EAE小鼠中枢神经系统中CD11b mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响

目的：观察实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠不同发病时期脑和脊髓组织中CD11b mRNA的表达变化,明确益肾达络饮的干预机制。方法：采用MOG_35-55抗原免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型,随机选取分为正常组,佐剂组、模型组、醋酸泼尼松3.9 mg·kg^-1组、益肾达络饮20 g·kg^-1组,在造模后第7天开始灌胃给药,直到相应时间点进行取材。采用实时荧光定量PCR测定免疫后7 d（发病前期）、14 d（发病初期）、24 d（发病急性期）、40 d（慢性持续期）4个不同时间点EAE小鼠脑和脊髓组织中CD11b mRNA表达的变化。结果：与正常组比较,在免疫后14,24,40d,模型组EAE小鼠大脑中CD11b mRNA表达分别升高至2.39±1.09,3.20±1.14,1.58±0.36（P<0.05）。与模型组比较,在免疫后40 d激素组和益肾达络饮组EAE小鼠大脑中CD11b mRNA的表达水平明显降低（P<0.05）;与正常组比较,激素组、益肾达络饮组在免疫后40 d CD11b mRNA在EAE小鼠大脑中表达水平无显著改变;在免疫后14 d激素组EAE小鼠脊髓中CD11b mRNA的表达水平明显降低。结论：单核细胞是实验性自身免疫性脑脊髓炎的潜在调节细胞;中药复方益肾达络饮干预EAE的作用机制与中枢神经系统单核细胞黏附分子CD11b的调节密切相关。     

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经功能评分和病理特征的影响

目的:研究益肾达络饮对复发-缓解型EAE小鼠发病率、发病时间、复发率、神经功能评分及病理特征的影响。方法:用HE染色和Luxol fast blue染色观察EAE小鼠的病理特征。结果:中药组EAE小鼠的复发率(14.27%)低于模型组(62.5%);免疫后第21天神经功能评分,中药组(1.86±0.40)低于模型组(3.13±0.69);免疫后第61天神经功能评分,中药组(0.86±0.55)低于模型组(2.75±0.73),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益肾达络饮能降低EAE小鼠的复发率、神经功能评分,减轻炎性细胞浸润和髓鞘脱失,但其作用机制需要进一步研究。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经组织中ZO-1 mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响

目的研究血脑屏障紧密连接蛋白在EAE发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效和作用机制。方法采用荧光定量PCR测定免疫后不同时间点EAE小鼠中枢神经组织中ZO-1 mRNA表达的变化。结果中药复方益肾达络饮可以显著改善EAE模型小鼠神经功能评分。与正常组相比,激素组、中药组在免疫后14、24、40 d ZO-1 mRNA在EAE小鼠大脑中表达均未见显著改变,而脊髓中在免疫后第14日显著降低;在免疫后14、24、40 d模型组小鼠脊髓中ZO-1 mRNA表达均显著降低。结论 ZO-1是实验性自身免疫性脑脊髓炎血脑屏障破坏的一个重要因素;中药复方益肾达络饮能有效改善EAE小鼠神经功能损伤,其干预EAE的作用机制与血脑屏障紧密连接蛋白调节密切相关。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经组织中CD_4 mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响

目的观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效和作用机制。方法采用荧光定量PCR测定免疫后不同时间点EAE小鼠中枢神经组织中CD4mRNA表达的变化。结果中药复方益肾达络饮可以显著改善EAE模型小鼠神经功能评分。与模型组相比,激素组、中药组在免疫后14、24、40 d CD4mRNA在EAE小鼠大脑中表达水平明显降低,而在脊髓中仅在免疫后第14日显著降低。结论免疫炎性细胞CD4+T细胞是实验性自身免疫性脑脊髓炎的潜在调节细胞;中药复方益肾达络饮能有效改善EAE小鼠神经功能损伤,其干预EAE的作用机制与中枢神经系统免疫炎性细胞的调节密切相关。     

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎NF-κB信号传导通路的影响

目的:研究NF-κB信号传导通路在EAE发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效,探讨益肾达络饮治疗EAE的作用机制。方法:采用免疫蛋白质印迹法、免疫组化法测定EAE小鼠中枢神经组织中NF-κBp65、IκB-α蛋白表达的变化。结果:中药复方益肾达络饮能降低EAE的复发率(P<0.05),改善EAE模型小鼠神经功能评分(P<0.05)。与模型组相比,激素组、中药组、中药加激素组NF-κBp65表达水平明显降低,IκB-α表达水平明显升高(P<0.05)。结论:在EAE中,NF-κB介导的炎性级联反应是EAE小鼠CNS炎性浸润、轴索损伤的重要原因;中药复方益肾达络饮能降低EAE的复发率,有效改善EAE小鼠神经功能损伤;中药益肾达络饮干预EAE的作用机制与对NF-κB信号通路的调节密切相关。     

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎TNF-α的影响

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预EAE的疗效,探讨其治疗EAE的作用机制.方法:选用雌性SJL/J小鼠95只,随机分为正常组、泼尼松3.9 mg·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1加泼尼松3.9 mg·kg-1组,从开始造模后7d开始ig给药,连续15 d,从急性期、复发期采用免疫蛋白印迹法、免疫组化法测定EAE小鼠中枢神经组织中TNF-α蛋白表达的变化.结果:益肾达络饮能降低EAE的复发率(P＜0.05),改善EAE模型小鼠神经功能评分(P＜0.05).与模型组相比,泼尼松3.9 mg·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1加泼尼松3.9 mg·kg-1组中枢神经组织TNF-α表达水平明显降低(P＜0.05).结论:降低TNF-α的表达水平,有助于缓解EAE病损程度;益肾达络饮能降低EAE的复发率,有效改善EAE小鼠神经功能损伤;醋酸泼尼松和益肾达络饮调节TNF-α的表达水平可能是治疗EAE的机制之一.     

益肾达络饮对EAE小鼠p-JNK1/2,JNK1/2,COX-2的影响

目的:研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠磷酸化c-Jun氨基末端激酶1/2(p-JNK1/2),c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)及环氧合酶-2(COX-2)的影响。方法:将48只雌性SJL小鼠(8~12周龄)随机分为4组,即正常组、模型组、益肾达络饮组和泼尼松组,每组各12只。在模型组、益肾达络饮组和泼尼松组每只小鼠上腹部,分两点ih抗原乳剂200μL[含髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)139-151150μg,H37 Ra 400μg],记为第1天;分别在第1天和第3天给予每只小鼠尾静脉注射百日咳杆菌液100μL(含百日咳杆菌0.6×106个)。造模的第7天给药,正常组和模型组给予生理盐水10 m L·kg-1ig,益肾达络饮组给予益肾达络饮生药量20 g·kg-1ig,泼尼松组给予泼尼松药液3.9 mg·kg-1ig,共干预15 d。免疫后每天记录各组小鼠的神经功能评分;Western blot法测定EAE小鼠脑组织内p-JNK1/2,JNK1/2,COX-2的表达。结果:与正常组比较,模型组EAE小鼠的神经功能评分明显升高(P0.01),p-JNK1,p-JNK2和COX-2的表达水平明显升高(P0.05);与模型组比较,益肾达络饮组和泼尼松组明显降低EAE小鼠的神经功能评分(P0.05),明显降低p-JNK1,p-JNK2和COX-2蛋白表达的水平(P0.05,P0.01);泼尼松组COX-2的表达水平低于益肾达络饮组(P0.05)。结论:JNK1/2通路和COX-2与EAE的发病有关,益肾达络饮可通过降低p-JNK2和COX-2的表达降低EAE小鼠的神经功能评分,但其具体的机制需进一步探讨。     

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎p38MAPK信号转导通路的影响

目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预EAE的疗效,探讨益肾达络饮治疗EAE的作用机制。方法:采用免疫蛋白质印迹法、免疫组化法测定EAE小鼠CNS中p38、p-p38蛋白表达的变化。结果:益肾达络饮能降低EAE的复发率(P<0.05),改善EAE模型小鼠神经功能评分(P<0.05)。与模型组相比,抑制剂SB203580组、激素组、中药组、中药加激素组p-p38表达水平明显降低(P<0.05)。结论:p38MAPK介导的炎性级联反应是EAE小鼠CNS炎性浸润,轴索损伤的重要原因;益肾达络饮能降低EAE的复发率,有效改善EAE小鼠神经功能损伤;中药益肾达络饮干预EAE的作用机制与对p38MAPK信号通路的调节密切相关。     

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎MCP-1的影响

[目的]研究益肾达络饮对髓鞘蛋白脂质蛋白多肽(PLP139-151)诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内趋化因子(MCP-1)的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制。[方法]采用免疫组化、地高辛标记的寡核苷酸探针原位杂交技术熏测定各组小鼠中枢神经组织中MCP-1蛋白和MCP-1mRNA的含量。[结果]正常组与模型组、激素组、中药组MCP-1蛋白、MCP-1mRNA含量相比较均有极显著性差异(P<0.01),中药组、激素组与模型组MCP-1蛋白、MCP-1mRNA含量相比较均有极显著性差异(P<0.01);中药组、激素组相比较有显著性差异(P<0.05)。[结论]益肾达络饮在蛋白、分子水平能降低MCP-1含量,其对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与下调MCP-1熏抑制单个核细胞的趋化性熏减轻炎性浸润,抑制局部炎症有一定关系。     

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎β淀粉样前体蛋白的影响

目的:研究中药复方益肾达络饮对PLP139-151诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内轴突病变标记物β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制.方法:采用免疫组化技术,测定各组小鼠中枢神经组织中APP蛋白含量.结果: APP蛋白表达正常组与模型组、激素组、中药组比较均有极显著性差异(P值均<0.01),模型组与中药组比较有极显著性差异(P值均<0.01),与激素组比较有显著性差异(P<0.05),激素组与中药组比较有显著性差异(P<0.05).结论:EAE小鼠APP表达升高,提示存在轴索损害.醋酸泼尼松、益肾达络饮均降低EAE小鼠中枢神经组织内APP的表达,且益肾达络饮优于醋酸泼尼松.益肾达络饮自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与下调APP、抑制轴突变性有一定关系.     

桂枝加葛根汤对神经炎症小鼠海马空间记忆、细胞因子和小胶质细胞的影响

目的:探讨桂枝加葛根汤对脂多糖(LPS)诱导神经炎症小鼠海马空间记忆、炎性细胞因子和小胶质细胞激活的影响及可能的作用机制.方法:将63只雄性ICR小鼠随机分为5组:正常对照组(Control,n=13)、神经炎症模型组(Model,n=13)、桂枝加葛根汤低剂量组(GGD-low,n=10)、桂枝加葛根汤高剂量组(GGD-high,n=14)、二甲基四环素阳性对照组(Positive oontrol,n=13,0.05 g·kg-1,每日1次,连续3d).给予小鼠ip LPS(0.33 mg·kg-1)建立AD的神经炎症模型,桂枝加葛根汤低、高剂量(6,12 g·kg-1)治疗4周后分别采用Morris水迷宫、ELISA和免疫荧光法检测观察桂枝加葛根汤对神经炎症小鼠空间记忆、海马细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量以及小胶质细胞的激活现象的影响.结果:Morris水迷宫结果显示,LPS诱导后小鼠的逃避潜伏期明显比正常对照组延长(P＜0.05),桂枝加葛根汤低、高剂量治疗后小鼠逃避潜伏期均明显比模型组缩短(P＜ 0.05,P＜0.01);LPS导致小鼠海马TNF-α,IL-1β含量显著增高(P＜0.01),小胶质细胞则表现为数量增多且呈放射状等激活现象,桂枝加葛根汤治疗后TNF-α,IL-1β含量则不同程度地明显降低(P＜0.05),小胶质细胞激活状态改善.结论:桂枝加葛根汤对LPS诱导的神经炎症小鼠海马空间记忆障碍具有改善作用,其机制可能与调节海马小胶质细胞激活和炎性细胞因子TNF-α和IL-1β含量的作用有关.     

益肾养心疏肝汤联合针灸治疗女性更年期综合征的临床研究

目的：探讨益肾养心疏肝汤联合针灸治疗女性更年期综合征（WMS）的临床疗效。方法：选择WMS患者78例,随机分为两组,每组39例,对照组给予口服戊酸雌二醇片,治疗组在西药激素治疗基础上,加服益肾养心疏肝汤合针灸治疗。4周为1疗程,连续治疗3个疗程后,两组患者均进行治疗前后症状积分、汉密尔顿抑郁量表（HAMD）、汉密尔焦虑量表（HAMA）评分、血清促卵泡激素（FSH）及雌二醇（E2）评分及总体疗效比较。结果：在临床症状方面,两组治疗前后比较均有不同程度的改善（P<0.05 或P<0.01）,HAMD、HAMA 有不同程度的降低（P<0.05）,E2有不同程度升高（P<0.05）,FSH 有不同程度降低（P<0.05）,治疗组较对照组有更明显的优势,总有效率治疗组明显高于对照组（P<0.05）。结论：益肾养心疏肝汤联合针灸及激素治疗WMS,对于临床症状的改善、焦虑抑郁情绪的缓解及病情活动的控制,与单纯的西药激素治疗相比,具有一定的优势。     

针刺对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠磷酸化P38丝裂原活化蛋白酶的影响＊

目的 观察针刺对自身免疫性脑脊髓炎小鼠（EAE）的疗效及其对脑干磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）的影响，探究针刺对EAE小鼠的治疗作用和机制，为临床治疗MS提供新的思路方法。方法 将40只C57BL/6小鼠随机分成4组。空白组小鼠不作处理，其余组采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）制备的完全抗原将小鼠诱导成EAE模型。造模后第14天开始，空白组及模型组每日固定，并用生理盐水灌胃。激素组每日与醋酸泼尼松灌胃。针刺组小鼠针刺“大椎”、双侧“肾俞”“足三里”。记录小鼠体重和神经功能评分。免疫第28天后对脑组织进行取材，用LFB染色观察病理变化，检测脑组织中p-p38MAPK免疫组化表达及p-p38MAPK的WB表达。结果 与空白组相比，其余各组小鼠体重降低（P < 0.05），神经功能评分升高（P < 0.05），LFB染色脱髓鞘程度升高，p-p38MAPK免疫组化及WB检测均升高（P < 0.05）。与模型组相比，针刺组及激素组体重升高（P < 0.05），神经功能评分降低（P < 0.05），LFB染色脱髓鞘程度降低，p-p38MAPK免疫组化及WB检测均降低（P < 0.05）。与激素组相比，针刺组体重降低（P < 0.05），神经功能评分升高（P < 0.05），p-p38MAPK免疫组化及WB检测升高，但差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 针刺可能是通过降低EAE小鼠p-p38MAPK表达，降低EAE小鼠炎症反应，减轻神经损伤从而发挥治疗作用。     

大麻素1型受体过表达对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经干细胞的影响

目的:探讨大麻素1型受体(CB1R)过表达对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑神经干细胞的影响。方法:建立EAE小鼠模型(n=50)并设置佐剂组(n=10)和对照组(n=10),建模成功的EAE小鼠注射CB1R过表达慢病毒液并记为CBlR过表达组(n=20),设置空载体组(n=10)和EAE模型组(n=20)。评价各组小鼠神经功能,观察对照组、EAE模型组和CBlR过表达组小鼠的脑组织病理学变化,检测脑组织CB1R、室管膜下区Brdu和Brdu+/Nestin+以及Sox-2 mRNA水平。结果：EAE模型组神经功能评分升高、CBlR蛋白降低(P<0.05),CBlR过表达组神经功能评分下降、CBlR蛋白升高(P<0.05)。EAE模型组脑组织出现炎症细胞浸润及髓鞘缺失等典型病理变化,CBlR过表达组的病理损伤显著改善。EAE模型组Brdu、Brdu+/Nestin+阳性细胞以及Sox-2mRNA水平均显著增加(均P<0.05),CBlR过表达组比较EAE模型组亦显著增加(P<0.05)。结论:过表达CBlR可能是通过加速小鼠脑神经干细胞的增殖从而促进脑组织损伤的修复,最终有效减轻了自身免疫性脑脊髓炎小鼠的症状。     

补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中p-Tau和Beta-tubulin表达的影响

目的:观察补肾益髓(Bu Shen Yi Sui,BSYS)方及其拆方补肾(Bu Shen,BS)和化痰活血(Hua Tan Huo Xue,HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)小鼠脑和脊髓中p-Tau和Beta-tubulin的作用。方法:C57BL/6小鼠雌性随机分为正常对照(NC)、模型(MO)、醋酸泼尼松(PA)、梓醇(CA)、BSYS、BS和HTHX组。造模当天与造模后第7天于小鼠背部两侧皮下注射抗原,即50μg髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35-55、完全弗氏佐剂(CFA)与结核分支杆菌(TB)混合,并在免疫当天和2 d后腹腔注射500 ng的百日咳毒素(PTX)。每天对小鼠进行灌胃,观察其体重及神经功能评分,并于造模第20 d和第40 d分别取脑和脊髓进行病理检测。采用免疫组化法检测p-Tau和beta-tubulin的表达。结果:与MO组比较,BSYS、BS和HTHX组体重与神经功能评分均出现明显上升,HE染色可观察到炎细胞显著减少,核固缩减轻,同时,BSYS、BS和HTHX方均可明显下调p-Tau表达(P0.05,P0.01),上调beta-tubulin蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:BSYS方及其拆方BS和HTHX均对EAE小鼠有神经保护作用,表现在减少体重丢失,降低神经功能评分,减轻炎炎性细胞浸润,减轻轴突损伤及促进其修复,尤以BSYS全方更为显著。     

探索进展型EAE 小鼠中枢神经系统不同部位的组织病理学和小胶质细胞的动态变化

目的 建立进展型实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型,观察中枢神经系统（central nervous system,CNS）不同部位在病变不同阶段的组织病理学变化以及M1型、M2型小胶质细胞的动态变化。方法 以C57BL/6为实验小鼠,建立EAE模型,于不同发病时期对CNS各部位进行切片;髓鞘染色（luxol fast blue,LFB）检测髓鞘脱失、苏木素-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色检测炎细胞浸润;免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）检测M1型、M2型小胶质细胞的动态变化;Real-Time PCR检测腰髓段中iNOS,TNF-α,Arg-1以及IL-4的mRNA水平。结果 LFB和HE染色结果显示EAE 小鼠CNS各部位均于发病点出现髓鞘脱失和炎细胞浸润,且随疾病进展逐渐加重。IHC结果显示,M1型小胶质细胞浸润随疾病进展不断增加;M2型浸润先增加后减少。Real-Time PCR结果显示,iNOS,TNF-α的mRNA水平随疾病进展逐渐增加;Arg-1,IL-4的mRNA的表达水平为先增加后降低。结论 在进展型EAE小鼠的病理变化中,CNS各部位髓鞘脱失程度和炎细胞浸润随疾病进展变得更加严重,且以腰髓段的病理变化最为严重。随着疾病进展,M1型小胶质细胞数量逐渐增加,M2型的浸润先增加后减少。     

昆仑雪菊黄酮类提取物抗脂多糖诱导的小胶质细胞活化作用及网络药理学机制分析

目的:研究昆仑雪菊干预小胶质细胞功能的作用机制。方法:采用CCK-8法检测昆仑雪菊总黄酮对BV2细胞的增殖抑制活性,Griess法和ELISA检测细胞炎症因子一氧化氮(NO)、白细胞介素-6(IL-6)的分泌。借助自建昆仑雪菊成分-靶点数据集对昆仑雪菊中9个主要黄酮成分和相关作用靶点进行筛选。通过GeneCards、GENE、STRING数据库及R语言收集并筛选小胶质细胞功能靶点,筛选昆仑雪菊改善小胶质细胞功能的靶点,构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并用Cytoscape软件的NetworkAnalyzer功能筛选核心靶点。利用基因集富集分析(GSEA)软件对分子特征数据库MSigDB中的相关靶点进行Hallmark基因分析。使用Bioconductor数据库进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:昆仑雪菊黄酮类提取物在4μg·mL–1时可以显著抑制小胶质细胞激活分泌NO和IL-6。昆仑雪菊黄酮类成分可能作用于蛋白激酶B(Akt)、肿瘤坏死因子(TNF)、IL-6、TP53、酪氨酸激酶C(SRC)、表皮生长因子受体(EGFR)、JUN、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、CTNNB1等靶点干预小胶质细胞的功能。涉及的通路包括磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-Akt信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路、信号转导子和转录激活子(JAK)-STAT信号通路等。结论:昆仑雪菊黄酮类成分可能通过参与调控PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路、JAK-STAT信号通路等的相关靶点,实现调节胶质细胞活化的作用。     

左归丸和右归丸对自身免疫性脑脊髓炎大鼠中枢神经系统淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响

目的通过观察左归丸与右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型大鼠脑、脊髓组织淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响,探讨滋阴补肾法与温阳补肾法治疗EAE作用机制。方法应用髓鞘碱性蛋白与完全福氏佐剂,按体积比1：1制成抗原并于Lewis大鼠双后足垫下注射,建立EAE模型。120只Lewis大鼠随机分为正常组、模型组、激素组、左归丸组及右归丸组,每组24只,正常组和模型组给予生理盐水灌胃,3mL／（只·d）;激素组免疫后给予生理盐水灌胃,3mL／（只·d）,发病后改为醋酸泼尼松混悬液灌胃,5mg／（kg·d）;左归丸组免疫后给予左归丸混悬液,2g／（kg·d）;右归丸组免疫后给予右归丸混悬液,3g／（kg·d）。直至处死。分别于急性期（免疫后15d）和缓解期（免疫后27d）随机选取各组大鼠,取脑和脊髓组织切片进行CD4^＋、CD8^＋、CD3^＋、CD19^＋免疫组化染色。结果造模后第15日及第27日,模型组脑和脊髓组织中CD4^＋免疫组化表达均较正常组升高（P〈0．01）,CD8^＋表达降低（P〈0．05）,CD4^＋／CD8^＋比值升高（P〈0．01）;同模型组比较,左归丸组、右归丸组、激素组CD4^＋免疫组化表达均降低（P〈0．01）,且在造模后第27日,左归丸组和右归丸组脊髓组织CD4^＋表达较激素组显著降低（P〈0．01）;造模后第15日,右归丸组和激素组CD8^＋表达较模型组升高（P〈0．01）,造模后第27日,左归丸组和激素组CD8^＋表达较模型组升高（P〈0．01）;不同时点激素组、左归丸组及右归丸组CD4^＋／CD8^＋比值均显著低于模型组（P〈0．05）;造模后第15日及第27日,模型组中枢神经系统CD19^＋免疫组化表达均较正常组升高（P〈0．01）,急性期左归丸组、右归丸组、激素组脊髓组织CD19^＋表达较模型组降低（P〈0．01）,缓解期则见左归丸组和右归丸组CD19^＋表达减少（P〈0．01）。结论EAE大鼠CD4^＋／CO8^＋比值升高,这在EAE发病中发挥重要作用。滋阴补肾法和温阳补肾法可下调CD4^＋表达,下调CD4^＋／CD8^＋比值来治疗EAE。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠p38的变化及益肾达络饮的影响

目的:研究中药复方益肾达络饮对PLP139-151诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内p38的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制。方法:采用免疫组化技术,测定各组小鼠中枢神经组织中p38蛋白含量。结果:p38表达正常组与模型组、激素组、中药组比较均有极显著性差异(P值均<0.01);与模型组比较,激素组有显著性差异(P<0.05),中药组有极显著性差异(P<0.01);激素组与中药组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:EAE小鼠p38表达升高,提示EAE病变过程中可能激活p38MAPK信号转导通路。醋酸泼尼松、益肾达络饮均能降低EAE小鼠中枢神经组织内p38的表达,且益肾达络饮优于醋酸泼尼松。益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能通过下调p38,抑制p38MAPK活化,从而改善机体免疫紊乱。