加减大黄虫丸干预RF/6A细胞参与血管生成的实验研究

目的探讨加减大黄虫丸干预猴脉络膜-视网膜内皮细胞（RF/6A）参与血管生成的作用。方法 MTS比色法观察加减大黄虫丸对RF/6A细胞增殖的影响;Transwell小室检测其对RF/6A细胞移行的影响;Matrigel实验检测其对RF/6A细胞管腔形成的影响;Western Blot和实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）,分别检测其对RF/6A细胞表达VEGF、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白和mRNA的影响。结果 0.2 g.mL-1浓度的加减大黄虫丸对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖具有抑制作用;其浓度为01、2.52、5和50 mg.mL-1时RF/6A细胞移行数分别为73.333±4.51、61.333±4.042、8.667±6.66和17.667±4.16;其浓度为01、2.52、5和50 mg.mL-1时RF/6A细胞内皮管腔形成数分别为20.333±0.581、3.333±1.53、11.000±1.00和1.333±0.58;其100和200 mg.mL-1浓度能够抑制RF/6A细胞VEGF、MMP-2蛋白和mRNA表达,400 mg.mL-1浓度能够抑制RF/6A细胞MMP-2蛋白和VEGF mRNA表达。结论加减大黄虫丸通过抑制RF/6A细胞增殖、移行及管腔形成的途径抑制其参与新生血管生成,其机理可能与抑制RF/6A细胞VEGF、MMP-2的表达有关。     

羟基红花黄色素A对高糖作用下恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞迁移及VEGF表达的影响

目的 研究羟基红花黄色素A（HSYA）对高糖作用下恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞（RF/6A）迁移的影响,探讨HSYA抑制视网膜脉络膜新生血管内皮细胞的作用机制。方法 采用细胞划痕修复实验和半定量RT-PCR方法,检测HSYA对正常和高糖作用下RF/6A迁移和VEGF表达的影响。结果 HSYA在18 mg/L,37 mg/L,73mg/L浓度对高糖（22mmol/L）诱导下RF/6A细胞有显著抑制作用,而对正常糖（5mmol/L）下RF/6A细胞无显著抑制作用;与正常糖组比较高糖组VEGF明显表达,而加HSYA组VEGF表达降低。结论 一定浓度的HSYA对高糖诱导下RF/6A细胞有显著抑制作用,其可能机制为HSYA抑制血管内皮细胞VEGF表达。     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞增殖及ERK蛋白表达的影响

目的 观察Tumstatin肽对体外培养的视网膜微血管内皮细胞增殖及细胞外信号调节激酶(ERK) 蛋白表达的影响。方法　采用MTT比色法测定Tumstatin肽（T8肽）对血管内皮生长因子（VEGF）诱导下的恒河猴视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞）增殖的干预作用;采用Western-blot检测T8肽对VEGF刺激后15min、30min、45 min和60min的RF/6A细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化。 结果　T8肽浓度在5μg/ml 以上时对RF/6A细胞有抑制作用,且抑制作用随着浓度的增大而增高,各组OD值和抑制率比较差异均有显著性意义（P均<0.05）;T8肽可抑制VEGF对RF/6A细胞的促增殖作用;在1～40μg /ml相同浓度条件下,T8肽对VEGF条件下的RF/6A细胞增殖抑制率显著大于无VEGF条件下的抑制率（P均<0.01）。VEGF可刺激RF/6A细胞ERK1/2蛋白表达增加,T8肽可抑制VEGF诱导的RF/6A细胞ERK1/2蛋白的表达。 结论　Tumstatin抑制视网膜微血管内皮细胞的增殖,机制可能与VEGF信号转导通路上的ERK1/2细胞信号转导通路有关。     

外源性骨形态发生蛋白7联合血管内皮生长因子诱导大鼠脂肪干细胞向成骨细胞分化的实验研究

 目的探讨脂肪干细胞经低浓度骨形态发生蛋白7（BMP-7）及血管内皮生长因子（VEGF）短期诱导后骨细胞方向的分化情况。方法无菌切取成年Wistar大鼠腹股沟处脂肪,砖型胶原酶消化法体外分离培养脂肪干细胞,分为4 组：各组均加入含10%FBS 的DMEM培养基,0.1 μmol/L地塞米松,50 μmol/L 维生素C,10 mmol/L β-甘油磷酸钠,100 U/mL 青霉素,100 U/mL 链霉素;在此基础上,第1 组加BMP-7 和VEGF（各5 ng/mL）;第2 组加BMP-7（10 ng/mL）;第3 组加VEGF（10 ng/mL）;另设第4组（空白组）,加高糖DMEM。每3 d 更换培养基。至1,5,7,10,14 d 观察细胞生长及转化情况,通过免疫组化、ALP 染色、茜素红钙结节染色及MTT等检测不同组别诱导的成骨细胞。结果细胞计数、MTT、ALP 活性检测及免疫组化灰度值检测证实4 组诱导液诱导脂肪干细胞向成骨细胞分化的能力：BMP-7+VEGF组>BMP-7 组>VEGF组>空白组。结论与单独使用BMP-7、VEGF或基础培养基相比,BMP-7 联合VEGF 有加快脂肪干细胞向成骨细胞分化的能力。     

HMGB1联合MSCs移植对急性心肌梗死大鼠心脏血管生成影响

目的 通过高迁移率组蛋白1（High Mobility Group Box-1,HMGB1）预处理骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）,观察HMGB1能否增强MSCs旁分泌效应;在大鼠急性心肌梗死的模型上,HMGB1同时联合移植MSCs,观察HMGB1联合MSCs移植是否能进一步增加梗死区域局部新生血管数量.方法 贴壁离心法培养大鼠MSCs,HMGB1的受体TLR4和RAGE检测;不同浓度梯度HMGB1分别干预MSCs后,ELISA法检测VEGF的表达情况;SD雄性大鼠分为4组：模型组、MSCs移植组、HMGB1注射组、HMGB1注射＋MSCs移植组（n=24只）,制备大鼠急性心肌梗死模型;术后3、7、28 dELISA法检测血清VEGF浓度水平;术后28d免疫组化测定梗死区新生血管密度.结果 ①MSCs有TLR4和RAGE的表达;②浓度为12.5、25、50、100和200ng/mL HMGB1干预MSCs后,VEGF的分泌较对照组显著增加,当浓度为400和800ng/mL时,VEGF的分泌量较对照组减少（P＜0.05）;③术后3、7d时间点血清VEGF测定：HMGB1注射＋MSCs移植组＞MSCs移植组＞HMGB1注射组＞模型组（P＜0.05）;④HMGB1注射＋MSCs移植组的CD31染色新生血管数明显增多.结论 HMGB1联合MSCs移植对急性心肌梗死大鼠心梗区及交界区新生血管生成有益.     

重组HMGB1 A-box蛋白对HMGB1抗炎作用的观察

目的：观察重组HMGB1 A-box蛋白对HMGB1的特异性拮抗作用。方法：复苏的RAW264.7细胞培养至对数生长期,用于以下实验：实验分为六组,r HMGB1组：加500 ng/mL r H-MGB1;LPS组：加100 ng/mL LPS;A-box干预1组：加500 ng/mL r HMGB1和100 ng/mL A-box;A-box干预2组：加500 ng/mL r HMGB1和200 ng/mL A-box;A-box干预3组：加500 ng/mL r HMGB1和500 ng/mL A-box;A-box干预4组：加100 ng/mL LPS和500 ng/mL A-box。培养6 h后,收集上清液,待测。各组上清液采用ELISA盒检测TNF-α的含量。结果：200 ng/mL、500 ng/mL重组A-box蛋白能明显抑制HMGB1诱导培养细胞释放TNF-α的水平（P〈0.05）,但对LPS的无明显作用。结论：r HMGB1 A-box蛋白可能有特异性拮抗HMGB1的致炎作用。     

轴突导向因子Netrin-1对视网膜脉络膜内皮细胞RF/6A的作用研究

目的 研究轴突导向因子Netrin-1对视网膜脉络膜内皮细胞RF/6A的作用.方法 用免疫组化,CCK-8,Transwell及Martrigel方法检测不同浓度Netrin-1对RF/6A细胞增殖,迁移和管腔形成的作用及与血管内皮生长因子(VEGF)的相互作用.结果 体外实验发现Netrin-1对新生血管形成具有双重作用,浓度0～500ng/ml,对细胞迁移,增殖及管腔形成表现为促进作用,而在Netrin-1浓度＞500ng/ml时表现为抑制作用.Netrin-1浓度为50ng/ml时增殖和迁移能力最强.VEGF同时作用时,增殖及迁移作用增强.结论 Netrin-1对RF/6A细胞系的作用依浓度改变表现为对细胞增殖、迁移及管腔形成的促进及抑制作用.VEGF存在的条件下,促进作用表现为进一步增强,抑制作用无明显差异.由此可以推测Netrin-1在新生血管形成中具有双重调控作用,调控作用取决于Netrin-1的浓度及与VEGF的相互作用.在以新生血管发生为主要特点的增殖性糖尿病性视网膜病变中可能起到一定作用.     

CTGF对人牙周膜成纤维细胞VEGF表达影响

目的 探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对人牙周膜成纤维细胞VEGF表达的影响.方法 通过组织培养获得人牙周膜成纤维细胞(HPLFs);第5代HPLFs实验组细胞加入不同浓度CTGF(5、10、50、100 ng/mL),对照组加入等量的蒸馏水,培养48 h后,收集细胞爬片,免疫组化及计算机图像处理系统检测检测HPLFs中VEGF表达变化.结果 通过组织培养获得细胞抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性,为中胚层来源的成纤维细胞,符合HPLFs的形态学及免疫学特征.CTGF终浓度为5～100 ng/mL,实验组VEGF表达强度高于空白对照组.CTGF终浓度为10 ng/mL时VEGF表达强度增幅最大.结论 CTGF干预可有效上调HPLFs中VEGF表达.     

人参皂苷Rb3对高糖诱导的内皮细胞迁移和增殖及糖尿病小鼠视网膜功能的影响

目的 探究人参皂苷Rb3(Ginsenoside Rb3)对高糖诱导的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞（RF/6A）迁移和增殖及db/db小鼠视网膜功能的影响及其作用机制。方法 RF/6A细胞分为正常组（5.5 mmol/L D-葡萄糖）、高糖组（25 mmol/L D-葡萄糖）、高糖+Ginsenoside Rb3(100、150、200μg/mL)组。采用CCK-8法检测各组细胞活力,5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-Bromodeoxyuridinc,BrdU）染色评估细胞增殖能力以及Transwell法检测各组细胞迁移能力,Western blot技术检测各组RF/6A中YES相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)和磷酸化YES关联蛋白1(p-YAP1)的表达。db/db小鼠分为模型组和Ginsenoside Rb3组,给药4周后,运用光学相干断层扫描实验和视网膜电生理检查评价db/db小鼠视网膜形态和功能的变化,并采用免疫荧光染色法观察YAP1在视网膜中的表达。结果 结果显示,与对照组比较,高糖组细胞活力和BrdU阳性细胞率显著增加（P<0.01）...     

胰岛素样生长因子Ⅰ对TNF-α伤害的鼠骨骼肌C2细胞蛋白代谢的影响

目的探讨胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)伤害的鼠骨骼肌C2细胞(C2细胞)蛋白代谢的可能改善作用.方法常规细胞培养,用低血清培养液促使C2细胞进入分化状态.将对象分成正常组、对照组和处理组;对照组分为加入TNF-α 10 ng/mL(A10)和20 ng/mL(A20)两个亚组;处理组分成加入TNF-α 10 ng/mL+IGF-Ⅰ30 ng/mL(B10)和TNF-α20 ng/mL+IGF-Ⅰ30 ng(B20)两个亚组.于处理后6,24,48和72 h收获细胞裂解物,用BCA法检测细胞裂解物的蛋白浓度,对两组各时相的对应蛋白浓度进行比较.结果在所有时相上,B10和B20亚组的蛋白浓度均高于A10和A20亚组的相应值,而且在24 h位点上处理组的蛋白浓度均显著高于对照组(P<0.05).在6,24,48和72 h位点上,A10和B10亚组的蛋白浓度与A20和B20亚组相比差异均无显著性.结论对受TNF-α伤害的鼠C2细胞IGF-Ⅰ至少有微弱的改善蛋白代谢作用,这可能与其通过促进细胞分化和抑制细胞凋亡部分地拮抗了TNF-α阻止细胞分化和促进细胞凋亡的作用.IGF-Ⅰ 30 ng/mL对TNF-α 10 ng/mL和TNF-α20 ng/mL两个剂量的反应无明显不同,IGF-Ⅰ与TNF-α之间是否存在其他的剂量效应需进一步研究.     

Effect of VEGF on neural differentiation of human embryonic stem cells <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

The effects of vascular endothelial growth factor （VEGF） on neural differentiation of human embryonic stem cells （hESCs） in vitro and the possible mechanism were observed. The hESCs lines, TJMU1 and TJMU2, were established and stored by our laboratory, hESCs differentiated into neuronal cells through embryonic body formation. In this induction process, hESCs were divided into three groups： group A, routine induction; group B, routine induction＋10 ng/mL VEGF; group C, routine in- duction＋10 ng/mL VEGF＋10 ng/mL VEGFR2/Fc. OCT4, Nestin and GFAP in each group were de- tected by RT-PCR, and the cells expressing Nestin and GFAP were counted by immunofluorescence. The percentage of Nestin positive cells in group B was significantly higher than in groups A and C, while the percentage of GFAP positive cells in group B was significantly lower than in groups A and C （P〈0.01）. There was no significant difference between groups A and C （P〉0.05）. It was concluded that VEGF, via VEGFR2, stimulated the neural differentiation of hESCs in vitro.     

五味子乙素对脑胶质瘤SHG-44细胞VEGF表达水平的影响及其细胞生长抑制作用

目的：探讨五味子乙素（Sch B）作用于脑胶质瘤SHG-44细胞后对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及细胞生长抑制作用,阐明其可能机制。方法：培养脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为对照组和Sch B　50、100、200 mg•L^-1组,MTT法检测不同剂量Sch B作用SHG-44细胞后其生长情况;酶联免疫吸附实验和细胞免疫组织化学方法观察Sch B作用后SHG-44细胞VEGF蛋白表达情况。结果：与对照组比较,200 mg•L^-1Sch B作用SHG-44细胞24 h,细胞增殖活性轻度增加（P<0.05）;Sch B （50、100 和200 mg•L^-1）作用48或72 h,细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）;200 mg•L^-1Sch B作用SHG-44细胞72 h,培养上清中VEGF蛋白表达水平明显降低(P<0.01）。与对照组比较,Sch B作用SHG-44细胞72 h后,Sch B 50、100和200 mg•L^-1组VEGF蛋白阳性表达率均明显降低（P<0.01）。结论：Sch B能明显抑制SHG-44细胞VEGF蛋白表达及细胞生长,提示Sch B可能通过抑制脑胶质瘤血管生成而发挥抗肿瘤作用。     

miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h,ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h,Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞,用TNF-α（100ng／mL）刺激24h,ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF,50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度;50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h,VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍,而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明,小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后,TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01）,但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。     

Effects of brucine on vascular endothelial growth factor expression and microvessel density in a nude mouse model of bone metastasis due to breast cancer

Objective:To study the effects of brucine on vascular endothelial growth factor（VEGF）expression and microvessel density（MVD）in a nude mouse model of bone metastasis due to breast cancer,and to assess the possible antitumor mechanism of brucine.Methods:A syringe needle was used to directly inject 0.2 mL monoplast suspension（with 2×10⁶ human breast cancer cells contained）into the bony femoral cortex of the right hind leg for modeling.Twenty-five nude mice were randomized into five groups and administered with an intraperitoneal injection of saline or drug for 8 consecutive days:model group（0.2 mL normal saline）,low-dose brucine group(1.73 mg·kg^-1),medium-dose brucine group(3.45 mg·kg^-1),high-dose brucine group(6.90mg·kg^-1,and thalidomide group(200 mg·kg^-1).Diet and activity were recorded,and the tumors were harvested 5 weeks later.The percentage of VEGF-positive cells was determined with hematoxylin and eosin staining and immunohistochemical staining,and MVD expression was determined by optical microscopy.Results: The VEGF expressions in brucine-or thalidomide-treated mice were significantly reduced as compared with mice in the model group（P<0.01）.There were no significant difference between the high-dose brucine group and the thalidomide group（P>0.05）.Significant difference was between the high-and low-dose brucine group （P<0.05）.Further,VEGF expression was significantly increased in the low-and medium-close brucine groups compared with the thalidomide group（P<0.05）.The MVD values in the three brucine and thalidomide groups were significantly lower than that in the model group（P<0.01）.The MVD values in the medium-and high-dose brucine groups were not significantly different from those in the thalidomide group（P>0.05）,while the MVD value showed a significant increase in the low-dose group compared with the thalidomide group（P<0.05）.Conclusion:Brucine could inhibit the growth of breast cancer to bone metastases,possibly by inhibiting tumor angiogenesis.     

麻风病患者血浆内皮细胞特异性分子-1的水平及其临床意义

目的 检测麻风病患者血浆内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell-specific molecule 1, ESM-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和CD105内皮糖蛋白的水平,探讨其对麻风病辅助诊断的临床价值。方法 选择不同临床型别的麻风病患者33例为研究对象,对照组为健康者17例,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测患者和对照组血浆中的ESM-1、VEGF和CD105水平,并比较两组间上述因子的水平。受试者工作特征曲线(receiver operation characteristic curve, ROC)分析ESM-1、VEGF和CD105对麻风病诊断的价值。结果 麻风病患者组血浆ESM-1浓度(3.79±0.62) ng/mL高于对照组(3.20±0.85) ng/mL(P<0.05);ESM-1诊断麻风病的ROC 曲线下面积(area under the ROC curve, AUC)为0.715;ESM-1最佳临界值为3.73 ng/mL时诊断麻风病的灵敏度66.7％,特异度82.4％,约登指数为0.491。患者组血浆VEGF浓度(0.64±0.13) ng/mL高于对照组(0.54±0.11) ng/mL(P<0.05);VEGF诊断麻风病的AUC为0.722;当VEGF最佳临界值为0.67 ng/mL时诊断麻风病的灵敏度45.5％,特异度94.1％,约登指数为0.396。患者组(42.04±9.44) ng/mL和对照组(45.08±9.43) ng/mL间血浆CD105浓度差异无统计学意义(P>0.05);CD105诊断麻风病的AUC为0.423。结论 麻风病患者血浆ESM-1和VEGF水平高于正常组,ESM-1的灵敏度和约登指数较VEGF高,对于麻风病的诊断有一定的参考价值。     

VEGF经PI3K-Akt-Bad通路降低冻存后EOCs凋亡率

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）对低温冻存内皮生长晕细胞（EOCs）凋亡率的影响及其与PI3K-Akt-Bad信号通路的关系,研究VEGF降低低温冻存EOCs凋亡率的可能机制。方法：采用密度梯度离心法分离人脐带血中的单个核细胞,经体外扩增培养EOCs,用免疫细胞化学染色及荧光染色法鉴定细胞的内皮特性。以扩增后的第二代细胞为生物材料,将其分为W组（wortmannin干预24 h后冻存）、W+V组（wortmannin 干预24 h后+50μg/L VEGF冻存）、BC组（空白对照组）、V组（50μg/L VEGF冻存）,于-80 ℃冻存24 h后复苏。用流式细胞术检测EOCs凋亡率,Western blot法检测p-Akt、Bad、Caspase 3的表达量。结果：采用体外扩增培养的EOCs具有多种内皮细胞特性。低温冻存会增加EOCs的凋亡率（为5.36%±0.27%）,但50μg/L VEGF能够降低低温冻存和复苏过程EOCs的凋亡率（为3.36%±0.27%,P＜0.05）;经wortmannin对PI3K特异性抑制后,VEGF对EOCs的保护作用减弱,细胞的凋亡率增加（为8.34%±0.57%,P＜0.05）;加50μg/L VEGF的EOCs冻存细胞p-Akt表达升高而Bad和Caspase 3表达降低（均P＜0.05）,经wortmannin干预24 h后的EOCs冻存细胞p-Akt表达降低而Bad和Caspase 3表达升高（均P＜0.05）。结论：50μg/L VEGF能够降低低温冻存EOCs的凋亡率,其作用可能通过PI3K-Akt-Bad信号通路来实现。     

血管内皮生长因子促进少突胶质前体细胞增殖及其机制的初步研究

目的观察不同浓度血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对少突胶质前体细胞(oli-godendrocyte precursor cells,OPCs)增殖的影响,探索VEGF促进OPCs体外增殖与Notch信号通道上相关蛋白的关系。方法分离纯化培养OPCs,MTT法检测不同浓度VEGF(50、100、200 ng/ml)促进OPCs增殖的作用以及加入Notch通路γ-分泌酶抑制剂DAPT(VEGF 100 ng/ml+DAPT50μmol/ml)后OPCs增殖变化情况,RT-PCR、Western blot技术检测VEGF处理OPCs后Notch信号通道上Notch-1、Hes-1的基因表达和蛋白表达情况。结果 50、100、200 ng/ml VEGF处理组的细胞增殖率分别为(107±2)%、(124±2)%、(142±7)%,与空白对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);VEGF+DAPT处理组的增殖率下降至(103±4)%(P<0.05)。RT-PCR及Western blot分析显示VEGF处理OPCs后,Notch-1、Hes-1蛋白在基因水平和蛋白水平表达均增加(P<0.05),γ-分泌酶抑制剂DAPT能抑制其表达(P<0.05)。结论 VEGF对OPCs具有促进增殖的作用,其促增殖作用与Nocth信号通路相关蛋白有关。     

胰岛素样细胞生长因子-1、碱性成纤维细胞生长因子及转化生长因子α对人表皮干细胞增殖的影响

目的 表皮干细胞是组织工程化皮肤的"种子细胞".文中研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、胰岛素样细胞生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)和转化生长因子α(transforming growth factor α,TGFα)对人表皮干细胞增殖的影响.方法 采用两步酶消化法和Ⅳ型胶原差速贴壁相结合的方法获得人原代表皮干细胞,将表皮干细胞分为A组(K-SFM)、B组(K-SFM+bFGF)、C组(K-SFM+IGF-1)及D组(K-SFM+TGFα)进行培养.比较不同组之间表皮干细胞的克隆形成率、生长增殖、生长曲线和细胞周期等指标.结果 B组、C组及D组培养的表皮干细胞在细胞增殖、细胞克隆率方面检测结果均明显高于A组(P<0.05);流式细胞仪检测B组、C组与A组及D组处于G0/G1细胞比例比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 IGF-1、bFGF及TGF-α均对表皮干细胞的增殖有促进作用,IGF-1及bFGF对表皮干细胞表型的维持有较好的作用.     

抑胶素对大鼠Ｃ6胶质瘤细胞血管内皮生长因子的抑制作用

目的：探讨抑胶素对大鼠Ｃ6胶质瘤细胞血管内皮生长因子（VEGF）的抑制作用。方法： 采用单层贴壁培养法对大鼠Ｃ6脑胶质瘤细胞株进行培养,并用2、4、8和16 ng•L^-1抑胶素作用７２ ｈ，免疫组化法观察抑胶素对Ｃ6胶质瘤细胞VEGF的抑制作用。结果：VEGF表达阳性的细胞绝大部分表现为细胞浆和（或）细胞核染成黄褐色。PBS对照组的C6胶质瘤细胞VEGF在细胞浆中表达明显，经不同浓度的抑胶素处理７２ ｈ后， 肿瘤内VEGF阳性细胞密度较PBS对照组下降（P<0.05，P<0.01），不同浓度的抑胶素作用后C6细胞中VEGF灰度值不同：2 ng•L^-1抑胶素组（182.3±5.7）与PBS对照组（185.6±6.5）比较差异有显著性（P<0.05），4 、8和16 ng•L^-1抑胶素组及顺铂处理组细胞VEGF灰度值（分别为176.8±5.4、169.8±4.1、162.6±2.9和167.3±3.5）与PBS对照组比较差异有显著性（P<0.01）。结论：抑胶素对大鼠Ｃ6胶质瘤细胞VEGF有抑制作用。