转化生长因子β1对胃腺癌细胞凋亡诱导的研究

为研究转化生长因子β１能否诱导人胃腺癌ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡，运用透射电镜技术了解凋亡细胞超微结构改变，用流式细胞术分析细胞ＤＮＡ，周期变化ＤＮＡ片段改变采用琼脂糖凝胶电泳法，电镜下可见细胞核染色质浓缩，边集，核碎裂及凋亡小体形成，ＤＮＡ梯状电泳带出现ＤＮＡ周期分析显示在整个细胞周期峰群前端存在一个凋亡峰，表明转化生长因子β１可诱导人胃腺癌ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡。     

β－榄香烯与阿霉素及顺铂对人胃腺癌细胞的协同抑制效应

β－榄香烯与阿霉素及顺铂对人胃腺癌细胞的协同抑制效应２１０００２南京南京军区南京总医院陈龙邦，臧静，王靖华，胡守友，褚晓源关键词胃，腺癌，抗肿瘤药，多剂联用中国图书资料分类号Ｒ９７９．１β－榄香烯是从莪术中提取的有效抗癌成分，是我国自行研制的国家二类...     

X射线对人肺腺癌A549细胞增殖及线粒体DNA基因表达的影响

目的 研究X射线辐射对人肺腺癌A549细胞增殖及线粒体DNA(mtDNA)基因表达的影响。方法 8 MV X射线以4 Gy的吸收剂量照射A549细胞,照射后不同时间检测细胞周期分布和凋亡率,电镜下观察细胞超微结构,人mtDNA基因表达谱芯片检测靶基因的表达变化。结果 照射后12 h即出现G₂/M期的阻滞,凋亡率在照射后48 h达到峰值,透射电镜下可见凋亡的形态改变。X射线照射后mtDNA编码基因表达呈普遍下调,包括12 h组的1种tRNA和4种mRNA基因、24 h组的2种tRNA和4种mRNA基因、48 h组的13种mRNA和2种rRNA及4种tRNA基因、72 h组的11种mRNA和2种rRNA基因。结论 X射线辐射可导致A549细胞G₂/M期阻滞,mtDNA编码基因的普遍低表达可能和辐射诱导凋亡相关。     

洛铂抑制胃癌SGC-7901细胞增殖及其机制的初步研究

目的观察洛铂对胃癌细胞SGC-7901细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法将对数生长期的SGC-7901细胞分阴性对照组（不加药物）和实验组（加入不同浓度洛铂）,采用倒置显微镜观察不同浓度下细胞生长状态;MTT法观察对细胞的增殖抑制;Western印迹方法分析不同浓度洛铂对SGC-7901细胞内Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果倒置显微镜下观察,洛铂能抑制细胞增殖,出现明显的凋亡学形态特征。MTT法显示洛铂能抑制细胞增殖,并呈浓度及时间依赖关系。Western印迹结果显示洛铂能使SGC-7901细胞Bcl-2蛋白表达水平下降。结论洛铂能明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导凋亡,可能与调节SGC-7901细胞Bcl-2蛋白表达水平相关。     

电压门控钾通道Kv1.5反义核酸对胃癌细胞SGC7901生长的抑制作用

目的构建电压门控钾通道Kv1．5分子的反义核酸(Kv1．5AS)的真核表达载体,建立Kv1．5AS转染的胃癌SGC7901细胞亚系,探讨Kv1．5分子对胃癌细胞生长的抑制作用。方法通过DNA重组技术,将Kv1．5全长eDNA片段从pBKKvl．5载体反向亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1,构建表达Kv1．5反义核酸的重组载体pcDNA3．1-Kv1．5AS。借助脂质体将pcDNA3．1-Kv1．5AS转导入胃癌细胞SGC7901。通过MTT实验绘制细胞生长曲线,肿瘤细胞集落形成实验检测集落形成率,流式细胞仪进行细胞周期分析,并利用Western blot检测Kv1．5和CyclinD1蛋白在基因转染细胞中的表达。结果限制性酶切鉴定结果提示,重组载体peDNA3．1-Kvl．5AS构建成功。Western blot结果表明,转染pcDNA3．1-Kv1．5AS后,Kv1．5蛋白在SGC7901细胞中的表达显著降低。与转染空载体的对照细胞相比,转染Kv1．5AS表达载体后,SGC7901细胞生长变缓,集落形成率显著降低,细胞发生了G1期阻滞。Western blot结果证实,CydinD1蛋白在Kv1．5AS转染细胞中表达降低。结论电压门控钾通道Kv1．5反义核酸可抑制胃癌细胞SGC7901的生长。     

蛋白酶体抑制剂MG132联合X射线对人肺腺癌细胞生长迁移和周期的影响及作用机制

目的 研究蛋白酶体抑制剂MG132联合X射线对人肺腺癌A549细胞生长、迁移、侵袭、细胞周期分布的影响及机制。方法 MTT法检测不同MG132浓度处理后不同时间肺腺癌A549细胞的增殖;克隆形成实验检测A549细胞的存活能力;划痕实验测定A549细胞的迁移能力;Transwell小室测定其侵袭能力;流式细胞术测定细胞周期分布的改变;Western blot法测定蛋白表达水平。结果 MG132明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长,并呈现剂量-效应和时间-效应关系。MG132联合X射线对A549细胞克隆存活能力有显著抑制作用（F=554.78、954.64,P<0.01）,且加MG132组克隆存活率均低于照射组（t=4.44、12.41、3.52、6.72,P<0.05）。MG132在无毒性剂量下联合X射线可显著抑制A549细胞的迁移及侵袭能力（t=12.79,P<0.01）,并明显增加G₁期细胞阻滞（t=4.29,P<0.05）;MG132联合X射线明显降低A549细胞中基质金属蛋白酶-2,-9和G₁期相关蛋白Cyclin D1的表达水平,同时增加细胞中P53的表达。结论 MG132可以显著抑制人肺腺癌A549细胞的生长,且在无毒性剂量下联合X射线可以明显降低其转移和侵袭能力,显著增加肿瘤细胞的G₁期阻滞。     

青蒿琥酯对乳腺癌细胞的生长抑制作用及其机制

目的探讨青蒿琥酯对乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长抑制作用及其可能机制。方法利用CCK-8法检测青蒿琥酯对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用,并计算IC₅₀值。根据IC₅₀值选择后续实验的青蒿琥酯浓度(0、25、50、100 μg/ml),0 μg/ml青蒿琥酯组作为对照组。采用不同浓度(0、25、50、100 μg/ml)的青蒿琥酯干预MDA-MB-231细胞24 h,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况及线粒体膜电位;0、25 μg/ml青蒿琥酯干预MDA-MB-231细胞24 h,利用细胞划痕试验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果青蒿琥酯对MDA-MB-231细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度依赖性,对MDA-MB-231细胞的IC₅₀为54.24μg/ml。不同浓度的青蒿琥酯干预MDA-MB-231细胞24 h,MDA-MB-231细胞凋亡率显著增高(P<0.01);与对照组相比,青蒿琥酯组细胞线粒体膜电位显著降低(P<0.01),且呈浓度依赖性。细胞划痕实验结果显示,青蒿琥...     

新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂对结肠癌细胞的增殖抑制作用

目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor, HDACi）JZ004对结肠癌细胞系HCT-8和HT-29细胞增殖的影响,并初步探讨其抗癌机制。方法用不同浓度JZ004分别处理HCT-8和HT-29细胞, MTT法检测细胞的增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期停滞、细胞凋亡;若丹明（rhodamine）123和二氯二氢荧光素二乙酸酯（ DCFH-DA）测定细胞线粒体跨膜电位及活性氧（ reactive oxygen species ,ROS）产生的变化;免疫印迹法检测细胞内乙酰化组蛋白H3、p21、细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）4、Bcl-2、Mcl-1、Bax等相关蛋白的表达水平。结果MTT结果显示,JZ004对结肠癌细胞系的增殖有明显抑制作用,其抑制效果与时间、剂量呈正相关;流式分析结果显示,细胞凋亡率随JZ004浓度提高而增加;JZ004处理72 h后,p21表达水平上调,CDK4蛋白表达下调,细胞周期停滞于G0／G1期而抑制细胞的生长,细胞内ROS产生增多,且线粒体跨膜电位显著下降,促凋亡蛋白Bax的表达呈上调趋势,而抑凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达则受到抑制。结论 JZ004作为一种新型的HDACi对结肠癌细胞具有明显的抑制生长和诱导凋亡作用,凋亡诱导机制可能与Bcl-2家族蛋白表达水平变化有关。提示JZ004具有成为结肠癌临床化疗药物的潜能。     

人肺腺癌A549细胞低剂量辐射超敏感性及其机制的研究

目的 观察A549细胞的低剂量辐射超敏感性现象,探讨其发生的机制。方法 A549细胞接受0~2 Gy的⁶⁰Coγ射线照射后,流式细胞仪对其分选计数,克隆形成法检测细胞存活分数,Western blot法检测ATM1981Ser-P蛋白表达,Hoechst 33258荧光染色法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,PI单染流式细胞仪检测细胞周期。结果 细胞在0~0.3 Gy表现出单位剂量杀伤增强,在0.3~0.5 Gy表现出一定的辐射抗性,0.5 Gy后的区域存活分数随辐射剂量的增加而降低。照射后1 h,ATM激酶在0.2 Gy时开始活化,0.5 Gy时活化达高峰(t=7.96,P<0.05);与0.5 Gy相比1.0和2.0 Gy的活化水平无明显变化(t=0.69、0.55,P>0.05)。照射后24 h,部分细胞发生凋亡,其凋亡曲线与存活曲线相吻合。与未照射组相比,0.1和0.2 Gy组在各时间点(照射后6、12和24 h)的细胞周期无明显变化,而0.3、0.4和0.5 Gy 组,照射后6和12 h细胞发生G₂/M期阻滞(t＝2.87、2.88、4.92和3.70、3.12、8.11,P<0.05),照射后24 h G₂/M期细胞比例下降(t＝3.87、4.77、3.01,P<0.05)。结论 A549细胞存在HRS/IRR现象,其发生可能与ATM激酶、细胞周期变化有关,凋亡是细胞死亡的主要方式。     

和厚朴酚对鼻咽癌细胞生长及其放射敏感性的影响

目的 研究和厚朴酚对人鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞生长和放射敏感性的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测CNE-1和CNE-2细胞生长;流式细胞术检测细胞周期变化;磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测细胞凋亡;Western blot法测定相关蛋白表达水平;采用细胞克隆形成法观察和厚朴酚对细胞放射敏感性的影响。结果 和厚朴酚明显抑制CNE-1和CNE-2细胞生长,且存在着明显剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC₅₀)在CNE-1和CNE-2细胞分别为2.84和2.68 μmol/L(24 h),2.50 和2.20 μmol/L(48 h)。2.5 μmol/L和厚朴酚处理24 h后,CNE-1细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞分别达到24.53%、23.05%和7.13%,与未经处理的对照组之间差异均有统计学意义(t=-41.17、-8.18、-6.08, P<0.05)。4和3 μmol/L的和厚朴酚分别使CNE-1细胞和CNE-2细胞中促凋亡蛋白Bax和凋亡效应蛋白Caspase 3的表达水平出现2.31倍和1.89倍(t=-15.92、-17.15,P<0.05)及4.43倍和1.85倍(t=-29.39、-13.47,P<0.05)的增加,同时抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达降低45.05%和36.50%(t=26.94、66.14,P<0.05)。和厚朴酚24 h预处理可以明显提高CNE-1和CNE-2细胞对X射线的放射敏感性,SER分别为1.41和1.88。3 Gy X射线照射明显增加两种细胞的G₂/M期细胞数量(t=-14.96、-19.26, P<0.05),和厚朴酚降低了辐射导致的G₂/M期细胞阻滞(t=7.65、4.98,P<0.05),同时Cyclin B1蛋白表达明显增加(t=-33.07、-73.49,P<0.05)。结论 和厚朴酚诱导人鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞凋亡和细胞坏死而导致细胞生长的抑制。干预X射线诱导G₂/M期细胞阻滞可能是和厚朴酚预处理提高两种鼻咽癌细胞放射敏感性的重要作用机制。     

MS-275与姜黄素联用阻断细胞生存信号通路诱导前列腺癌细胞凋亡

目的探讨小剂量姜黄素和组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275联用诱导前列腺癌细胞系DU145凋亡的作用机制。方法 DU145细胞分为对照组,MS-275组(分别用1、2、4、8μmol/L的MS-275单独处理细胞24、48h)、姜黄素组(分别用10、20、40、80μmol/L的姜黄素处理细胞24、48h)、MS-275+姜黄素组(1μmol/LMS-275+20μmol/L姜黄素处理细胞24、48h)。采用MTT比色法测定药物单用或联用对细胞的杀伤效应,流式细胞术分析细胞周期的改变,Westernblotting检测细胞内蛋白表达水平的变化。结果 MS-275和姜黄素单用都能够呈剂量和时间依赖性地杀伤DU145细胞;小剂量MS-275(1μmol/L)+姜黄素(20μmol/L)联用时能够协同杀伤细胞,两种药物联合处理细胞48h后,细胞的生存率仅为45.9%;细胞周期检测表明MS-275和姜黄素联用导致细胞出现明显的亚G1峰,提示DU145细胞被诱导凋亡;Western blotting结果证实联合用药48h后,细胞内生存信号蛋白激酶Akt和ERK的磷酸化水平下降,同时凋亡标志蛋白PARP发生剪切。结论 MS-275和姜黄素联用可以协同杀伤DU145细胞,并通过抑制细胞内Akt和ERK生存信号通路的活性来诱导细胞凋亡。     

NM-3及氧化苦参碱对裸鼠体内耐药人胃癌细胞SGC-7901的分子作用

 目的探讨NM-3及氧化苦参碱对裸鼠体内多药耐药人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用及其抗肿瘤作用的分子机制.方法建立多药耐药人胃癌SGC-7901细胞的皮下移植瘤模型并随机分成生理盐水对照组,NM-3、氧化苦参碱、NM-3联合氧化苦参碱治疗组.每组裸鼠在胃癌组织移植7周后处死,并测算其肿瘤抑制率和采用TUNEL(末端脱氧核酸转移酶原位标记)和流式细胞仪法分析其凋亡指数.结果NM-3治疗组(10 mg/L、20mg/L)对多药耐药SGC-7901细胞皮下移植瘤的抑制率显著增加,其凋亡率分别是(11.20±0.18)%和(12.20±1.65)%,两者比较无差异(P＞0.05);NM-3联合氧化苦参碱治疗组凋亡指数(AI)为(51.20±4.23)%,显著高于NM-3治疗组和生理盐水对照组(1.27±0.11%,P＜0.01).结论NM-3可以增强氧化苦参碱对多药耐药细胞SGC-7901的抑制作用,诱导裸鼠体内人胃癌细胞的凋亡,并能增强裸鼠体内胃癌对化疗的疗效和敏感性.     

雷替曲塞对人胃癌细胞MGC-803裸鼠移植瘤的抑制作用

 目的 通过研究雷替曲塞抑制裸鼠MGC-803胃癌移植瘤的生长,初步探讨其相关作用机制。方法 建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,把24只裸鼠随机分为3 组,每组8只。对照组(生理盐水),低剂量组(雷替曲塞5 mg/kg),高剂量组(雷替曲塞12 mg/kg)。每周经腹腔注射给药2次,持续2周。详细记录裸鼠精神状态、体重以及肿瘤生长情况,免疫组化法检测裸鼠肿瘤组织Ki67及PCNA蛋白表达,并通过Western blottting法检测裸鼠肿瘤组织Caspase-3及Bax蛋白表达。结果 治疗期间雷替曲塞低剂量组和高剂量组裸鼠体重均低于对照组,低剂量组、高剂量组的抑瘤率分别为27.54%、44.20%,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化法显示低剂量组、高剂量组Ki67阳性细胞率分别为58.95%、42.16%,PCNA阳性细胞率分别为51.36%、37.27%,均明显低于对照组(P<0.05);Western blotting法表明低剂量组、高剂量组Caspase-3和Bax蛋白表达均明显高于对照组(P<0.05)。结论 雷替曲塞可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长增殖,其机制可能与提高Caspase-3和Bax蛋白表达、从而促进细胞凋亡有关。     

arresten cDNA在人胃癌细胞SGC-7901中的表达及活性鉴定

目的：构建arresten cDNA的分泌型真核表达载体，将其转染人胃癌SGC-7901细胞，探讨arresten体外抑制血管内皮细胞生长的活性。方法：利用PCR法将小鼠Igκ链信号序列的60个碱基拼接至arresten cDNA的氨基端，并克隆入真核表达载体pcDNA3．1( )，然后以脂质体法将重组pcDNA3．1( )-arresten转染SGC-7901细胞，Western印迹检测arresten的分泌表达，最后，提取SGC-7901细胞培养上清，采用内皮细胞增殖抑制试验鉴定上清中arresten活性。结果：成功构建了arresten cDNA的分泌型真核表达载体，获得可表达arresten的SGC-7901细胞系，真核表达的arresten具有抑制血管内皮细胞增殖的活性。结论：arresten是一种有效的血管生成抑制剂，其cDNA的真核表达载体的成功构建为针对人类胃癌的arresten抗血管基因治疗研究奠定基础。     

胃癌相关基因GCRG213真核表达载体的构建及其对胃癌细胞生长特性的影响

目的 研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45生长特性的影响。方法 将从pGEM-T质粒上扩增出的胃癌相关基因GCRG213的DNA片段,按正向、反向克隆人真核表达载体pcDNA3．1（＋）。测序正确的重组子pcDNA3．1-a（含GCRG213正向克隆）、pcDNA3．1-b（含GCRG213反向克隆）和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,采用半定量RT-PCR及Western blot方法比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪分析细胞的增殖状态,Annexin VFITC／PI双标记法检测凋亡细胞。结果经测序证实,GCRG213正向克隆和反向克隆正确插入真核表达载体pcDNA3．1（＋）。与对应的空载体比较,转染pcDNA3.1-a的MKN45细胞中mRNA的表达上调35．4%,蛋白的表达上调49．4％,而转染pcDNA3．1-b的MKN45细胞中mRNA的表达下调32．1％,蛋白的表达下调50．3％。转染了GCRG213正向克隆的MKN45细胞生长增殖速度加快,凋亡率下降,而转染了GCRG213反向克隆的MKN45细胞生长增殖速度减慢,凋亡率增加。结论 胃癌相关基因GCRG213可促进肿瘤细胞的生长,抑制肿瘤细胞凋亡,可能是恶性肿瘤癌变的促进因素之一。     

人体胃癌细胞的分离

目的：探讨人体胃癌细胞的分离方法。方法：应用免疫磁珠分选法（MACS）分离人体胃癌细胞，并用免疫组化方法鉴定。结果：免疫磁珠分选的胃癌细胞活力达到90％，且经鉴定证实为上皮源性细胞胃癌细胞。结论：免疫磁珠分选法能分离出高活性的人体胃癌细胞。     

miR-302a在胃癌中表达及其对胃癌细胞凋亡与细胞周期影响

目的研究微小RNA-302a(miRNA-302a)在胃癌标本中的表达水平与临床病理特征的关系,以及其对胃癌细胞的凋亡和细胞周期调控作用,以探讨将miR-302a用于胃癌生物靶向治疗的可能性。方法采用实时PCR(RT-PCR)方法检测胃癌组织和正常胃黏膜组织中miR-302a的相对表达水平,并分析其与对应患者的临床病理资料的相关性。同时,采用RTPCR方法检测miR-302a在胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803和BGC-823及正常胃黏膜细胞GES-1中的表达情况;选取miR-302a表达水平最低者为癌细胞,并转染过表达miR-302a的真核重组质粒p CDNA3.1-miR-302a;转染后,采用流式细胞仪Annexin V/PI双染法和PI单染法检测miR-302a对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果胃癌组织中miR-302a的相对表达水平显著低于癌旁正常胃癌黏膜组织(P<0.05),且其表达与临床分期、病理分级和转移均有密切关系(P<0.05)。同时,在胃癌细胞SGC-7901、MGC-803和BGC-823中miR-302a的相对表达水平显著低于正常细胞GES-1中的表达(P<0.05),且在BGC-823中表达水平最低。p CDNA3.1-miR-302a质粒转染组与空白组和p CDNA3.1质粒转染组比较,miR-302a质粒转染后48 h后细胞凋亡水平显著升高,且G2/M期细胞数显著增高(P<0.05)。结论在胃癌组织和细胞中miR-302a均呈现低水平表达,当miR-302a过表达后,能显著增高胃癌细胞的凋亡水平并使细胞出现G2/M期阻滞,可能成为胃癌治疗的新靶点。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡及其机制

目的研究去乙酰化酶转移酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌细胞SGC-7901的凋亡诱导作用及其机制。方法利用细胞计数、流式细胞仪及末端脱氧核苷酸转移酶生物素dUTP切口末端标记法(TUNEL)研究TSA对胃癌细胞SGC-7901的凋亡诱导作用。利用蛋白印迹法、基因芯片及实时定量PCR研究TSA对胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果TSA可诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡;TSA可增加胃癌细胞SGC-7901p53,bax等基因的表达,降低BCL-2、生存素和半胱天冬酶的表达;TSA可使凋亡诱导因子抗侵袭因子(AIF)和核酸内切酶EndoG从线粒体释放并转移到细胞核内;TSA可通过调控多个凋亡相关基因的表达诱导胃癌细胞发生凋亡,且该凋亡是半胱天冬酶非依赖性的。结论TSA可通过调控多个凋亡相关基因来实现其诱导胃癌细胞凋亡的作用,这种凋亡诱导作用是通过半胱天冬酶非依赖途径进行的。     

高表达鞘氨醇激酶对胃癌细胞生物学特性的影响

目的研究高表达鞘氨醇激酶（SPK）对人胃癌细胞增殖、迁移和凋亡等细胞生物学行为的影响。方法以重组腺病毒为载体,将人野生型（rAd—SPK^WT）及突变体（rAd—SPK^DV）SPK基因导入人胃癌细胞BCC-823。以Western blot检测外源SPK基因的表达,以[γ^82P]ATP掺入法测定SPK酶活性,用迁移扩散盒技术测定细胞的迁移能力。结果重组腺病毒可有效介导SPK在人胃癌细胞BGC-823中的表达。酶活性分析表明野生型SPK基因可增强SPK活性,而突变体SPK基因抑制SPK活性;高表达野生型SPK可以促进胃癌细胞的迁移,抑制5-FU对胃癌细胞的细胞毒作用,而高表达突变体SPK可以抑制胃癌细胞的迁移,增强5FU对胃癌细胞的细胞毒作用。结论SPK可以抑制5-FU诱导的胃癌细胞凋亡,促进胃癌细胞迁移,有可能成为胃癌新的治疗靶点。