栎树桑黄提取物诱导胃癌细胞凋亡作用的研究

目的 研究栎树桑黄乙醇提取物(OPL)对人胃癌细胞SGC-7901的抗肿瘤和诱导凋亡作用.方法 用不同浓度的OPL(0、40、80、160、240、320、400μg/ml)作用于4种不同人癌SGC-7901、HCT-116、MCF-7、Hela细胞48 h,MTT法检测药物抑制细胞增殖率;流式细胞术检测OPL对SGC-7901细胞周期的影响,Hoechst染色观察OPL对细胞核形态变化影响,Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测OPL对细胞凋亡的影响,Western blot法检测SGC-7901周期蛋白Cyclind1的表达,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved PARP蛋白的表达.结果 OPL明显呈现浓度依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖,诱导细胞凋亡,将细胞周期阻滞在G0/G1期(P＜0.05).Western blot法显示OPL上调Bax、cleaved PARP蛋白表达,下调Bcl-2、Cyclind1蛋白的表达(P＜0.05).结论 OPL呈现浓度依赖性诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G0/G1期.     

丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的:探讨丹参酮ⅡA对肝癌细胞中凋亡抑制蛋白XIAP的影响。方法:通过MTT实验、流式细胞术、细胞形态观察检测丹参酮ⅡA对细胞增殖和凋亡的影响,通过蛋白免疫印迹的方法检测丹参酮ⅡA对细胞中凋亡抑制蛋白XIAP、凋亡蛋白caspase-3以及PARP蛋白的影响。结果:MTT、细胞形态结果显示丹参酮ⅡA对SMMC-7721细胞的生长抑制作用成时间和剂量依赖性,免疫印迹结果显示,0.5μg/mL丹参酮ⅡA作用肝癌细胞24 h后,caspase-3前体、凋亡抑制蛋白XIAP表达明显下调,活化的caspase-3、剪切形式的PARP含量显著增加。结论:丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP,活化caspase-3,促进PARP剪切诱导肝癌细胞凋亡。     

银杏内酯B诱导人结直肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的 探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 通过制备HCT116裸鼠瘤模型,观察GB对肿瘤生长的影响,并通过体外培养人结直肠癌HCT116细胞,分别加入不同质量浓度GB,与其共孵育72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,Giemsa染色观察细胞形态,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2蛋白(B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2)、Bax蛋白(Bcl-2-associated protein x,Bax)和线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)的表达.结果 GB抑制裸鼠瘤的生长(P＜0.05),并显著抑制HCT116细胞的增殖(P＜0.01),诱导HCT116细胞发生凋亡.同时,GB能够显著下调HCT116细胞Mfn1蛋白和Bcl-2蛋白的表达水平(P＜0.01),并上调Bax蛋白的表达(P＜0.05).结论 GB可能通过抑制Mfn1的表达,调节促凋亡蛋白Bax活性,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进结直肠癌细胞的凋亡.     

竹节香附素A调控mTOR通路对肠癌HCT116细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨竹节香附素A(RA)抑制HCT116细胞的增殖及其相关机制.方法 利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测RA对HCT116细胞的增殖抑制;流式细胞术(FCM)检测RA对细胞凋亡的影响;透射电镜观察RA诱导自噬;Western blot检测凋亡、自噬相关蛋白表达.结果 RA能够明显抑制HCT116细胞的增殖,并呈浓度、时间依赖性.透射电镜观察到双层膜自噬体的存在;FCM显示RA能够诱导HCT116细胞凋亡,且随着浓度的增大凋亡率增加.Western blot检测显示,自噬相关蛋白Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达增高;抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少;而促凋亡蛋白Bax,凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、Cleaved-聚二磷酸腺苷核糖多聚酶(PARP)表达增加;RAPA靶蛋白(mTOR)信号通路中mTOR蛋白表达增加,磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达减少.加入mTOR通路抑制剂雷帕霉素(RAPA)后Beclin-1、LC3蛋白表达增加,凋亡率增加,且Cleaved-caspase-3、Cleaved-PARP表达也增加.结论 RA能够抑制肠癌细胞HCT116的增殖;并能诱导细胞自噬和凋亡,其机制可能是通过调控mTOR信号通路实现.     

mTOR信号通路介导黄芩苷抑制人结肠癌细胞的增殖

目的 探讨黄芩苷抑制人结肠癌细胞(HCT116)增殖的分子机制.方法 采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷(0.01～ 100 μg/ml)对体外培养的HCT116细胞增殖的抑制作用;采用Western blot分析检测被黄芩苷干预的HCT 116细胞的增殖相关蛋白的表达.结果 与对照组比较,浓度为1～ 100 μg/ml的黄芩苷处理组明显抑制HCT 116细胞的增殖(P＜0.05).用100μg/ml黄芩苷处理后,增殖相关的蛋白mTOR、p70S6K、S6、eIF4E表达明显下调(P＜0.05),4E-BP1表达明显上调.p-mTOR(Ser2448)、p-S6(Ser235/236)、p-4E-BP1(Thr37/46)的磷酸化水平下降(P＜0.05).结论 黄芩苷能通过抑制mTOR信号通路来抑制人结直肠癌HCT116细胞的增殖.     

伊立替康抑制人结直肠癌细胞增殖和ATP敏感性钾通道的相关性研究

 目的检测肿瘤化疗药物伊立替康(CPT-11)对人结直肠癌HCT-116细胞和HT-29细胞的作用,并探讨可能机制。方法用MTT比色法检测细胞增殖;用Transwell法检测细胞侵袭力;用流式细胞术Annexin
      V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;用流式细胞术PI单染法检测细胞周期;用膜片钳方法检测ATP敏感性钾电流(IKATP),并比较药物对两种细胞作用的异同。结果1.064.0μg/ml的CPT-11呈剂量依赖性和时间依赖性抑制HCT-116和HT-29的增殖,CPT-11抑制HCT-116和HT-29细胞增殖作用的半数抑制浓度(IC50)分别为39.3和19.5μg/ml;近似IC50浓度的CPT-11作用48h可使HCT-116和HT-29细胞阻滞于G0/G1期及S期,其中G0/G1期及S期比例分别从27.4%和17.4%上升至95.9%和98.2%,该浓度的CPT-11作用48h还可诱导HCT-116和HT-29细胞凋亡,凋亡率分别从14.8%和9.3%上升到36.9%和27.9%。CPT-11对HCT-116和HT-29细胞的侵袭抑制率分别为40.8%和47.5%。CP...更多T-11可剂量依赖性的降低HCT-116和HT-29细胞膜IKATP水平。结论CPT-11能有效抑制人结直肠癌HCT-116和HT-29细胞增殖和侵袭力、诱导细胞凋亡,且对HT-29细胞的作用较强;CPT-11抑制细胞增殖作用与其抑制细胞膜ATP敏感性钾通道开放相关。     

曼宋酮E对白血病 K562 细胞增殖和凋亡的影响

目的观察曼宋酮E对 K562 细胞增殖的影响,探讨其诱导凋亡作用及可能机制。方法台盼蓝拒染实验检测曼宋酮E对 K562 细胞的生长抑制作用;荧光显微镜观察细胞核形态的变化;流式细胞仪测定细胞凋亡率;免疫印迹法测定 caspase-3、caspase-8、caspase-9 及 PARP 的活性及 Bcl-2、Bax 和 Bcl-XL 的表达。结果 曼宋酮E抑制 K562 细胞增殖呈时间和浓度相关性;12.5 μg/mL 的曼宋酮E处理 K562 细胞 0、12、24、48 h 细胞凋亡率分别为 (2.1±0.8)%、(3.2±1.6)%、(15.3±8.9)%、(25.1±11.4)%;在曼宋酮E诱导 K562 细胞凋亡过程中,caspase-3 和 caspase-8 以及 PARP 出现活化断裂,casepase-9 表达无明显变化;Bcl-2 家族蛋白 Bcl-2、Bax 和 Bcl-L 表达无显著改变。结论 曼宋酮E可抑制诱导 K562 细胞增殖,并通过 caspase-8 途径介导凋亡     

不同时间和浓度大蒜素对卵巢癌细胞的影响及机制探究

目的 探讨大蒜素(allicin)对人卵巢癌普通型HO-8910和高侵袭型HO-8910PM细胞株增殖的影响及诱导细胞凋亡机制、作用效果比较。方法 不同浓度的大蒜素作用于人卵巢癌HO-8910和HO-8910PM细胞株不同时间,采用MTT法观察细胞活力;集落形成实验计算克隆形成率;PI/Hochest 33342荧光染色,检测caspase-3活性;Western blot法检测caspase-3和PARP蛋白表达。结果 大蒜素能显著抑制HO-8910和HO-8910PM细胞的增殖和集落形成,影响caspase-3的活性和PARP蛋白裂解(P＜0.05),呈时间和剂量依赖性;HO-8910PM细胞对大蒜素的敏感度均强于HO-8910细胞。结论 大蒜素可显著抑制卵巢癌细胞增殖,可能通过调节caspase-3和PARP诱导细胞凋亡,且高侵袭性卵巢癌细胞更敏感。     

原卟啉介导的光动力疗法对结肠癌HCT116细胞的杀伤和促凋亡作用及其机制

目的：研究原卟啉(protoporphyrin IX,PpIX)介导的光动力疗法对结肠癌HCT116细胞的杀伤和促凋亡作 用及其可能机制。方法：0,0.5,1,2,4,8,12 μg/mL的PpIX处理后给予0,5,10 J/cm2光照,用细胞增殖检测试 剂盒(cell counting kit 8,CCK8)检测HCT116细胞存活率。用Hoechst 33342染色法及流式细胞术检测空白对照组、单光 照组、单PpIX组、光动力组细胞的凋亡情况。Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白bcl-2,bax,caspase-3的表达。ROS 试剂盒及流式细胞术检测ROS的产量变化。结果：相同的光照剂量时,细胞存活率随着PpIX剂量增大而逐渐降低 (P<0.05)。相同的光敏剂浓度(<12 μg/mL)时,细胞存活率随着光照剂量的增强而降低(P<0.05)。Hoechst 33342染色发 现光动力组凋亡细胞相比其他3组高。流式细胞仪检测发现光动力组的HCT116细胞凋亡率、ROS产量均高于其他3组 (P<0.05)。Western印迹检测发现光动力组bax,caspase-3蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论：PpIX介导 的光动力疗法能促使HCT116细胞凋亡,ROS含量提高,可能与线粒体凋亡途径有关,通过多因素综合作用发挥效应。     

远华蟾蜍精通过调节应激与凋亡通路诱导结直肠癌细胞的凋亡

目的研究远华蟾蜍精对结直肠癌（CRC）细胞活力及凋亡的作用,并分析其抑制细胞活力及诱导细胞凋亡的机制。方法 四甲基偶氮唑盐法检测远华蟾蜍精对CRC细胞活力的影响,细胞核荧光染色及流式细胞术检测TBG对肿瘤细胞凋亡的作用; 免疫荧光检测线粒体膜电位及细胞内ROS水平,Western blotting及应激与凋亡信号抗体芯片检测TBG作用于肿瘤细胞后凋亡 相关蛋白表达变化。结果TBG以浓度和时间依赖关系显著抑制HCT116、SW480的细胞活力;TBG诱导HCT116细胞发生核 固缩,形成凋亡小体,增加Annexin V阳性细胞率;TGB上调细胞p53基因和Bax蛋白表达,促进Caspase9和PARP发生片段化; 抗体芯片发现该药诱导肿瘤细胞中Bad 磷酸化和PARP片段化,抑制了IΚBα、TAK1 蛋白磷酸化和Survivin 蛋白表达。结论 TBG通过诱导细胞凋亡而显著抑制CRC细胞活力,其凋亡诱导作用可能与p53介导的Bax通路活化及IAP通路的阻断相关。     

JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖及凋亡的影响

目的 研究JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖及凋亡的影响。方法 不同浓度JS-K 处理 HCT116 细胞48 h 后,采用MTS 法检测JS-K 对HCT116 细胞增殖活性的影响;PI 单染流式细胞术检测 JS-K 对HCT116 细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测JS-K 对HCT116 细胞凋亡的 影响;Texas Red-X 鬼笔环肽荧光染色观察细胞骨架形态;实时荧光定量聚合酶链反应检测Bcl-2 家族基 因mRNA 表达。结果 JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性（P <0.05）。 JS-K 诱导HCT116 细胞被阻滞在G2/M 期（P <0.05）。JS-K 可致HCT116 细胞发生晚期凋亡（P <0.05）。 JS-K 可改变HCT116 细胞骨架形态、微丝结构与分布。随着JS-K 浓度增加,促凋亡基因Bax、Bik、Bim、 Puma mRNA 相对表达量上调,抗凋亡基因Mcl-1 mRNA 相对表达量下调（P <0.05）。结论 JS-K 对人结肠 癌HCT116 细胞增殖有明显抑制作用,通过调节Bcl-2 家族基因表达,阻滞细胞G2/M 期,促进细胞发生晚 期凋亡。     

大黄素对HCT116结肠癌细胞凋亡作用及机制研究

目的 研究大黄素促进人结肠癌细胞HCT116细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 通过CCK8法检测大黄素对细胞活力的影响,并计算出IC₅₀。Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和荧光探针DCF-DA细胞内活性氧(ROS)的水平,Western blot法检测Bax、Bcl-2、p-ERK1/2、ERK1/2和c-Myc的表达。结果 不同浓度的大黄素抑制HCT116细胞的活力,并且具有浓度依赖性。大黄素将HCT116细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05),并且能够明显诱导ROS的产生(P<0.01),Western blot结果显示大黄素能够引起Bax/Bcl-2表达的上调,p-ERK1/2和c-Myc表达的降低(P<0.05)。结论 大黄素可以通过上调Bax/Bcl-2,下调c-Myc和p-ERK/ERK的表达从而促进结肠癌细胞的凋亡,阻滞细胞周期和增加ROS的产生。      

STAT3小干扰RNA的构建及其对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的：构建以STAT3为靶基因的短发夹状小干扰RNA表达载体,并探讨STAT3小干扰RNA表达载体对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法：以pGPU6／GFP／STAT3质粒为载体,构建STAT3的小干扰RNA表达载体,使用脂质体法转染人结肠癌HCT116细胞系,用M1Tr法检测空白对照组、小干扰RNA组、阴性对照组与脂质体对照组的增殖活性,48h后流式细胞仪分析4组细胞周期分布与凋亡的变化,并且通过RT—PCR和Westernblot检测结肠癌HCTll6细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达水平。结果：酶切鉴定和测序分析表明靶向STAT3的RNA干扰重组体构建成功;重组体转染HCT116后,STAT3的mRNA和蛋白水平较空载体转染组显著下降;小干扰RNA组与3对照组相比细胞增殖活性明显受到抑制（P〈0．01）;细胞生长明显减缓,G0／G1期细胞比例增加（P〈0．01）。结论：沉默STAT3基因可有效控制结肠癌细胞的增殖,使癌细胞阻滞于G0／G1期并诱导其凋亡,可望成为结肠癌治疗的新方法。     

皂角刺总黄酮诱导HCT116细胞凋亡的透射电镜观察

目的：研究皂角刺总黄酮对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法：应用CCK-8试剂盒检测对细胞增殖的抑制作用,透射电镜观察对细胞凋亡的超微结构变化。结果：皂角刺总黄酮能够显著抑制HCT116细胞的增殖,且呈现出一定的剂量依赖性。皂角刺总黄酮作用48小时后,HCT116细胞透射电镜可见核固缩、碎裂和凋亡小体等凋亡形态学改变。结论：皂角刺总黄酮可抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,诱导其凋亡。     

槲寄生对人大肠癌HCT116细胞细胞周期作用的研究

目的探讨槲寄生对人大肠癌HCT116细胞细胞周期的影响。方法采用MTT法测定槲寄生对HCT116增殖的影响,瑞特-姬姆萨染色和吖啶橙荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪进行细胞周期分析。结果槲寄生对HCT116细胞的生长有明显抑制作用,显微镜下肿瘤细胞体积缩小,核染色质固缩,部分发生核偏位,并使人大肠癌HCT116细胞周期阻止在G2/M期。结论槲寄生对HCT116细胞有明显的生长抑制和细胞周期阻滞作用。     

消炎痛抗肿瘤作用及体外增敏作用的研究

采用ＭＴＴ法,ＤＮＡ凝胶电泳,流式细胞仪分析技术,原位ＤＮＡ末端脱氧核苷酸转移酶法（ＴｄＴ）观察消炎痛对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响,结果：消炎痛可显著抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,呈剂量一时间依赖性效应,并可协同５－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ）的抗肿瘤细胞增殖作用,提示消炎痛通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

健脾益气化瘀解毒方含药血清对结肠癌 HCT116细胞增殖、周期、凋亡的影响

目的探讨健脾益气化瘀解毒方含药血清对人结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关蛋白Bcl-x L和Bax蛋白表达的影响。方法 10%、15%、20%健脾益气化瘀解毒方含药血清处理HCT116细胞12、24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖;不同浓度含药血清处理24、48 h后,碘化丙啶染色法检测细胞周期及凋亡率。蛋白质印迹法(Western blot)检测HCT116细胞内Caspase-3,Bcl-x L和Bax蛋白的表达;对照组均予以相同浓度空白鼠血清及10%胎牛血清(FBS)。结果细胞增殖:12 h后15%、20%含药血清与相同浓度鼠空白组比较,对HC116细胞的抑制作用具有统计学意义(P0.05),72 h对HCT116细胞的抑制作用最强(P0.05),健脾益气化瘀解毒方含药血清对HCT116细胞增殖具有良好的抑制作用,并与时间、浓度呈正相关。细胞周期:10%及15%含药血清组G2期细胞减少,而G1期与S期细胞增多,20%含药血清组G1期与S期细胞减少,而G2期细胞增加,48 h作用明显,而空白鼠血清细胞周期则无明显变化,说明含药血清能阻滞细胞周期,与时间呈正相关。细胞凋亡:与相应浓度对照组比较,含药血清处理24、48 h后,HCT116细胞晚期凋亡率增加,并且随浓度、时间增加凋亡率增加(P0.05),说明含药血清能促使HCT116细胞凋亡,与时间、浓度呈正相关。Western blot检测显示,与空白鼠血清组相比,15%含药血清可上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3、Bcl-x L的蛋白表达(P0.05)。结论健脾益气化瘀解毒方可能通过将结肠癌HCT116细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,通过上调凋亡相关蛋白Bax,下调Caspase-3、Bcl-x L蛋白的表达诱导细胞凋亡。     

miRNA-331对大肠癌细胞HCT116生物学功能的影响

目的 探讨miRNA-331对大肠癌细胞HCT116增殖、迁移和侵袭等生物学功能的影响.方法 将HCT116细胞转染miRNA-331 mimics后,通过MTT实验、克隆形成实验检测miRNA-331对大肠癌细胞增殖的影响;Transwell实验检测miRNA-331对HCT116细胞迁移和侵袭的影响.结果 转染miRNA-331 mimics的HCT116细胞在MTT实验中第1天～第5天的吸光度值与对照组相比显著减低;克隆形成实验中,转染miRNA-331 mimics后,HCT116细胞形成克隆的能力被削弱;Transwell实验显示,与阴性对照相比,转染miR-NA-331 mimics后,HCT116细胞的迁移能力明显下降.结论 miRNA-331表达上调可抑制HCT116细胞的增殖、迁移能力,表明miRNA-331有潜在的抑癌作用.     

糖化终末产物对人结肠癌HCT116细胞中ChREBP表达的影响

目的 研究糖化终末产物（advanced glycation end products, AGEs）对人结肠癌HCT116细胞中碳水化合物反应元件结合蛋白（carbohydrate responsive element binding protein, ChREBP）表达的影响。方法 采用RT-PCR检测AGEs处理的人结肠癌HCT116细胞中ChREBP及其下游基因的表达;使用N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预氧化应激状态;运用Western印迹法观察在HCT116细胞中AGEs诱导对ChREBP表达的影响;运用MTS比色法观察AGEs诱导对HCT116细胞增殖的影响。结果 AGEs刺激后人结肠癌HCT116细胞中转录因子ChREBP表达增加（P<0.05）;细胞经抗氧化剂NAC处理后,AGEs刺激所致ChREBP表达增加和HCT116细胞增殖均被明显抑制（P<0.05）。结论 AGEs通过激活氧化应激反应来上调人结肠癌HCT116细胞中的ChREBP表达。