吴茱萸碱和吴茱萸次碱电喷雾-离子阱质谱裂解途径研究

目的:对吴茱萸碱和吴茱萸次碱的电喷雾质谱裂解机制进行研究。方法:在电喷雾离子源,正、负离子模式下,分析吴茱萸碱和吴茱萸次碱的一级和多级质谱图。结果:解析了吴茱萸碱和吴茱萸次碱多级质谱碎片,在正负离子模式下,主要发生Rretro-Diels-Alder(RDA)裂解。结论:吴茱萸碱和吴茱萸次碱的ESI-MS质谱裂解途径可为吲哚类生物碱的成分研究提供数据参考。     

防己诺林碱阻断自噬抑制H1N1病毒感染的研究

目的 探索防己诺林碱在细胞水平抗H1N1病毒的作用,阐明防己诺林碱调控细胞自噬抑制H1N1病毒复制的分子机制。方法 CCK-8法检测0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0、20.000 0、40.000 0、60.000 0μmol·L^-1的防己诺林碱对MDCK细胞活力的影响;MDCK细胞设置对照组、模型组和防己诺林碱(2.5、5.0、10.0μmol·L^-1)组,除对照组外,以感染复数(MOI)为0.1的H1N1病毒感染MDCK细胞,加入防己诺林碱共同孵育12 h,同时设置防己诺林碱(10.0μmol·L^-1)与病毒共同孵育4、8 h组,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR,检测HIN1 mRNA表达)和Western blotting[H1N1病毒核蛋白(NP)]检测防己诺林碱对病毒复制的抑制作用;PI/Hoechst 33342染色检测防己诺林碱(10.0μmol·L^-1)对MDCK细胞死亡的影响;qRT-PCR法检测防己诺林碱检测防...     

防己诺林碱抑制黑色素瘤的增殖转移

目的观察防己诺林碱对黑色素瘤细胞生长转移的影响。方法通过MTT实验,观察不同浓度防己诺林碱对A375细胞增殖的影响;利用Transwell实验,检测不同浓度防己诺林碱对A375细胞转移功能的影响。通过Western blot和RT-PCR,检测防己诺林碱对A375生长转移相关蛋白的影响。结果防己诺林碱可以抑制黑色素瘤细胞A375的增殖转移。10、20、40μM/L防己诺林碱处理A375细胞后,对其增殖的抑制率分别为43.81%±1.53%、48.64%±4.65%、50.69%±4.99%。20、40μM/L防己诺林碱处理A375细胞作用24 h后,对其转移的抑制率分别为14.95%±4.31%、33.03%±5.46%。防己诺林碱显著抑制细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、CDK4、CDK6、基质金属蛋白酶-2(MMP2)的表达(P<0.05)。结论防己诺林碱能显著抑制A375细胞的增殖转移,可作为治疗黑色素瘤的潜在化疗药物进行深入研究。     

高效液相色谱法同时测定复方防己颗粒中粉防己碱和防己诺林碱的含量

目的：研究一种能同时准确测定复方防己颗粒中的粉防己碱和防己诺林碱的方法。方法：采用高效液相色谱法测定粉防己碱和防己诺林碱的含量；色谱柱ZorbaxsbCl。柱；流动相为甲醇-乙腈-0．002moL&#183;L^-1。“磷酸二氢钾-乙二胺（55：25：20：0．06），流速1．0mL&#183;min，柱温为室温，检测波长为230nm，进样量为20μL,结果：本法可以准确测定复方防己颗粒中的粉防己碱和防己诺林碱，精密度、回收率、稳定性均符合要求。结论：该方法能同时测定复方防己颗粒中的粉防己碱和防己诺林碱的含量，方法简单、快速、灵敏度高，可用于复方防己颗粒的质量控制。     

防己诺林碱阻断自噬抑制 H1N1病毒感染的研究

目的 探索防己诺林碱在细胞水平抗H1N1病毒的作用,阐明防己诺林碱调控细胞自噬抑制H1N1病毒复制的分子机制。方法 CCK-8法检测0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0、20.000 0、40.000 0、60.000 0 μmol·L^-1的防己诺林碱对MDCK细胞活力的影响;MDCK细胞设置对照组、模型组和防己诺林碱（2.5、5.0、10.0 μmol·L^-1）组,除对照组外,以感染复数（MOI）为0.1的H1N1病毒感染MDCK细胞,加入防己诺林碱共同孵育12 h,同时设置防己诺林碱（10.0 μmol·L^-1）与病毒共同孵育4、8 h组,通过实时荧光定量PCR （qRT-PCR,检测HIN1 mRNA表达）和Western blotting ［H1N1病毒核蛋白（NP）］检测防己诺林碱对病毒复制的抑制作用;PI/Hoechst 33342染色检测防己诺林碱（10.0 μmol·L^-1）对MDCK细胞死亡的影响;qRT-PCR法检测防己诺林碱检测防己诺林碱预处理、病毒感染早期药物处理、病毒感染晚期药物处理以及吸附和进入阶段给药对病毒复制的影响;MDCK细胞转染EGFP-LC3或EGFP-mCherry-LC3双荧光质粒,观察防己诺林碱对EGFP-LC3的荧光强度、EGFP-mCherry-LC3共定位的影响,设置自噬诱导剂雷帕霉素（0.5 μmol·L^-1）、自噬晚期抑制剂氯喹（10 μmol·L^-1）、巴佛洛霉素A1 （100 nmol·L^-1）对照。转染过EGFP-LC3质粒的MDCK细胞感染H1N1病毒,免疫荧光检测防己诺林碱对LC3与胞内的病毒NP蛋白共定位的影响;体外培养A549细胞,以MOI为0.1的H1N1病毒感染,Western blotting检测防己诺林碱对LC3II/LC3I蛋白表达的影响。结果 防己诺林碱对MDCK细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为40.19 μmol·L^-1 ;与模型组比较,防己诺林碱以浓度相关性的方式抑制HIN1 mRNA表达,以浓度和时间相关性的方式抑制NP蛋白表达（P＜0.01、0.001）;显著减少H1N1诱导的细胞死亡（P＜0.001）;抑制H1N1病毒进入过程。与对照组比较,防己诺林碱处理诱导LC3荧光聚集,诱导EGFP-LC3和mCherry-LC3双荧光共定位显著增加（P＜0.001）。与模型组比较,防己诺林碱处理明显减少NP的荧光数量（P＜0.001）,同时造成LC3荧光积累并与胞内的病毒NP蛋白共定位;引起LC3II积累（P＜0.01、0.001）。结论 防己诺林碱同氯喹和巴佛洛霉素A1一致,阻断自噬途径,使病毒粒子在自噬体内滞留,破坏病毒生命周期。     

HPLC法测定风痛安胶囊中粉防己碱和防己诺林碱的含量

目的建立风痛安胶囊中粉防己碱和防己诺林碱含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C18;流动相：甲醇-乙腈-0.03mol·L^-1磷酸二氢钾溶液-二乙胺（55∶25∶20∶0.05）;检测波长230nm。结果粉防己碱、防己诺林碱进样量分别在0.1355～2.7100μg（r=0.9999）,0.1033～2.0660μg（r=0.9999）范围内线性关系良好。粉防己碱、防己诺林碱平均回收率分别为98.02%（RSD=1.31%）,97.11%（RSD=1.42%）。结论本方法简便,专属,重复性好,可用于该制剂的质量控制。     

RP-HPLC测定舒肝饮丸中粉防己碱与防己诺林碱的含量

舒肝饮丸为我院自制制剂，由防己等9味中药组成，临床用于治疗慢性肝炎、肝硬化等疗效确切。防己为该制剂主要药物之一，含有粉防己碱（tetrandrine）和防己诺林碱（fangchinoline）等有效成分，高效液相色谱法测定防己及其他制剂中粉防己碱和防己诺林碱含量已有报道田。笔者用甲醇超声提取，采用高效液相色谱法测定舒肝饮丸中粉防己碱和防己诺林碱的含量，为该制剂的质量控制提供简便、快速、准确的测定方法。     

高效液相色谱法测定防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量

目的用高效液相色谱法测定不同产地防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量。方法色谱柱为Kromasil ODS-1（4．6mm×200mm，5μm），流动相为乙腈0．01％三乙胺水溶液，梯度洗脱，流速为1．0mL·min^-1，检测波长为280nm。结果粉防己碱在474-4740ng内线性关系良好，r=0．9999，平均回收率为99．3％，RSD=1．5％；防己诺林碱在238-2380ng线性关系良好，r=0．9998，平均回收率为99．5％，RSD=1．1％。结论建立了高效液相色谱法同时测定防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量，比较了不同产地防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量。     

运用量子化学方法解析大黄酚ESI-ITMSn中质谱行为

目的:研究大黄酚及其主要碎片离子在电喷雾-离子阱多级质谱(ESI-ITMSn)中的质谱行为。方法:获取大黄酚分子的一级质谱和多级质谱碰撞诱导解离下的碎片离子,运用量子化学方法计算质谱碎片离子的几何参数、键断裂能、电荷变化以及自旋密度,探讨碎片离子的断裂位点。结果:获得m/z:252.9、237.9、224.9、209.9、196.9、181.9、180.9、168.9、153.1离子的稳定构型,推断出大黄酚质谱裂解途径。结论:计算结果与CIDMS所推断的裂解规律相吻合,成功地解释了大黄酚分子在ESI-ITMSn中裂解现象。     

复方汉防己颗粒中防己的成分鉴别及含量测定

目的建立复方汉防己颗粒中主药防己有效成分粉防己碱和防己诺林碱的鉴别和含量测定方法。方法采用薄层色谱法对粉防己碱和防己诺林碱进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对其进行定量检测。结果薄层鉴别斑点清晰,阴性对照无干扰。含量测定粉防己碱在5．4～43．2mg·L^-1浓度范围内线性关系良好（r=0．9998,n=5）,平均加样回收率为98．43％,RSD为0．88％（n=9）;防己诺林碱在3．0-24．0mg·L^-1浓度范围内线性关系良好（r=0．9996,n=5）,平均加样回收率为98．68％,RSD为0．91％（n=9）。结论本方法操作简单、灵敏准确、重复性好,可用于复方汉防己颗粒中主药防己的成分鉴别及含量测定。     

抗肿瘤药米铂的一种新合成方法及结构表征

目的 合成抗肿瘤新药米铂。方法 以顺式- (1R,2R)-1, 2-环己二胺-二碘合铂(II)为起始原料,先将顺式- (1R,2R)-1, 2-环己二胺-二碘合铂(II)与硫酸银水解成含有硫酸根的水合物溶液,然后与八水氢氧化钡反应生成顺式- (1R,2R)-1,2-环己二胺-二羟基合铂(II)的水溶液,最后与正十四碳酸的正丁醇溶液反应合成米铂。采用元素分析、质谱、红外光谱、核磁共振氢谱和热分析对其结构进行表征。结果与结论 合成的化合物结构与标题化合物一致,收率约68%。该方法便于操作,收率高,可做进一步研究。     

Study on the Fragmentation Pathway of the Aconitine-Type Alkaloids under Electrospray Ionization Tandem Mass Spectrometry Utilizing Quantum Chemistry

Objective

With the aim of developing a rapid and sensitive method for the relative molecular mass and the fragmentation pathway of target compounds without complicated experiments, we combined mass spectrometry (MS) with quantum chemistry to analyze protonated molecules and fragmentation pathway of target compounds.

Methods

In this study, aconitine, mesaconitine, hypaconitine, benzoylaconine, benzoylmesaconine, and benzoylhypaconine were investigated by electrospray ionization multi-stage mass spectrometry, and the lost sequence of four CH₃OH molecules was studied using quantum chemistry.

Results

The results showed that the typical neutral losses correspond to the molecules CO, CH₃OH, H₂O, –C₆H₅CO, and –CH₃, and so the lost sequence of four methoxyl groups and the structures of more fragmentation ions were identified for the first time.

Conclusions

The study demonstrated that the method of MS coupled with quantum chemistry can be used to estimate the fragmentation pathway of compounds quickly and conveniently.     

加合钠离子的血管紧张素转换酶抑制剂类化合物的质谱分析

目的 建立在加合钠离子条件下血管紧张素转换酶抑制剂类化合物质谱鉴定和分析的新方法。 方法 电喷雾离子阱质谱,注射泵直接进样。 结果 在加合钠离子的条件下,都出现了特殊的重排离子,通过对碎裂离子的分析,总结了这类化合物在加合钠离子的条件下的质谱碎裂特征。 结论 采用解析加合钠离子的准分子离子碎裂途径的方法,有助于对这类化合物的结构推断。     

A fragmentation study on four C19-diterpenoid alkaloids by electrospray ionization ion-trap time-of-flight tandem mass spectrometry

High-resolution electrospray ionization ion-trap time-of-flight tandem mass spectrometry (HR-ESI-IT-TOF-MSⁿ) in positive-ion mode was used to determine the accurate masses and fragmentation pathways of four C₁₉-diterpenoid alkaloids, aconitine (1), yunnaconitine (2), crassicauline A (3), and benzoylmesaconine (4). The [M+H]⁺ ions of compounds 1–4 were readily observed in conventional single-stage mass spectrometry. Based on the MS^1–6 analyses, detailed fragmentation rules of the four compounds were proposed. The neutral losses of AcOH, MeOH, H₂O, CO, C₂H₄, PhCOOH and p-OMePhCOOH segments were the characteristic eliminations from the precursor ions due to the presence of acetyl, methoxyl, hydroxyl, N-ethyl, benzoyl and p-methoxyl-benzoyl units in the structures. Benefited from the high resolution of the mass analyzer, the loss of 28 Da corresponding to CO or CH₄ segment in product ions was unambiguously distinguished. The losing sequence of the main substituent groups was summarized as: C(8)-acetyl>C(16)-methotyl>C(15)-hydroxyl>C(6)-methoxyl>C(1)-methoxyl/C(3)-hydroxyl>C(18)-methoxyl>>C(13)-hydroxyl. The sequential loss of (16)-methoxyl moiety and CO (generating from enol–ketone tautomerism) groups could be recognized as the characteristic eliminations for the compounds with C(16)-methoxyl and C(15)-hydroxyl groups simultaneously. The application of HR-ESI-IT-TOF-MSⁿ technique to investigate the fragmentation of C₁₉-diterpenoid alkaloids provided useful information to understand their fragmentation behaviors.     

抗肿瘤药米铂的合成工艺改进

目的 改进抗肿瘤药米铂的合成工艺。方法 以顺式-二碘-(1R,2R)-1, 2-环己二胺合铂(II)为起始原料,将顺式-二碘- (1R,2R)-1, 2-环己二胺合铂(II)与硝酸银水解合成含有硝酸根的水合物溶液,然后与阴离子树脂交换生成顺式-二羟基- (1R,2R)-1,2-环己二胺合铂(II)的水溶液,再与正十四碳酸的正丁醇溶液反应合成米铂。采用元素分析、质谱、红外光谱、核磁共振氢谱、热分析和比旋光度对其结构进行表征。结果与结论 合成的化合物结构与标题化合物一致,收率约75%。该方法便于操作,收率高。     

液质联用法测定奶粉中单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)的含量

目的建立奶粉中单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)的含量测定方法。方法通过有机溶剂提取和C18SPE小柱对样品进行处理,采用RP-HPLC与MS联用法测定。色谱柱为Waters C4300A柱(2.1 mm×100 mm,3.5μm),流动相为乙酸铵-甲醇溶液,梯度洗脱,MS检测器选用负离子SIR模式。结果分析测定无干扰,GM1质量浓度在0.500~50.0μg.L-1内与峰面积呈良好的线性关系,定量限为0.500μg.L-1,批内与批间RSD均小于5%,回收率在94.4%~113.8%内。结论该法专属性强、灵敏度高、结果准确、重现性好,适用于奶粉中GM1的定量分析。     

六甲溴铵阻断交感神经元烟碱受体的机理

使用膜片钳全细胞记录技术，观察了六甲溴铵(C₆)对培养新生大鼠颈上交感节(SCG)神经元烟碱受体的阻断作用，并对其作用机理进行了研究. 本实验发现C₆对神经元烟碱受体的抑制作用具有明显的浓度依赖性和电压依赖性，可明显加速烟碱受体的失敏，提示C₆主要以阻断受体开放离子通道的方式拮抗烟碱受体.     

Sulfuric Acid-Induced Airway Hyperresponsiveness

Sulfuric Acid-Induced Airway Hyperresponsiveness. GEARHART,J.M., AND SCHLESINGER, R.B. (1986). Fundam. Appl. Toxicol. 7,681–689. Rabbits were exposed to submicroraeter sulfuricacid (H₂SO₄) mist at 250 µg/m³ for 1 hr/day, 5 days/weekfor 4, 8, or 12 months in order to examine the effects on bronchialresponsiveness, which was assessed at the end of each exposureseries by administration (iv) of doubling doses of acetylcholineand measurement of pulmonary resistance (RL). Dynamic compliance(C_dyn) and respiratory rate (f) were also measured followingagonist challenge. Animals exposed for 4 months showed increasedsensitivity to acetylcholine (dose required to produce a 150%increase in R_L), and there was an increase in reactivity (slopeof dose vs change in R_L) by 8 months, with a leveling off ofthe response after this time. No changes in C_cyn or/were notedat any time. Thus, repeated exposures to H₂SO₄ resulted in theproduction of hyperresponsive airways in previously healthyanimals. This has implications for the role of nonspecific irritantsin the pathogenesis of airway disease.     

黄芪总提物对肝细胞凋亡的抑制作用

为研究黄芪总提物 (TEA)对肝细胞凋亡的保护作用及其机理 ,分别用D 氨基半乳糖 (D GalN ,70 0mg·kg- 1,ip) +脂多糖 (LPS ,1μg·kg- 1,ip)诱导小鼠在体肝细胞凋亡和H2 O2 (0 .1mmol·L- 1,1h)诱导原代培养大鼠肝细胞凋亡 ,采用形态学观察 ,DNA凝胶电泳和流式细胞术等方法检测细胞凋亡 .结果表明 :①TEA (40mg·kg- 1,ig× 2 ,5h)使D GalN +LPS升高的小鼠血中肿瘤坏死因子 (TNF)水平和肝脏丙二醛 (MDA)含量降低 ,以及使降低的肝线粒体锰 超氧化物歧化酶 (Mn SOD)活性升高 ;TEA可明显抑制D GalN +LPS引起的小鼠肝细胞皱缩变小 ,核染色质凝聚和DNA片段化 .②TEA (2 0mg·L- 1)可恢复或减轻由H2 O2 所致肝细胞增殖受抑和肝细胞MDA含量升高 ;TEA (40mg·L- 1)可使H2 O2 致DNA较强的AO荧光染色变淡 ,TEA(2 0mg·L- 1)对H2 O2 所致的DNA片段化有抑制作用 ,使H2 O2 升高的大鼠肝细胞DNA亚G1峰 (即凋亡峰 )明显降低 ,经DNA软件分析 ,TEA可使H2 O2 升高的细胞凋亡率从 6 3.7%降至 4 .2 % .提示 ,TEA对体内外肝细胞凋亡均有保护作用 ,其抗肝损伤作用可能与其抗凋亡和抗氧化作用有关     

Characterization and determination of the major constituents in Belamcandae Rhizoma by HPLC-DAD-ESI-MS(n)

Belamcandae Rhizoma, derived from the rhizome of Belamcanda chinensis (L.) DC., has been used as traditional Chinese medicine for the treatment of coughing and pharyngitis. However, there have been few studies dealing with the systematic analysis of the bioactive constituents in Belamcandae Rhizoma. In this work, high performance liquid chromatography-diode array detection-electrospray ionization multiple-stage mass spectrometry (HPLC-DAD-ESI-MSⁿ) combined with liquid chromatography-time of flight-mass spectrometry (HPLC-TOF/MS) was established for profiling and characterization of multi-constituent in Belamcandae Rhizoma. The ESI-MSⁿ fragmentation behaviors of the authentic references were proposed for aiding the structural identification of components in the extract. Thirty-five flavonoids, including 30 isoflavones and five xanthones, were identified or tentatively identified by comparing their retention times, UV and MS spectra with those of authentic compounds or literature data. Twelve of the identified compounds (neomangiferin, mangiferin, tectoridin, iristectorin B, iristectorin A, iridin, tectorigenin, iristectorigenin A, irigenin, irisflorentin, irilone and dichtomitin) were determined by HPLC-DAD using a C₁₈ column. The results indicated that the developed analysis method could be employed as a rapid, effective technique for structural characterization of chemical constituents in herbal medicine. This work is expected to provide comprehensive information for the quality evaluation of Belamcandae Rhizoma, which would be a valuable reference for the further study and development of this herb and related medicinal products.