高效液相色谱荧光法同时测定小鼠脑组织中4种氨基酸类神经递质

目的 采用高效液相-荧光检测技术建它一种稳定的用于测定脑组织中多种氨基酸类神经递质的方法.方法 用微透析技术收集小鼠脑组织中多种氨基酸类神经递质,用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色谱(high perform-ance liquid chromatography,HPLC)法测定微透析液中天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、r-氨基丁酸(GABA)的含量.结果 兴奋性Asp、Glu及抑制性Gly、GABA在18 min内完全分离,在0.625~5umol/L浓度范围内与峰面积有良好的线性关系.结论 HPLC法快速、准确、灵敏度高,适用于脑组织中氨基酸类神经递质含量的测定.     

高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量

本文利用高效液相色谱柱前邻苯二甲酝酿自动衍生、自动进样程序测定脑组织中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸和ｒ－氨基丁酸含量，该法的最低检出限为１０ｎｍｏｌ／ｍｌ，５种氨基酸峰面积测定值的变异系数平均为２．０±１．３％，线性相关系数平均为０．９７±０．０３。     

柱前衍生高效液相色谱法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量

目的 用柱前衍生法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,方法以磺酰氯二甲胺偶氮苯(DABS-CL)作衍生剂,采用柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC),YMC-Pack ODS-A柱(250mm×4.6mm,5mm),流动相A为25mol/L KH2PO2,流动相B为乙腈:甲醇=70:30;流速1.5 ml/min梯度洗脱,检测波长436nm,柱温35℃,结果各种氨基酸均具有良好的线性关系(相关系数,=0.9989～0.9999)、精密度(RSD<1.50%)、稳定性(RSD<3.50%)、平均回收率(98.83%～107.83%),测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,其含有人体必需氨基酸占总氨基酸含量的40%以上,结论该方法简便实用,分析结果准确可靠,适用于动植物中富有氨基酸含量的测定.     

ALS患者脑脊液中氨基酸类神经递质的变增益高效液相-荧光检测

目的建立用于测定肌萎缩侧索硬化(ALS)患者脑脊液中氨基酸类神经递质的方法,观察患者用肌萎灵注射液治疗前后脑脊液中氨基酸类神经递质的变化。方法采集42例患者的脑脊液,用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生变增益HPLC法测定脑脊液中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸的含量。结果4种氨基酸在20min内分离度、线性关系均良好;42例ALS患者治疗后与治疗前相比,脑脊液中兴奋性的天门冬氨酸和谷氨酸水平明显降低,而抑制性的甘氨酸和γ-氨基丁酸水平变化不明显。结论本方法快速、准确、灵敏度高,适用于脑脊液中神经递质类氨基酸的含量测定。     

柱前衍生RP-HPLC法测定泽泻中氨基酸的含量

目的 分析不同产地泽泻中氨基酸含量及其特征性。方法 采用邻苯二甲醛(OPA)、氯甲酸芴甲酯(FMOC)联合柱前衍生RP-HPLC测定泽泻中的17种氨基酸。结果 氨基酸质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，r均在0．99以上。不同产地泽泻中氨基酸含量有一定差别。结论 该方法适宜泽泻药材中氨基酸含量的测定。     

反相高效液相色谱荧光法测定大鼠脑组织中氨基酸类神经递质

目的建立并改良反相高效液相色谱法,测定大鼠不同脑组织分区氨基酸类神经递质含量.方法改良使用JK2CO3缓冲溶液作为稀释液,反相高效液相色谱洗脱,高丝氨酸作为内标,邻苯二甲醛柱前衍生和荧光检测器检测大鼠大脑皮质、海马、纹状体和小脑中4种氨基酸类神经递质:天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量.结果 4种氨基酸在18 min内洗脱完全,分离效果良好;在0.5～40 μmol/L浓度范围有较好的线性关系,其相关系数不低于0.999 7;4种氨基酸天内精密度范围为0.70%～4.01%,天间精密度为2.78%～9.58%;Asp、Glu和GABA的最低检测限为0.01 μnol/L,而Gly为0.02 μnol/L;海马组织4种氨基酸绝对回收率不低于89.39%.结论改良后的反相高效液相色谱荧光法灵敏度高、重复性好,能有效分离检测大鼠脑组织分区中氨基酸类神经递质.     

柱前衍生高效液相色谱法测定瓜蒌皮中游离氨基酸含量

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC)测定瓜蒌皮中游离氨基酸含量的方法。方法 :采用异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂,高效液相色谱法色谱柱为(Atlantis dC18 Column(3μm,4.6 mm×150 mm,Waters),流动相A:甲醇-乙腈(1∶2),流动相B:0.15 mol/L乙酸钠,流速1.0mL/min,梯度洗脱,柱温35℃,吸收波长254 nm。结果:各种氨基酸均能达到基线分离。结论:柱前衍生高效液相色谱法作为瓜蒌皮药材中游离氨基酸的测定手段之一,准确可靠。     

荧光高效液相法测定3种失眠模型大鼠脑组织氨基酸类神经递质的含量

目的：测定3种失眠模型大鼠脑组织氨基酸类神经递质的含量。方法：复制药物诱导失眠动物模型、平台水环境诱导失眠动物模型、刺激诱导失眠动物模型,以Agilent 1100 荧光检测器高效液相系统为检测工具,Agilent ZORBAX SB-Aq（250mm?.6mm,5μm）为色谱柱,柱温25℃,激发波长λex=357nm,发射波长λem=455nm,甲醇-50mmoL/L醋酸钠缓冲液（pH=6.5）为流动相,采取梯度洗脱,测定正常组及模型组大鼠脑组织中谷氨酸（Glu）、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(γ-GABA)、牛磺酸(Tau)的含量。结果：谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸分别在10.06~0.0503、10.13~0.0506、10.05~0.0502、10.03~0.0501μg/mL范围内其浓度与峰面积呈良好的线性关系（r分别为0.99995、0.99995、0.99985、0.99990）。测得药物诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为0.2042?.0145、0.0086?.0005、0.0919?.0024、0.0421?.0011μg;平台水环境诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为0.2144?.0159、0.0085?.0004、0.0966?.0035、0.0433?.0012μg;刺激诱导失眠大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为0.1818?.0043、0.0084?.0005、0.0824?.0033、0.0414?.0018μg;正常大鼠脑组织中Glu、Gly、Tau、γ-GABA的含量为0.1744?.0038、0.0085?.0004、0.0791?.0022、0.0406?.0012μg。结论：本实验建立的方法能满足同时测定大鼠脑组织中谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸的含量测定的需要, Glu、Tau、γ-GABA与失眠可能存在一定的量效关系,三种失眠动物模型均能较好地反映出脑内氨基酸类神经递质的变化。     

高效液相荧光法测定大鼠脑内氨基酸类神经递质方法的改良

目的 改良测定大鼠脑组织氨基酸类神经递质的反相高效液相色谱荧光法.方法 改良使用磷酸盐-甲醇-乙腈作为流动相,反相高效液相色谱洗脱,高丝氨酸作为内标,邻苯二甲醛柱前衍生和荧光检测器,检测大鼠大脑皮质、海马、纹状体、中脑、小脑和下丘脑6个脑区中天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(G1n)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)和牛磺酸(Tau)6种氨基酸类神经递质含量.结果 6种氨基酸在20 min内洗脱完全,分离效果良好;在6.25～ 400 μmol/L浓度范围有较好的线性关系,其相关系数不低于0.99;6种氨基酸日内试验精密度范围为1.38％ ～7.59％;日间试验精密度为2.7％～8.68％;6种氨基酸回收率不低于80％.结论 改良后的反相高效液相色谱荧光法灵敏度较高、重复性好,能有效分离检测大鼠脑组织分区中氨基酸类神经递质含量.     

邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定氨基酸类神经介质

目的：建立测定神经中枢氨基酸类介质的方法。方法：邻苯二甲醛柱前衍生,ODS（C18）柱分离,pH6．0醋酸盐缓冲溶液与甲醇二元梯度洗脱,荧光检测。结果：仅在9min内就分离测定了大鼠脑中5种氨基酸介质的含量。在一定浓度范围内,氨基酸的峰面积与其浓度呈现良好的线性关系,相关系数在0．9978－0．9999之间。结论：本方法适用于神经药理学的研究。     

持续性植物状态患者脑脊液中氨基酸类神经递质的检测

目的 应用高效液相色谱分析法检测持续性植物状态(PVS)患者脑脊液中氨基酸类神经递质,观察其与临床表现的相关性。方法 分别采集46例PVS患者与20例对照病人的脑脊液,检测谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸的含量。结果 4种氨基酸在25min内得以较好分离。PVS组4种递质水平均高于对照组,且递质水平与PVS评分呈负相关,其中甘氨酸及丙氨酸与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PVS患者脑脊液中氨基酸类递质与临床表现有一定的相关性。     

一种新的柱前衍生法测定血浆同型半胱氨酸

目的建立一种新的高效液相柱前衍生法,准确、快速测定血浆同型半胱氨酸(HCY)浓度.方法血中结合态的HCY经三丁基膦还原为游离HCY后,与衍生试剂7-氟苯唑-2-氧-1,3-二唑-4-磺酸胺(ABD-F)进行柱前衍生反应,衍生物经反相C18色谱柱,用0.15mol/L磷酸盐缓冲液(pH=4.2)与甲醇按85∶15配制的混合液洗脱.荧光检测激发λ=385nm,发射λ=515nm.结果在3.125～100.00μmol/L范围内,HCY浓度与荧光强度的线性关系良好,γ=0.9998,测定的批内、批间变异系数分别为3.13%和5.10%,高低2种浓度的回收率分别为98.5%和92.7%,健康人血浆HCY的参考值为8.12±2.72μmol/L.结论本法测定血浆HCY准确快速、特异性高、分离效果好,适用于临床血浆HCY测定的常规需要.     

高效液相色谱法测定血清色氨酸

用高效液相色谱法测定血清色氨酸。采用Ｎｏｖａ－ＰＡＫＣ１８柱，０．１ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸二氢钾水溶液为流动相，２９５ｎｍ的检测波长，测出线性范围为１．２２３～２４４７．３８１μｍｏｌ·－１，最低检出浓度为０．６１２μｍｏｌ·Ｌ－１，正常人血清色氨酸浓度为４６．６０３±５．１０８μｍｏｌ·Ｌ－１。测定血清色氨酸的时间＜５ｍｉｎ。本法简便、快速、准确、可靠，适用于临床和科研     

HPLC柱前衍生法测定谷丙甘氨酸咀嚼片含量

目的建立谷丙甘氨酸中谷氨酸、丙氨酸及甘氨酸的高效液相分析方法,并用该方法测定咀嚼片中3种氨基酸的含量,为该制剂的质量标准制定提供依据.方法谷丙甘氨酸咀嚼片中3种氨基酸含量测定采用异硫氰酸基苯酯柱前衍生化高效液相色谱法.色谱条件:色谱柱为Inertsil ODS-3V(4.6mm×250mm,5μm);流动相A为0.1mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液(pH6.5)/乙腈(93:7),流动相B为蒸馏水/乙腈(20:80)二元梯度洗脱分离;检测波长为254nm;流速为1ml/min;柱温为40℃.外标法计算3种氨基酸的含量.结果谷丙甘氨酸咀嚼片中谷氨酸、丙氨酸及甘氨酸分离度良好,在所考查的浓度范围内浓度对峰面积线性回归r》0.99,平均回收率为98.7%,日内及日间RSD＜1.3%,三批样品中3种氨基酸的含量均在95%～105%之间.结论用HPLC柱前衍生方法可测定谷丙甘氨酸制剂中谷氨酸、丙氨酸及甘氨酸含量.     

邻苯二甲醛-9-氯甲酸芴甲酯柱前衍生HPLC法测定血必净注射液中氨基酸

摘 要：目的 通过建立HPLC分析法测定血必净注射液中氨基酸,为提高中药注射液质量标准提供依据。方法 通过 OPA-FMOC柱前衍生化法,建立同时检测血必净注射液中18种常见氨基酸的液相色谱法。色谱柱为Agilent SB-C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相A为0.02 mol/L醋酸钠溶液（含200 μL/L三乙胺和3.5 mL/L四氢呋喃,2%醋酸溶液调pH 7.2±0.05）,流动相B为0.02 mol/L醋酸钠溶液–甲醇–乙腈（200∶400∶400）（pH 7.2±0.05）,梯度洗脱;体积流量：0～38 min为1.0 mL/min;柱温40 ℃;检测波长0～32.5 min为338 nm,32.5 min以后为262 nm。结果 所测18种氨基酸在各自的高、低质量浓度范围内线性关系良好;3个批次血必净注射液中,游离氨基酸测定平均值为1.320 mg/mL,总氨基酸测定平均值为2.027 mg/mL。结论 所建立的氨基酸定量方法结果准确可靠,重现性好,有助于血必净注射液的质量控制,对中药注射剂安全评价标准的提高具有指导意义。     

柱前衍生化RP-HPLC法分析龟板中氨基酸

目的采用柱前衍生RP-HPLC法对龟板中13种氨基酸进行分析。方法用6mol/L HCl水解提取龟板中总氨基酸,以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂,采用外标法,梯度洗脱的方式分析。结果13种氨基酸在40min内均可得到很好的分离,回收率(除甘氨酸外)为91.68%~106.26%,RSD为0.718%~4.386%。结论所建立的方法分离效果好、灵敏、准确、简便,且采用普通的C18色谱柱,可广泛用于含有多种氨基酸样品的分析。     

高效液相色谱-荧光法在婴幼儿血清苯丙氨酸测定中的应用

目的探讨高效液相色谱-荧光法测定血清苯丙氨酸的临床应用价值.方法采用不经荧光衍生化处理的高效液相色谱-荧光法直接检测健康婴幼儿、拟诊和排诊苯丙酮尿症患儿的血清苯丙氨酸含量.结果51例1月～5岁的健康婴幼儿的血清苯丙氨酸含量为32.09～133.59μmol/L(x±s=93.1±24.1μmol/L).45例临床拟诊和排诊PKU的1月～5岁的的婴幼儿中,30例血清苯丙氨酸含量＜150μmol/L,排除PKU诊断,15例患儿血清苯丙氨酸含量为1070.8～2302.6μmol/L(x±s=1696.4±415.1μmol/L),诊断为经典型PKU患者.结论不经荧光衍生化处理的高效液相色谱-荧光法简便、快速、灵敏、特异,适用于苯丙酮尿症的诊断和疗效监测.     

柱前衍生HPLC测定阿胶中17种水解氨基酸含量

目的 建立柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)同时测定阿胶中17种水解氨基酸含量的方法.方法 用6 mol/L盐酸溶液水解阿胶中的氨基酸,以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂;用Hypersil BDS C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254nm,柱温为30℃.结果 17种氨基酸在60 min内均可得到很好的分离,回收率为97.4％～1 00.1％,RSD为1.6％～3.4％.结论 建立的方法可靠,可用于阿胶中17种水解氨基酸的含量测定.