LncRNA CBR3-AS1调节miR-409-3p/hnRNPA2B1轴对肝细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨长链RNA CBR3-AS1(LncRNA CBR3-AS1)靶向微小RNA-409-3p(miR-409-3p)/核不均一核糖核蛋白A2B1(hnRNPA2B1)轴对肝细胞癌(HCC)细胞恶性生物学行为的影响。方法 qRT-PCR法分析肝癌组织中LncRNA CBR3-AS1和miR-409-3p表达水平。双荧光素酶检测LncRNA CBR3-AS1和miR-409-3p及hnRNPA2B1和miR-409-3p的靶向关系。将Hep G2细胞分为si-NC组、si-CBR3-AS1组、si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组、si-CBR3-AS1+anti-miR-409-3p组、miR-NC组、miR-409-3p mimics组、miR-409-3p mimics+pcDNA组、miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1组。平板克隆检测细胞增殖；Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡；划痕实验检测细胞迁移；Transwell实验检测细胞侵袭；Western blot分析法检测细胞核增殖抗原标记物(Ki67)、细胞周期负调控因子(P21)、...     

不同浓度锰处理对甘草SQS1基因表达及其甘草酸含量影响的分析

以一年生甘草移栽苗为实验材料,设置5个锰离子浓度水平,分别为0、1.81、18.1、36.2和54.3 mg·L-1(Mn SO4·H2O),利用实时荧光定量PCR和高效液相色谱方法对甘草鲨稀合成酶1(SQS1)基因相对表达量和甘草酸含量进行测定,从而探讨锰处理对甘草SQS1基因表达量与甘草酸积累的影响。结果表明随着锰处理浓度的增加,甘草SQS1基因的相对表达量和甘草酸含量均呈现先升高后下降的趋势,且两者之间存在极显著正相关(P<0.01,r=0.737)。SQS1基因表达量在18.1 mg·L-1浓度处理时达到最大值为7.90,分别是对照(0 mg·L-1)、1.81、36.2和54.3 mg·L-1处理的1.75、1.37、1.37和2.33倍,且差异极显著(P<0.01)。甘草酸含量在1.81和18.1 mg·L-1浓度处理时达到最大值,且两者之间差异不显著(P>0.05),与其他3个处理间存在极显著差异(P<0.01)。本研究说明适量浓度的锰处理对甘草SQS1基因的表达和甘草酸的积累具有一定的促进作用。     

温度胁迫下泽泻中三萜类成分及其生物合成酶基因的相关性研究

目的 研究温度胁迫下泽泻中三萜类成分及其生物合成酶基因表达的相关性。方法 以不同温度（0℃、6℃、16℃,26℃）栽培下的泽泻为研究对象,采用UPLC-MS/MS法检测泽泻叶片中8种三萜类成分泽泻醇A、泽泻醇B、泽泻醇F、泽泻醇G、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、24-乙酰泽泻醇F的含量及总量,并采用qRT-PCR技术检测三萜类合成途径中生物合酶HMGR、SQS、FPPS、MVD的mRNA水平。结果 泽泻叶片中23-乙酰泽泻醇B及8种三萜类成分总量与SQS、HMGR基因的mRNA水平呈正相关（P <0.05）;而FPPS及MVD基因在不同温度干预下mRNA水平无显著性变化（P >0.05）。结论 SQS、HMGR可能是泽泻中三萜类成分合成的限速酶,且其表达受到环境温度的调节,为泽泻药材质量的调控提供了理论依据。     

CYP3A5、UGT1A1、UGT2B7基因多态性与肾移植受者 他克莫司血药浓度的相关性研究

目的:探讨CYP3A5、UGT1A1、UGT2B7基因多态性与肾移植受者他克莫司血药浓度的相关性.方法:共纳入124例肾移植术后采用他克莫司十霉酚酸酯+泼尼松三联治疗方案的患者.采用酶放大免疫测定法(Emit)检测他克莫司血药浓度;采用实时荧光定量PCR方法和Taqman基因分型技术测定CYP3A5*3、UGT1A1*6、UGT2B7*3、UGT1A1*28、UGT2B7*2基因多态性;应用Kruskal-Wallis H检验法分析5个SNPs基因多态性与他克莫司血药浓度的相关性.结果:CYP3A5*3突变型的他克莫司血药浓度GG/AG(7.75±2.56)/(6.75±1.85) ng· mL-1显著高于野生型AA (5.00±1.81)ng·mL-1 (P＜0.01);UGT1A1*6基因型GG/AG的血药浓度分别为(7.15±2.72)/(6.74±1.81)ng·mL-1,显著高于基因型AA(4.45±0.49)ng·mL-1(P=0.022).UGT2B7*3基因型GG/GT的血药浓度分别为(7.00±1.95)、(7.48±2.22)ng·mL-1,显著高于基因型TT(6.78+3.00)ng·mL-1(P=0.014).UGT1A1*28与UGT2B7*2基因多态性与他克莫司血药浓度无显著相关性(P＞0.05).结论:他克莫司血药浓度与CYP3A5*3、UGT1A1*6、UGT2B7*3基因多态性相关.     

LncRNA PSMA3-AS1调节miR-140-3p/DDX5轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的 探讨长链非编码RNA人蛋白酶体α亚基3型的反义RNA1(PSMA3-AS1)调节miR-140-3p/DEAD box p68 RNA解旋酶(DDX5)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 qRT-PCR、Western blot、免疫组化法分别检测40例肺癌组织和细胞系中PSMA3-AS1、miR-140-3p、DDX5表达。将A549细胞分为：control组、si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+inhibitor-NC组、si-PSMA3-AS1+miR-140-3p inhibitor组,qRT-PCR检测转染效率;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及DDX5蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与PSMA3-AS1和DDX5的关系;构建肺癌裸鼠模型,分为si-NC...     

骨髓间充质干细胞与成骨细胞复合培养对成骨细胞增殖的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)与成骨细胞复合培养对成骨细胞增殖的影响。方法将BMSCs与成骨细胞分别按1∶2、1∶4、1∶1、2∶1和4∶1比例复合培养(分别为A1组、A2组、A3组、A4组和A5组);另设成骨细胞培养组(B1组)和BMSCs培养组(B2组)为对照。流式细胞术检测复合培养组的细胞比例;细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定所有细胞培养组的生长曲线;RT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)及Ⅰ型胶原mRNA表达。结果 BMSCs与成骨细胞复合培养能促进成骨细胞增殖,以A2组效果最好,明显大于B1组(P<0.05);而A2组ALP及Ⅰ型胶原mRNA表达与B1组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BMSCs与成骨细胞复合培养能促进成骨细胞增殖,其中1∶4比例最佳。     

芬太尼通过 ILF3-AS1/miR-132对卵巢癌细胞生长和转移的影响

目的探讨芬太尼对卵巢癌细胞生长和转移的影响及分子机制。方法 2018年 8月至 2019年 10月,体外培养卵巢癌细胞 A2780,用浓度分别为 0、0.5、5、50、500 ng/mL的芬太尼处理,作为不同浓度芬太尼处理组。将过表达的白细胞介素增强结合因子 3反义 RNA1(ILF3-AS1)(pcDNA3.1-ILF3-AS1、对照 pcDNA3.1)、抑制微小 RNA(miRNA/miR)-132表达(抗 -miR-132、对照 anti-miR-NC)的载体分别转染 A2780细胞,并以 500 ng/mL芬太尼处理,记为芬太尼 500+pcDNA3.1-ILF3-AS1组、芬太尼 500+pcDNA3.1组、芬太尼 500+anti-miR-132组、芬太尼 500+anti-miR-NC组。将 pcDNA3.1、pcDNA3.1-ILF3-AS1、si-NC、si-ILF3AS1转染至 A2780细胞中,记为 pcDNA3.1组、 pcDNA3.1-ILF3-AS1组、 si-NC组、 si-ILF3-AS1组。四甲基偶氮唑盐比色法( MTT)检测细胞存活率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数; Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测 ILF3-AS1和 miR-132的表达水平;荧光素酶报告实验检测 ILF3-AS1和 miR-132的靶向关系。结果与 0 ng/mL芬太尼处理组相比, 5、50、500 ng/mL的芬太尼处理的 A2780中 miR-132表达水平显著升高［( 1.39±0.13)、(1.68±0.17)、(2.34±0.23)比( 1.00±     

LncRNA PSMA3-AS1调控miR-27b-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)人蛋白酶体α亚基3型反义RNA1(PSMA3-AS1)通过调控微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响。方法 选取20例非小细胞肺癌标本和20例健康志愿者肺部上皮样本。购买人体正常的肺部上皮细胞H1299、H358、A549及NC-LH2073.采用实时荧光RT-PCR检测LncRNA PSMA3-AS1、miR-27b-3p表达,构建抑制LncRNA PSMA3-AS1表达的A549细胞,采用MTT法、流式细胞仪、Transwell检测细胞增殖、凋亡、迁移情况,Western Blot法检测细胞周期蛋白-D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化。结果 与人体正常肺上皮组织相比,非小细胞肺癌组织中LncRNA PSMA3-AS1表达升高,miR-27b-3p表达下降(P<0.05)。与BEAS-2B组相比,H1299组、H358组、NC-LH2073组、A549组中LncRNA PSMA3-AS1水平上升,miR-27b-3p水平降...     

悬浮红细胞与新鲜冰冻血浆在创伤大输血患者输血过程中的应用

目的 探讨悬浮红细胞(SRBC)与新鲜冰冻血浆(FFP)在创伤大输血患者输血过程中的应用价值。方法 选取我院2019年4月至2021年1月创伤大输血患者146例进行回顾性分析,均行悬浮红细胞与新鲜冰冻血浆输注,根据输注比例不同分为3组。A组(n=51)选择FFP∶SRBC=1∶1.5比例输注,B组(n=49)选择FFP∶SRBC=1∶2.5比例输注,C组(n=46)选择FFP SRBC=1∶4比例输注,比较3组输注前及输注24 h凝血功能[纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)]、钙离子(Ca²⁺)、钾离子(K⁺)、不良反应。结果 输注24 h A组FIB、TT、APTT、PT与输注前比较差异无统计学意义(P>0.05);B组、C组FIB水平低于输注前,TT、APTT、PT高于输注前(P<0.05);输注24 h后3组FIB、TT、APTT、PT比较差异有统计学意义,且A组FIB水平最高,TT、APTT、PT最短(P<0.05);输注24 h后3组Ca^2+<...     

SLCO1A2、SLCO2B1及SLCO1B1的单核苷酸多态性与丙戊酸抗癫痫疗效的相关性研究北大核心CSCD

目的考察转运体基因溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1A2(SLCO1A2)、SLCO2B1及SLCO1B1的单核苷酸多态性(SNPs)与丙戊酸抗癫痫疗效的相关性。方法纳入单用丙戊酸的癫痫患者,根据随访期内的发作控制情况将患者分为有效控制组和未有效控制组。用MassARRAY平台对患者SLCO1A2 rs4149000、SLCO2B1 rs2306168、SLCO2B1 rs12422149及SLCO1B1 rs4149056进行基因分型,分析不同基因型与丙戊酸抗癫痫疗效的关系。结果SLCO1A2 rs4149000 CC/CT+TT基因型在有效控制组和未有效控制组的分布分别为102/26和48/4;在共显性模型下,SLCO2B1 rs12422149 GG/GA/AA基因型在有效控制组和未有效控制组的分布分别为61/50/17和33/19/0;同时,SLCO1B1 rs4149056 TT/TC/CC基因型在有效控制组和未有效控制组的分布分别为92/32/4和48/4/0,以上基因型在有效控制组和未有效控制组中的分布差异均有统计学意义(均P<0.05)。其中,rs12422149和rs4149056被纳入多因素Logistic回归方程,rs12422149 GG型(OR=2.295,P<0.05)及rs4149056 TT型(OR=5.201,P<0.05)患者丙戊酸疗效较差,2个位点共同解释59.6%的丙戊酸耐药的个体差异。结论SLCO2B1 rs12422149野生型(GG型)和SLCO1B1 rs4149056野生型(TT型)更容易发生丙戊酸耐药。     

蒙古族儿童过敏性紫癜与HLA—A基因的关联性

目的探索内蒙地区蒙古族儿童过敏性紫癜（AP）与HLA-A基因的关联性。可望找出相关基因,以探寻其部分发病机理及防治前景。方法采用病例对照研究策略,引入PCR—SSO技术,在祖籍三代居住内蒙地区,无血缘关系,无与异族通婚史及其他免疫性疾病史和家族史的蒙古族人群中,选择儿童AP病例组56例和健康儿童对照组66名,作HEA-A等位基因的型别分析。基因频率比较在单因素四格表X。或Fisher检验的基础上,作以Logistic多因素回归。结果病例组HLA-A$11基因频率为16．1％,与对照组的9．1％比较,Wald为3．954,P为0．047,差异有统计学意义。B为0．844〉0,OR为2．325〉1,促进发病,其95％可信区间为1．012—5．340,其内不包含1,与P意义相符,有统计学意义。EF为0．342〉0。结论HLA-A＊11等位基因可能是内蒙地区蒙古族儿童AP发病单体型中的一个遗传易感基因。     

Lead nitrate-induced development of hypercholesterolemia in rats: sterol-independent gene regulation of hepatic enzymes responsible for cholesterol homeostasis

Changes in the gene expressions of hepatic enzymes responsible for cholesterol homeostasis were examined during the process of lead nitrate (LN)-induced development of hypercholesterolemia in male rats. Total cholesterol levels in the liver and serum were significantly increased at 3-72 h and 12-72 h, respectively, after LN-treatment (100 micromol/kg, i.v.). Despite the development of hypercholesterolemia, the genes for hepatic 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase (HMGR) and other enzymes (FPPS, farnesyl diphosphate synthase; SQS, squalene synthase; CYP51, lanosterol 14alpha-demethylase) responsible for cholesterol biosynthesis were activated at 3-24 h and 12-18 h, respectively. On the other hand, the gene expression of cholesterol 7alpha-hydroxylase (CYP7A1), a catabolic enzyme of cholesterol, was remarkably suppressed at 3-72 h. The gene expression levels of cytokines interleukin-1beta (IL-1beta) and TNF-alpha, which activate the HMGR gene and suppress the CYP7A1 gene, were significantly increased at 1-3 h and 3-24 h, respectively. Furthermore, gene activation of SREBP-2, a gene activator of several cholesterogenic enzymes, occurred before the gene activations of FPPS, SQS and CYP51. This is the first report demonstrating sterol-independent gene regulation of hepatic enzymes responsible for cholesterol homeostasis in LN-treated male rats. The mechanisms for the altered-gene expressions of hepatic enzymes in LN-treated rats are discussed.     

Enhancing production of ergosterol in Pichia pastoris GS115 by over-expression of 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase from Glycyrrhiza uralensis

The rate-limiting enzyme in the mevalonic acid (MVA) pathway which can lead to triterpenoid saponin glycyrrhizic acid (GA) is 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase (HMGR). In order to reveal the effect of copy number variation in the HMGR gene on the MVA pathway, the HMGR gene from Glycyrrhiza uralensis Fisch. (GuHMGR) was cloned and over-expressed in Pichia pastoris GS115. Six recombinant P. pastoris strains containing different copy numbers of the GuHMGR gene were obtained and the content of ergosterol was analyzed by HPLC. The results showed that all the recombinant P. pastoris strains contained more ergosterol than the negative control and the strains with 8 and 44 copies contained significantly more ergosterol than the other strains. However, as the copy number increased, the content of ergosterol showed an increasing–decreasing–increasing pattern. This study provides a rationale for increasing the content of GA through over-expressing the GuHMGR gene in cultivars of G. uralensis.KEY WORDS: Glycyrrhiza uralensis Fisch., 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase gene, Over-expression, Pichia pastoris, Copy number variationAbbreviations: BMGY, buffered glycerol-complex medium; BMMY, buffered methanol-complex medium; CNV, copy number variation; HMGR, 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase; LOD, limit of detection; LLOQ, lower limit of quantitation; MD, minimal dextrose medium; MM, minimal medium; MVA, mevalonic acid; PCR, polymerase chain reaction; RSD, relative standard deviation; YPD, yeast peptone dextrose medium     

HMG-CoA还原酶和FPP合酶基因拷贝数对紫穗槐-4,11-二烯酵母工程菌产量的影响

从青蒿中克隆了紫穗槐-4,11-二烯合酶基因(ADS)，从酿酒酵母中克隆了HMG-CoA还原酶(HMGR)催化结构域和FPP合酶(FPPS)基因。构建含ADS基因的酿酒酵母表达载体pYeDP60/G/AS，将其转入酿酒酵母，获得能产生紫穗槐-4,11-二烯的酵母工程菌，以朱栾倍半萜为参照，产量为10 μg·L^-1。另外构建了含HMGR和FPPS基因的酵母表达载体pGBT9/A/HMG/G/FPP，将该载体和pYeDP60/G/AS共转入酿酒酵母，得到第二个能产生紫穗槐-4,11-二烯的酵母工程菌，产量为23.6 mg·L^-1，结果表明增加HMG-CoA还原酶和FPP合酶基因的拷贝数能显著增加酵母工程菌的紫穗槐-4,11-二烯产量。     

蒙古族与汉族人群GSTM3及CYP1A1基因多态性的研究

目的研究内蒙古地区蒙、汉族人群GSTM3和CYP1A1 Exon7基因多态性。方法采用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性（PCR-RFLP）和等位基因特异性扩增（ASA）技术分析内蒙古地区412例健康蒙古族人和436例健康汉族人的GSTM3及CYP1A1 Exon7基因多态性及基因型分布频率。结果内蒙古地区蒙、汉族人群GSTM3基因型之间的分布频率具有显著性差异（P〈0.05）,CYP1A1 Exon7基因型分布频率无显著性差异（P〉0.05）。结论 GSTM3基因型频率在内蒙古地区健康蒙、汉族人群中的分布具有显著差异,而CYP1A1 Exon7基因型分布频率无显著性差异。     

人类基因组拷贝数变异与新药研究开发

主要论述人类基因组拷贝数变异与新药研究开发的进展。参阅近年来文献,对基因拷贝数变异、基因拷贝数变异图谱与疾病关联的研究及重大疾病新药研究开发的进展进行综述。人类基因组拷贝数变异(CNVs)或称拷贝数多态性(CNPs)是人类基因组变异研究的新发展。首次综合性的人类基因组的拷贝数变异图谱为基因结构和人类疾病研究提供了一个重要的资源,为新药的研究开发开拓了更加广阔的前景。     

内源性与外源性加亚嘉西科逆转录病毒基因组序列分析

目的:确定内蒙古JSRV-NM病毒株在逆转录病毒与宿主共进化史上的地位。方法:从我国内蒙古羊种绵羊肺腺瘤病羊肺组织标本中分离出exJSRV-NM株。PCR方法扩增出exJSRV-NM和enJSRV-NM株全长cDNA并进行全基因组测序。应用DNAstar软件对JSRV-NM基因组上的U3、ENV、GAG/POL核苷酸序列进行分析。结果:克隆的exJSRV-NM株和enJSRV-NM株全基因全长分别为7462bp和7430bp。序列分析表明,exJSRV-NM株序列与Gen-Bank上收录的南非代表株基因组和JSRV21核苷酸全序相比其同源性分别为93.3%和99.2%。enJSRV-NM株序列与GenBank上收录的enJS56A1相比其同源性为94.8%。结论:我国内蒙古羊种所携带的JSRV-NM在逆转录病毒与宿主共进化史上属于古老型。     

内蒙古地区乙型肝炎报告质量调查及分析

目的全面了解内蒙古地区医疗机构乙型肝炎病例的报告现状。方法采用定量调查和定性访谈方式对现场调查病例和网络报告病例进行核查统计。结果本次共调查23家医疗机构,收集了2416例乙肝病例。全区乙肝病例报告率为85.94%。2008年乙肝病例报告重卡率为1.15%,2007～2008年跨年度重卡率为1.42%。乙肝病例现场诊断与网络报告的诊断类型一致率为79.30%。临床医生对乙肝病例诊断、报告知识知晓情况不容乐观。结论乙肝病例报告混乱是全区乙肝病例常规监测报告中普遍存在的问题,漏报、重复报告以及错误报告同时并存。     

UGT2B17拷贝数变异的研究进展

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶（UDP-g1ucuronosyltransferase,UGT）是人体内重要的Ⅱ相代谢酶,UDP-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸为其主要的糖基供体。UGT为多基因编码并且含有大量同工酶的超基因家族,包括UGT1和UGT2两个亚家族。UGT2B17是UGT2B家族的一员,越来越多的研究发现UGT2B17基因存在普遍遗传缺失现象,其造成的遗传差异对疾病的影响已引起了众多关注。UGT2B17基因拷贝数变异（Copy Number Variants,CNV）源自4号染色体上一段约120 kb的DNA序列缺失和插入,CNV发生频率高,种族差异明显,与器官移植、骨质疏松、肿瘤发生,乃至兴奋剂检测密切相关。UGT2B17的CNV研究及功能意义具有重大遗传药理学及药物基因组学意义。我们将从UGT2B17的基因拷贝数变异与种族差异、移植排斥反应与肿瘤发生发展等几个方面进行探讨。     

Establishment of a methodology for identifying Paeoniae Radix based on metallomic analysis

We aimed to establish a methodology for identifying Paeonia samples based on metallomic analysis. We prepared 66 batches of samples (16 batches of crude drugs and 50 batches of cultivars, comprising 64 batches of Paeonia lactiflora and 2 batches of P. veitchii) collected from Japan and China (Inner Mongolia and elsewhere) between 1996 and 2008. P. lactiflora samples were genetically classified into white peony root (WPR) type and red peony root (RPR) type. Up to 47 elements were measured by inductively coupled plasma–mass spectrometry, and RPR type crude drug samples contained up to five times as much calcium as the others. Principal component analysis (PCA) of the multi-element fingerprints obtained suggested that P. veitchii, which grows wild, were distinguishable from the other cultivated P. lactiflora samples. This was confirmed perfectly by soft independent modeling of class analogy (SIMCA). The PCA of the fingerprints of P. lactiflora crude drug samples also suggested that it was possible to classify them by production area (Japan, Inner Mongolia, and China excluding Inner Mongolia) and genetic type (RPR and WPR types). They were also classified 100 % to the predicted class by SIMCA in both cases. These analyses were successful among the samples whose collection dates varied. This simple metallomic method is an efficient approach for verifying the complex origin of Paeoniae Radix.