鼻喉组织中的研究进展,为临床防治提供新的思路。     

β-防御素-1mRNA在大鼠体内的分布及基因顺序分析

目的 研究β-防御素-1mRNA在正常大鼠体内的存在情况和基因顺序情况,为临床调节和应用β-防御素-1提供重要的信息.方法 从大鼠不同器官和组织的匀浆中提取总RNA,合成第1链cDNA,利用PCR扩增大鼠β-防御素-1的DNA片段,PCR产物经凝胶电泳后观察并测序.结果 遍及全身的21种器官和组织中,气管、心脏、肾脏、子宫、卵巢、睾丸、肝脏、胃、小肠、胸腺、脑和皮肤等12种器官或组织中能检测到β-防御素-1的mRNA,其中,在气管、心脏、肾脏、胃、卵巢和皮肤中较为丰富.DNA测序确定PCR产物为防御素,且与已知的防御素结构完全一致.结论 β-防御素-1的mRNA在正常大鼠体内多个器官和组织中都存在,提示它在机体内控制细菌感染的作用较为广泛,它的结构高度保留.     

人β-防御素-3与人表皮生长因子融合蛋白的克隆及原核表达

目的:克隆融合蛋白d-EGF成熟链基因,构建原核表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)表达体系中进行有效表达、分离纯化并鉴定其特异性。方法:以蛋白基因序列为基础,RT-PCR扩增人防御素-β和表皮生长因子基因,分别构建β-防御素-3(β-defensin-3)、EGF重组质粒,应用重组PCR方法,将EGF的DNA序列拼接到β-defensin-3 DNA序列的3'端,将基因克隆入原核表达载体pET-SUMO,构建重组质粒pET-SUMO-d-EGF。采用PCR、测序等方法鉴定后转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,Ni-trap柱纯化,SDS-PAGE检测表达及纯化结果,最后以Western blot对其进行特异性鉴定。结果:成功构建β-defensin-3、EGF重组质粒,经重组PCR成功扩增出294 bp的目的片段,重组体PCR结果与预期结果一致,测序正确。转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导经SDS-PAGE分析得到28 kDa左右的目的蛋白条带。Western blot鉴定出融合蛋白含有抗EGF、β-防御素-3两种抗原特异性的蛋白。结论:成功构建原核表达载体pET-SUMO-d-EGF,并获得纯化的融合蛋白,为进一步的活性分析奠定了实验基础。     

牙龈上皮β-防御素-2诱导表达的中药筛选

目的 筛选出对大鼠牙龈上皮β-防御素-2具有诱导表达作用的中药。方法 2019年2月至2020年4月选取90只大鼠作为研究对象。将90只健康成年Wistar大鼠随机分为固有表达组(10只)、阴性对照组及阳性对照组(各10只);实验组分别给予药物(黄芪组、板蓝根组、丹参组、柴胡组、鱼腥草组、穿心莲内酯组,每组10只,共60只),连续给药7 d后将大鼠处死,切取大鼠牙龈上皮,采用免疫组织化学方法检测大鼠牙龈上皮β-防御素-2蛋白的表达情况。结果 黄芪组和板蓝根组大鼠牙龈上皮β-防御素-2蛋白的表达明显高于固有表达组,差异有统计学意义(P0.05),但与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 中药黄芪和板蓝根能够诱导大鼠牙龈上皮β-防御素-2的表达增高,黄芪和板蓝根具有调节大鼠口腔黏膜天然免疫的作用。     

黄芪等中药对大鼠子宫β-防御素-2基因表达的调控

目的 通过黄芪等中药对大鼠子宫β-防御素-2基因表达的影响,探讨中药在局部组织提高机体免疫力的作用.方法 将30只健康的Wistar大鼠随机分成空白组、黄芪组、苦参组、红芪组、黄芩组、双黄连组,分别灌胃,于第7日将大鼠处死并提取子宫组织RNA,用RT-PCR法检测大鼠β-防御素-2基因的表达变化.结果 黄芪组、红芪组、双黄连组大鼠子宫组织β-防御素-2基因表达增强,而苦参组及黄芩组没有发生明显改变.结论 黄芪、红芪、双黄连等中药可以增强大鼠子宫β-防御素-2基因表达,提示可以利用这些中药来增强局部组织的免疫力,以达到杀灭病原微生物的作用.