rhTPO/GM-CSF融合蛋白对60Co γ射线照射小鼠造血功能的影响

目的 探索一个新的、具有能同时促进机体红、粒及巨核细胞系造血的细胞因子,以便治疗由化疗和放疗等各种原因引起全血细胞损伤的综合征。方法 所用的细胞因子是本实验室重组的产品,以照射小鼠为模型,给小鼠注射细胞因子后,观察红、粒及巨核细胞的变化。结果 ｒｈＴＰＯ／ＧＭ－ＣＳＦ融合蛋白对受照射小鼠血象有恢复作用。结论 融合蛋白具有ＴＰＯ－ＣＳＦ双重的生物活性。     

细胞因子对中子和γ射线照射小鼠的辐射防护作用及作用机理研究

研究ＩＬ－１β、ＴＮＦα和Ｇ－ＣＳＦ等细胞因子对裂变中子和γ射线照射小鼠的辐射防护作用，探讨其作用机理。方法观察几种细胞因子对受照小鼠存活率的影响，计数受照小鼠脾脏ＣＦＵ－Ｓ，进行骨髓红系、粒系及混合系造血祖细胞培养，检测部分动物的血清ＧＭ－ＣＳＦ水平及脾脏淋巴细胞转化能力的变化。结果ＩＬ－１β和ＴＮＦα能明显提高８．５Ｇｙγ射线照射小鼠的３０天存活率，二者复合应用有加强作用；裂变中子照射时防护效价下降，复合应用亦无加强作用。Ｇ－ＣＳＦ也能提高中子照射小鼠的３０天存活率。３种细胞因子单独或复合应用对受照小鼠的造血和免疫系统，特别是粒系造血有某种程度的保护作用。结论ＩＬ－１β、ＴＮＦα单独或复合应用对γ射线照射小鼠有明显的保护作用，裂变中子照射时的防护效价降低，且无复合应用的加强作用。Ｇ－ＣＳＦ对中子照射小鼠有辐射保护作用。这些细胞因子的辐射防护作用可能与其减轻小鼠造血和免疫系统损伤和促进其恢复有关。     

重组人铜锌超氧化物歧化酶对小鼠骨髓造血粒─巨系祖细胞的辐射防护作用

目的：探讨重组人铜锌超氧化物歧化酶（ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ）的辐射防护作用及其机理。方法：通过γ线辐射损伤小鼠的体内和体外实验，观察了ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ和聚乙二醇修饰的ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ（ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ）对小鼠骨髓造血粒－巨系祖细胞克隆产生率（ＣＦＵ－ＧＭ）的影响。结果：体内实验，小鼠整体照射，静脉给药，以上两种酶（２５`０～３００ｍｇ／ｋｇ）均能非常显著地提高ＣＦＵ－ＧＭ的数量。其中以照射前后联合给药效果最好。而单纯照射前给药，ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ仅在照前１小时给药效果较好；ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ则在照前３小时或照前１小时给药都有较好的效果。体外实验，小鼠离体细胞照射并给药，未见ｒｈＣｕＺｎ－ＳＯＤ对ＣＦＵ－ＧＭ的影响。结论：以上两种酶对小鼠骨髓ＣＦＵ－ＧＭ有良好的辐射防护作用，其机理可能是通过机体防御系统作用的间接途径实现的。ＰＥＧ－ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ的生物半衰期较长，可增加给药时机，因而具有更大的实用价值。     

重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子对6．5Gy不均匀照射犬造血功能的影响

重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）在白血病及肿瘤病人大剂量放化疗白细胞减少性疾病的治疗中显示出了良好的前景。ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可明显改善屏蔽全骨盆后６．５Ｇｙ６０Ｃｏｒ线照射犬的临床症状，加速外周血白细胞的恢复，提高白细胞的最低值，缩短白细胞减少的持续时间。可明显增加照射犬骨髓有核细胞数及骨髓细胞数，促进骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的增殖，提高骨髓细胞的粒／红比值。可应用于事故性骨髓型急性放射病病人的临床治疗。     

重组人粒—巨噬细胞集落刺激因子对6.5Gy不均匀照射犬造血功…

重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）在白血病及肿瘤病人大剂量放化疗白细胞减少性疾病的治疗中显示出了良好的前景。ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可明显改善屏蔽全骨盆后６．５Ｇｙ＾６０Ｃｏγ线照射犬的临床症状，加速外周血白细胞的恢复，提高白细胞的最低值，缩短白细胞减少的持续时间。可明显增加照射犬骨髓有核细胞数及骨髓细胞数，促进骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的增殖，提高骨髓细胞的粒／红比值。可应用于事故性骨髓型急性放射     

钩吻对小鼠急性辐射损伤的保护作用

钩吻 (ＧＥＢ)是一种主要含多种吲哚类生物碱的剧毒植物。具有消炎、镇痛、抗肿瘤、调节免疫功能和保护骨髓选血功能等作用[1 3] 。ＧＭ ＣＳＦ是公认的造血细胞生长因子 ,它对放射损伤有较好的治疗作用 ,ｒｈＧＭ ＣＳＦ ＩＬ 3融合蛋白同时具有ＧＭ ＣＳＦ和ＩＬ 3的功能 ,作用效果优于ＧＭ ＣＳＦ[4 ] 。笔者旨在比较ＧＦＢ和ｒｈＧＭ ＣＳＦ ＩＬ 3融合蛋白对小鼠急性放射损伤的治疗效果 ,现报道如下。一、材料和方法1 药物 :钩吻乙醇粗提物为广西产钩吻茎乙醇粗提物 ,提取和制备方法见文献 [3],配成浓度 6 0ｍｇ ｍｌ,过滤除菌备用。…     

吉林放射事故病人血浆造血活性观察

目的观察病人血浆造血活性，了解其与照后造血功能变化的可能关系。方法以ＭＴＴ法测病人血浆对ＮＦＳ－６０、ＴＦ－１和ＢＥＴ－２细胞因子依赖细胞株在有或无相应细胞因子存在时的吸光度（４９２ｎｍ）。结果患者血清有类似ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３和ＥＰＯ的刺激活性。血浆加入含ｒｈＧ－ＣＳＦ和ＥＰＯ的培养体系中可使ＮＦＳ－６０和ＢＥＴ－２细胞增殖受抑。上述变化与病人外周血白细胞、红细胞及血红蛋白的变化有相关之处。结论吉林辐射事故病人血浆中有粒系和红系造血抑制活性。     

流式细胞仪在小鼠造血干细胞基因转移效率测定中的应用

目的探讨流式细胞仪在造血干细胞基因转移效率测定中的应用价值。方法以干细胞因子（ＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）３、ＩＬ６单独或联合作用（ＳＣＦ／ＩＬ３、ＳＣＦ／ＩＬ６、ＩＬ３／ＩＬ６、ＳＣＦ／ＩＬ３／ＩＬ６）后的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠造血干细胞作为靶细胞,应用含有绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因的逆转录病毒载体ＧＣＧＰＸＳＮ介导的基因转移技术实施基因转移,采用ＦＡＣＳ型流式细胞仪测定基因转移效率。结果病毒上清转染的阳性对照组基因转移率为０．０６％,以不同细胞因子作用后基因转移效率提高至００７％～０．２０％,细胞因子作用前后比较,除ＳＣＦ／ＩＬ６组外,差异均有显著或非常显著意义（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１）。其中以ＳＣＦ／ＩＬ３组与ＳＣＦ／ＩＬ３／ＩＬ６组的提高最为明显,均达０２０％,与其他各细胞因子组比较,差异也有非常显著意义（Ｐ＜００１）。结论应用流式细胞仪可测定出ＳＣＦ、ＩＬ３、ＩＬ６单独或联合作用对小鼠造血干细胞基因转移效率的不同影响,具有快速、方便、准确的优点。     

rhGM－CSF对狗骨髓辐射损伤治疗作用的定量病理研究

目的；为了解细胞因子对骨髓辐射损伤的治疗作用。方法：用６０Ｃｏγ射线以５．５Ｇｙ照射１４只比格狗后，静脉注射低剂量（１０μｙ／ｋｇ·ｄ）及高剂量（２０μｇ／ｋｇ·ｄ）ｒｈＧＭ－ＣＳＦ，连续２０天，动物于照射后３０天活杀取胸骨，采用Ｈ·Ｅ及Ａｇ－ｎｏｒ嗜银蛋白染色和图像分析等技术，定量研究了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对骨髓造血的促进作用。结果表明：高剂量的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对狗骨髓辐射损伤后造血重建有明显的促进作用，即ｒｈＧＭ－ＣＳＦ能使骨髓中有核细胞数显著增多；能使增殖活跃的单核系细胞亦增多，与照射对照组比，差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。讨论：高剂量ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对狗骨髓造血功能的重建有促进作用。     

胚胎期胺辐射对子鼠造血基质细胞功能的影响

目的 研究胚胎期２．０Ｇｙ＾１３７Ｇｓγ射线照射后对子鼠造血基质细胞的远期影响。方法 建立胚胎期受辐射小鼠模型；以细胞计数检测股骨骨髓有核细胞（ＢＭＮＣｓ）数；用免疫组化ＡＢＣ法检测基质细胞粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和干细胞因子（ＳＣＦ）的表达；用体外小鼠骨髓细胞培养法以粒单细胞系祖细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）为指标观察基质细胞对正常骨髓造血的支持功能。结果 胚胎期受辐射小鼠ＢＭＮＣｓ     

人IL2/GMCSF融合基因的克隆及序列测定

通过PCR技术,构建与克隆了IL2/GMCSF融合基因,并进行了序列测定。该融合基因的克隆成功,为表达具有IL2、GMCSF双功能活性的新型融合蛋白,以及发现细胞因子的新生物学功能等研究提供了有利条件。     

GM-CSF和rhBMP-2m对小鼠急性放射损伤治疗作用的对比研究

目的 研究和比较重组人骨形成蛋白(rhBMP2m)、GM-CSF对照射后小鼠造血损伤的修复作用。方法 rhBMP2m用分子生物学方法由大肠杆菌中获得; 该实验中rhBMP2m对照射后动物的影响, 通过观察动物的30天活存率表示。结果 照射对照组小鼠的30天活存率为0, 平均活存天数为(9.1±2.2)d;GMSCF治疗组小鼠的30天活存率为20.0%, 平均活存天数为(11.5±1.9)d, rhBMP2m治疗组小鼠的30天活存数为4, 活存率为40%, 平均活存天数为(13.2±6.1)d.结果显示GMCSF和rhBMP2m均能提高受照小鼠的活存率, 并延长活存时间, 而且后者优于前者(P<0.05).结论 rhBMP2m对小鼠急性放射损伤具有治疗作用, 初步观察其优于GMCSF。     

重组人促血小板生成素体内生物学活性的研究

目的　探讨重组人血小板生成素 (rhTPO)体内的生物学活性。方法　本研究以Babl/c纯系小鼠为实验对象 ,将其分成实验组及对照组 ,实验前采尾静脉血 ,测小鼠血小板正常值 ;然后连续 7d腹腔注射rhTPO ,并于注射后第 7天及第 14天采眶静脉血 0 .2ml,测定小鼠外周血小板数量 ,同时观察小鼠的死亡情况。结果　在实验第 7天 ,实验组小鼠外周血小板数明显高于同期对照组 (P <0 .0 5 ) ;而且随实验时间的延长 ,实验组血小板数有升高趋势。结论　rhTPO促进小鼠外周血小板的产生 ,增加外周血小板数量。     

创伤后单核巨噬细胞集落刺激因子调控新生血管化的分子机制

目的 观察创伤愈合过程中单核巨噬细胞集落刺激因子(granuiocyte/macrophage colony - stimulating factor,GMCSF)经ERK通路活化核因子(nuclear factor,NF) - Κb诱导创伤后人皮肤成纤维细胞（human dermal fibroblasts,HDFs）生成血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),并探讨相关机制。方法 分离培养创伤部位HDFs,并用GMCSF处理。作用不同时间后,采用RT - PCR和ELISA分别检测HDFs VEGF Mrna和蛋白水平;应用GMCSF作用HDFs后,采用Western blot观察ERK磷酸化水平的改变;进一步应用ERK通路特异性抑制剂PD98059预处理HDFs。再用GMCSF刺激已预处理过的细胞,收集细胞和上清液,采用Western blot检测VEGF蛋白水平的变化;进一步通过抑制ERK信号通路,采用免疫荧光检测NF - Κb的活化。另外,应用核质抽提试剂盒分离胞质和胞核,采用Western blot检测NF - Κb的活化。结果 随着GMCSF浓度的增加,VEGF Mrna及蛋白水平也逐步增加,呈一定的剂量依赖性;GMCSF作用于HDFs 2 h后,VEGF Mrna水平开始升高,至4～6h达到峰值。GMCSF能够显著活化ERK磷酸化过程;与GMCSF组相比,ERK信号通路特异性抑制剂PD98059能显著抑制GMCSF诱导VEGF的表达(P＜0.05)。免疫荧光和Western blot结果显示,抑制ERK后NF - Κb的活化受到显著抑制。结论 GMCSF可通过ERK信号通路活化NF - Κb从而诱导HDFsVEGF的表达。     

hTPO和hNIS共转染胶质瘤细胞U251介导放射性碘摄取的研究

目的 将人甲状腺过氧化物酶（hTPO）基因及人钠/碘同向转运体（hNIS）基因共转入胶质瘤细胞系U251后,研究其摄碘能力的变化.方法 克隆、重组、包装并扩增纯化得到重组腺病毒（AdTPO）,测定病毒滴度,Western-Blotting检测重组腺病毒的表达.使用脂质体转染法将hNIS基因转染入人胶质瘤细胞系U251中,经过G418硫酸盐筛选获得稳定表达hNIS的细胞系（hNIS-U251）,为hNIS-U251组;使用重组腺病毒将hTPO基因转导入hNIS-U251中,使胶质瘤细胞获得hTPO基因（AdTPO-hNIS-U251）,为AdTPO-hNIS-U251组;未转入hTPO和hNIS的细胞为对照组（U251）.然后进行3组稳定表达细胞系体外摄125I实验及体外125I外流实验.3组间两两比较用q检验（Newman-Keuls法）.结果 AdTPO-hNIS-U251细胞、hNIS-U251细胞和U251细胞所摄取125I分别为（74 647.53±3605.88）、（55 769.96±4353.26）和（507.67±57.69）计数/min,3组间差异有统计学意义（F=836.17,P＜0.01）.AdTPO-hNIS-U251组较对照组（U251）摄125I能力增高约147倍（q=55.64,P＜0.01）,hNIS-U251组较对照组（U251）摄碘能力增高约110倍（q=41.47,P＜0.01）.AdTPO-hNIS-U251组较hNIS-U251组高约1.3倍（q=14.17,P＜0.01）.在体外125I外流实验中证实AdTPO-hNIS-U251组125I外流减慢,其有效半衰期延长至13 min.结论 将hTPO和hNIS基因共转染至胶质瘤细胞系U251后,能有效提高U251的摄碘能力.     

Iodide uptake in human anaplastic thyroid carcinoma cells after transfer of the human thyroid peroxidase gene

Human thyroperoxidase (hTPO) is critical for the accumulation of iodide in thyroid tissues. Poorly differentiated and anaplastic thyroid tumours which lack thyroid-specific gene expression fail to accumulate iodide and, therefore, do not respond to iodine-131 therapy. We consequently investigated whether transfer of the hTPO gene is sufficient to restore the iodide-trapping capacity in undifferentiated thyroid and non-thyroid tumour cells. The human anaplastic thyroid carcinoma cell lines C643 and SW1736, the rat Morris hepatoma cell line MH3924A and the rat papillary thyroid carcinoma cell line L2 were used as in vitro model systems. Employing a bicistronic retroviral vector based on the myeloproliferative sarcoma virus for the transfer of the hTPO and the neomycin resistance gene, the C643 cells and SW1736 cells were transfected while the L2 cells and MH3924A cells were infected with retroviral particles. Seven recombinant C643 and seven SW1736 cell lines as well as four recombinant L2 and four MH3924A cell lines were established by neomycin selection. They were studied for hTPO expression using an antibody-based luminescence kit, followed by determination of the enzyme activity in the guaiacol assay and of the iodide uptake capacity in the presence of Na125I. Genetically modified cell lines expressed up to 1,800 times more hTPO as compared to wild type tumour cells. The level of hTPO expression varied significantly between individual neomycin-resistant cell lines, suggesting that the recombinant retroviral DNA was integrated at different sites of the cellular genome. The accumulation of iodide, however, was not significantly enhanced in individual recombinant cell lines, irrespective of low or high hTPO expression. Moreover, there was no correlation between hTPO expression and enzyme activity in individual cell lines. The transduction of the hTPO gene per se is not sufficient to restore iodide trapping in non-iodide-concentrating tumour cells. Future studies will have to concentrate on the possible expression of enzymatically active proteins or the transfer of multiple genes involved in iodide trapping.     

幽门螺杆菌热休克蛋白A与尿素酶B融合表达产物的初步纯化及其在小鼠体内免疫效应活性分析

目的 :探讨幽门螺杆菌热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白的免疫生物学活性。方法 :采用亲和层析、离子交换和凝胶过滤对幽门螺杆菌热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白进行初步纯化 ,用粗纯化蛋白对小鼠进行免疫 ,然后分析其免疫活性。结果 :采用亲和层析或离子交换和凝胶过滤后 ,融合蛋白的纯度分别可达到 6 5 .6 %和90 .2 %。该融合蛋白可诱导小鼠产生抗幽门螺杆菌的胃肠黏液IgA和血清IgG抗体 ,并促使免疫小鼠脾脏T淋巴细胞CD4 CD8 比值的增加。结论 :重组热休克蛋白A与尿素酶B融合蛋白可以诱导在未来免疫预防中起积极作用的免疫应答反应     

放烧复合伤后白细胞介素-3基因的表达

为了进一步探讨放射损伤和放烧复合伤引起造血功能障碍的机理，研究了作为造血调控的重要细胞因子——白细胞介素－３（ＩＬ－３）基因在放射损伤、烧伤、放烧复合伤后不同时相点基因表达的变化。方法ｍＲＮＡ抽提、分子杂交、细胞培养、ＩＬ－３生物活性测定、３Ｈ－ＴｄＲ参与实验等生物技术方法。结果放射损伤后ＩＬ－３基因的表达受到明显抑制，照射后第３，１４天表达的ＩＬ－３ｍＲＮＡ减少了７７％，２１％；ＩＬ－３蛋白减少了８３％，３６％。烧伤对ＩＬ－３基因表达的影响呈双相性，烧伤后第３天ＩＬ－３表达受到抑制；烧伤后第１４天ＩＬ－３的表达增强；放烧复合伤后ＩＬ－３的表达受到抑制，其抑制程度介于放射损伤与烧伤之间，各观察组ＩＬ－３基因表达的变化与骨髓有核细胞数的变化呈平行关系。结论放射损伤、放烧复合伤后ＩＬ－３基因表达被抑制可能是急性放射病引起造血功能障碍的原因之一。     

胃癌MG7-Ag模拟表位与HSP70融合基因疫苗的构建及其诱导小鼠免疫反应的研究

目的　以热休克蛋白 70 (HSP70 )为载体 ,构建胃癌MG7 Ag模拟表位与HSP70融合基因的DNA疫苗 ,并观察该疫苗诱导C5 7BL/ 6小鼠产生MG7 Ag特异性免疫反应的作用。方法　将胃癌MG7 Ag模拟表位 (九肽 )的编码序列设计在HSP70下游引物的 5′末端 ,通过PCR方法获得HSP70与模拟表位的融合基因片段。将PCR产物克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+) ,构建融合基因疫苗。将该融合基因疫苗接种C5 7BL/ 6小鼠股四头肌 ,每隔 3周加强免疫一次 ,共接种 3次。分别在每次接种后 3周收集免疫血清 ,用细胞ELISA法检测小鼠血清中抗MG7 Ag抗体的水平。末次免疫后 3周 ,收集脾细胞 ,用51Cr释放法检测MG7 Ag特异性CTL的杀伤活性。结果　PCR扩增得到大小约 2 .0kb的片段 ,与预期大小一致。将该片段克隆入pcDNA3.1(+) ,DNA序列测定证实MG7 Ag模拟表位的编码序列已成功融合于HSP70cDNA的 3′末端。基因疫苗免疫后 ,融合基因免疫组小鼠于第 9周出现抗MG7 Ag抗体 ,而对照组小鼠无MG7 Ag抗体产生 (P <0 0 5 )。51Cr释放实验结果表明 ,融合基因免疫组小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤率与对照组相比无显著差异 (P >0 0 5 )。结论　MG7 Ag模拟表位与HSP70融合基因疫苗构建成功 ;该融合基因疫苗能够诱导MG7 Ag特异性的体液免疫反应