上调神经生长因子-β对人胆管癌细胞QBC939、生物学特性的影响

目的探讨神经生长因子-β上调对人胆管癌细胞QBC939增殖、凋亡、细胞周期及克隆形成能力等生物学特性的影响。方法构建稳定转染pEGFP-N1-NGF的QBC939细胞,上调神经生长因子-β的表达(高表达组),转染pEGFP-N1-NC组的QBC939细胞作为对照组。以Western blot方法检测细胞转染效果,细胞增殖实验(CCK-8实验)检测细胞增殖能力,单克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果在450nm波长下,24小时测得对照组QBC939细胞的吸光度值为0.409±0.014,高表达组细胞的吸光度值为0.691±0.029;48小时测得对照组QBC939细胞的吸光度值为1.612±0.044,高表达组细胞的吸光度值为2.033±0.005,其差异均具有统计学意义(P<0.05);200倍显微镜下观察,对照组直径大于500um的单细胞克隆数比例为10%,高表达组直径大于500um的单细胞克隆数比例为24%,统计学差异显著(P<0.01);对照组S期细胞数所占比例为(15.643±0.693)%,高表达组S期细胞数所占比例为(40.193±1.671)%,统计学差异显著(P<0.01);对照组细胞早期凋亡率为(15.76±0.97)%,高表达组细胞早期凋亡率为(8.82±0.93)%,具有统计学差异(P<0.05)。结论上调神经生长因子-β能够增强QBC939细胞的增殖与克隆形成能力,能够促进细胞进入S期,抑制细胞凋亡。     

过表达核心蛋白聚糖基因对胆管癌细胞周期及凋亡的影响

目的 观察过表达核心蛋白聚糖(DCN)基因对胆管癌细胞周期及凋亡的影响.方法 脂质体介导真核表达质粒pEGFP-DCN和空载体pEGFP-N1转入人胆管癌细胞株QBC939,Westernblot检测DCN蛋白的表达,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DCN mRNA的表达,克隆形成实验计算克隆形成率,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果 RT-qPCR示过表达DCN相对空载体上调32.34倍;Western blot结果示过表达组DCN上调2.00倍.pEGFP-DCN转染组细胞克隆形成数[(210.9±19.3)个]显著低于空质粒转染组[(608.7±56.3)个],差异有统计学意义(P＜0.05).转染pEGFP-DCN细胞与空载体比较,细胞增殖能力显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞周期检测显示,胆管癌细胞转染pEGFP-DCN后G1～ Go期细胞比例明显升高,而G2～S期细胞减少,细胞周期被阻滞在G1～Go期,凋亡分析转染pEGFP-DCN的QBC939细胞较转染空载体细胞凋亡显著增加,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3明显增高,而B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达水平明显降低(0.787±0.068比1.276±0.157).结论 转染DCN能够显著抑制胆管癌细胞的增殖,明显促进胆管癌细胞凋亡,而DCN促进胆管细胞凋亡与上调Caspase-3和下调bcl-2蛋白相关.     

RhoC基因转染对人胆管癌QBC 939细胞增殖和侵袭性的影响

目的研究RhoC（ras homolog gene family，member C）基因对胆管癌QBC939细胞株增殖和侵袭能力的影响。方法以脂质体将RhoC cDNA真核表达载体转染人胆管癌QBC939细胞。应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化，流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化，Boyden小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。结果RhoC基因能促进胆管癌QBC939细胞增殖，流式细胞仪分析结果显示转染后细胞出现G1期细胞减少，侵袭实验显示转染后细胞侵袭能力较转染前有显著加强。结论RhoC基因能够促进胆管癌QBC939细胞株的体外增殖和侵袭能力。     

RNA干扰ANXA5表达对人胆管癌细胞QBC939的增殖和侵袭的影响

目的:探讨膜联蛋白A5(ANXA5)对人胆管癌细胞QBC939增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:构建3个沉默QBC939细胞ANXA5的shRNA质粒(ANXA5-sh1/2/3)和1个阴性对照质粒,慢病毒包装质粒后感染QBC939细胞,流式细胞仪检测感染效率。病毒感染QBC939细胞后,Western blotting检测细胞的ANXA5蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率变化;划痕实验和Transwell实验评估QBC939细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:干扰组(KD)细胞中的ANXA5蛋白水平显著低于空白组(BC)和阴性对照组(NC)细胞中的ANXA5蛋白水平。与NC组和BC组细胞相比,KD组细胞中G0/1细胞的百分比和凋亡率增高,而细胞增殖活性降低。KD组细胞中的细胞迁移和侵袭能力也低于NC和BC组细胞。结论:RNA干扰QBC939细胞的ANXA5表达后,明显抑制其增殖、侵袭和诱导凋亡的作用。     

靶向survivin的shRNA对人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响

目的：探讨靶向survivin的shRNA对人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响。方法：合成具有互补序列的能够编码短发卡RNA（shRNA）的双链寡核苷酸并构建pSilencer2．1真核表达质粒,经稳定转染QBC939细胞后对转基因后胆管癌细胞的生物学行为进行观察。结果：neo基因稳定表达于转染阳性质粒及阴性对照质粒的QBC939细胞中。通过RT—PCR及westernblot检测证实shRNA在mRNA及蛋白质水平抑制survivin表达率分别达68固％和613％。细胞计数及平板克隆形成实验显示转染细胞生长速度及细胞克隆明显减缓（P〈O．01）。流式细胞术测定细胞周期显示转染细胞G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少。DNAladder、透射电镜观察及流式细胞定量研究显示转染细胞凋亡明显增多。结论：靶向survivin的shRNA能有效抑制目的基因的表达,通过增加细胞凋亡在体外抑制人胆管癌细胞的生长,为胆管癌的基因治疗提供一定的实验基础。     

Survivin 抑制人胆管癌细胞凋亡相关信号通路的实验研究

目的:探讨survivin基因对人胆管癌细胞凋亡信号通路的调节机制.方法:构建针对survivin基因的siRNA和对照siRNA,将QBC939人胆管癌细胞分为3组,分别为siRNA-survivin转染组,对照siRNA转染组和未转染组.转染后,首先用Western blot检测未转染QBC939细胞和QBC939/siRNA(-)细胞及QBC939/siRNA(+)细胞中survivin的表达,验证干扰效果,继而分别用流式细胞仪,激酶活性测定和Western blot检测以上3种状态的QBC939细胞的凋亡情况,caspase-3的活性和caspase-3,caspase-9及procaspase-9凋亡信号分子的表达.结果:QBC939/siRNA(+)细胞survivin蛋白表达量明显低于未转染的QBC939细胞(P＜0.05),而QBC939/siRNA(-)细胞survivin蛋白表达量无明显改变(P＞0.05).与未转染的QBC939细胞比较,QBC939/siRNA(+)细胞凋亡明显增加,caspase-3活性明显升高,caspase-3和caspase-9表达明显上调,而procaspase-9表达降低(均P＜0.05);上述指标在QBC939/siRNA(-)细胞与未转染的QBC939细胞间的差异无统计学意义(均P＞0.05).结论:survivin基因可能通过促进procaspase-9的活化阻止caspase-3和caspase-9的激活,从而抑制胆管癌细胞的凋亡.     

RhoC反义基因转染对人胆管癌QBC 939细胞增殖和侵袭性的影响

目的研究RhoC反义基因对胆管癌QBC939细胞株增殖和侵袭的影响。方法以脂质体将反义RhoC cDNA真核表达载体转染人胆管癌QBC939细胞。应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化,Transwell小室检测侵袭能力的变化。结果转染反义RhoC cDNA真核表达载体后,形成克隆数目较空载体转染细胞和未转染的QBC939细胞明显减少[(54±8)vs(91±11)vs(90±9),P<0.05];并出现G_1期阻滞(52.5% vs 43.4% vs 43.7%);穿过小室滤膜细胞数目明显减少[(36±6)vs(96±12)vs(95±7),P<0.05]。结论RhoC反义基因能够抑制胆管癌QBC939细胞株的体外增殖和侵袭力。     

RNA干扰诱导型一氧化氮合酶基因表达对人胆管癌细胞生长的影响

目的:探讨RNA干扰诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的表达对人胆管癌细胞生长的影响。方法:针对iNOS设计并合成3种iNOS-siRNA序列(siRNA1、siRNA2、siRNA3)及阴性对照siRNA序列后,分别转染人胆管癌细胞QBC939细胞,用荧光显微镜下观察转染效率,通过iNOS mRNA与蛋白的变化分析干扰效果,选择干扰效果最为明显的iNOS-siRNA序列,观察其干扰后QBC939细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的变化。实验以无处理的QBC939细胞为空白对照。结果:合成的3种iNOS-siRNA序列均可有效转染人胆管癌QBC939细胞,且转染后均能明显降低QBC939细胞中iNOS mRNA与蛋白的表达(均P0.05),其中siRNA2对iNOS的抑制作用最为明显,阴性对照siRNA序列对QBC939细胞中iNOS mRNA与蛋白的表达无明显影响(均P0.05)。转染siRNA2后,QBC939细胞增值明显降低、出现明显的G0/G1期阻滞、凋亡率明显增加(均P0.05);转染阴性对照siRNA序列的QBC939细胞无上述改变(均P0.05)。结论:RNA干扰能有效降低iNOS基因在胆管癌细胞中的表达,从而抑制胆管癌细胞的增殖,并促进其凋亡。     

PTTG对胆管癌细胞生长和5-FU敏感性影响的研究

目的探讨抑制垂体瘤转化基因(PTTG)表达后胆管癌细胞体外生长的变化及其对5-FU化疗敏感性的影响。方法将反义PTTG真核表达载体pcDNA3.1-PTTGas和空白载体pcDNA3.1(+)转染入胆管癌细胞株QBC939中,筛选获得稳定表达株tQBC939(PTTG-)和tQBC939(pcDNA3.1),并设立未转染的QBC939细胞对照组,绘制细胞生长曲线,以MTT法检测细胞增殖力的变化,流式细胞仪检测细胞周期的比例变化,并采用5-FU处理细胞后,以MTT检测3组细胞的生长抑制率,计算IC50值,流式细胞仪和Hoechst染色法检测各组细胞凋亡情况。结果 tQBC939(PTTG-)组与tQBC939(pcD-NA3.1)组和QBC939组比较,前者生长较为迅速,S期细胞比例增多,G2/M期细胞比例减少(P0.05),增殖指数较高(P0.05);经5-FU处理后,tQBC939(PTTG-)的IC50值明显低于tQBC939(pcD-NA3.1)和QBC939细胞(P0.05),细胞凋亡增多。结论转染PTTG反义DNA可增强胆管癌细胞的增殖力和对5-FU化疗的敏感性。     

阻断Hedgehog信号通路可抑制胆管癌细胞QBC939的生长

目的 研究Hedgehog信号通路特异性阻断剂环靶明(cyclopamine)对人胆管癌细胞系QBC939增殖与凋亡的影响.方法 用MTT比色法检测环靶明对QBC939细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率.RT-PCR法分别检测环靶明处理前后PTCH1、GLI1、EGFR在QBC939中的mRNA表达及变化.Western blot检测环靶明处理前后PTCH1、GLI1、EGFR在QBC939中的蛋白表达及变化.结果 环靶明抑制QBC939细胞的增殖,其作用呈剂量和时间依赖性.经5、10、20 μmol/L的环靶明作用48 h后,QBC939细胞的凋亡率逐渐升高,明显高于对照组的凋亡率(P＜0.01).PTCH1、GLI1、EGFR的mRNA和蛋白均在QBC939中表达,环靶明下调QBC939的PTCH1、GLI1、EGFR表达.结论 阻断Hedgehog信号通路能抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,促进其凋亡.     

1,25二羟维生素D3对胆管癌细胞系QBC939增殖和凋亡的影响

目的 探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2 D3]对胆管癌细胞系QBC939的体外增殖及凋亡的影响.方法 将不同浓度的1,25(OH)2 D3与胆管癌细胞系QBC939共同培养,采用MTT法测定细胞增殖能力、显微镜观察细胞形态学的改变、流式细胞仪检测细胞周期与凋亡、免疫细胞化学观察bcl-2的表达.结果 0.1～0.5μmol/L的1,25(OH)2 D3对胆管癌细胞QBC939有抑制作用,呈剂量依赖性.经1,25(OH)2 D3作用72h后细胞G1期比例升高,S期比例下降,其中0.5μmol/L组细胞G1期由(50.3±1.0)%上升至(65.5±3.2)%,S期由(39.4±0.5)%下降至(23.6±0.7)%;并且可诱导细胞产生凋亡,0.5μmol/L组作用后细胞凋亡率由0.5%上升至24.6%;bcl-2的表达下调.结论 1,25(OH)2 D3能抑制胆管癌细胞系QBC939增殖并诱导细胞凋亡,其引起凋亡的机制可能与下调bcl-2的表达相关.     

MicroRNA-133a-5p调控c-met表达对胆管癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨MicroRNA-133(miR-133)在胆管癌细胞系中的表达,研究miR-133基因表达在胆管癌细胞迁移和侵袭过程中的作用。方法:利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术测定分析miR-133及其不同成熟体(miR-133b、miR-133a-3p、miR-133a-5p)在胆管癌QBC939细胞系中的表达。将胆管癌QBC939细胞系经转染后分为三组:自然生长组(空白对照组),细胞转染无关序列组(阴性对照组)以及细胞转染Anti-miR-133a-5p组(干扰组),利用RT-PCR检测各组胆管癌QBC939细胞系中miR-133a-5p、c-met的表达。然后利用Transwell小室法分别检测分析干扰miR-133a-5p基因表达对胆管癌QBC939细胞系迁移和侵袭能力的影响。结果:RT-PCR检测miR-133不同成熟体miR-133b(0.74±0.07)、miR-133a-3p(0.99±0.12)、miR-133a-5p(1.00±0.06)中的表达,其中miR-133a-5p在胆管癌QBC939细胞系中表达量最高(P0.05)。RT-PCR实验证实干扰组QBC939细胞系中miR-133a-5p(0.70±0.08)表达显著低于对照组(1.43±0.34);干扰组QBC939细胞系中c-met(0.09±0.02)表达也显著低于对照组(1.01±0.07),差异有统计学意义(P0.01)。Transwell小室实验证实干扰组中胆管癌QBC939细胞系迁移(69.5±8.3)和侵袭(19.3±3.3)能力明显低于对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:MicroRNA-133a-5p的低表达可以明显减弱c-met的表达,同时可以抑制胆管癌QBC939细胞系的迁移和侵袭能力,miR-133a-5p有可能成为胆管癌基因表达调控的新靶点。     

Bcl-2反义寡核苷酸对VP-16抑制人胆管癌细胞株增殖和诱导凋亡的影响

目的:探讨bcl-2 反义寡核苷酸（ASODN）对VP-16抑制人胆管癌QBC939细胞生长和诱导细胞凋亡的影响。方法:合成特异性靶向Bcl-2 ASODN，并将其转染QBC939细胞;四甲基噻唑蓝（MTT）试验检测Bcl-2 ASODN对VP-16抑制QBC939细胞增殖的影响;流式细胞术观察Bcl-2 ASODN对VP-16诱导QBC939细胞凋亡的影响。结果:ASODN组细胞的存活率显著低于无义寡核苷酸（NSODN）组(P＜0.05);ASODN+VP-16组细胞存活率显著低于ASODN组及VP-16组(P＜0.05);ASODN组、ASODN+VP-16组和VP-16组细胞凋亡率显著高于对照组和NSODN组（P＜0.05);ASODN+VP-16组细胞凋亡率显著高于ASODN组及VP-16组(P＜0.05)。结论:Bcl-2 ASODN对VP-16抑制人胆管癌QBC939细胞生长和诱导细胞凋亡有促进作用。     

神经生长因子对人胆管癌细胞增殖作用的影响

目的探讨神经生长因子（NGF）对人胆管癌细胞株QBC939增殖能力的影响。方法构建β-NGF的真核表达载体pcDNA3．0-NGF，经酶切鉴定后，采用脂质体lipofectamine转染人胆管埔细胞株QBC939。Western Blot检测蛋白的表达情况。MTT法检测转染前后细胞的增殖情况。结果成功构建β—NGF的真核表达载体pcDNA3．0-NGF：转染QBC939细胞后，能稳定表达β-NGF蛋白，且表达强度随转染质粒浓度的增加而增强，与对照组相比，差异有显著性（P〈0.0001）。MTT检测转染后的细胞增殖能力增强，与空白对照组和转染空质粒组相比，差异有显著性（P〈0．01）．且表现出量效依赖关系。结论NGF具有促进胆管癌细胞株QBC939增殖的作用。     

反义调控DNA甲基转移酶3b基因对人胆管癌细胞QBC939生长的影响

目的观察转染反义DNMT3b基因真核表达质粒对人胆管癌细胞QBC939生长的影响，初步探讨DNMT3b基因在胆管癌发生中的作用。方法构建反义DNMT3b基因真核表达质粒，用脂质体介导法将其转人人胆管癌细胞株QBC939；Western blot检测转染前后DNMT3b蛋白表达的变化；MTT法和软琼脂克隆形成试验观察细胞的生长增殖能力；流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。结果转染反义基因能使DNMT3b蛋白表达水平降低；转染反义DNMT3b基因不能抑制QBC939的生长曲线，对其软琼脂克隆形成率亦无影响（P=0．717）；转染反义DNMT3b基因不能改变QBC939的细胞周期和促进细胞凋亡（P=0．089）。结论转染反义DNMT3b基因真核表达质粒可下调DNMT3b在QBC939细胞中的表达水平，但对QBC939的生长和增殖无影响，也不能改变QBC939的细胞周期和促进细胞凋亡的发生。     

WWOX表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨含有WW结构域的氧化还原酶基因(WWOX)表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞;采用荧光定量逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot法鉴定WWOX在QBC939细胞中的表达;流式细胞仪(FCM)法检测转染前后各细胞凋亡率的变化;JC-l染色法检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化;荧光定量RT-PCR和Western blot法检测胆管癌细胞bcl-2表达的变化;将未转染和转染空质粒的细胞作为对照组接种到裸鼠皮下以检测荷瘤,TUNEL方法原位检测移植瘤的凋亡.结果 建立了稳定表达WWOX基因的QBC939/WWOX细胞株,mRNA及蛋白表达明显增加.FCM显示QBC939/WWOX组的细胞凋亡率明显增高[(1.24±0.35)％比(1.73±0.48)％比(21.40±2.35)％,P＜O.01],JC-l显示转染组的线粒体膜电位下降[(4.27±0.64)％比(4.96±0.52)％比(28.60±3.94)％,P＜O.01],bcl-2 mRNA及蛋白的表达均显著降低(P＜0.05).转染组的皮下肿瘤较对照组生长速度明显减慢(P＜0.05),TUNEL实验证实转染组的皮下肿瘤凋亡指数为(13.6±1.5)％,较对照组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.O1).结论 WWOX基因能促进胆管癌细胞的凋亡,其机制可能与下调bcl-2的表达,激活线粒体凋亡通路有关.     

肿瘤转移抑制基因nm23-H1转染对人胆管癌细胞系增殖能力的影响

目的 探讨nm23-H1基因转染对人胆管癌细胞系增殖能力的影响。方法 通过脂质体法将含有全长nm23-H1 cDNA的真核表达载体转染人胆管癌细胞系QBC939,Northern blotring及免疫组织化学观察转染前后细胞内nm23-H1基因的mRNA及蛋白表达情况,噻唑蓝(MTT)比色法检测转染前后细胞体外增殖能力变化,流式细胞仪分析转染前后细胞周期及凋亡改变。结果 转染成功的QBC_(939)-nm23细胞nm23-H1基因的mRNA及蛋白表达明显上升,体外增殖能力下降,G_0/G_1期、G_2/M期、S期比例及凋亡率(％)分别为(70.24±2.05、12.37±0.91、17.39±2.95、9.54±0.78),与亲本QBC_(939)细胞(56.57±0.99、16.00±1.39、27.44±2.09、4.23±1.05)及对照组QBC_(939)-C细胞(56.17±0.82、17.23±0.77、26.60±0.53、3.67±0.49)相比,G_0/G_1期细胞比例明显增加,G_2/M期及S期细胞比例明显下降,凋亡细胞增加(P<0.05)。结论 nm23-H1基因可以抑制体外胆管癌细胞的增殖能力及诱导凋亡。     

尼美舒利对胆管癌QBC939细胞增殖的抑制作用

目的研究选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939细胞增殖的抑制作用。方法应用MTT比色法观察尼美舒利对QBC939细胞增殖的影响，细胞凋亡采用透射电镜及流式细胞仪检测，应用免疫组化法检测尼美舒利对QBC939细胞COX-2及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的影响。结果尼美舒利呈时间、剂量依赖性抑制QBC939细胞的增殖，降低QBC939细胞COX-2和PCNA的表达，流式细胞仪检测结果显示，随药物浓度增加，细胞凋亡率显著增加，透射电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变。结论尼美舒利显著抑制QBC939细胞的增殖，诱导其凋亡，且呈时间、剂量依赖性，其机理可能与其下调细胞内COX-2蛋白表达有关。     

外源性IL-6对胆管癌细胞的抗凋亡作用及其对Bcl-2 mRNA的调控

目的观察外源性IL-6对胆管癌细胞系QBC939凋亡及对Bcl-2 mRNA表达的影响。方法用MTT法检测外源性IL-6对胆管癌细胞QBC939的促增殖作用;通过annexin V/FITC和PI染色、流式细胞分析检测外源性IL-6对QBC939细胞凋亡的影响,RT-PCR测定Bcl-2 mRNA的表达。结果外源性IL-6能刺激QBC939细胞增殖,且QBC939细胞增殖与IL-6浓度呈正相关(r=1);外源性IL-6处理后,凋亡率显著低于对照组(P0.05),外源性IL-6处理细胞后Bcl-2 mRNA显著高于对照组(P0.05)。结论外源性IL-6在一定剂量范围内促进QBC939细胞生长,并抑制QBC939细胞凋亡;而此作用可能与上调Bcl-2 mRNA表达有关。     

STAT3基因短发卡RNA表达质粒的构建及其对胃癌细胞生长和侵袭的抑制作用

目的 构建信号传导及转录活化因子3(STAT 3)基因短发夹RNA(shRNA)表达质粒,探讨STAT 3抑制后对胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法 根据STAT 3 Mrna 编码序列,设计RNA干扰靶点,构建STAT 3基因的特异性小RNA干扰质粒(psiRNA-H1/STAT 3),使用脂质体转染MKN-45细胞,实验分为对照组、psiRNA-H1转染组和psiRNA-H1/STAT 3转染组.通过RT-PCR和Western blot检测STAT 3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT 3 Mrna和蛋白表达的影响; MTT比色法检测细胞的生长抑制率; 采用流式细胞术检测转染后对MKN-45细胞凋亡的影响; 采用Boyden小室侵袭实验检测转染后MKN-45细胞侵袭力的变化.结果 成功转染重组体的MKN-45细胞中STAT 3 Mrna和蛋白表达明显下降(P＜0.05).psiRNA-H1/STAT 3转染组各时相均明显抑制MKN-45细胞生长,且MKN-45细胞凋亡率为34.26%,相比对照组(3.75%)和psiRNA-H1转染组(4.43%)明显升高(P＜0.01).另外,psiRNA-H1/STAT 3转染组MKN-45细胞侵袭力较另外2组明显减弱(P＜0.01).结论 成功构建了针对STAT 3基因的shRNA表达载体,通过转染MKN-45细胞,在体外能有效抑制人胃癌细胞STAT 3 Mrna和蛋白表达,细胞增殖、侵袭能力减弱并且促进细胞凋亡,为STAT 3基因靶向治疗提供一定的实验依据.