罗汉果甜苷对肝星状细胞HSC-T6增殖及肝纤维化相关基因的影响

目的 研究罗汉果甜苷含药血清对大鼠肝星状细胞HSC-T6的毒性以及对细胞增殖与相关基因表达的影响,初步探讨其抗肝纤维化作用机制。方法 以罗汉果甜苷含药血清干预HSC-T6,乳酸脱氢酶（LDH）法检测罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6的细胞毒性;MTT法检测其对HSC-T6生长的抑制作用;RT-PCR法检测HSC-T6中I型胶原（Col-I）、转化生长因子-β1（TGF-β1）及基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）mRNA表达。结果 罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6无特异毒性,罗汉果甜苷含药血清体积分数为20%、10%时可显著抑制HSC-T6的增殖（P＜0.05、0.01）,并对Col-I、TGF-β1及TIMP-1 mRNA表达均表现显著抑制作用（P＜0.05、0.01）。结论 罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6细胞无特异毒性,对HSC-T6细胞增殖、Col-I有抑制作用,促进细胞外基质（ECM）降解,这可能是其抗肝纤维化的部分作用机制。     

雷帕霉素对mTOR基因诱导的NIH3T3成纤维细胞增殖的影响

目的探讨雷帕霉素对mTOR基因诱导的NI H3T3成纤维细胞增殖的影响。方法以mTOR基因转染小鼠NI H3T3成纤维细胞,以雷帕霉素干预,用MTT法检测细胞增殖情况,用RT-PCR和Western blot方法测定细胞p70S6KmRNA与蛋白的表达。结果 MTT法检测转染mTOR基因后细胞增殖能力增强,雷帕霉素可抑制其增殖;RT-PCR与Western blot检测转染后细胞p70S6K的mRNA与蛋白表达水平明显增加,雷帕霉素可抑制p70S6KmRNA与蛋白表达水平。结论雷帕霉素可能通过抑制mTOR/p70S6K信号通路抑制成纤维细胞增殖。     

Cx43和mTOR/p70S6K信号通路在胃癌中的研究进展

在我国,胃癌占恶性肿瘤的第二位[1],好发于中老年男性.胃癌一直是研究热点,但胃癌的发生机制尚不清楚.目前达成共识的结论是:胃癌的发生发展是一个多因素、多步骤、复杂的渐进过程,涉及多条信号传导通路的异常改变[2].近年来,对于细胞缝隙连接通讯(g a p junction intercellular communcia...     

mTOR/p70S6K信号通路在胰腺癌中作用的研究进展

胰腺癌是一种恶性程度很高的肿瘤,往往预后较差,其形成和发展的病理生理学分子机制尚不完全清楚。最新的研究表明,mTOR/p70S6K信号通路在胰腺癌的发生、发展进程中发挥了重要作用,例如TEOA可通过抑制mTOR/p70S6K信号通路从而诱导胰腺导管腺癌细胞的自噬性细胞死亡;ibr-7抑制TRIM32的过程可通过mTOR/p70S6K信号通路增加胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性;CENPM的表达增加可通过mTOR/p70S6K信号通路促进胰腺肿瘤的转移;胜田高良姜可通过调节癌细胞中AMPK和Akt/mTOR/p70S6K信号通路诱导胰腺癌细胞的生长抑制、凋亡和自噬;人阳性辅激活因子4可通过mTOR/p70S6K信号通路影响胰腺导管腺癌的病理进展和预后等。mTOR/p70S6K信号通路有望成为胰腺癌治疗的一个重要靶点。     

PI3K、Akt、mTOR、p70S6K基因在宫颈癌变过程中的表达及相关性研究

目的探讨PI3K、Akt、mTOR、p70S6K在宫颈癌变过程中的表达。结合宫颈病变的临床病理学特征,对4个基因蛋白阳性表达的相关性进行临床研究。方法选取20例宫颈糜烂伴鳞状上皮化生、60例宫颈上皮内瘤变(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各20例)以及48例宫颈鳞状细胞癌患者,应用免疫组织化学SP法检测各组宫颈组织中PI3K、Akt、mTOR、p70S6K的表达,选取10例正常宫颈组织作为对照组。结果 1在宫颈癌变动态过程中,从宫颈糜烂伴鳞化、宫颈上皮内瘤变到宫颈鳞状细胞癌,PI3K、Akt、m TOR、p70S6K癌基因阳性表达率逐渐增高,差异有统计学意义(P<0.05)。2PI3K、Akt、mTOR与p70S6K在宫颈癌中的阳性表达与临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),淋巴结转移组阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(P<0.01),与年龄、病灶大小无关(P>0.05)。3PI3K、Akt、mTOR和p70S6K与宫颈上皮内瘤变和在宫颈癌中的阳性表达呈正相关。结论 PI3K、Akt、mTOR、p70S6K在宫颈癌变过程中存在着联合表达,并协同参与了宫颈癌的发生和进展,可以作为早期诊断、预后判断的新的生物学标志物,并为基因的协同治疗提供新靶点。     

p-Akt-mTOR-p70S6K信号通路蛋白与卵巢癌临床病理特征及化疗耐药的相关性

目的：研究磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路中 的p-Akt,mTOR和p70S6K 3种蛋白与卵巢癌临床病理特征及化学药物治疗(简称化疗)耐药的关系。方法：采用免疫组 织化学方法检测18例卵巢癌化疗耐药和25例化疗敏感组织中p-Akt,mTOR和p70S6K蛋白的表达,分析这些蛋白与卵 巢癌临床病理特征及化疗耐药的相关性。结果：p-Akt蛋白在卵巢浆液性癌、黏液性癌和子宫内膜样癌中的表达分别 为77.14%,50.00%和66.67%,三者比较差异无统计学意义(P>0.05);在高、中分化和低分化癌中的表达分别为73.33% 和75.00%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);在I~II期和III~IV期中的表达分别为18.18%和93.75%,差异有统计学 意义(P<0.05)。mTOR蛋白在卵巢浆液性癌、黏液性癌和子宫内膜样癌中的表达分别为77.14%,100.00%和83.33%,三 者比较差异无统计学意义(P>0.05);在高、中分化和低分化癌中的表达分别为80.00%和78.57%,两者比较差异无统 计学意义(P>0.05);在I~II期和III~IV期中的表达分别为27.27%和96.88%,差异有统计学意义(P<0.05)。p70S6K蛋白在 卵巢浆液性癌、黏液性癌和子宫内膜样癌中的表达分别为80.00%,100.00%和100.00%,三者比较差异无统计学意义 (P>0.05);在高、中分化和低分化癌中的表达分别为93.33%和78.57%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);在I~II期 和III~IV期中的表达分别为45.45%和96.88%,差异有统计学意义(P<0.05)。p-Akt蛋白在卵巢癌化疗耐药和敏感组织中 的表达率分别为88.89%及64.00%;mTOR蛋白在耐药和敏感组织中的表达率分别为94.44%及68.00%;p70S6K蛋白在耐 药和敏感组织中的表达率分别为100.00%及72.00%,3种蛋白在耐药组中的表达均高于敏感组(P<0.05)。结论：p-Akt- mTOR-p70S6K信号通路中的3种蛋白可能参与卵巢癌的侵袭和转移,这3种蛋白的表达上调可能与卵巢癌化疗耐药有 关,在临床上可作为预测卵巢癌化疗耐药的标志。     

人参皂苷Rb1抗小鼠脑自然衰老及其对mTOR/p70S6K通路的影响

【目的】观察人参皂苷Rb1对小鼠脑组织自然衰老的作用,并探讨mTOR/p70S6K通路在其中的作用。【方法】27只C57/B6雌性小鼠购于中山大学实验动物中心,其中7只3月龄C57/B6雌性小鼠为青年组,20只22月龄C57/B6雌性小鼠为老年组,青年组小鼠予生理盐水(PBS)腹腔注射,老年组小鼠分别予PBS(对照)、低剂量Rb1(10 mg·kg-1·d-1)、高剂量Rb1(20 mg·kg-1·d-1)腹腔注射。6周后处死小鼠,取脑组织匀浆,检测丙二醛(MDA)含量、单胺氧化酶(MAO)活性,western blot技术检测血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、p-m TOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K蛋白表达情况。【结果】与青年小鼠比较,老年对照组小鼠脑组织中的MDA含量增多,MAO活性增加,PAI-1蛋白表达增多,m TOR蛋白、p70S6K蛋白磷酸化水平增加。与老年对照组比较,注射Rb1的两组小鼠脑组织MAO活性,m TOR蛋白、p70S6K蛋白磷酸化水平均降低;此外,高剂量Rb1组MDA含量、PAI-1蛋白的表达降低。【结论】高剂量(20 mg·kg-1·d-1)人参皂苷Rb1可以减轻小鼠脑自然衰老;人参皂苷Rb1的这一抗衰老作用可能与m TOR/p70S6K通路密切相关。     

粉碎粒度对栀子苷提取率的影响

目的优选栀子药材的提取工艺。方法以HPLC法测定不同粉碎粒度样品中栀子苷的含量为指标，比较了粉碎粒度对栀子苷提取率的影响。结果栀子粉碎成20目粗粉，加10倍量水，提取3次，每次提取1．5h，栀子苷的提取率在90％以上。结论该工艺与乙醇回流法相比，更经济、更安全。     

柳氮磺胺吡啶对HSC-T6和L02细胞增殖和凋亡的初步观察

目的:探讨柳氮磺胺吡啶(Sulfasalazine,SASP)对正常肝细胞和肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖和凋亡的影响.方法:以正常人肝细胞株(L02细胞)和大鼠肝星状细胞株(HSC-T6细胞)为研究靶细胞,用CCK-8比色法检测细胞增殖;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染检测HSC-T6细胞凋亡率;AO/EB染色法观察细胞凋亡形态.结果:同对照组比较,一定浓度范围的SASP对HSC的增殖具有显著的抑制作用,呈现时间和剂量效应.膜联蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)双染显示SASP诱导HSC-T6凋亡也旱现时间和剂量效应;AO/EB染色出现凋亡细胞的特征性改变.而SASP干预L02后,与对照组相比,增殖和凋亡率均无统计学意义,AO/EB染色后,未出现凋亡细胞.结论:同等干预浓度的SASP能够选择性的抑制HSC增殖,诱导其凋亡.     

矫治力对兔牙周组织中雷帕霉素靶蛋白和核糖体S6蛋白激酶活性的影响

目的探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/S6蛋白激酶(p70S6K)信号通路在兔正畸牙移动过程中对牙周组织改建的作用。方法选用12只日本大耳白兔(体质量2.0kg左右),雌雄不限,建立正畸牙移动的动物模型,按照3,5,7,14d随机分组,每组3只,上颌右侧戴矫治器组为实验组,左侧未戴矫治器组为对照组,采用Western免疫印迹的方法,观察牙周组织中mTOR及p70S6K蛋白表达的变化。结果戴矫治器3d后牙周组织中mTOR和p70S6K表达增强,7d达高峰,14d后有所下降,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。结论在矫治力作用下,兔牙周组织中mTOR及p70S6K表达均明显增强,导致牙周组织发生一系列变化。     

E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润的实验研究

目的：研究E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润的相关性，为探讨前列腺癌的浸润转移机制提供实验依据。方法：应用电穿孔方法将线性化的PrevTet—off-in调控质粒和PrevTRE2-flag—E6AP重组质粒导入前列腺癌细胞（Lncap），建立稳定表达E6-AP的前列腺癌细胞。应用MTT实验检测细胞的增殖；应用Matrigel Invasion Chamber检测肿瘤细胞迁移浸润特性。结果：MTT结果显示，稳定转染表达E6-AP的前列腺癌细胞比未转染的细胞具有较强的增殖活性；在细胞的迁移浸润试验中，表达E6-AP的稳定转染细胞具有较强的爬行与附着能力。结论：E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润性密切相关。     

miR-100过表达通过增强AMPK-mTOR-p70S6K信号通路介导的自噬发挥抗脓毒症作用的研究

目的 探讨miR-100过表达通过增强AMPK-mTOR-p70S6K信号通路介导的自噬,进而发挥抗脓毒症的作用机制研究.方法 利用脂多糖(LPS)刺激大鼠心肌细胞H9C2构建脓毒症体外细胞模型.将大鼠心肌细胞H9C2分为对照组、LPS组、LPS+miR-100激动剂组和LPS+miR-100拮抗剂组.细胞通过转染mi...     

抗肝硬化复方在体外对星状细胞增殖和胶原合成的抑制作用

目的研究抗肝硬化复方(BJ-JN)在体外对活化星状细胞(HSC)增殖和胶原合成的抑制作用,进一步探讨BJ-JN的作用机制。方法在引入血清药理方法的基础上,探讨BJ-JN在体外对混合新生小牛血清(NBS) 大鼠血清(RS)和转化生长因子β1(TGF-β1)两种刺激因素作用下的HSC-T6细胞增殖和胶原合成的抑制作用。将不同时间点(2.5、3.5 h)采集的BJ-JN含药血清作用于NBS和RS共同刺激下的HSC-T6,分别加入3H-TdR和3H-Pro,在液体闪烁计数仪上检测HST-T6细胞增殖和胶原合成。在5个不同的时间点(2~24 h)将刺激浓度为9 pmol/L的TGF-β1作用于HSC-T6,用四甲基偶氮唑(MTT)比色法测定吸光度值,确定TGF-β1刺激HST-T6的最适刺激时间。将不同浓度(0.19%~3.125%)BJ-JN含药血清作用于最适刺激时间、9 pmol/LTGF-β1刺激条件下的HST-T6,用MTT比色法测定吸光度值并计算抑制率。结果与正常对照组比较,给药2.5和3.5h BJ-JN含药血清对NBS RS刺激的HSC-T6细胞增殖和胶原合成有显著的抑制作用。9 pmol/L TGF-β1对HSC-T6细胞作用16 h的刺激作用最强。不同浓度BJ-JN含药血清可显著抑制TGF-β1刺激的HSC-T6细胞增殖。结论BJ-JN含药血清在体外可以明显抑制HSC-T6细胞增殖和胶原合成。     

三甲益肝颗粒含药血清对HSC-T6细胞形态、增殖和凋亡的影响

目的观察三甲益肝颗粒(San Jia Yi Gan granula,SJG)含药血清对HSC-T6细胞形态、增殖和凋亡的作用,探讨SJG抗肝纤维化的细胞学基础。方法雄性SD大鼠30只按随机数字表法分为5组,每组6只,分别为生理盐水对照组(Control)、水飞蓟宾组(Sily)、低剂量SJG组(SJG-L)、中剂量SJG组(SJG-M)和高剂量SJG组(SJG-H)。SJG按低、中、高(1.7、3.4、6.8g/kg)3个剂量灌胃大鼠制备含药血清,并用不同体积分数(5%、10%、20%、40%)SJG含药血清干预HSC-T6细胞株,用倒置相差显微镜观察HSC-T6细胞形态学的变化,MTT法检测SJG药物血清对HSC-T6细胞增殖的影响,流式细胞仪检测SJG药物血清诱导HSC-T6细胞早期凋亡。结果含药血清干预后,细胞形态发生明显改变:药物组细胞较对照组细胞明显减少,细胞间隙较宽,细胞皱缩,核染色质浓集呈球形。MTT实验结果显示各组药物血清均可抑制HSC-T6细胞的增殖,SJG-M、SJG-H组对HSC-T6细胞增殖的抑制均显著高于Sily组(P<0.05),SJG-L组与Sily组对HSC-T6细胞增殖的抑制...     

mTOR信号通路在卵巢型子宫内膜异位症中的表达及临床意义

目的：探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路蛋白在卵巢型子宫内膜异位组织中的表达及其临床意义。方法：利用RT—PCR、蛋白质免疫印迹法、免疫组织化学法检测2011年1月～2013年6月就诊我院的卵巢型子宫内膜异位症患者40例和正常增生期子宫内膜40例组织中mTOR及下游分子p70S6激酶（p70S6K）和4E—BP1的表达。结果：mTOR及下游分子p70S6K和4E—BP1在卵巢型子宫内膜异位组织中mRNA及蛋白的表达均低于正常子宫内膜组织。mTOR蛋白在卵巢型子宫内膜异位组织中为阳性表达,高于正常子宫内膜组织,且与痛经、月经异常、不孕无明显相关性,而与囊肿大小、异位内膜浸润深度及盆腔浸润情况关系显著。结论：mTOR信号通路与卵巢型子宫内膜异位症的发生、发展关系密切,mTOR蛋白失活可能是卵巢子宫内膜异位的显著标志,检测mTOR蛋白表达对卵巢子宫内膜异位的诊断具有一定意义。     

苦参碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞发生自噬与mTOR相关性研究

目的：明确苦参碱是否可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路,从而诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。 方法：苦参碱(终浓度为0、1、2mg/ml)±氯喹(Chloroquine)(自噬抑制剂)处理乳腺癌Bcap-37细胞24小时,运用免疫印迹(Western-blot)法检测PI3K/Akt信号通路上的自噬相关蛋白mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6、eIF4E的表达。苦参碱(终浓度为0、1、2mg/ml)±BafilomycinA1(自噬抑制剂)/ Rapamcin(自噬诱导剂)处理乳腺癌Bcap-37细胞24小时,Western-blot法检测eIF4E蛋白的表达。 结果：苦参碱剂量依赖性抑制mTOR、p70S6k的磷酸化,同时降低eIF4E蛋白的表达;当苦参碱联合氯喹(CQ)作用于乳腺癌Bcap-37细胞时,则对上述蛋白表达均无明显抑制作用。苦参碱联合BafilomycinA1作用于Bcap-37细胞时,eIF4E蛋白表达同样无明显改变;苦参碱联合Rapamcin时,eIF4E蛋白表达则呈剂量依赖性降低。 结论：苦参碱可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路,从而诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。